热原检查法标准操作规程
热原检查标准操作规程
XXXX药业有限公司标准操作规程(S O P)1.目的规范热原检查操作，保证热原检查结果的准确可靠。
2.范围热原检查3.责任质量保证科、化验室、实验动物室负责人及相关人员4. 制定依据：《中国药典》2010年版三部5.规程5.1 实验材料及用具5.1.1 天平精度 10g 家兔称量用5.1.2 电热干燥箱5.1.3 ZRY-2D型热原仪5.1.4 家兔固定盒5.1.5 实验用具注射器、广口试剂瓶（均需去热原）、直镊、时钟、脱脂棉5.1.6 试剂75%乙醇5.2.实验动物5.2.1 健康无伤、体重1.7kg以上、同一来源、同一品系家兔，雌兔应无孕，一兔一笼，标兔号。
5.2.2 新兔预选5.2.2.1 新兔经饲养7日后,进行预测体温,测温的条件与热原检查要求相同。
5.2.2.2 测量体温时,肛门体温计插入肛门的深度各兔应相同,约为6cm,测温时间不得少于1.5分钟。
5.2.2.3 每隔30分钟测温1次，共8次。
5.2.2.4 8次体温均在38.0-39.6℃（一般多选用38.4-39.4℃）的范围内，且最高最底体温数不超过0.4℃（以不超过0.35℃为佳）的家兔，可供3周内实验用。
5.2.2.5 录用新兔编号，登记入兔史记录卡，未被录选家兔，可饲养7日按2.2.1至2.2.3程序再预测体温一次，如仍不符合要求则淘汰。
5.2.3 家兔的重复使用5.2.3.1 供试品判定为符合规定的家兔；升温达0.6℃的家兔应休息2周以上，方可供下次试验用。
5.2.3.2 供试品判定为需重复实验的家兔，应暂作休息处理，如重复合格，升温≥0.6℃的家兔，应重新测温挑选。
5.2.3.3 供试品判定为不符合规定的家兔，不再使用。
5.2.3.4 复试用家兔挑选体重在2.0-2.4kg、正常体温在38.8-39.2℃、使用过2～3次的家兔进行实验。
5.3 实验前的准备5.3.1 温度探头每6个月校验一次，不符合要求者不能使用。
5.3.2 用具除热原清洗干净的玻璃器皿、注射器、针头、直镊等放入金属制容器内，密闭，置电热干燥箱中经250℃30分钟或180℃2小时加热除热原。
热原检查标准操作规程(2015版药典)
热原检查标准操作规程（2015版药典）1．目的：通过本规程的制定，使该检查操作进一步规范化，标准化，以减少误差的发生。
2．依据：《中国药典》2015年版四部通则1142 P153。
3．适用范围：本标准适用于本公司有热原检查的操作。
4．责任：热原QC检验人员对本规程的实施负责。
5．程序：5．1．概述本法系将一定剂量的供试品，静脉注入家兔体内，在规定时间内，观察家兔体温升高的情况，以判定供试品中所含热原的限度是否符合规定。
5．2．实验材料及用具5．2．1．天平（精度50g，家兔称重用）。
5．2．2．电热干燥箱（0~300±）℃5．2．3．恒温水浴箱（37~100）℃5．2．4．家兔固定盒5．2．5．实验用具：注射器、针头、金属直镊、注射器盒、时钟、75％酒精棉球、手术镊。
5．3．将供试品放入恒温水浴箱中，温热至约38℃。
5．4．供试用家兔供试用的家兔应健康合格，体重1.7kg以上，雌兔应无孕。
预测体温前7日即应用同一饲料饲养，在此期间内，体重应不减轻，精神、食欲、排泄等不得有异常现象。
未曾使用于热原检查的家兔；或供试品判定为符合规定，但组内升温达0.6℃的家兔；或3周内未曾使用的家兔，均应在检查供试品前7日内预测体温，进行挑选。
挑选试验的条件与检查供试品时相同，仅不注射药液，每隔30分钟测量体温1次，共测8次，8次体温均在38.0~39.6℃的范围内，且最高与最低体温相差不超过0.4℃的家兔，方可供热原检查用。
用于热原检查后的家兔，如供试品判定为符合规定，至少应休息48小时方可再供热原检查用，其中升温达0.6℃的家兔应休息2周以上。
对用于血液制品、抗毒素和其他同一抗原性供试品检测的家兔可在5天内重复使用1次。
如供试品判定为不符合规定，则组内全部家兔不再使用。
5．5．试验前的准备5．5．1．用具的除热原：所有与药液接触的器具，都必须清洗干净后，置电热干燥箱中经250℃、50分钟加热除热原。
注射器、针头、手术镊清洗干净后，放入注射器盒内，密闭，放入电热干燥箱中经250℃，50分钟加热除热原。
热原检查法
热原检查法热原检查法是一种用于检测微生物的方法，它基于微生物在特定温度下产生的热量来进行检测。
该方法被广泛应用于食品、水质、医药等领域，具有灵敏度高、快速、可靠等优点。
下面将从原理、操作步骤、优缺点和应用等方面进行详细介绍。
一、原理热原检查法是通过测量微生物在特定温度下产生的热量来进行检测的。
该方法主要基于微生物代谢活动所产生的热量，利用热电偶或红外线传感器对微生物所产生的热量进行实时监测。
当微生物数量较多时，其代谢活动所产生的热量也会相应增加，从而能够通过仪器显示出来。
二、操作步骤1. 样品制备：将待测样品按规定方法处理后，制备成适宜的试样。
2. 检测设备准备：根据使用说明书正确安装设备，并连接好电源和计算机。
3. 仪器调试：按说明书要求对仪器进行调试，并进行空白测试和标准曲线建立。
4. 样品检测：将制备好的样品加入检测仪器中，按要求设定温度和时间，进行检测。
5. 结果分析：根据仪器显示结果进行分析判断，确定样品中微生物的种类和数量。
三、优缺点优点：1. 灵敏度高：热原检查法对微生物的检测灵敏度高，可以检测到微生物数量较少的样品。
2. 快速：该方法操作简便，可以在短时间内获得检测结果，适用于快速筛查大批量样品。
3. 可靠性强：该方法结果准确可靠，并且不受环境影响。
4. 适用范围广：热原检查法适用于多种类型的样品，包括食品、水质、医药等领域。
缺点：1. 无法区分微生物种类：热原检查法只能确定样品中是否存在微生物以及其数量，并不能区分不同种类的微生物。
2. 对温度要求高：该方法对温度要求较高，在操作过程中需要掌握好温度控制以及时间控制等参数。
3. 不适用于活菌数的计数：由于热原检查法只能检测到微生物代谢产生的热量，因此不适用于活菌数的计数。
四、应用热原检查法广泛应用于食品、水质、医药等领域。
在食品领域中，该方法可以用于检测肉制品、水产品、奶制品等样品中的微生物。
在水质领域中，该方法可以用于检测自来水、污水等样品中的微生物。
热原检查法(兔法)
1.目的：建立产品中热原检查的标准操作规程。
2.范围：产品的热原检查。
3.责任：质量监督部。
4.内容：本法适用于《中国药典（1995年版）》附录中“热原检查法—兔法”。
4.1实验材料及用具：4.1.1天平：精度0.01或0.1mg 供试品称量用精度0.1或1mg 试剂称量用精度10g 家兔称重用4.1.2电热干燥箱：（50-300±1）℃。
4.1.3恒温水浴：（37-100±0.5）℃。
4.1.4热原测温仪或肛门体温计，精度0.1℃。
4.1.5家兔固定盒：盒的两侧有通气孔。
4.1.6实验用具：注射器、烧杯、三角瓶、大称量瓶、吸管、移液管、表面皿、玻璃棒、广口试剂瓶、金属制密封器（均需去热原）、时钟、直镊、脱脂棉或细软卫生纸。
4.1.7试剂：75％乙醇、凡士林或50％甘油、新蒸馏水（4小时内蒸馏）、灭菌注射用水（经热原检查，3只家兔中体温升高0.4℃的最多只有1只，且3只家兔体温升高总数低于1℃，或经细菌内毒素检查，含细菌内毒素低于0.5EU／m1）、无热原氯化钠（经250℃ 30分钟或200℃ 1小时或180℃ 2小时加热除热原）。
4.2溶液配制：供试品溶液。
4.2.1原料药：4.2.1.1精密称取适量，置烧怀、三角瓶或称量瓶中。
4.2.1.2按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水，搅拌使溶解。
4.2.2注射液：4.2.2.1用75％乙醇棉球消毒安瓶颈部，割开安瓶。
4.2.2.2精密量取一定量药液。
4.2.2.3按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水，混匀。
4.2.3注射用生理盐水：4.2.3.1称取无热原的氯化钠适量至烧杯或三角瓶中。
4.2.3.2加入供试品“注射用水”适量，配成0.9％的等渗溶液。
4.3实验动物：4.3.1健康无伤、体重1.7-3.0kg、同一来源、同一品系家兔，雌兔应无孕，一兔一笼，标兔号。
4.3.2新兔预选：4.3.2.1新兔经饲养7日后，进行预测体温，测温的条件与热原检查要求相同。
热原检查法
热原检查法标准操作规程家兔法1.实验材料及用具1.1天平精度0.01mg或0.1 mg供试验称量用精度0.1 mg或1 mg试剂称量用精度10g家兔称量用1.2电热干燥箱，250℃以上，受热均匀。
1.3恒温水浴1.4热原测温仪或肛门体温计，精度0.1℃。
1.5家兔固定盒，盒两侧有通气孔。
1.6实验用具注射器、烧杯、三角瓶、大称量瓶、吸管、移液管、表面皿、玻璃棒、广口试剂瓶、直镊、金属制密封器（均需除热原）、时钟、脱脂棉。
1.7试剂75%乙醇、凡士林或50%甘油、生理盐水、灭菌注射用水（经细菌内毒素检，含细菌毒素低于0.25EU/mI）无热原氯化钠（经250℃30分钟或200℃1小时或180℃2小时加热原）。
2.供试品溶液的制备2.1原料药2.1.1精密称定适量，置烧杯、三角瓶或称量瓶中。
2.1.2按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水或无热原生理盐水，搅拌使溶解。
2.2注射液2.2.1用75%乙醇棉球消毒安瓶颈部。
2.2.2精密量取一定量药液。
2.2.3按规定浓度，加精密量取的一定量灭菌注射用水或无热原生理盐水，混匀。
3实验动物3.1健康无伤害、体重1.7kg以上至4.0kg左右同一来源、同一品系、合格的实验用兔，雌兔应孕，1兔1笼，标兔号。
3.2新兔预选3.2.1新兔经同一饲料饲养7日后，进行预测体温，测温的条件与热原检查要求相同。
3.2.2测量体温时，测温仪探头或肛门温度计插入肛门的深度各兔应相同约6cm，测温时间不得少于1.5分钟。
3.2.3每隔30分钟测温1次，共8次。
3.2.48次体温均在38.0℃～39.6℃（一般多选用38.4～39.4℃）的范围内，且最高最低体温差数不超过0.4℃的家兔，可供3周内实验用。
3.2.5录选新兔编号、登记入兔史记录卡，未被录选家兔，可饲养7日再预测体温1次，如仍不符合要求则淘汰。
兔史记录卡内容应包括日期、体重、性别、供试品名、正常体温、温差结果。
3.3家兔的重复使用3.3.1供试品判定为符合规定的家兔，至少应休息48小时，方可供下一次实验用。
热源、无菌、细菌内毒素、微生物限度检查
热源、无菌、细菌内毒素、微生物限度检查的关系前面看到过关于无菌和内毒素区别的帖子。
那么请问各位，热源、无菌、细菌内毒素和微生物限度检查究竟有什么区别，又有什么联系呢？本人我在微生物方面比较白，只是觉得这四项都和细菌有关，都需要培养基，都要在无菌台里做…… 汗~~ 其他的实在不知了。
头都大了，希望各位指点迷津，谢谢。
[楼主] | Posted:08-09-09 10:22|珊瑚礁级别: ★会员发帖: 292威望: 6财富: 95注册时间:2008-03-06最后登陆:2010-11-25无菌，最终灭菌产品和百级生产非灭菌产品需要检测的项目，一般采用薄膜过滤法；如，粉针剂、大输液产品。
微生物限度，允许结果有菌落，但有限度，是一定范围，一般采用半封闭薄膜过滤法和平皿法。
指非灭菌产品，如口服制剂和食品、外用药。
热源，目前很多品种采用细菌内毒素检测方法代替，简单，成本低。
但必须按照国家标准。
内毒素和热源一般是大输液产品的检测项目。
想了解很多，应该多看看专业书籍啊[1 楼] | Posted:08-09-09 12:21|洲际捣蛋级别: 论坛版主发帖: 2500威望: 315财富: 42注册时间:2008-03-15最后登陆:2010-11-08热原---不需要培养基兔法看药典就知道是怎么回事了细菌内毒素----不需要培养基一般工作环境也可以做无菌----需要培养基薄膜过滤法直接接种法也可以参照药典微生物限度检查----需要培养基薄膜过滤法梯度稀释图布平板法区别：热原和细菌内毒素检验方法的不同但检验的东西在本质上其实是一样的另外细菌内毒素检查法要比热原检查法灵敏10倍，根据各种药物的特性，规定检查热原还是细菌内毒素。
注册时间:2008-03-10最后登陆:2010-10-11zyb3421060级别: ★会员发帖: 65威望: 3财富: 1注册时间:2008-03-10最后登陆:2010-11-12还不是很明白[5 楼] | Posted:08-12-25 08:26|shabb007级别: ★★会员发帖: 649威望: 20财富: 20注册时间:2007-12-14最后登陆:2010-12-03这么说吧。
YBB00042005
锌离子 取供试品液，用孔径0.45μm的滤膜过滤，精密量取滤液10ml，加2mol/L盐酸1ml和亚铁氰化钾试液（称取4.2g亚铁氰化钾三水化合物，用水溶解并稀释至100mL,摇匀，即得）3滴混合，不得显色；如显色，与标准锌溶液（临用前，称取44.0mg，硫酸锌七水化合物，用新煮沸并冷却的水溶解并稀释至1000.0ml）3.0ml，加空白对照液8ml与2mol/L盐酸1ml和亚铁氰化钾试液3滴对照液比较，不得更深。
【灰分】 除另有规定外，取本品1.0g，置已炽灼至恒重的坩锅中，精密称定，缓缓炽灼至完全炭化，再在800℃炽灼至完全灰化，移置干燥器内，放冷至室温，精密称定后，再在800℃炽灼至恒重，遗留残渣不得过45%。
【易挥发性硫化物】* ：取本品，照挥发性硫化物测定法（YBB00302004）测定，应符合规定。
【密封性与穿刺器保持性】 取本品10个，置高压蒸气灭菌器中（不浸水），121±2℃，保持30分钟，冷却至室温，另取10个与之配套的玻璃注射液瓶加水至标示容量，用上述胶塞，塞紧，再加上与之配套铝盖，压盖。用符合注射剂用胶塞、垫片穿刺力测定法（YBB00322004）中图1所示的穿刺器，向胶塞穿刺部位垂直穿刺，穿刺器刺穿胶塞，倒挂瓶，穿刺器悬挂0.5kg重物，穿刺器应保持4小时不被拔出，且瓶塞穿刺部位应无泄漏。
【鉴别】* （1） 取本品适量剪成小颗粒，称取2.0g，置于30ml坩埚中，加碳酸氢钠2.0g均匀覆盖试样，置电炉上，缓缓加热至炭化，放冷，置高温炉300℃加热至完全灰化，取出，放冷，加水10ml使溶解，过滤，取滤液1.5ml，置于试管中，加硝酸酸化，加入硝酸银试液1滴，应产生白色或淡黄色沉淀。
第三章 制药用水
纯化水
蒸馏
注射用水
灭菌
灭菌注射用水A来自5制水方法离子交换法
电渗析法 反渗透法
蒸馏法
A
6
A
7
返回
离子交换树脂
A
8
常用交换树脂 阳离子树脂床、阴离子树脂床、 混合树脂床串联
阳离子交换树脂： 氢型：RSO3- H+ 钠型（稳定）Na+
阴离子交换树脂： 氢氧型：RN +(CH3)3OH氯型（稳定）： Cl-
• 其对革兰阴性菌以外的微生 物产生的内毒素不灵敏
• 尚不能完全代替家兔法。
A
34
鲎试验法
鲎试剂(一般0.1～0.2ml) 供试品(一般0.1～0.2ml)
37C水浴中培育60分钟
观察结果
A
35
热原的检查方法
鲎
试
验 法
鲎试剂 （凝固酶原）
激活 细菌内毒素
凝固酶
+
鲎试剂 （凝固蛋白原）
凝固蛋白
凝胶
反渗透装置
反渗透装置主要有框板式、管式（管束式）、螺旋卷式及 中空纤维式四种类型。此法的主要特点除了可以从水中除去有 毒有机和无机污染外，还能保证完全消毒，完全能达到注射用 水的质量要求，而且又比较经济，故美国药典ⅩⅠⅩ版（1975 版）开始收载此法为制备注射用水的法定方法之一。
A
16
A
17
A
A
36
鲎血是蓝色的
A
37
A
38
A
39
小结：热原的来源性质除去热原的方法
来源
特性
去除方法
溶剂
耐热性
高温法
原料 生产环境
滤过性 其它
注射剂第五章
热不稳定的： 100C 15min（Vit C，地塞米松磷酸钠）
七、质量检查
装量、可见异物、微粒、无菌和热原 八、印字与包装 安瓿上印：注射剂的名称、规格及批号
举例
1、盐酸普鲁卡因注射液
处方：盐酸普鲁卡因 氯化钠 盐酸 注射用水加至 0.5g 8.0g 适量 1000ml
处方分析 主药 等渗调节剂 pH调节剂
制法：取注射用水约800ml，加入氯化钠，搅拌溶解，再加盐 酸普鲁卡因使之溶解，用0.1mol/L的盐酸溶液调节pH值为 4.0～4.5，加注射用水全量搅匀，滤过，灌封于安瓿中，用流 通蒸汽100℃30min灭菌。
2、维生素C注射液 处方：维生素C 依地酸二钠 碳酸氢钠 亚硫酸氢钠
104g 0.05g 49.0g 2.0g
二、制备
(一）输液剂生产工艺流程
车间要求：配液在1万级洁净度
滤过及灌封等要求洁净度达到100级
(二）包装容器及处理 输液瓶、丁基胶塞和铝盖
(三）输液剂的配制
浓配法
用针用活性炭（pH3~5时，吸附力强，吸附20~30min）
(四）输液剂的滤过
(五）输液剂的灌封
灌注→加薄膜→盖橡胶塞→轧铝盖
环境：洁净度100级
调节等渗的计算方法 1、冰点下降数据法： 依据：冰点相同的稀溶液具有相等的渗透压。 计算公式：
0.52-a W= b a：未经调节的药物溶液冰点降低值 b：1％（g/ml）等渗调节剂的冰点降低值
例：配制2％盐酸普鲁卡因注射液100ml，需要加多少NaCl， 使其成等渗溶液？ 查表：a＝0.122*2 b＝0.58 W=(0.52-0.244)/0.58=0.478g
超声波→气→水→气→水→气
3、干燥灭菌
热原检查法
※热原检查法药检文摘日期:2004-8-11热原检查法1绪言热原也称为发热性物质（日本药局方）''英文叫做Pyrogen，即能够引起恒温动物体温异常升高的物质总称。
与注射剂有关的发热性物质研究可追溯到16世纪。
直到18世纪丹麦生理学家panum的研究中断定，“发热物质是一种对热稳定，溶于水，不溶于乙醇，由活的细菌中来的一类物质，而且微量静注后就能引起高热反应”。
1923年，Seibert肯定地证实了所有注射剂的发热原因是通过革兰氏阴性菌所产生的一种可滤过的高热稳定的热原污染结果。
随后Rademaker进一步证实了Seibert的发现，并进一步强调避免细菌污染的重要性。
之后的共同研究确立了使用家兔检测注射剂及水中致热物质的方法。
这个结果导致了官方的重视，20年后，美国药典于1942年USP12）进行了收载''其后，各国药典相继收载，CHP→1953年''BP→1953年''JP→1951年第6版药局方''半个多世纪来，热原检查法在保证注射剂的安全用药方面发挥了重要作用。
2热原与热原反应热原即发热性物质，目前普遍认为是由革兰氏阴性菌所产生的内毒素（脂多糖），广义说，是所有引起恒温动物体温异常升高物质的总称。
除内毒素引起发热外，还包括病毒，干扰素以及其它种种发热物质。
热原反应是指临床输液反应，如果将携带超量热原物质的注射液静脉输入人体，通常在05-2h 内引起机体严重的临床反应。
表现为：机体外周皮肤血管收缩，停止排汗，散热减少，发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐，严重时可出现昏迷、休克、死亡等一系列临床症状，体温通常可上升至40℃左右。
3热原的本质在自然界，热原分布很广，可以说无处不在，无处不有，关于热原本质的研究，目前在世界范围内，主要存在二种观点。
一种观点是：热原的本质就是革兰氏阴性-菌所产生的细菌内毒素，就注射剂来讲，其输液反应主要来源于细菌内毒素。
1142热原检査法
表 2-2 耳 用 制 剂 、鼻 用 制 剂 、库 肤 给 药 制 剂 、 吸入制剂抑菌效力判断标准
A 细菌
B
A 真菌
B
减 少 的 lg 值
2d
7d
14d
28d
2
3
—
NI
—
—
3
NI
—
一
2
NI
—
—
1
NI
注 ：N I : 未 增 加 ，是 指 对 前 一 个 测 定 时 间 ，试 验 菌 增 加 的 数 量 不 超 过 0. 5 lg 。
本试验操作过程应防止内毒素的污染。 细 菌 内 毒 素 的 量 用 内 毒 素 单 位 （E U )表 示 ，1 E U 与 1 个 内 毒 素 国 际 单 位 （I U ) 相 当 。 细菌内毒素国家标准品系自大肠埃希菌提取精制而成， 用 于 标 定 、复 核 、仲 裁 鲎 试 剂 灵 敏 度 、标 定 细 菌 内 毒 素 工 作 标 准 品 的 效 价 ，干 扰 试 验 及 检 查 法 中 编 号 B 和 C 溶 液 的 制 备 、凝 胶 法 中 鲎 试 剂 灵 敏 度 复 核 试 验 、光 度 测 定 法 中 标 准 曲 线可靠性试验。 细菌内毒素工作标准品系以细菌内毒素国家标准品为基 准 标 定 其 效 价 ，用 于 干 扰 试 验 及 检 查 法 中 编 号 B 和 C 溶液 的 制 备 、凝 胶 法 中 鲎 试 剂 灵 敏 度 复 核 试 验 、光 度 测 定 法 中 标 准曲线可靠性试验。 细 菌 内 毒 素 检 查 用 水 应 符 合 灭 菌 注 射 用 水 标 准 ，其内毒 素 含 量 小 于 0_ 015EU/ml( 用 于 凝 胶 法 ）或 0. 005EU/ml(用 于 光 度 测 定 法 ），且 对 内 毒 素 试 验 无 干 扰 作 用 。 试验所用的 器皿需经 处理，以去除可能存在的外源性内 毒 素 。耐 热 器 皿 常 用 干 热 灭 菌 法 （250°C、3 0 分 钟 以 上 ）去 除 ，也 可 采 用 其 他 确 证 不 干 扰 细 菌 内 毒 素 检 査 的 适 宜 方 法 。 若 使 用 塑 料 器 具 ，如 微 孔 板 和 与 微 量 加 样 器 配 套 的 吸 头 等 ， 应选用标明无内毒素并且对试验无干扰的器具。 供 试 品 溶 液 的 制 备 某 些 供 试 品 需 进 行 复 溶 、稀释或在 水 性 溶 液 中 浸 提 制 成 供 试 品 溶 液 。必 要 时 ，可调节被测溶液 ( 或 其 稀 释 液 ）的 p H 值 ，一 般 供 试 品 溶 液 和 鲎 试 剂 混 合 后 溶 液 的 p H 值 在 6 .0 〜 8 .0 的 范 围 内 为 宜 ，可 使 用 适 宜 的 酸 、 碱 溶 液 或 缓 冲 液 调 节 p H 值 。酸或碱 溶 液 须用 细 菌 内 毒 素 检 査 用 水 在 已 去 除 内 毒 素 的 容 器 中 配 制 。缓 冲 液 必 须 经 过 验 证 不含内毒素和干扰因子。 内毒 素 限 值 的 确 定 药 品 、生 物 制 品 的 细 菌 内 毒 素 限 值 (L )一般按以下公式确定：
热原检查法
※热原检查法药检文摘日期:2004-8-11 热原检查法1绪言热原也称为发热性物质（日本药局方）''英文叫做Pyrogen，即能够引起恒温动物体温异常升高的物质总称。
与注射剂有关的发热性物质研究可追溯到16世纪。
直到18世纪丹麦生理学家panum的研究中断定，“发热物质是一种对热稳定，溶于水，不溶于乙醇，由活的细菌中来的一类物质，而且微量静注后就能引起高热反应”。
1923年，Seibert肯定地证实了所有注射剂的发热原因是通过革兰氏阴性菌所产生的一种可滤过的高热稳定的热原污染结果。
随后Rademaker进一步证实了Seibert的发现，并进一步强调避免细菌污染的重要性。
之后的共同研究确立了使用家兔检测注射剂及水中致热物质的方法。
这个结果导致了官方的重视，20年后，美国药典于1942年USP12）进行了收载''其后，各国药典相继收载，CHP→1953年''BP→1953年''JP→1951年第6版药局方''半个多世纪来，热原检查法在保证注射剂的安全用药方面发挥了重要作用。
2热原与热原反应热原即发热性物质，目前普遍认为是由革兰氏阴性菌所产生的内毒素（脂多糖），广义说，是所有引起恒温动物体温异常升高物质的总称。
除内毒素引起发热外，还包括病毒，干扰素以及其它种种发热物质。
热原反应是指临床输液反应，如果将携带超量热原物质的注射液静脉输入人体，通常在05-2h内引起机体严重的临床反应。
表现为：机体外周皮肤血管收缩，停止排汗，散热减少，发生冷感、寒战、发热、头痛、恶心、呕吐，严重时可出现昏迷、休克、死亡等一系列临床症状，体温通常可上升至40℃左右。
3热原的本质在自然界，热原分布很广，可以说无处不在，无处不有，关于热原本质的研究，目前在世界范围内，主要存在二种观点。
一种观点是：热原的本质就是革兰氏阴性-菌所产生的细菌内毒素，就注射剂来讲，其输液反应主要来源于细菌内毒素。
药品质量控制中的生物检定
三、安全性检查制定原则
中药注射剂安全性检查项目
热原（或细菌内毒素） 异常毒性 过敏反应 溶血与凝聚 降压物质检查（功能主治中具有与升压相 关内容的注射剂除外）
三、安全性检查制定原则
方法适用性（设定限值前研究） 确定限值 应进行三批以上供试品的检查验证
四、安全性检查的基本原理和技术要求
三、生物检定中安全性检查制定原则
三、安全性检查制定原则
1. 静脉注射
细菌内毒素（或热原）
三、安全性检查制定原则
1. 静脉注射 异常毒性检查 所用原料系动物来源或微生物发酵液提取 物，组分结构不清晰或有可能污染毒性杂 质，且又缺乏有效的理化分析方法的静脉 用注射剂，应考虑设立异常毒性检查
三、安全性检查制定原则
1. 静脉注射 过敏反应检查 所用原料系动物来源或微生物发酵提取物 时，组分结构不清晰，且有可能污染异源 蛋白或未知过敏反应物质的静脉用注射剂 ，如缺乏相关的理化分析方法且临床发现 过敏反应，应考虑设立过敏反应检查项
三、安全性检查制定原则
1. 静脉注射 降压物质或组胺类物质 所用原料系动物来源或微生物发酵提取物 时, 组分结构不清晰或有可能污染组胺、类 组胺样降血压物质的静脉用注射剂，应考 虑设立降压物质或组胺类物质检查项
一、概述：生物检定的方法
体内检测： 以整体动物为生物体，能反映药物对人体 的作用方式，是最经典的生物效价检测方 法 体内测定法的有蛋白质、肽类激素等
一、概述：生物检定的方法
体外检测 离体动物器官测定法 细胞培养（促进细胞生长、抑制细胞生长、 间接保护细胞）测定法 生化酶促反应测定法 免疫学活性测定法
电热器试验安全操作规程范本
电热器试验安全操作规程范本一、前言电热器试验是保证电热器质量和安全性的重要环节。
为了保证试验过程的安全性，提高电热器试验效果，制定本安全操作规程范本，以指导试验人员进行安全操作。
二、试验设备安全操作规程1.试验设备的选择和安装试验设备的选择应与试验项目相匹配，同时，试验设备的类型和规格应符合相关的国家标准和安全规定。
试验设备的安装应由专业人员完成，并确保设备的固定、接地良好。
2.试验电源的接入试验电源应选用符合国家标准的电源，并按照标准的接线方式进行接入。
试验过程中，应确保电源接触良好，避免漏电和短路等安全隐患。
3.试验设备的维护和保养试验设备应定期进行维护和保养，保持设备的良好工作状态。
维护和保养工作应由专业人员进行，严禁试验人员私自拆卸和修理设备。
4.试验设备的使用方法试验设备的使用方法应严格按照设备说明书进行操作。
试验人员应熟悉设备的使用方法，并遵守设备操作步骤，禁止随意更改设备参数或运行状态。
三、试验环境安全操作规程1.试验场所的选择和布置试验场所应选择空气流通良好、无明火、无易燃、易爆物品的场所。
试验场所的布置应符合相关的安全规程，随时保持整洁、干净。
2.安全警示标志的设置试验场所应设置相应的安全警示标志，提醒试验人员注意安全事项。
警示标志的设置应符合国家标准，清晰可见。
3.防火措施的采取试验过程中，严禁在试验场所内吸烟、乱扔烟蒂等行为。
试验人员应随时保持警觉，防止火源接近试验场所，并备好灭火器具。
4.试验环境的温度和湿度控制试验环境的温度和湿度应符合相关的试验要求。
试验人员应定期检查试验环境的温湿度，确保试验过程的正常进行。
四、试验过程安全操作规程1.试验前的准备工作试验前，试验人员应核对试验设备和试验样品的规格、型号、参数是否符合要求。
对试验样品的外观和连接部位进行检查，确保试验过程的安全可靠。
2.试验过程的操作方法试验过程中，试验人员应严格按照试验操作规程操作，并确保试验设备和样品的安全可靠。
细菌内毒素检查法
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5、供试品溶液的配制
• 注意事项： • 1、供试品溶液的浓度如以 **mg/ml表示，
此**mg/ml是指供试品溶液中活性物质的浓 度。 • 2 、样品初试时一般按照样品的估计百分含 量或效价单位计算稀释液溶剂加入量，复 试时，则必须根据该供试品的实际百分含 量或效价来计算。
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6、鲎试剂灵敏度复核试验
应终点浓度是指系列递减的内毒素浓度中 最后一个呈阳性结果的浓度。
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6、鲎试剂灵敏度复核试验
• 6、当λc在0.5λ～2λ(包括0.5λ和2λ) 时， 方可用于细菌内毒素检查，并以标示灵敏 度λ为该批鲎试剂的灵敏度。
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6、鲎试剂灵敏度复核试验
项目
细菌内毒素浓度（EU/ml） 0.5 0.25 0.125 0.0625
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1、热原(progon)
• 欧洲药典委员会提出：“严格地讲，不是 每一种热原都具有脂多糖的结构，但所有 已知的细菌内毒素脂多糖都有热原活性”。 在药品生产质量管理规范（GMP）条件下， 药品生产的质量控制一般可以接受的观点 是：不存在细菌内毒素意味着不存在热原。
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2、细菌内毒素（Endotoxin）
蛋白质，是细菌在生长过程中分泌到菌体 外的毒性物质。产生外毒素的细菌主要是 革兰氏阳性菌。如白喉杆菌、破伤风杆菌、 肉毒杆菌、金黄色葡萄球菌以及少数革兰 氏阴性菌。
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2、细菌内毒素（Endotoxin）
• 加一类为内毒素（Endotoxin）。是革兰氏 阴性菌的细胞壁外壁层上的特有结构。细 菌在生活状态时不释放出来，只有当细菌 死亡自溶或粘附在其它细胞时，才表现其 毒性，内毒素的主要化学成分是脂多糖中 的类脂A成分。
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热原检查法标准操作规程
目的：
建立热原检查的基本操作，为热原检查人员提供正确的操作规程。
2.依据：
《中华人民共和国药典》2000年版二部。
3.范围：
本标准适用于采用家兔法进行的热原检查的操作。
4.职责：
QC热原检查操作人员对本标准的实施负责。
5. 程序：
5.1.实验材料及用具：
5.1.1. 天平（精度50g，家兔称重用）。
5.1.2.电热干燥箱(50~300±1)℃
5.1.3.保温箱(室温+3~60)℃
5.1.4.智能热原检测仪。
5.1.5.家兔固定盒
5.1.
6.实验用具：注射器、针头、刻度吸管、锥形瓶、硫酸纸、砂轮、洗耳球、金
属直镊、注射器盒、时钟、75%酒精棉球、手术镊。
5.1.7. 稀释剂：灭菌注射用水、氯化钠注射液。
5.2. 供试品溶液的配制：
5.2.1.打开洁净台的风机及照明开关，并用75%酒精棉球擦拭台面消毒。
5.2.2. 用75%酒精棉球擦手消毒。
5.2.3. 取供试品适量，置锥形瓶中，并标明批号。
5.2.4. 加入规定的稀释剂，制成符合规定浓度的供试品溶液，锥形瓶瓶口用经过灭菌的硫酸纸封好，放入保温箱中，温热至约38℃。
5.2.5. 供试品配制完毕后，应在30分钟内注射于家兔体内。
5.3. 实验动物：应符合规定。
见家兔预选操作规程（SOP ZL5001）。
5.4. 实验前的准备：
5.4.1. 智能热原检测仪探头应每月校验一次，见智能热原检测仪使用规程（SOP ZL0058）。
5.4.2. 用具的除热原：所有与药液接触的器具，都必须清洗干净后，置电热干燥箱
中经250℃、30分钟加热除热原。
注射器、针头、手术镊清洗干净后，放入注射器盒内，密闭，放入电热干燥箱中经250℃，30分钟加热除热原。
5.4.3. 实验室的温度：
实验室的温度应在（17-28）℃范围内
实验室与饲养室的温度相差不得大于5℃
试验全过程中，室温变化不得大于3℃
5.5. 检查法：
5.5.1.选符合规定的家兔，停止给饲料和水，称重后置于家兔固定盒中至少1小时。
5.5.2.每隔30分钟测量家兔体温一次，一般测量两次。
两次体温之差不得超过0.2 ℃，以此两次体温的平均值作为该兔的正常体温。
5.5.3.测量体温时，测温探头插入肛门的深度和时间各兔应相同。
深度为6cm，时
间约为1分半钟。
5.5.4. 当日使用的家兔，正常体温应在（38.0-39.6）℃范围内，且各兔间相差不得
超过1℃。
5.5.5. 每个供试品用家兔3只，在测定正常体温后15分钟内给药。
供试品的剂量，
应按各该药项下的规定注射。
注射前，先用75%酒精棉球轻擦家兔耳静脉的注射部位，从耳尖端静脉进针，如进针不利，则顺序向前进行。
5.5.7. 注射完毕，拔出针头时，用75%酒精棉球按压针孔数秒钟，止血，注射时间一般每只家兔不超过3分钟。
5.5.8.每隔30分钟，按前法测家兔体温一次，共测6次。
5.6. 温差计算：
5.6.1.注射药液后，以6次测得体温中最高的一次减去正常体温，为该兔体温的升
高度数，如6次体温均低于正常体温，则升温度数以“0”计。
5.6.2.6次体温中最低的一次，减去正常体温，即为降温值。
5.7. 结果判断：
5.7.1.判断复试：
5.7.1.1 初试3只家兔中仅有1 只体温升高0.6℃或0.6℃以上，或3 只家兔升温均在0.6℃以下，但升温的总数达1.4℃或1.4℃以上，应另取5只家兔复试，检查方法同上。
5.7.1.2. 3只家兔中有一只降温值≥0.6℃，或3只家兔中有2只降温值在0.45~0.55℃,应另取3只家兔复试。
5.7.2. 判断符合规定：
初试3只家兔中，体温升高均在0.6℃以下，并且3只家兔升温的总数在1.4℃以下，可判断为符合规定。
复试5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔数仅有1 只，并且初复试合并，8只家兔的升温总数为3.5℃或3.5℃以下，可判断为符合规定。
5.7.3. 判断不符合规定：
5.7.3.1. 初试3只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔数，有2只或3只，可判断为不符合规定。
5.7.3.2. 复试的5只家兔中，体温升高0.6℃或0.6℃以上的家兔有2 只或2只以上，可判断为不符合规定。
5.7.3.3. 初复试合并8只家兔的升温总数超过3.5℃，可判断为不符合规定。
注意事项：
5.8.1. 热原实验室内外，均应保持安静，避免强烈直射的日光或灯光及其它刺激。
5.8.2.在试验过程中，避免家兔骚动，保持体温稳定并注意相对湿度保持稳定。
5.8.3.试验过程中，家兔因肛门出血过多，造成升温或降温超过规定时应复试。
6. 本标准引用本公司内部标准：
家兔预选操作规程SOP ZL5001；
温度计校正规程SOP ZL0058。
7. 附：
热原检查记录ZL0083 00。