乙肝病毒X蛋白增强小鼠体内HBV的转录及复制

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miR-124在消化道肿瘤中的研究进展

现代消化及介入诊疗2020年第25卷第2期Modyn DigytOs&TOuwtOs2220,VoO25,No--1631-.综述. miO-122在消化道肿瘤中的研究进展刘买英，丁研，叶家才【提要】MOmRNA(miONA)是一类长度为20~24个核苷酸的非编码单链RNA,被称为强大的转录后调控因子。

miRNA 表达的改变在多种疾病(包括肿瘤)的发生发展过程中发挥重要的调控作用。

其中，mPuRNAA24(miRA24)是目前的研究热点之一，它在多种肿瘤包括消化道肿瘤中低表达，并在细胞增殖、侵袭转移及凋亡等方面发挥重要的抑癌作用，密切参与恶性肿瘤的发生、发展和预后。

本文就miON24在消化道肿瘤中的功能及其调控机制作一综述，为miON24作为恶性肿瘤诊断、治疗及评估预后的生物靶标提供理论依据。

【关键词】微小RNA；miON24；消化道肿瘤中图分类号：R735；R45文献标志码：A DOI:-.8266/j.Oso.5277-2102.0020.52.730恶性肿瘤是影响国民健康的主要疾病之一，病死率高。

其中消化道肿瘤占恶性肿瘤的50%左右，是导致人类死亡的重要原因［］。

近年来，随着分子生物学的不断发展和突破，恶性肿瘤的治疗将迎来新的希望和曙光。

MOmRNA(miRNA 或miR)是一类由20~24个核苷酸组成的内源性单链非编码RNA,被称为强大的转录后调控因子［2］o成熟miRNA的5,端有2~8个高度保守的核苷酸序列可与靶mRNA的9-非翻译区(9unWanslaOh reyiox,3，-UTR)的碱基偶联抑制蛋白质翻译［］,广泛参与癌症相关基因的表达及细胞分化、增殖、迁移和凋亡在内的许多生命过程的调控。

其中，miRN24是一种高度保守的miRNA,其异常表达与消化道癌、头颈部癌、乳腺癌等多种恶性肿瘤有关。

大量研究证明，miRN24具有抑癌作用，它在恶性肿瘤的形成过程中起着一定的作用，如上皮-间质转化(epitPelinl-mesenc/ymni Wansi/ox,EMT)、细胞周期阻滞、侵袭转移和化疗耐药等。

hbv各基因区编码产物 -回复

hbv各基因区编码产物-回复HBV（乙型肝炎病毒）是一种致病性病毒，是引起肝炎和肝硬化的主要原因之一。

HBV基因组由四个主要区域编码产物，分别是表面抗原区（S区）、核心蛋白区（C区）、转录调控区（X区）和编码酶及外衣位置区（P区）。

本文将一步一步回答HBV各基因区编码产物的相关内容。

首先，我们来讨论表面抗原区（S区）。

表面抗原区编码产物是HBV外表面的蛋白质，包括三种结构上不同但功能上相似的蛋白质，分别是S、M、L表面抗原。

其中，S抗原是最基本的，它存在于HBV颗粒和血液中，被用于乙肝病毒感染的诊断和治疗。

M表面抗原是通过编码S蛋白前面的预S蛋白质产生的，它在HBV感染早期主要是在内部颗粒中发现，但在血液中也可检测到。

L表面抗原是通过编码S蛋白后面的预S蛋白质产生，它在HBV感染早期主要是在内部颗粒中发现。

接下来是核心蛋白区（C区）。

核心蛋白是HBV颗粒的主要组分之一，也被称为核心抗原。

它在病毒生命周期中起多种重要作用，包括维持病毒颗粒的结构完整性、媒介病毒的复制和颗粒的装配。

核心蛋白的编码产物经过一系列的翻译和修饰过程形成最终的核心抗原蛋白，这些蛋白质能够诱导宿主免疫系统产生免疫应答。

第三个基因区是转录调控区（X区）。

X蛋白是HBV的主要转录调控因子，通过干扰宿主细胞的信号通路和基因表达来保持病毒的生存和复制。

X蛋白的编码产物也具有多种功能，包括抑制宿主细胞的DNA修复、干扰细胞周期和细胞凋亡、调节宿主基因的转录和翻译等。

X蛋白的过度表达和异常调控可能导致乙肝病毒感染的慢性化和癌变。

最后是编码酶及外衣位置区（P区）。

P区编码产物主要包括多种酶，如聚合酶、DNA依赖性的RNA聚合酶、RNA酶和DNA外切酶等。

这些酶在乙肝病毒的复制过程中起着重要作用，如聚合酶负责合成病毒RNA或DNA的互补链，RNA酶则参与RNA的处理和成熟，DNA外切酶参与病毒DNA的修复和整合。

这些酶的功能使得乙肝病毒具有高度的复制活性。

强的松增强 HBV 感染小鼠体内病毒复制表达

强的松增强 HBV 感染小鼠体内病毒复制表达于毅;刘凤君;石瑶;陆明娇;魏小丽【摘要】Objective:To detect the effect of glucorticoid on HBV replication of mice in vivo.Methods:HBV replication com-petent plasmid pAAV/HBV1 .2 was transferred into male C57L /6 mice by hydrodynamics-based in vivo transfection.24 h after transfec-tion,the mice were matched by body weight,age and serum level of Hepatitis B e antigen (HBeAg)and were divided into experiment group and control group,and then treated orally with prednisone or normal saline at interval of twenty four hours for 3 and 10 days.Four to six hours after the last administration,the mice were killed.HBV-DNA replication intermediates in liver were analyzed by Southern Blot Hybridization.The serum HBsAg and HBeAg were detected by chemiluminescent detection system.Results:HBV-DNA replication intermediates were detected in the livers of mice after treating orally with prednisone or normal saline for 3 days,the level of HBV-DNA replication intermediates of the experimental group was 0.127 times higher than that of the control group.However,after treatment for 10 days,compared with the control group of mice,the level of HBV-DNA replication intermediates of the experimental mice increased greatly.Quantitative analysis showed that prednisone enhanced the level of HBV-DNA replication intermediates appropriately 1 .534 fold.Three days after the above treatment,the serum HBsAg of the control mice and the experimental mice were 1 618.28 μg /μL and 1 666.23 μg /μL on average respectively,which showed nosignificant difference.Similarly,there was no significant difference in the se-rum HBeAg,which showed as follows:14.68 μg /μL,14.95 μg /μL on average respectively.In contrast,10 days after the same treat-ment,the serum HBsAg of the control and the experimental of mice were on average 8 059.40 μg /μL,1 1 885.87 μg /μL,respectively, and the serum HBeAg were 183.15 μg /μL,286.14 μg /μL,respectively.Both of the level of serum HBsAg and HbeAg from experi-mental mice were higher than that of control animals.Conclusion:The replication and expression of hepatitis B virus in the HBV infec-tion mice could be increased by prednisone orally and the increasing effect of prednisone on HBV is time-dependant,which provides fur-ther research about HBV reactivation caused by prednisone and other immunosuppressive drugs,and reminds clinicians,especially non-infected professional doctors to pay full attention to HBV reactivation when glucocorticoid is used in patients with HBV infection.%目的：检测糖皮质激素对 HBV 感染小鼠体内 HBV 复制的作用。

HBx蛋白通过调控原代小鼠肝细胞周期促进HBV复制的分子机制研究的开题报告

HBx蛋白通过调控原代小鼠肝细胞周期促进HBV复制的分子机制研究的开题报告
研究背景
乙型肝炎病毒（HBV）是一种DNA病毒，感染全球范围内约2亿人。

HBV感染可以导致肝炎、肝硬化以及肝细胞癌等严重疾病。

在HBV感染
的过程中，HBx蛋白（一种病毒编码的蛋白质）扮演了重要的调控角色，能够促进HBV复制，但其促进机制尚不清楚。

研究目的
本研究旨在探究HBx蛋白促进HBV复制的分子机制，特别关注其调节宿主细胞周期进行的可能性。

研究方法
本研究将使用原代小鼠肝细胞，通过转染HBV和HBx蛋白的方式建立HBV感染模型，并进行以下实验：
1. 测定细胞周期变化：使用流式细胞术测定细胞周期变化，并比较HBV感染与HBx蛋白转染对细胞周期的影响。

2. 分析细胞周期调控相关蛋白表达：通过Western blotting和实时
荧光定量PCR分析细胞周期调控相关蛋白的表达水平。

3. 分析HBx对细胞周期调控相关蛋白的影响：通过转染siRNA靶向HBx蛋白，分析其对细胞周期调控相关蛋白的影响。

4. 测定HBV复制情况：通过荧光定量PCR测定HBV复制情况，并
分析HBx蛋白对HBV复制的调节作用。

预期结果
本研究预期将揭示HBx蛋白调节宿主细胞周期的作用机制，并进一步探究其在促进HBV复制中的作用。

这些研究结果将有助于深入了解HBV感染的发病机制，为寻找更有效的治疗方法提供基础。

乙型肝炎病毒X蛋白在HBV复制中作用的研究进展

乙型肝炎病毒X蛋白在HBV复制中作用的研究进展
王月宾;唐红
【期刊名称】《华西医学》
【年(卷),期】2008(23)4
【总页数】2页(P917-918)
【关键词】乙型肝炎病毒X蛋白;HBV复制;乙型肝炎病毒(HBV);嗜肝DNA病毒;公共卫生问题;机体免疫反应;肝脏细胞;高发区
【作者】王月宾;唐红
【作者单位】四川大学华西医院感染性疾病中心生物治疗国家重点实验室感染性疾病研究室
【正文语种】中文
【中图分类】R373.21;R512.62
【相关文献】
1.乙型肝炎病毒X蛋白及其截短体与损伤DNA结合蛋白1在HBV复制中的作用[J], 杨旋;何松;罗娜;罗莉;樊浩;龚倩
2.乙型肝炎病毒X蛋白相关微小RNA差异表达在乙型肝炎病毒复制中的作用研究[J], 陈静;陈磊;吴孟超;石晓祯
3.HBx蛋白与宿主胞内蛋白相互作用对增强HBV复制的研究进展 [J], 刘慧;鲁凤民;
4.HBx蛋白与宿主胞内蛋白相互作用对增强HBV复制的研究进展 [J], 刘慧;鲁凤民
5.乙型肝炎病毒X蛋白在嗜肝DNA病毒复制及感染中的作用 [J], 方新华
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乙肝病毒X蛋白对肝星状细胞的增殖及其表达TGFβ1和CTGF的影响

Ａｂｍａｒｔ公司）；乙肝病毒Ｘ蛋白抗体［－ｈｅｐａｔｉｔｉｓＢ
的发生发展，如：调节转录、影响细胞修复、干扰各
ｖｉｒｕｓＸａｎｔｉｇｅｎａｎｔｉｂｏｄｙ（Ｘ３６Ｃ）ａｂ２７４１，英国Ａｂ —
叠攀ＪＦ２Ｏ１３Ｊｕｎｅ，ｖ。１４７Ｎ。３ｕｊｉａｎＭｅｄＵｎｉｖ～
１２７
乙肝病毒Ｘ蛋白对肝星状细胞的增殖及其表达丁Ｇ１和ＣＴＧＦ的影响
陈红英，陈治新，王小众
Ｌ０２／ｘ细胞ＨＢＶＸ基因的稳定表达。将ＨＳＣ细胞分别与Ｌ０２／ｘ、转染空质粒和未转染的肝细胞共培养３６ｈ，分别命名为ＨＳＣ／ｘ、ＨＳＣ／ｃｔｒ和ＨｓＣ／ＮＣ。ＣＣＫ一８法检测各组ＨＳＣ增殖，Ｒｅａｌ — ｔｉｍｅＰＣＲ法检测在ＨＳＣ增殖中起重要作用的ＴＧＦｐｌ和ＣＴＧＦ基因在各组ＨＳＣ中的ｍＲＮＡ表达。结果ＲＴＰＣＲ和Ｗｅｓｔｅｒｎｂｌｏｔ结果显示，Ｌ０２／ｘ细胞中有ＨＢＶＸ基因ｍＲＮＡ和蛋白的表达。ＣＣＫ一８法检测显示，ＨＳＣ／ｘ的增殖（０．７３７７ ±０．０１４２）显著高于ＨＳＣ／ｃｔｒ（０．４９７０ ±０．００８５）和Ｈｓｃ／ＮＣ（０．４９１３ ±０．０１８６），差别具有统计学意义（Ｐ＜０．０１）。Ｒｅａｌ — ｔｉｍｅＰＣＲ显

乙肝病毒X蛋白调节microRNAs促进肝癌细胞生长和迁移的研究的开题报告

乙肝病毒X蛋白调节microRNAs促进肝癌细胞生
长和迁移的研究的开题报告
一、研究背景
乙肝病毒（HBV）感染是全球范围内最严重的公共卫生问题之一。

慢性HBV感染可导致肝炎、肝硬化和肝细胞癌（HCC）。

HCC是全球范围内最常见的癌症之一，也是常见的肿瘤死亡原因之一。

HBV X蛋白是HBV编码的非结构蛋白之一，被认为与HBV相关性肝癌的发生和发展有关。

许多研究表明，X蛋白可调节microRNAs（miRNAs）的表达水平，从而调节相关信号通路，促进癌细胞生长和迁移。

二、研究目的
本研究旨在探究X蛋白调节miRNAs促进HBV相关性HCC细胞生长和迁移的机制，并寻找新的治疗策略。

三、研究内容和方法
1. 采用Bioinformatics技术，筛选出在HBV相关性HCC细胞中被X 蛋白调控的miRNAs。

2. 采用实时定量PCR技术，验证筛选出的miRNAs的表达水平。

3. 采用Western blot技术，检测相关信号通路的蛋白表达水平。

4. 采用细胞实验，研究不同miRNAs在HBV相关性HCC细胞生长和迁移中的作用。

5. 采用动物实验，研究miRNAs作为治疗靶点的潜在价值。

四、研究意义
本研究将提高我们对HBV相关性HCC生长和迁移机制的理解，揭示X蛋白调节miRNAs的作用机制，为寻求新的治疗策略提供基础和理论支
持。

同时，本研究也有望为HBV相关性HCC的预防和治疗提供新的治疗靶点和战略。

乙型肝炎病毒X蛋白反式调节基因11剪切体的克隆表达和功能研究的开题报告

乙型肝炎病毒X蛋白反式调节基因11剪切体的克隆表达和功能研究的开题报告一、研究背景乙型肝炎病毒（HBV）是一种世界范围内广泛存在的病毒，它引起的肝炎病毒感染严重影响人类健康。

HBV感染导致肝脏炎症、坏死、纤维化和肝癌等严重后果。

乙肝病毒X蛋白（HBx）在HBV感染中扮演着关键的作用，它参与了病毒的复制、转录和肝癌的发生等多个生物学过程。

然而，目前尚不清楚HBx蛋白的详细分子机制和功能。

HBx 蛋白的剪切体形式是一种已知的功能结构抑制物，可逆调节多个剪切酶和翻译调节因子，从而将跨膜、细胞质和核内靶位点的mRNA的生成和代谢稳态平衡调控在细胞内。

反式调节基因11（RSF11）是一种组蛋白去乙酰化酶蛋白，其过度表达与肝癌的发生和发展有关。

有研究表明，RSF11可直接与HBx相互作用，可能是HBx剪切体结构的组成部分。

因此，研究HBx剪切体和RSF11相互作用的分子机制可以深入了解乙肝病毒感染的生物学过程和肝癌的发生机制。

二、研究目的本研究旨在克隆表达人类HBx反式调节基因11剪切体，进一步探究其对HBV感染和肝癌发生的调控作用。

具体研究目的如下：1. 克隆HBx反式调节基因11剪切体的相关基因和蛋白序列。

2. 构建HBx-RSF11互作的表达载体并进行转染。

3. 分析HBx-RSF11互作的影响，探究其对HBV感染和肝癌发生的作用。

三、研究方法1. 克隆HBx反式调节基因11剪切体的相关基因和蛋白序列。

根据GenBank数据库的相关信息，设计HBx反式调节基因11剪切体的引物并进行PCR扩增。

将PCR产物进行测序和分析，确保其正确性。

2. 构建HBx-RSF11互作的表达载体并进行转染。

将RSF11基因和HBx基因分别克隆到表达载体中，并构建带有不同标签的融合蛋白。

将不同标签的重组蛋白转染入细胞中，采用共免疫印迹和免疫共沉淀等手段，检测其相互作用。

3. 分析HBx-RSF11互作的影响，探究其对HBV感染和肝癌发生的作用。

乙型肝炎病毒x基因转基因小鼠模型的建立及培育

乙型肝炎病毒x基因转基因小鼠模型的建立及培育熊俊;訾晓渊;姚玉成;金艳花;李建秀;朱海英;王新民;胡以平;余宏宇【期刊名称】《第二军医大学学报》【年(卷),期】2002(23)11【摘要】目的:建立可表达乙型肝炎病毒X蛋白的HBx基因(adr亚型)转基因小鼠模型,以研究x基因的功能。

方法:采用基因重组技术构建含有CMV启动子和HBx 基因(adr亚型)开放阅读框(ORF)的真核表达载体pcDNA3-HBx。

该载体经Sal I 限制性内切酶线性化后,琼脂糖电泳回收目的片段,用原核显微注射法将其注射入雄原核,制备转基因小鼠。

复合PCR法在基因组水平筛选HBx基因转基因小鼠founder;免疫组织化学法在蛋白水平检测X蛋白在这些小鼠中的表达情况。

结果:成功构建了HBx基因真核表达载体pcDNA3-HBx。

经原核显微注射法将目的片段注射入受精卵雄原核后,出生并存活了11只新生鼠,经PCR检测后获得5只founder转基因小鼠,命名为C57-TgN(HBx)SMMU。

免疫组织化学检测发现5只PCR阳性小鼠的肝细胞质中均有X蛋白的表达。

将这5只转基因小鼠与正常同系异性小鼠交配,进行传代培育,复合PCR法筛选阳性转基因小鼠,目前已传至F4代。

结论:本研究成功地产生了稳定遗传HBx基因并表达X蛋白的转基因小鼠C57-TgN(HBx)SMMU,它将有利于体内研究HBx基因在肝细胞癌发生中的作用。

【总页数】4页(P1184-1187)【关键词】乙型肝炎病毒;X蛋白;转基因小鼠;HBx基因【作者】熊俊;訾晓渊;姚玉成;金艳花;李建秀;朱海英;王新民;胡以平;余宏宇【作者单位】第二军医大学基础医学部细胞生物学教研室;长征医院病理科【正文语种】中文【中图分类】R373.21【相关文献】1.乙型肝炎病毒核心基因转基因小鼠的建立 [J], 刘红;张钦宪;胡以平2.人乙型肝炎病毒x基因转基因小鼠模型的建立 [J], 屠亚军;琦祖和;杨鹏3.乙型肝炎病毒X基因转基因小鼠模型的建立及其应用研究进展 [J], 毛华伟;赖国旗4.乙型肝炎病毒(adr亚型)preS2-S基因转基因小鼠的建立 [J], 苏小平;姚玉成;訾晓渊;赵书民;熊俊;李建秀;王新民;丁佳;许燕;余宏宇;胡以平5.乙型肝炎病毒X基因转基因小鼠的建立及其表型分析 [J], 熊俊;訾晓渊;姚玉成;李建秀;刘厚奇;胡以平因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

HBV小鼠模型是什么？HBV小鼠如何选择？

图 1 HBV 感染、免疫病理学和治疗⼩⿏模型简介⼄肝抗病毒药物筛选模型介绍在⼄肝抗病毒药物筛选⽅⾯，传统的⽅法是⽔动⼒和 AAV 相结合的模型。

rAAV8-1.3HBV 经尾静脉注射到正常的 C57BL/6 ⼩⿏体内，其表达⽔平随重组病毒注射剂量的增加⽽升⾼，⾼剂量注射时可造成超过 40% 的肝细胞感染 HBV，⾎清中 HBV DNA 可达 10 的 5 次⽅以上。

但要注意不同⼩⿏品系HBV 感染的表型有差别。

⽽⽬前应⽤较多的是在⼄肝抗病毒药物筛选⽅⾯应⽤较多的转基因⼩⿏模型，是 Guidotti 等[4] 研发的，其在 HBV 全长序列 5'末端重复⼀个 C 基因和 X 基因及其增强⼦，构建了 1.3 倍全长 HBV 基因组的转基因⼩⿏，该⼩⿏体内可检测到 HBsAg、HBeAg 和 HBcAg，也可观察到⼩⿏体内完整病毒颗粒的形成，且病毒颗粒具有感染性，HBV 复制⽔平与慢性⼄型肝炎患者相当。

更精准的⼈源化肝脏模型啮齿类最完备的 HBV 感染模型莫过于⼈⿏嵌合肝脏⼩⿏（⼈源化肝脏模型），因为在⼩⿏肝脏中定植的是⼈类的肝脏细胞，因⽽更好模拟了 HBV ⾃然感染和 cccDNA 复制过程。

⽬前，⽂献报道和商品化的有 5 种⼈源化肝脏⼩⿏模型：1、uPA-SCID；2、FRG；3、TK-NOG；4、AFC8；5、URG[6～11，见表 2]其中 URG® ⼩⿏，是国内最早和唯⼀商品化的⼈源化肝脏⼩⿏模型。

URG® ⼩⿏简介及优势URG® ⼩⿏由 4 种基因修饰动物模型交配获得，包含 2 个转基因和 2 个基因敲除。

其核⼼模型源于2006 年北京⼤学邓宏魁教授实验室，相关研究⼈员构建了 TRE-uPA 转基因⼩⿏和 Alb-rtTA 转基因⼩⿏，然后交配获得了 Alb-rtTA/TRE-uPA 双阳性⼩⿏；通过 Dox 诱导，在该⼩⿏中检测到了 uPA 表达和肝损伤[6]。

乙型肝炎病毒x抗原在HBV宫内感染中的作用机制

乙型肝炎病毒x抗原在HBV宫内感染中的作用机制白桂芹;付逢萍;唐瑶【摘要】目的研究高复制水平HBV血清感染人绒毛膜滋养细胞株JEG-3后细胞内乙型肝炎病毒x抗原(HBxAg)及其下游蛋白在细胞内的表达情况,探讨HBxAg在HBV宫内感染中的作用.方法对人早孕绒毛膜滋养细胞株JEG-3进行传代培养,将高复制水平乙型肝炎病毒血清(HBV-DNA定量为107～108拷贝/mL)与传代培养的JEG-3细胞共同孵育48～72 h;逆转录-聚合酶链式反应检测细胞内HBx-mRNA水平;Western blot检测细胞内HBxAg的表达;免疫组化检测细胞内HBxAg表达以及细胞内磷脂酰肌醇激酶3(PI3K)的表达;流式细胞仪检测细胞内pAKT的表达.结果 HBV感染JEG-3细胞后,在细胞中检测到HBx-mRNA,并检测到HBxAg的表达,同时发现细胞内PI3K及pAKT的表达水平明显增加,经统计学分析,差异有统计学意义(P＜0.05).结论 HBxAg/PI3K/pAKT抗细胞凋亡途径是高复制水平HBV宫内感染的可能机制.%Objective To study the expressions of hepatitis B virus X antigen (HBxAg) and downstream protein after human chorionic trophoblast cell line (JEG-3) is infected with HBV serum of high replication level and to explore the role of HBxAg in HBV intrauterine infection. Methods Human chorionic trophoblast cell line JEG-3 during early pregnancy was subcultured, and the hepatitis B virus serum of high replication level (HBV-DNA 107-108copy/ml) and subcultured cells (JEG-3) were incubated together for 48-72 hours. HBx-mRNA level was detected by reverse transcription-polymerase chain reaction) Western biot was used to detect the intracellular expression of HBxAg. Immunohistochemistry was applied to assay intracellular expression of HBxAg and the changes of theintracellular expression level of phosphatidylinositol kinase 3 (P13K); flow cytometry was used to assay the changes of intracellular expression level of pAKT. Results After human chorionic trophoblast cell line JEG-3 was infected with HBV in vitro, HBx-mRNA and HBxAg expressions were detected in the cells. And the intracellular expression levels of PI3K and pAKT significantly increased (P<0.05). Conclusion HBxAg/PI3K/ pAKT pathway is the possible mechanism of HBV intrauterine infection of high replication level.【期刊名称】《西安交通大学学报（医学版）》【年(卷),期】2012(033)005【总页数】6页(P631-635,639)【关键词】乙型肝炎病毒x抗原;乙型肝炎病毒(HBV);体外感染;宫内感染【作者】白桂芹;付逢萍;唐瑶【作者单位】西安交通大学医学院第一附属医院妇产科,陕西西安710061;郑州市第一人民医院妇产科,河南郑州 450000;西安交通大学医学院,陕西西安710061【正文语种】中文【中图分类】R714.7乙型肝炎病毒（hepatitis B virus，HBV）的母婴传播是慢性病毒携带状态的主要原因，全世界乙肝感染者中有40%～50%的患者是由母婴垂直传播所致［1］，与慢性肝炎、肝硬化、肝癌的发生密切相关。

乙型肝炎病毒B,C基因型X蛋白在原核系统中的克隆表达与纯化的开题报告

乙型肝炎病毒B，C基因型X蛋白在原核系统中的克隆表达与纯化的开题报告1. 研究背景肝炎病毒引起的肝炎是一种常见的严重传染病，其中乙型肝炎病毒（HBV）和丙型肝炎病毒（HCV）是主要病原体之一。

HBV和HCV均是RNA病毒，但它们的基因组结构和复制机制有很大的差异。

HBV是一种DNA病毒，它的复制需要通过病毒蛋白X（HBx）进行调控和协同。

HBx 蛋白参与了病毒感染、基因转录和蛋白翻译等过程，是HBV感染过程中的关键分子。

目前，原核表达系统已经成为获得大量重组蛋白的重要手段。

因此，利用原核表达系统克隆表达和纯化HBV和HCV的病毒蛋白，特别是HBx 蛋白，是深入研究HBV和HCV生物学特性的关键手段之一。

2. 研究目的本研究旨在通过原核表达系统构建乙型肝炎病毒B/C基因型X蛋白的克隆表达载体，并利用该载体在大肠杆菌中表达和纯化X蛋白。

通过纯化和分析得到的X蛋白，对其进行鉴定和结构分析，为了解其功能提供依据，同时为HBV和HCV感染治疗提供基础研究支持。

3. 研究方法3.1 基因合成利用基因合成技术合成B/C基因型X蛋白的编码基因，基因序列根据NCBI数据库中已知的相关ATCC信封上提供的信息进行设计。

3.2 克隆表达载体构建将基因合成的X蛋白编码基因克隆到具有适当限制酶切位点的原核表达载体中，如pET-28a(+)载体。

3.3 原核表达和蛋白纯化将重组表达载体转化到BL21(DE3)大肠杆菌，感染菌液后加入适当浓度的异丙基-β-D-硫代半乳糖苷（IPTG）诱导重组蛋白表达。

随后对细胞进行超声破裂，采用以Ni2+离子为基础材料的亲和层析法纯化目标蛋白。

3.4 蛋白鉴定和结构分析通过SDS-PAGE和Western blot检测纯化后的蛋白是否为目标X蛋白，并借助色谱技术、质谱分析等结构分析手段确定X蛋白的三维空间结构。

4. 研究意义本研究将为HBV和HCV的感染治疗提供基础研究支持，同时也优化和完善了利用原核表达系统进行病毒蛋白表达和纯化的技术路径。

乙型肝炎病毒X蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响的开题报告

乙型肝炎病毒X蛋白对原代小鼠肝细胞周期的影响
的开题报告
1. 研究背景
乙型肝炎病毒是一种严重的传染病，会导致肝脏炎症、肝硬化和肝
癌等疾病。

乙型肝炎病毒X蛋白是病毒基因组中的一种重要蛋白，具有
调节宿主细胞周期、转录和细胞凋亡等作用。

目前，乙型肝炎病毒X蛋
白对肝细胞周期的影响还存在较多的争议，因此有必要开展深入的研究。

2. 研究目的
本研究旨在探究乙型肝炎病毒X蛋白对原代小鼠肝细胞周期的调控
作用，并深入探讨相关机制，为进一步阐明乙型肝炎病毒X蛋白参与肝
癌发生发展的分子机制提供理论基础。

3. 研究方法
本研究使用原代小鼠肝细胞悬浮培养并转染乙型肝炎病毒X蛋白表
达质粒，采用Western blotting和实时荧光定量PCR技术检测细胞中乙
型肝炎病毒X蛋白的表达水平。

利用流式细胞仪检测细胞周期的变化，
并通过免疫荧光染色和蛋白质印迹等方法探究乙型肝炎病毒X蛋白调控
细胞周期的可能机制。

4. 研究意义
本研究将对乙型肝炎病毒X蛋白参与肝癌发生发展的分子机制进行
深入探讨，为肝癌的预防和治疗提供新的理论依据。

同时，本研究也有
助于深入了解乙型肝炎病毒感染的分子机制，为病毒相关疾病的诊断和
治疗提供新的思路。

hbv各基因区编码产物 -回复

hbv各基因区编码产物-回复HBV各基因区编码产物乙型肝炎病毒（HBV）是一种致命的病毒感染，广泛流行于全球范围内。

该病毒具有一个特殊的基因组，它可以编码多个产物。

在这篇文章中，我们将一步一步地回答关于HBV各基因区编码产物的问题，以帮助读者更好地了解这个病毒。

1. HBV基因组结构HBV的基因组是由一个环状DNA分子组成。

该基因组可以分为四个基因区域，分别是S（表达HBsAg的表面抗原）、C（编码核衣壳蛋白）、P （编码逆转录酶）和X（编码X蛋白）。

2. S基因区编码产物S基因区是HBV基因组中最重要的区域之一，它编码一系列的表面抗原（HBsAg）。

HBsAg是HBV诱发主机产生免疫反应的关键蛋白。

它是病毒颗粒的主要成分，并且可以用来检测HBV感染。

3. C基因区编码产物C基因区编码的产物是核衣壳蛋白（HBcAg）。

HBcAg是HBV中核心颗粒的主要成分，具有基本的抗原性。

它在病毒复制、装配和释放过程中起着重要作用，并且可以作为HBV感染的标志。

4. P基因区编码产物P基因区编码的产物是逆转录酶（RT），它是一个多功能的酶。

逆转录酶能够将病毒的RNA基因组逆转录成DNA，并插入到宿主细胞的基因组中。

这种逆转录过程是HBV感染和复制的关键步骤，因此逆转录酶在HBV感染中具有重要作用。

5. X基因区编码产物X基因区编码的产物是X蛋白。

X蛋白是一个非结构性蛋白，具有多种功能。

它能抑制宿主细胞的基因转录和蛋白合成，从而影响细胞周期和凋亡等过程。

此外，X蛋白还能干扰免疫反应，增加HBV感染的潜在性和病变。

总之，HBV基因组编码的产物在病毒感染的各个阶段起着至关重要的作用。

S蛋白和C蛋白是病毒的主要结构成分，通过它们，我们可以检测HBV感染。

P蛋白和X蛋白则在复制和感染过程中发挥重要的调控作用。

对HBV基因区编码产物的深入了解，有助于我们更好地理解该病毒的感染机制，并有助于开发新的治疗和预防策略。

希望这篇文章能帮助读者更好地了解HBV各基因区编码产物。

乙肝病毒X蛋白通过激活JAK2／STAT3信号通路调节肾小管上皮细胞凋亡

乙肝病毒X蛋白通过激活JAK2／STAT3信号通路调节肾小管上皮细胞凋亡何平;李丹;李德天;冯国和【摘要】目的：观察乙肝病毒X蛋白（HBx）对肾小管上皮细胞凋亡的作用，并探讨其在乙型病毒肝炎相关性肾炎（HBVGN）发病中的分子机制。

方法：将构建好的HBx真核表达载体pcDNA3．1（＋）-HBx转染至体外培养的人肾近曲小管上皮细胞（ HK-2细胞）中。

Western blotting 法检测转染后目的蛋白的表达及JAK2/STAT3信号通路的活化。

细胞免疫荧光检测STAT3及p-STAT3表达水平。

CCK-8法检测细胞增殖活性。

Hoechst 33342染色观察细胞的形态学改变。

透射电镜观察细胞的超微结构及凋亡。

Annexin V/PI双染流式细胞术检测细胞凋亡率。

结果：转染目的基因HBx后，p-JAK2及p-STAT3表达水平均显著增加；同时，细胞增殖明显受抑。

透射电镜、Ho-echst 33342染色及Annexin V/PI双染流式细胞术检测发现HBx促进HK-2细胞凋亡。

AG490（ JAK2/STAT3信号通路阻断剂）孵育后能够部分阻断JAK2/STAT3信号通路，减少HBx 所致细胞凋亡。

结论：HBx 通过激活JAK2/STAT3信号通路导致肾小管上皮细胞凋亡，可能参与了HBV直接损伤肾组织的致病机制。

%AIM: To investigate the correlation of hepatitis B virus X protein (HBx) with renal tubular epithelialcell apoptosisin hepatitis B virus-associated glomerulonephritis (HBVGN) and the possible signaling mechanism. METHODS: The activation of JAK2/STAT3 signal pathway and the expression of apoptosis -related proteins in humankindey proximal tubular epithelial cells (HK-2 cells) were determined by Western blotting after transfection with HBx eukaryoticexpression vector.The cell proliferation was observed by CCK-8 assay.The cellapoptosis was analyzed by the imagingof HO33342 staining, transmission electron microscopy and flow cytometry with Annexin V /PI double staining.RESULTS:After transfection of the target gene HBx, the expression levels of both p-JAK2 and p-STAT3 were significantly increased.At the same time, the cell proliferation was obviously inhibited, and the apoptotic rate was increased.After incubationwith AG490, the JAK2/STAT3 signal pathway was partially blocked, and the cell apoptosis induced by HBx was reduced. CONCLUSION: HBx up-regulates the activation of JAK2/STAT3 signal pathway to induce renal tubular epithelialcell apoptosis, which is possibly involved in the pathogenic mechanism that HBV directly damages nephridial tissue .【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2014(000)008【总页数】10页(P1451-1460)【关键词】细胞凋亡;乙肝病毒X蛋白;JAK2/STAT3 信号通路;HK-2细胞;AG490【作者】何平;李丹;李德天;冯国和【作者单位】中国医科大学附属盛京医院肾内科，辽宁沈阳110004;中国医科大学附属盛京医院肾内科，辽宁沈阳110004;中国医科大学附属盛京医院肾内科，辽宁沈阳110004;中国医科大学附属盛京医院感染科，辽宁沈阳110004【正文语种】中文【中图分类】R363乙型肝炎病毒(hepatitis B virus，HBV)感染是全球范围内重要的公共卫生问题之一。

乙肝病毒X基因转化人肝细胞裸鼠成瘤实验及其机制研究的开题报告

乙肝病毒X基因转化人肝细胞裸鼠成瘤实验及其机制研究的开题报告题目：乙肝病毒X基因转化人肝细胞裸鼠成瘤实验及其机制研究一、研究背景及意义乙型肝炎病毒（HBV）是一种严重影响人类健康的病原体，约有3500万人患有该病毒。

尽管开发了许多疫苗和抗病毒药物，但该病仍然是全球范围内的健康问题。

HBV X基因是HBV基因组中常见的开放读码框架，经过转录和翻译后产生的X蛋白可以促进细胞增殖，凋亡抑制并抑制DNA修复。

这些功能使得HBx蛋白成为一种有争议的致癌基因。

同时，文献报道后细胞转染HGx基因后在肝部组织中时靠Cell Cycle的调控，促使肝细胞增殖和致癌的发生。

本实验旨在构建乙肝病毒X基因转化人肝细胞裸鼠模型，通过研究HBx蛋白的作用机制以及裸鼠肿瘤的生长规律来深入探究HBx蛋白在肝癌发生中的作用。

二、研究内容及方案1.人肝细胞株的构建：本实验选用常用的肝癌细胞株HepG2进行基因转染，将乙肝病毒X基因载体导入HepG2中，利用PCR和Western Blot等技术验证HBx蛋白的表达情况。

2.裸鼠肿瘤移植：将HBx基因转染的HepG2细胞移植至裸鼠体内，观察裸鼠生长情况和监测肿瘤体积的变化。

3.机制研究：采用组学方法（包括转录组学，蛋白质组学和代谢组学等）研究HBx基因表达的影响，以阐明HBx蛋白在肝癌发生中的作用机制。

4.药物干预：应用现有药物干预裸鼠肝癌模型，分析药物对肿瘤的影响以验证HBx蛋白的作用机制。

三、研究预期成果通过本实验的开展，预计获得以下成果：1.成功构建HBx基因转染的人肝细胞株，并验证HBx蛋白的表达情况。

2.成功建立HBx肝癌裸鼠模型，并监测和记录裸鼠肝癌的生长和转移规律，为研究HBx蛋白在肝癌发生中的作用机制提供直接的图像数据支持。

3.利用组学方法阐明HBx蛋白在肝癌发生中的作用机制。

4.验证某些药物在抑制HBx蛋白功能的同时，是否能降低裸鼠肝癌的发生率，以期为寻找肝癌的治疗方法提供理论依据。

HBV X蛋白结合共同转录因子ⅡB的研究

HBV X蛋白结合共同转录因子ⅡB的研究中华传染病杂志1999年第3期第17卷论著作者：杨益大马亦林郑临村上清史单位：杨益大、马亦林、郑临310003杭州，浙江大学附属第一医院；；村上清史日本金泽大学肿瘤研究所关键词：乙型肝炎病毒X蛋白；共同转录因子ⅡB；结合【摘要】目的研究乙型肝炎病毒X蛋白(HBV X蛋白)能否结合共同转录因子ⅡB(TF ⅡB)。

方法应用体外蛋白与蛋白结合试验(Pull-Down试验)和Far-Western Blot试验，以及细胞内联合免疫沉淀试验。

结果HBV X蛋白能直接与普通TFⅡB结合。

HBV X的X199(51-99)是结合TFⅡB的最小基团。

研究还证实土拨鼠肝炎病毒X蛋白(WHX)同样能与TFⅡB结合。

细胞内联合免疫沉淀试验更进一步证实了体外蛋白与蛋白结合实验的结果。

结论嗜肝DNA病毒X蛋白与TFⅡB结合是其发挥反式转录激活作用的机制之一。

Study on the binding of HBV X protien to the general transcription factor ⅡBYANG Yida, MA Yilin, ZHEN Lin, et al.Department of Infectours Diseases, The First Affiliated Hospital of Zhejiang University, Hangzhou 310003【Abstract】Objective To study the binding of HBV X protein(HBV X) to the general transcription factor ⅡB(TF ⅡB).Methods Pull-Down assay in vitro, Far-Western Blot assay and Co-Immunopreci-pitation assay in vivo were used to detect the binding of HBX protien to TF ⅡB.Results It was found that HBX binded TF ⅡB directly and HBV X 199(51-99)is the minimal domain responsible for the binding to TF ⅡB. Furthermore, the binding of TF ⅡB-HBX in vitro was confirmed by intracellular co-immunoprecripition assay. It was also found that the woodchuck hepatitis virus X protien (WHX) was to bind TF ⅡB.Conclusion These RE results suggest that the interaction between HBX and TF ⅡB maybe of the mechanisms which account for its transcription activity.【Key words】Hepatitis B virus X protein General transcription factor ⅡB Binding乙型肝炎病毒(HBV)X基因编码相对分子质量为17 000的X蛋白(HBV X蛋白)，具有反式转录激活作用，能广泛激活病毒和细胞的启动子的转录，在HBV复制，感染以及慢性HBV感染所致肝细胞癌(HCC)中均有十分重要的作用［1］。