反相色谱法测定有机化合物(精)

3.相对校正因子的测定： 取1.00 mL甲苯标准溶液和1.00 mL苯酚标准溶液混合，待仪器稳
定后，注入10цL混合溶液，记录色谱图，平行测定三次。
4. 样品分析： 取1.00 mL内标标准溶液和1.00 mL样品溶液混合，待仪器稳定后， 注入10цL混合溶液，记录色谱图，平行测定三次。
数据处理
3. 灵敏度高、易于实现操作自动化。
实验预习
了解高效液相色谱仪的基本结构及操作步骤。
掌握利用内标法分析混合物中甲苯含量的方法。
仪器与试剂
1. 色谱仪: Agilent 1100
2. 色谱柱：C18柱， 250 mm×4.6 mm 3. 流动相: 甲醇:水(70:30)，流速: 1.0 mL/min 4. 检测器: 紫外检测器 254 nm
反相色谱法测定有机化合物 中甲苯的含量
实验目的
了解高效液相色谱仪的基本结构及基本操作。 了解反相色谱法的基本原理。 掌握利用内标法进行色谱定量分析的实验方法。
实验原理
流动相的极性大于固定相的化学键合相色谱称为反相色谱。由于
各种物质的极性不同，因而在反相色谱体系中的分配能力不同，因此
保留时间不同，在色谱图上呈现不同位置的色谱峰。反相色谱大部分 以C18或C8为色谱柱，以甲醇或乙氰的水溶液为流动相。
采用内标法定量时，首先将一定量的待测物标准品溶液与内标物
标准品溶液混合，进行色谱分离，测得峰面积分别为Ai和As，求出相 对校正因子f΄。
样品分析时，将一定量的内标物加入待测样品中，进行色谱分析，
测源自文库峰面积，计算样品中待测物的量。
高效液相色谱仪流程示意图
高效液相色谱法的特点
1. 分析速度快。 2. 分离效率高。
基本操作
1. 打开电脑主机，再打开高效液相色谱的模块，启动工作站并初始化仪 器。 2. 仪器初始化完毕后，在工作界面上选择测量项目，设置适当的仪器参
数：流动相组成=甲醇:水(70:30) ，流速=1.0 mL/min ，柱压=200 kPa。
3. 运行程序，清洗色谱柱，直至基线平稳，然后进样，进行测定。 4. 测定结束后，依次用纯水、100%甲醇洗涤20分钟，退出主程序，关闭 计算机。
相对校正因子
未知液中甲苯的含量
注意事项和问题
1. 检查流动相是否充足。
2. 待仪器稳定后，再进样。 3. 进样器要充分洗涤。
实验步骤
1. 确定实验条件（流动相、流速、检测波长等） 2. 溶液的配制： （1）内标物溶液的配制：准确称取一定量苯酚纯品，加甲醇溶解后 制成0.400 mg/mL的标准溶液
（2）甲苯标准溶液的制备：准确量取一定量甲苯的标准品，加甲醇
溶解后制成0.500 mg/mL的标准溶液 （3）样品溶液的制备：准确称取适量样品，加甲醇超声溶解，定容 于100 mL容量瓶中，过滤备用。