菌种的保存方法介绍
微生物菌种保藏的原理和方法
微生物菌种保藏的原理和方法
一、原理：
1.休眠状态：微生物菌种在低温下可进入休眠状态，减缓代谢活动，延长存活时间。
2.冷冻保存：通过降低温度到零下或较低的温度，减慢微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
3.干燥保存：通过去除菌种周围的水分，降低微生物体内化学反应速率，延缓其代谢活动和死亡过程。
4.冻干保存：先冷冻再干燥保存，通过冷冻降低微生物体内的水分活性，再通过干燥去除冻结水，使菌种能在实验室条件下保存较长时间。
二、方法：
1.冷冻保存：
（1）使用离心管或培养管制备菌种的蛋白质保护液，可以是细胞培养基、缓冲液等。
（2）将培养物转移到保护液中，使其悬浮均匀。
（3）加入保护剂，如甘油或DMSO（二甲亚砜），提高菌种的冷冻抵抗力。
（4）将混合物分装到小容器或冻存管中。
（5）使用特定的冷冻方案，将菌种快速冷冻，并存储在低温下，通常为零下80℃或更低的温度。
2.干燥保存：
（1）用无菌技术转移到无菌条件下的试管中。
（2）将菌种培养在无菌的固体培养基上。
（3）收集培养物，将其平均分布在无菌试管或培养皿中。
（4）将试管或培养皿放在无菌的通风柜中，使培养物在无菌环境下干燥。
（5）将干燥的培养物贮存在干燥无菌容器中。
3.冻干保存：
（1）将培养物转移到无菌离心管或培养皿中。
（2）使用细菌培养基将菌种制备为细菌悬浮液。
（3）在细菌悬浮液中加入保护剂，如蔗糖或甘露醇。
（4）将混合物分装到冻干瓶中。
（5）使用低温冷冻机将菌种冷冻为固体，再将其放入冻结干燥机中进行冻干。
（6）将冻干的菌种贮存在密封的冻干瓶中。
菌种的储存条件
菌种的储存条件
菌种的储存条件
菌种是指具有一定遗传特性和生物学特性的一种微生物群体，是进行科学研究以及工业应用的基础。为了长期保存和保持菌种的稳定性，在储存菌种时需要注意一些条件。下面将详细介绍菌种的储存条件。
一、菌种的储存温度
温度是影响菌种存活和保持活力的重要因素。不同种类的菌种对于温度的要求不同，一般可分为冷冻储存和低温储存两种方式。
1. 冷冻储存：一般情况下，冷冻储存温度为-80℃，这是因为在这个温度下，细胞活动几乎停止，生化反应和分解过程也会减缓，从而能够稳定保存菌株。此外，为了防止温度波动对菌种的影响，冷冻储存应该选择一个温度恒定的冷冻设备。
2. 低温储存：低温储存是相对于冷冻储存而言的，温度范围通常在-20℃至-70℃之间。在低温下储存菌种，要求采用短时间转入低温环境，快速降温，并注意防止温度波动。
二、菌种的储存液
菌种的储存液是将菌株保存在液体培养基中的一种方式，主要有菌种原液储存和冷冻储存液两种形式。储存液的选择应根据
不同菌株的要求、实验室设备和储存方式来决定。
1. 菌种原液储存：菌种原液储存适用于一些较为敏感的菌株，要求其活力尽可能得到保留。菌种原液储存液一般由培养基和一定浓度的甘油混合而成，需要在使用前进行无菌处理。
2. 冷冻储存液：冷冻储存液中添加了一定比例的甘油或乳糖，可以减少冰晶对菌株的损伤，并增加了冷冻菌株的保活率。此外，在选择储存液时还可以根据菌株特性添加一些物质，如保鲜剂、抗生素等，以提高菌株的储存质量。
三、菌种的储存容器
菌种的储存容器对于菌株的保存稳定性以及长期保存的效果有着重要的影响。常见的菌种储存容器主要有冷藏管、冷冻管、培养皿、冻干菌种等。
常用的菌种保藏方法及其优缺点
常用的菌种保藏方法及其优缺点
菌种保藏是微生物学研究中的重要环节，其目的是长期保存各类菌种以便于日后的使用和研究。常用的菌种保藏方法有冷冻保存、制备淡防冻溶液、干燥保存、液氮冷冻保存、冷冻干燥保存等。下面是这些方法的优缺点。
1.冷冻保存：
冷冻保存是通过将菌种保存在低温下，在液氮冷冻罐中或冷冻干燥保存，常见的保存温度为-80°C或液氮温度。其优点是保存方便，菌种保存时间相对较长；缺点是保存设备和条件要求较高，保存过程中会有一定的细胞破坏。
2.制备淡防冻溶液：
制备淡防冻溶液是指制备一种富含保护物质的冻存液，然后将菌种悬浮于其中，并在-20°C或-80°C保存。其优点是相对简单，易于操作以及相对较长的保存时间；缺点是需要特定的冻存液配方和保存温度。
3.干燥保存：
干燥保存是将菌种培养物在低温和低气压下干燥，然后保存于干燥剂中。其优点是较为简单，设备要求低，保存时间较长；缺点是保存后重新复苏的成功率较低，保存过程中可能会有一定的细胞破坏。
4.液氮冷冻保存：
液氮冷冻保存是将菌种保存在极低温的液氮中，常见的保存方法是将菌种培养物按一定比例混合液氮与甘油，然后使用液氮保存。其优点是保存时间极长，细胞破坏较小；缺点是保存设备和条件要求较高。
5.冷冻干燥保存：
冷冻干燥保存是将菌种首先冷冻，然后通过真空干燥的方法去除水分，最后保存在干燥剂中。其优点是保存效果稳定，保存时间长；缺点是设备
要求较高，操控难度大。
总的来说，不同的菌种保藏方法有各自的优点和缺点。选择合适的方
法应根据菌种的特性、实验室的设备和条件、保藏期限以及实验目的等因
菌种保存操作方法
菌种保存操作方法
菌种的保存操作方法主要包括以下几个步骤：
1. 预处理：将菌种转接到适宜的培养基上，并培养出适量的细胞。
2. 选择保存方法：根据菌种特性和保存时间的要求，选择合适的保存方法，常见的方法有低温保存、冷冻保存和冷冻干燥保存。
3. 低温保存：将菌种接种在石蜡或冰芯样管中，并将其放入冷藏库中保存。一般保存温度在4以下，可以延长菌种的保存时间，但菌种仍然会有某些代谢活动。
4. 冷冻保存：菌种培养后，用无菌培养基或添加防护剂的无菌培养基冻结培养基培养的菌株。将菌株和培养基混合后，迅速冷冻至-70以下，并将其存放在液氮罐中。这种保存方法可以延长菌种的保存时间，并防止细胞活力的丧失。
5. 冷冻干燥保存：将菌种培养后，将菌株和保护剂混合，制成细胞悬浮液，用真空冷冻干燥仪将其冷冻干燥。干燥后，将其密封在干燥剂中保存，可以在室温下保存数年甚至数十年，且菌种仍然具有一定的活力。
需要注意的是，在保存菌种时要注意保持无菌条件，并在保存前对菌种进行鉴定和纯化，以确保保存的菌种是纯种菌株。此外，保存后的菌种要定期检查其存活
率和纯度，必要时进行保存方法的更替。
保存菌种的方法
（一）培养基保存法利用各种斜面和半固体培养基，加上石蜡油保存菌种，是一种最常用而又简易的保存方法。 1.普通琼脂斜面保存法：肠道杆菌、葡萄球菌等一般细菌可接种于不含糖的普通琼脂斜面上，斜面底部应加少许无糖肉膏汤，以防干涸。经35℃培养18～24h后，移种于4℃冰箱中，一般可保存一个月，每月传代一次。 2.血液琼脂斜面保存法：链球菌、肺炎链球菌应接种于血液琼脂斜面上，35℃培养生长后，置4℃冰箱中保存，链球菌须半个月至1个月移种一次，肺炎链球菌的新分离菌株须2～4天移种一次，以后逐渐延长移种时间，在适应后可延至半个月移种一次。 3.巧克力色斜面保存法：宜保存脑膜炎奈瑟菌，并在35℃孵箱中保存，一般每2天移种一次。 4.鸡蛋斜面保存法：适于保存含有Vi抗原的沙门菌属及其他含表面抗原的细菌，一般可保存一个月。 5.半固体穿刺保存法：将细菌接种于琼脂半固体或血清琼脂半固体内，经35℃培养18～24h，再以无菌方法加入灭菌的液体石蜡。高度约lcm，置4℃冰箱保存。保存时间可达3～6个月。（二）干燥保存法原理是将细菌体内的水分蒸发掉，使其处于休眠和代谢停滞状态，从而达到长期保存菌种的目的。菌种干燥后低温保存，可保存数年至十几年。（三）冷冻干燥保存法本法又称冷冻真空干燥法。它综合利用了各种有利于菌种保存的因素（低温、干燥和缺氧等），是目前最有效的菌种保存方法之一。用本法保存的菌种具有成活率高，变异性小等优点，保存期一般3～5年，有的可长达10年以上。（四）脱脂牛奶保存法
保存菌种的方法
保存菌种的方法
保存菌种是微生物学研究中非常重要的一项工作。菌种可以通过不同的方法进行保存，以保证其长期的存活和保持其特性。以下是几种常见的保存菌种的方法：
1. 冷冻保存：将菌株培养在富含营养物的培养基上，然后将细菌悬液添加到含有冷冻保护剂的离心管中，将其置于-80℃的冰箱中冷冻保存。这种方法可以长期保存菌株，但需要注意冻存液的配制以及冷冻和解冻的操作。
2. 干燥保存：将菌株在富含营养物的培养基上生长，将其转移到无菌纸片上，然后在室温下晾干并密封保存。这种方法不需要低温保护，但需要在干燥的条件下保存，并且菌株的保存时间较短。
3. 防冻干保存：将菌株培养在富含营养物的培养基上，然后将其转移到无菌滤纸片上，在防冻干剂的条件下进行干燥处理，并在干燥后密封保存。这种方法可以在室温下保存菌株，并且可以长期保存，但需要注意干燥和密封的条件。
4. 长期冷藏保存：将菌株培养在富含营养物的培养基上，然后在4℃的冰箱中长期保存。这种方法简便易行，但保存时间较短，通常不超过6个月。
需要注意的是，保存菌株的方法应根据不同的菌株和实验需求来选择。保存菌株时也需要注意无菌操作，选择适当的保存容器和保存条件，并及时更新保存记录，以保证菌株保存的质量和可靠性。
野生菌种如何保存方法
野生菌种如何保存方法
引言
野生菌种是重要的生物资源，对于研究生物多样性、开发新药和农业生产都具有重要意义。为了保存野生菌种并保持其特异性状，科研人员开展了许多方法研究和实践。本文将介绍几种常用的野生菌种保存方法，并探讨其优缺点。
1. 冷冻保存
冷冻保存是最常见和简单的菌种保存方法之一。将野生菌株培养在适宜的培养基上，然后将菌株悬液或培养基混合物置于-80的冷冻机中冻结保存。这种方法可以在较长的时间内保持菌株的活力，常用于保存需长期存储和重要的菌株资源。优点：
- 易于实施和操作，不需要昂贵的设备。
- 能够保存多种野生菌株，并保持其特异性状。
- 蛋白质和细胞结构可以在冷冻存储中得到很好的保护，有助于菌株的恢复。缺点：
- 需要对冷冻设备进行定期维护，以确保其正常工作。
- 对冷冻、解冻过程需要严格的操作控制，否则可能导致菌株的死亡。
- 存储时间较长的菌株可能会出现细胞损伤和代谢活性下降的问题。
2. 干燥保存
干燥保存是另一种常见的野生菌种保存方法。将菌株培养在适宜的培养基上，然后将培养基或菌株悬液置于恒温干燥器中进行脱水，制成干燥粉末后保存。这种方法可以极大地减小菌株的体积和重量，便于长期保存和传递。
优点：
- 干燥保存方便易行，不需要特殊设备和操作。
- 保存稳定性高，可以长期存储。
- 保存的菌株体积小，便于传递和分发。
缺点：
- 干燥保存可能会对菌株的某些特性产生一定的影响，如代谢活性的下降或孢子形成能力的降低。
- 干燥后的菌株恢复需要一定的时间和条件。一些菌株在干燥过程中可能会失去活性。
3. 液氮保存
菌种管理规范
菌种管理规范
引言概述：
菌种管理是生物学研究中非常重要的一环，它涉及到菌种的保存、传播、鉴定和利用等方面。规范的菌种管理能够确保菌种的质量和可靠性，为科学研究和应用提供可靠的基础。本文将从菌种的保存、传播、鉴定和利用四个方面，详细介绍菌种管理的规范要求。
一、菌种的保存
1.1 选择合适的保存方法：根据菌种的特性和用途，选择合适的保存方法，如冷冻保存、冷冻干燥保存、液氮保存等。不同保存方法有不同的适合范围和保存时间，需要根据具体情况进行选择。
1.2 建立菌种库：建立菌种库是菌种管理的基础，应该建立完善的菌种库管理制度，包括菌种的登记、编号、分类和储存等方面。菌种库应该具备良好的环境条件和设备，确保菌种的保存质量。
1.3 定期检测菌种的保存状态：定期检测菌种的保存状态，包括菌种的存活率、纯度和活力等指标。对于保存时间较长的菌种，还应进行定期的复苏和传代，确保菌种的保存质量。
二、菌种的传播
2.1 确保传播菌种的纯度：在菌种传播过程中，要确保菌种的纯度，避免混入其他菌株或者杂质。传播菌种前应进行纯度检测，确保菌种的纯度达到要求。
2.2 规范传播菌种的方法：传播菌种应采取规范的方法，如菌种的分离培养、菌种的接种方法等。传播菌种的操作应注意无菌操作，避免污染和交叉感染。
2.3 记录传播菌种的信息：传播菌种时应详细记录菌种的信息，包括菌种的编号、来源、传播日期等。这些信息有助于追溯菌种的来源和传播过程，确保菌种的可追溯性。
三、菌种的鉴定
3.1 选择合适的鉴定方法：根据菌种的特性和需要，选择合适的鉴定方法。常用的鉴定方法包括形态学鉴定、生理生化鉴定、份子生物学鉴定等。不同的鉴定方法有不同的特点和适合范围，需要根据具体情况进行选择。
菌种保藏方法
一、石蜡油低温保藏法
本方法的原理是在长好的斜面菌上覆盖灭菌的液体石蜡，达到菌体与空气隔绝，使菌处于生长和代谢停止状态，同时石蜡油还防止水分蒸发，在低温下达到较长期的保藏菌种的目的。保藏温度要求在-4～4℃下。液体石蜡法适用于不产孢子的菌种。具体操作是：菌种为斜面培养菌种，斜面不宜过长；选择纯净优质石蜡油，置三角烧瓶中经过121℃高压蒸汽灭菌1～2h，将其放烘箱中(160℃左右)干热处理，去除灭菌时渗入的水分，待石蜡油变得清澈透明后冷却即可加入斜面，斜面上不能出现气泡，液蜡添加量以高出斜面顶部约1cm为宜。
二、甘油管冷冻保藏法
1．试验方法介绍本法也是利用微生物在甘油中生长和代谢受到抑制的原理达到保藏目的。其方法是，将80%的甘油高压蒸汽灭菌待用。将培养好的斜面菌种用无菌水制成高浓度的菌悬液(108～1010/ml)。取1ml灭菌甘油放入与甘油充分混匀，使甘油浓度约为10%-30%，于-70℃下冻存。-20℃保存时间较短。或采用体积比为8：2的甘油－生理盐水，加入新鲜培养的菌体肉汤，混合均匀后至-20℃冰箱保存。
2．效果该法适用于一般细菌的保存，同时也适用于链球菌、弧菌、真菌等需特殊方法保存的菌种，适用范围广，操作简便，效果好，无变异现象发生。甘油－生理盐水保存液保存菌种优于甘油原液，其原因可能是加入生理盐水适当降低了甘油的高渗作用，且有肉汤培养物适量增加保存液的营养成分，从而更好地保护了待保存的菌株。
三、真空冷冻干燥法
1．试验原理
真空冷冻干燥保藏法是兼具低温、干燥、除氧三方面菌种保藏的主要因素，除不宜于丝状真菌的菌丝体外，对病毒、细菌、放线菌、酵母及丝状菌孢子等各类微生物都适用，不宜用冻干法保存的微生物不到2%。冷冻干燥法是在低温下快速将细胞冻结，然后在真空条件下干燥，使微生物的生长和酶活动停止。为了防止在冷冻和水分升华过程中对细胞的损害，要采用保护剂来制备细胞悬液，使菌在冻结和脱水过程中起到保护作用的溶质，通过氢键和离子键对水和细胞所产生的亲和力来稳定细胞成分的构型。即是使样品中的水分在冰冻状态下，抽真空减压，使冻结的冰直接升华为水蒸气，使样品达到干燥。干燥后的微生物在真空下封装，与空气隔绝，达到长期保藏的目的。
保存菌种的方法
保存菌种的方法
菌种保存是微生物学中非常重要的一环，因为合适的保存方法可以保证菌株的品质和
稳定性，使其能够长期存储。以下是关于保存菌种的10条方法以及详细描述。
1. 冷冻保存：将菌株生长到对数生长期，用稳定添加剂（例如甘油、二甲基亚砜等）制成含有冷冻保护剂的菌液或菌片，加入液态氮或-80℃冰箱中保存。这种保存方法适用
于细菌、真菌、酵母等样品，能够长期保存，但对于需要氧气或是不能耐受低温的菌株不
适用。
2. 真空气体吸口保存：将菌株生长后制成含有添加剂的液态培养基，混合好后放入
真空器中，排除气体后，用火焰消毒，制成真空条件下的口密封菌液或菌片，然后保存在4℃下。这种方法不需要添加保护剂，保存时间较短，但适用于不能耐受低温和不适用于
冷冻保存的菌株。
3. 干燥保存：将菌株生长到对数生长期，将细菌涂在玻璃片上，用烘箱干燥后保存
在密封袋或密闭容器中。这种方法适用于细菌，真菌和酵母，可以长期保存，但能否使用
仍需进一步验证。
4. 固体培养基上保存：将菌株生长到对数生长期，在固体培养基上形成孢子或菌落，将所长好的固体培养基通过滴管法滴入稳定添加剂中，然后冷冻或冷冻干燥保存。适用于
真菌和酵母等难以保存的菌类。
5. 血清中保存：将菌株生长到对数生长期，加入相当于液态氧气的气体，保护期生
产的抗凝血清中，保存在4℃下。适用于不耐受低温和不能被冷冻保存的菌种。
6. 挤压保存：将菌株生长到对数生长期，用挤压材料制成粘稠的菌株，将其保存在
温和的环境中，适用于不适用于氧气的微生物，例如厌氧菌等。
7. 转移保存：将菌株接种在体积较大的液态培养基中，生长到对数生长期，然后将
菌种长期保存方法
菌种长期保存方法
菌种的长期保存方法有多种，常用的包括以下几种：
1. 冷冻保存：将菌株培养物添加适量的保护剂（如甘油、蔗糖等），将菌种冷冻在低温下保存。通常在-70或更低的温度下保存，可以避免菌种的变异和死亡。
2. 真空冻干保存：将菌株培养物通过真空冷冻干燥技术，制备成干粉状，然后密封保存。这种方法适用于某些脆弱的菌种，有助于保持菌株的原始特性。
3. 高温烘箱保存：将菌株培养物置于高温（通常为40-50）的烘箱中烘干，然后密封保存。这种方法适用于耐热的菌株，可以较长时间地保持菌种的活性。
4. 冷冻干燥保存：将菌株培养物进行冷冻干燥处理，制备成干燥粉末，并密封保存。这种方法可以长期保存菌种，且易于运输和储存。
5. 非洲紫外线灭菌保存：将菌株培养物置于紫外线照射仪中进行灭菌处理，然后密封保存。这种方法适用于一些容易形成胞内孢子的菌株，可以有效地保持菌种的活性。
选择合适的保存方法应根据菌株的特性以及实验需求来确定，同时在保存过程中应注意使用无菌操作，确保保存的菌种不受外界污染。
菌种保藏方法范文
菌种保藏方法范文
菌种保藏是指将具有特定遗传性状的菌种保持在一定的条件下存活和保存，以便于后续的研究和利用。菌种保藏的目的是保持菌种的稳定性、纯度和活力。下面将对常见的菌种保藏方法进行详细介绍。
1.冷冻保藏法：冷冻保藏法是最常见和常用的菌种保存方法之一、该方法是将菌种在适宜的培养基上生长至适宜的阶段，然后通过添加甘油或其他保护剂来增加菌种的耐冻存活力，并放入低温环境下冷冻保存。通常使用-20℃或更低的温度进行保存。这种方法简单易行，成本较低，在短时间内能够保持菌株的复原性很好。
2.干燥保藏法：干燥保藏法又称为脱水保藏法，是将菌种长时间保存于干燥状态中。先将菌种培养至适宜的生长阶段，然后用无菌方法将菌种制成干燥菌粉，放入干燥瓶中密封保存。常见的干燥剂有二氧化硅凝胶、无水CaCl2等。干燥保藏法保存的菌种潜伏期长，比较安全可靠，但复苏的条件较为苛刻。
3.液氮保藏法：液氮保藏法又称为低温保存方法，是将菌种保存在液态氮中。通过将菌种培养至适宜生长阶段后，将其转接入试管中，用无菌方法加入等体积的冷冻保护剂（例如甘油），放入液氮中保存。液氮的温度达到-196℃，在这种环境下菌种可以长时间保存，但需要特殊的设备和条件。
4.胶体保藏法：胶体保藏法是将菌种培养至适宜生长阶段，然后将其与无菌明胶混合均匀，制成菌胶球，通过培养基中的各种成分供应菌种的生长和维持菌株的复原性。这种保藏方法具有较长的复苏潜伏期，并且易于携带和传递，是一种较为理想的保存方法。
5.冷冻干燥保藏法：冷冻干燥保藏法是将菌种通过冷冻干燥的方法进
菌株保存方法及温度
菌株保存方法及温度
引言
菌株保存是微生物学研究的重要环节之一，合适的保存方法和温度可以确保菌株的长期保存和充分利用。本文将介绍常用的菌株保存方法以及不同菌株所需的合适保存温度。
常用的菌株保存方法
1. 低温冷冻保存：将菌株培养物添加不同浓度的甘油或乙二醇，并以低温（通常为-80或液氮温度）冷冻保存。这种方法适用于大部分菌株，保存时间可达数年甚至更久。
2. 低温冷冻干燥保存：首先将菌株培养物培养在适宜的培养基上，然后将培养物冷冻干燥，最后封装在干燥剂中保存。这种方法适用于一些难以在液氮中保存的菌株，保存时间一般为几年。
3. 高温干燥保存：将菌株培养物培养在适宜的培养基上，然后将培养物在高温下迅速干燥，最后保存在干燥剂中。这种方法适用于一些特殊的菌株，保存时间通常较短。
4. 冷冻保存液中保存：将菌株培养物添加到冷冻保存液中（如液氮中的冷冻保护液），并在低温下保存。这种方法适用于一些难以冷冻干燥的菌株，保存时间一般为数年。
菌株保存温度的选择
1. 常温保存（18-25）：适用于一些常见的菌株，如大肠杆菌（Escherichia coli）等。在常温下保存的菌株容易遭受污染和突变，保存时间较短，通常为数周至数个月。
2. 低温保存（2-8）：适用于一些耐寒的菌株，如青霉菌（Penicillium）等。保存在低温下的菌株可以维持较长时间的活力，保存时间一般为数个月至一年。
3. 冷冻保存（-20或-80）：适用于大部分菌株，可以保存数年甚至更久。较低的温度可以减慢菌株的代谢和生长速度，有利于保存。
4. 液氮保存（-196）：适用于对低温非常敏感的菌株，如一些微生物菌株。液氮温度下的保存可以减少代谢活性，有效保持菌株的稳定性和活力，保存时间长达数十年。
高中保存菌种的方法
高中保存菌种的方法
在高中生物实验中，保存菌种是非常重要的一环。正确的保存方法可以保证菌种的活性和纯度，为后续实验提供可靠的基础。下面介绍几种高中保存菌种的方法。
1. 冷冻保存法
冷冻保存法是一种常见的保存菌种的方法。将菌种培养在富含营养物质的培养基上，生长到对数期后，用无菌的冰冻管将菌液吸入管内，加入等体积的保护剂（如甘油、DMSO等），在-80℃的冰箱中保存。这种方法可以保存较长时间，但需要注意的是，菌种的冷冻速度要快，解冻时也要迅速，以保证菌种的活性。
2. 干燥保存法
干燥保存法是将菌种培养在富含营养物质的培养基上，生长到对数期后，用无菌的吸管将菌液吸入管内，滴在无菌的滤纸上，晾干后放入无菌的干燥瓶中保存。这种方法可以保存较长时间，但需要注意的是，干燥的时间不能过长，否则会影响菌种的活性。
3. 冷藏保存法
冷藏保存法是将菌种培养在富含营养物质的培养基上，生长到对数期后，用无菌的冰冻管将菌液吸入管内，放在4℃的冰箱中保存。这种方法可以保存较短时间，但是操作简单，适合保存一些常用的
菌种。
4. 静置保存法
静置保存法是将菌种培养在富含营养物质的培养基上，生长到对数期后，用无菌的吸管将菌液吸入管内，放在无菌的培养皿中，不加任何保护剂，放在恒温培养箱中保存。这种方法适用于一些易于保存的菌种，但需要注意的是，保存时间不能过长，否则会影响菌种的活性。
保存菌种是一项非常重要的工作，需要严格按照操作规程进行，以保证菌种的活性和纯度。在保存过程中，需要注意无菌操作，避免污染，同时选择适合的保存方法，以满足实验的需要。
菌种的储存条件
菌种的储存条件
菌种的储存条件对于保持菌种的活力和稳定性至关重要。不同菌
种有不同的储存条件，本文将详细介绍菌种的储存条件及其注意事项。
一、冷冻储存条件：
冷冻储存是最常用的一种储存方式。菌种在-80℃或更低温度下存放，可有效地抑制微生物的代谢活动。冷冻储存条件下，菌种的活力
可长期得到保持。
1.冻存液的配制：
冷冻菌种时需要配制冻存液。常见的冻存液成分包括：2%蛋白胨、15%甘油、10%蔗糖等。菌种与冻存液按一定比例混合后，分装到冻存
管中。
2.冻存管的选择：
冷冻菌种时应选择质量好、无毒、不易破裂的冻存管。常见的冻
存管材料有聚乙烯（PE）和聚丙烯（PP）等。
3.低温保存：
菌种在低温保存时应存放于-80℃以下的冷冻设备中，如超低温冰箱、液氮罐等。冻存时需避免温度变化过大，以免对菌种造成损伤。
4.冷冻菌种的密封：
菌种存放在冷冻设备中时，需注意将冻存管严密密封，以防菌种被空气污染、受潮等。
5.冷冻菌种的标签：
冷冻菌种应在冻存管上标注清楚菌种名称、保存日期、储存温度等信息。
二、液氮冷冻保存条件：
液氮冷冻保存是一种极低温度下的长期保存方式，菌种在液氮温度下存放可以保持较好的存活率。
1.菌种冷冻液的配制：
菌种冷冻液通常包括20%的甘油或甘露醇等，以防止冷冻过程中的冷冻损伤。
2.冷冻管的选择：
液氮冷冻保存时，应选择耐低温、密封性好的专用冷冻管，以确保菌种的保存质量。
3.菌种冻存管的密封：
冷冻管在液氮中保存时，应当严密密封，并确保管内无空气以防菌种受潮。
4.液氮存放设备的选择：
液氮冷冻保存时，需要专用的液氮罐进行存放。液氮罐应有良好的保温性能，以避免液氮的挥发。
实验室最常用的五种菌种保藏方法
实验室最常用的五种菌种保藏方法
一、冷冻保存
在实验室中，冷冻保存是最常用的菌种保藏方法之一。这种方法利用低温的环境，将菌种置于-70°C以下的冰柜或液氮罐中进行保存，以减缓菌种的新陈代谢过程，从而延长其保存时间。冷冻保存不仅适用于常见的细菌菌种，对真菌、酵母菌等微生物也同样适用。在冷冻保存的过程中，需要注意样品容器的密封性和防潮性，以避免保存过程中的交叉污染和冻结损伤。
二、干燥保存
干燥保存是另一种常见的菌种保藏方法。这种方法通过将菌种置于低温低湿环境中，使其水分蒸发，使菌种变得干燥并进入休眠状态，从而延长其保存时间。常见的干燥保存方式包括真空冷冻干燥、干燥剂吸附法等。干燥保存尤其适用于灵敏对湿度敏感的菌种，以及一些难以存活在液体培养基中的微生物。
三、低温保存
除了冷冻保存外，低温保存也是常见的菌种保藏方式之一。在这种方法中，菌种通常被保存在4°C左右的冰箱中，通过控制温度和湿度，延缓菌种的新陈代谢，并保持其生长状态。这种保存方式不仅适用于微生物的短期保存，也可以用于长期保存对保存温度敏感的微生物。
四、液氮保存
液氮保存是一种极低温的保存方式，通过将微生物样品浸没在液氮中进行保存。这种方法不仅可以有效地防止菌种的新陈代谢和变异，还能够保持菌种的生物特性和遗传信息。液氮保存适用于需要长期保存的珍贵菌株和难培养的微生物，如土壤中的特殊嗜冷菌和特殊嗜热菌等。
五、冻干保存
冻干保存是将微生物样品在冷冻的条件下先冻结，然后通过真空干燥的方式将水分蒸发，最终将样品转变成固态的干燥状态。这种方法既能保留微生物的生物特性，又能有效地延长样品的保存时间，适用于需要长时间运输和保存的微生物。
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低温冷冻保存法 实验室必须配备-20℃以下低温 冰箱，冰箱温度越低，保存的 时间越长。
滤纸片低温冷冻保存菌种方法[2]
将新华滤纸片剪成 3mm× 3mm，经高压蒸汽灭菌 置无菌器皿中备用，0.5ml无菌带盖塑料离心管。 将待保存菌种在血平板上分离纯化后，用无菌小镊 子夹住滤纸片，在平板上刮取多量细菌，放在塑料 离心管内， 1只离心管中可放数十片带菌滤纸片， 然后盖上盖子，用胶布将盖口封严，注明患者姓名， 菌名及保存日期等以备查找。将塑料管放在-70℃ 冰箱内保存。使用时将菌种分别从塑料离心管中取 出 1片，放入增菌肉汤中,35℃孵育18～24ｈ，再 将菌悬液移种于血平板上。本方法适于保存对营养 要求不高的细菌，而不适于苛养菌的保存。
该改良法优点有：⑴操作过程大大简化， 菌种管口不需溶封，不抽真空。⑵菌种管 抗破损性极佳；⑶菌种管体积超小。⑷成 本低廉，易于商品化生产、推广。笔者使 用该改良法近七年，本省发放菌种上万只 没有破损情况出现；数次发放嗜血杆菌、 链球菌、奈瑟氏菌等苛养菌，生长情况良 好。近几年我们还向华东地区部分兄弟省 分提供了室间质评菌种四万余只，效果满 意。
湿牛奶冷冻法[3]
材料 ①保护剂牛奶的准备：新鲜牛奶经脱脂棉 反复 3次过滤后，10磅10min高压蒸气灭菌后，冰 箱保存备用。②菌种管的处理：先经清洁液浸泡 1天，之后用清水冲洗，再用蒸馏水浸泡过夜，以 达中性，然后管口塞上棉花，经15磅30min高压蒸 气灭菌备用。方法 将各来自百度文库细菌种于各自生长良 好的平板培养基上，经分纯后在37℃孵箱孵育18h 后，用准备好的保护剂牛奶洗下菌苔，然后用无 菌毛细滴管吸取菌悬液滴入菌种管球部，每管球 部约有一半的菌液，之后火焰封口，保存于-20℃ 冰箱。抵抗强的细菌至少可保存 3年，抵抗力弱 的细菌保存不低于 2年。
临床微生物实验室可以根据 本室的条件，挑选最适合的 菌种保存法，也可以加以改 良，其原则是除了菌种存活 外，还必须保证其生物学性 状不发生改变。
谢 谢!
⑵血液琼脂斜面保存法：链球菌及肺炎球 菌等对营养要求较高的细菌应接种于血液 琼脂斜面上， 37℃培养生长后，放 4℃冰 箱保存。链球菌须半个月至 1个月移种一 次，肺炎球菌则须 4d移种一次。 ⑶鸡蛋斜面保存法：将细菌接种于鸡蛋斜 面上，经 37℃18-24h培养后，加无菌液体 石蜡至斜面浸液，再超出约1cm，置 4℃冰 箱保存。此法用于保存含有Vi抗原的沙门 氏菌及其它含表面抗原的细菌，可保存3-6 个月。
砂土管保存法
适用于产芽孢的细菌
将过筛后的中性细砂烘干，装入小试管内 约lcm高，塞以棉塞，灭菌烘干备用。用无 菌生理盐水洗下培养基上的细菌培养物， 制成菌悬液。然后吸此菌悬液约0.5m1注入 砂土管内，以砂土全部浸湿为度。塞好棉 塞，放入干燥器内抽干。然后放在装有氯 化钙 (吸水剂 )的干燥瓶内，置冰箱保存备 用。需用时可取一接种环砂土接种于适宜 培养基上培养即可。
商品化菌种保存管
每只保藏管中含20-25个小珠以及缓冲液， 使用时将菌落挑入缓冲液中，混匀，将缓 冲液吸去，置-70℃冰箱保存可达10年，20℃冰箱可保存1-3年。复苏时，只需将小 珠接入肉汤或平板上滚动即可。商品化菌 种保存管操作简单，但价格偏高。笔者预 计随着经济的不断发展和实验室条件的改 善，使用的单位将会越来越多。
细菌鉴定卡保存菌种[4]
本法适用于使用VITEK全自动微生鉴定仪的实验 室。方法是将鉴定卡标注后直接放置-20℃冰箱保 存，复苏时将鉴定卡直接从-20℃移至35℃，待小 孔液体完全融化后，以无菌手续，用注射器抽吸 出阳性生长孔内的液体，点种于合适平板，置 35℃孵箱内24～48小时即可。该法生化卡内的细 菌反复冻融 5次，分离出的细菌效果相同。葡萄 球菌属、肠杆菌属、念珠菌属存活时间不小于29 个月；肠球菌属、黄杆菌属、不动杆菌属存活时 间不小于21个月,链球菌属和假单胞菌属存活时间 不小于10个月。
菌种的保存方法介绍
江西省临床检验中心 吴茂红
临床微生物实验室经常能够分离到一些有 意义的菌种，但接种在平板上的细菌放 4℃冰箱只能保存数天，并且细菌在培养基 上移种 3次后，其形态、菌落、毒力等均 易发生变异[1]，监测日常工作的室内质控用 标准菌株也需要长期留存。所以尽可能长 期有效地留存菌种对于系统地分析当前流 行株的生物学、分子生物学特征及耐药性 变迁，医院感染病原学调查、新药临床研 究都十分重要的意义。本文介绍几种常用 的菌种保存方法
常规保存法
该法操作简单，只需普通冰 箱保存，每个临床微生物实 验室均可采用。但缺点是留 存时间短，传代频繁，菌种 易变异。
半固体穿刺保存法
用穿刺接种法将细菌培养物接种于半固体培养基 内，经 37℃18-24h培养后，加一层无菌的液体石 蜡，厚度约为 1cm，置冰箱保存。肠道杆菌及葡 萄球菌等，一般可保存3-6个月。当需传代移种时， 将半固体菌种管倾斜使液体石蜡流至一边，再取 菌移种于新的培养基。将沾有少量液体石蜡的接 种环浸于 95％酒精中片刻，再烧灼灭菌以免直接 在酒精灯上烧灼时，液体石蜡四处溅散而引起污 染。如保存副溶血性弧菌可加入NaCl制成3.5%高 盐半固体，在室温下可保存 1个月。
菌种管由传统的玻璃菌种管改为0.5ml带盖塑料离 心管。方法：①将塑料离心管置耐高压塑料离心 管盒内并用双层报纸包好，高压蒸汽15磅15min消 毒，放烤箱80℃烤干。②在净化工作台内将脱脂 牛奶洗下的浓厚菌悬液用长毛细玻璃滴管加到塑 料离心管的底部，每只0.2ml左右，切记不要将牛 奶污染离心管口。③将加好菌液的离心管盒置20℃冰箱预冻，预冻好后把离心管盒放置到冷冻 干燥机干燥箱内冻干。④冻干后在净化工作台内 压好离心管盖，不抽真空。贴标签，用封口膜封 离心管口。放-20℃冰箱保存。
斜面保存法
⑴普通琼脂斜面保存法：葡萄球菌、肠道 杆菌等对营养要求不高的一股细菌可接种 于普通琼脂斜面上，斜面底部应加少许无 糖肉膏液，以防干涸 (但变形杆菌"OX"及伤 寒杆"O"菌株宜接种于干燥的琼脂斜面以防 变异 )。用橡皮塞塞紧，经37℃18-24h培养 后，存放于 4℃冰箱中，一般可保存3-6个 月。
冷冻真空干燥保存法
该法是目前保存菌种的最佳方法，具有如下几个 突出的优点：①适用范围广。除少数不产生孢子 只产生菌丝体的丝状真菌不宜采用此方法保藏外， 其他各大类微生物如细菌、放线菌、酵母菌、丝 状真菌及病毒均可采用此方法保藏；②保藏期长， 成活率高。有人报道保藏在真空冷冻干燥安培管 中的真菌成活期长达40多年[5]，一般微生物至少 可保存 10余年；③微生物在保藏期内可避免其它 杂菌污染；④便于携带运输，易实现商品化生产。 其缺点为需要一定的设备（冷冻真空干燥机）、 操作繁琐等。
⑷吕氏血清斜面：白喉棒状杆菌可保存在 该培养基上，其成份为 1 %葡萄糖肉汤 (pH7.4) 1份，无菌牛血清或兔血清 3份。 白喉棒状杆菌在此培养基上生长迅速、旺 盛，菌体形态典型，如在培养基中再加入 5%-10%的中性甘油，则培养出的白喉棒 状杆菌异染颗粒更为明显，单24小时后即 衰老成为多形态，很少有异染颗粒，菌体 粗大3-4倍，置 4℃可保存 2周至 1个月。