2019_2020学年高二人教版生物选修一课件：2.1 微生物的实验室培养(二)
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2019_2020学年高二人教版生物选修一课件：2.1 微生物的实验室培养(一)
专题2 微生物的培养与应用第4课时 微生物的实验室培养(一)学习导航 1.阅读教材P14“(一)培养基”，掌握培养基的作用、分类及营养成分。
2.阅读教材P15“(二)无菌技术”，区分消毒和灭菌，掌握不同物品的灭菌方法。
重难点击 1.了解培养基的基本知识。
2.学会无菌操作的基本知识。
内容索引一、培养基二、无菌技术当堂检测一、培养基基础梳理1.概念：人们按照微生物对 的不同需求，配制出供其_________的营养基质。
2.种类3.成分(1)主要成分：水、、氮源、 。
(2)其他成分：还需要满足微生物生长对 、特殊营养物质以及 的要求。
培养基 ↓加入______培养基氧气营养物质生长繁殖液体凝固剂固体碳源无机盐pH(3)填表完成牛肉膏蛋白胨培养基的营养构成培养基组分提供的主要营养牛肉膏___________________________蛋白胨___________________NaCl ________H 2O氢元素、氧元素碳源、氮源、磷酸盐和维生素碳源、氮源和维生素无机盐(4)某些微生物生长还需要特殊的条件，填表完成培养下列微生物时所需要的特殊条件培养的微生物需要满足的其他要求乳酸杆菌培养基中添加_______霉菌将pH 调至_____细菌将pH 调至_____________厌氧微生物需要提供条件维生素酸性中性或微碱性无氧1.培养基的成分与作用(1)试根据微生物的同化作用类型将微生物进行分类。
问题探究答案 分为自养型微生物和异养型微生物。
(2)试从碳源和氮源的角度分析不同类型的微生物所需的培养基成分的特点。
自养型微生物异养型微生物碳源CO 2、NaHCO 3等无机物_____________氮源__________________________________________尿素、蛋白质等有机物糖类等有机物NH 3、硝酸盐等无机物2.牛肉膏蛋白胨培养基(1)牛肉膏蛋白胨培养基中提供碳源和氮源的物质各是什么？答案 牛肉膏和蛋白胨都可以为微生物提供碳源和氮源。
人教版高中生物选修一课件：2.1微生物的实验室培养 (共60张PPT)
专题2 微生物的培养与应用
课题1 微生物的实验室培养
1
（一）培养基
1、定义：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制 出供其生长繁殖的营养基质。 2、培养基成分:碳源、氮源、水和无机盐等4类 ★另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,以及 氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。如:培养乳酸菌时需 添加维生素、霉菌PH调成酸性、细菌PH调成中性或微碱 性、厌氧微生物提供无菌条件。 ★ 4类成分齐全的培养基叫基本培养基，例如牛肉膏蛋白 胨培养基
根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指
示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种类的
微生物。
3
液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
4
固体培养基：菌落
单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落特征是鉴定菌种的重要依据。
5
于计算平均值，因为它不接近真实值，应重新实验
并注意：将菌液摇匀后再接种 P22
35
㈤.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
半固体培养基：
无动力
有动力(弥散)
(是否运动) 6
选择培养基:从微生物群中选择具有特定表型的细胞. 使之进行繁殖所用的培养基,称为选择培养基.
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌
课题1 微生物的实验室培养
1
（一）培养基
1、定义：人们按照微生物对营养物质的不同需求，配制 出供其生长繁殖的营养基质。 2、培养基成分:碳源、氮源、水和无机盐等4类 ★另外还需要满足微生物生长对pH、特殊营养物质,以及 氧气、二氧化碳、渗透压等的要求。如:培养乳酸菌时需 添加维生素、霉菌PH调成酸性、细菌PH调成中性或微碱 性、厌氧微生物提供无菌条件。 ★ 4类成分齐全的培养基叫基本培养基，例如牛肉膏蛋白 胨培养基
根据微生物的代谢特点，在培养基中加入某种指
示剂或化学药品配制而成，用以鉴别不同种类的
微生物。
3
液体培养基：
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
4
固体培养基：菌落
单个或少数细菌在固体培养基上大量繁殖 时，就会形成一个肉眼可见的，具有一定 形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
菌落特征是鉴定菌种的重要依据。
5
于计算平均值，因为它不接近真实值，应重新实验
并注意：将菌液摇匀后再接种 P22
35
㈤.微生物的培养与观察
培养不同微生物往往需要不同培养温度。 细菌：30～37℃培养1～2d 放线菌：25～28℃培养5～7d 霉菌：25～28℃的温度下培养3～4d。
在菌落计数时，每隔24h统计一次菌落数目。 选取菌落数目稳定时的记录作为结果，以防止 因培养时间不足而导致遗漏菌落的数目。
半固体培养基：
无动力
有动力(弥散)
(是否运动) 6
选择培养基:从微生物群中选择具有特定表型的细胞. 使之进行繁殖所用的培养基,称为选择培养基.
加入青霉素的培养基: 分离酵母菌、霉菌等真菌
加入高浓度食盐的培养基: 分离金黄色葡萄球菌
生物人教版选修1课件：2.1 微生物的实验室培养
课前预习导学
目标导航 预习导引
课堂合作探究
KEQIAN YUXI DAOXUE KETANG HEZUO TANJIU
预习交流 1
由组成细胞的必需元素的种类理解微生物培养基的基本成分。 (1)构成细胞的基本元素有哪几种?由此推测培养基中应含有哪些基本 的成分? 提示:构成细胞的基本元素有 C、H、O、N 4 种,由此推测培养基应含有 提供 C 的物质(碳源)、 提供 N 的物质(氮源)、 提供 H 和 O 的物质(H2O)。 (2)组成细胞的大量元素中,除了 C、H、O、N 外,还有哪些元素?据此推 测,培养基中还应含有除问题(1)基本成分外的何种成分? 提示:还有 P、S、K、Ca、Mg 等元素,据此推测培养基中还应含有提供 P、S、K、Ca、Mg 等元素的物质(无机盐)。 (3)以硝化细菌和乳酸菌为例,比较自养微生物和异养微生物培养基中 碳源的不同。 提示:自养微生物的碳源是含碳的无机物,主要是 CO2、 NaHCO3 等,而异 养微生物的碳源则是含碳的有机物,如糖类、脂肪酸等。
课前预习导学
目标导航 预习导引
课堂合作探究
KEQIAN YUXI DAOXUE KETANG HEZUO TANJIU
二、无菌技术
1.概念:获得纯净培养物的关键是防止外来杂菌的入侵,无菌技术就是 围绕如何解决该问题展开的。 2.消毒:用较为温和的物理或化学方法杀死物体表面或内部的一部分微 生物(不包括芽孢和孢子)。 3.灭菌:指采用强烈的理化因素杀死物体内外所有的微生物,包括芽孢 和孢子。 4.无菌技术主要包括以下四方面 (1)对实验操作的空间、操作者的衣着和手,进行清洁和消毒。 (2)将用于微生物培养的器皿、接种用具和培养基等进行灭菌。 (3)为避免周围环境中微生物的污染,实验操作应在酒精灯火焰附近进 行。 (4)实验操作时应避免已经灭菌处理过的材料用具与周围的物品相接触。
高中生物选修1课件10：2.1微生物的实验室培养
微生物的实验室培养
一、基础知识
（一）微生物的类群 原核类: 细菌、支原体、放线菌、蓝藻
原生生物： 显微藻类、原生生物 微 生 真核类 物
真 菌： 酵母菌、霉菌、食用菌
非细胞类： 病毒、类病毒、朊病毒
◆微生物的共同特点：个体微小、结构简单
1.细菌的形态
2.细菌的繁殖 二分裂
3.细菌的菌落
（1）概念： 单个或少数细菌在固体培养基上 大量繁殖时，形成的一个肉眼可见的、具有 一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物
加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞
——
伊 红 美 蓝 培 养 基
（四）无菌技术
1.概念
无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止 杂菌污染的方法。
2.消毒与灭菌
⑴消毒定义： 利用化学或物理方法，杀死部份微生物的过程。
⑵灭菌的定义： 以化学试剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细 菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之 过程。
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基 表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表 面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培 养基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与 皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？ 为什么？
平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专 为防止空气中微生物的污染而设计的。
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来 微生物污染外,还有什么目的？
无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如
一、基础知识
（一）微生物的类群 原核类: 细菌、支原体、放线菌、蓝藻
原生生物： 显微藻类、原生生物 微 生 真核类 物
真 菌： 酵母菌、霉菌、食用菌
非细胞类： 病毒、类病毒、朊病毒
◆微生物的共同特点：个体微小、结构简单
1.细菌的形态
2.细菌的繁殖 二分裂
3.细菌的菌落
（1）概念： 单个或少数细菌在固体培养基上 大量繁殖时，形成的一个肉眼可见的、具有 一定形态结构的子细胞群体，叫做菌落。
不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物
加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞
——
伊 红 美 蓝 培 养 基
（四）无菌技术
1.概念
无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防止 杂菌污染的方法。
2.消毒与灭菌
⑴消毒定义： 利用化学或物理方法，杀死部份微生物的过程。
⑵灭菌的定义： 以化学试剂或物理方法消灭所有微生物，包括所有细 菌的繁殖体、芽孢、霉菌及病毒，而达到完全无菌之 过程。
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基 表面的湿度也比较高，将平板倒置，既可以使培养基表 面的水分更好地挥发，又可以防止皿盖上的水珠落入培 养基，造成污染。
4.在倒平板的过程中，如果不小心将培养基溅在皿盖与 皿底之间的部位，这个平板还能用来培养微生物吗？ 为什么？
平皿是由正反两平面板互扣而成，这种器具是专 为防止空气中微生物的污染而设计的。
1.无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来 微生物污染外,还有什么目的？
无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。
2.请你判断以下材料或用具是否需要消毒或灭菌。如
《微生物的实验室培养》课件(新人教版选修1)高二
（冷却至50℃） 冷却至 ℃
（二）纯化大肠杆菌 最常用的接种方法有： 最常用的接种方法有： • 平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法和
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。 结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求， 结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想 一想， 步应如何进行无菌操作？ 一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如， 应从操作的各个细节保证“无菌” 例如， 酒精灯与培养皿的距离要合适、 酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接 触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等 触任何其他物体、 等。
细菌的营养类型 细菌的营养类型 营养
根据细菌所利用的能源和碳源的不 将细菌分为两大营养类型。 同，将细菌分为两大营养类型。 自养菌： 自养菌：
光能自养型：光合细菌 光能自养型： 化能自养型：硝化细菌，铁细菌， 化能自养型：硝化细菌，铁细菌，硫细菌
异养菌： 异养菌： 腐生菌 寄生菌
大部分病原菌
菌 落
• 结果分析与评价 （P20） ） • 课题延伸 1、临时保藏法： 临时保藏法： 频繁使用的菌种 对象： 对象： 温度： 4℃（冰箱） 温度： 4℃（冰箱） 缺点： 容易被污染或 缺点：
产生变异
菌种的保存
2、甘油管藏法： 甘油管藏法： 长期保存的菌种 对象： 对象： 温度：20℃（冷冻箱） 温度：20℃（冷冻箱） -
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠， 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基 表面的湿度也比较高， 表面的湿度也比较高， 将平板倒置， 将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥 又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
（二）纯化大肠杆菌 最常用的接种方法有： 最常用的接种方法有： • 平板划线法和稀释涂布平板法 平板划线法和
涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。 涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。 结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求， 结合平板划线与系列稀释的无菌操作要求，想 一想， 步应如何进行无菌操作？ 一想，第2步应如何进行无菌操作？ 应从操作的各个细节保证“无菌”。例如， 应从操作的各个细节保证“无菌” 例如， 酒精灯与培养皿的距离要合适、 酒精灯与培养皿的距离要合适、吸管头不要接 触任何其他物体、吸管要在酒精灯火焰周围等 触任何其他物体、 等。
细菌的营养类型 细菌的营养类型 营养
根据细菌所利用的能源和碳源的不 将细菌分为两大营养类型。 同，将细菌分为两大营养类型。 自养菌： 自养菌：
光能自养型：光合细菌 光能自养型： 化能自养型：硝化细菌，铁细菌， 化能自养型：硝化细菌，铁细菌，硫细菌
异养菌： 异养菌： 腐生菌 寄生菌
大部分病原菌
菌 落
• 结果分析与评价 （P20） ） • 课题延伸 1、临时保藏法： 临时保藏法： 频繁使用的菌种 对象： 对象： 温度： 4℃（冰箱） 温度： 4℃（冰箱） 缺点： 容易被污染或 缺点：
产生变异
菌种的保存
2、甘油管藏法： 甘油管藏法： 长期保存的菌种 对象： 对象： 温度：20℃（冷冻箱） 温度：20℃（冷冻箱） -
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后
平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠， 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基 表面的湿度也比较高， 表面的湿度也比较高， 将平板倒置， 将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥 又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。 发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
人教版高中生物选修一2.1《微生物的实验室培养》课件6共72张PPT
专题2 :微生物的培养与应用
微生物：指形体微小(小于0.1mm)，结构简 单，在适宜环境中能迅速生长繁殖，易变异，通 常要借助显微镜才能看清楚的生物。大约有10万 种。
病毒 (噬菌体、艾滋病毒)
微生物
原核生物界 (细菌、放线菌、蓝藻) 真菌界 (酵母菌、霉菌、大型真菌)
原生生物界 (草履虫、变形虫、衣藻)
衣藻、草履 虫、变形虫
一、课题目标： 了解有关培养基的基础知识，进行无 菌技术的操作，进行微生物的培养。 二、课题重点和难点：无技术的操作。三、技能目标：
掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和 平板划线法等基本操作技术，熟练、规范 地进行无菌操作，成功地培养微生物。
一、基础知识：
（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成 的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 1.培养基的类型和用途 （1）按物理状态来分：培养基可分为固体培 养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌 种分离、鉴定菌落等。 （2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别 培养基。 （3）按成分来分，可分为天然培养基和合成 培养基。
伤 寒 杆 菌 细 胞 壁 中 含 毒 素
结构
细胞壁
化学本质
功能或应用
主要是肽聚糖 保护和维持细胞形状等 同真核生物 同真核生物 细胞膜 多种成分 新陈代谢的主要场所 基质 细 核糖体 同真核生物 同真核生物 胞 质粒 小型DNA 分子
控制细菌的抗药性、 固氮、抗生素生成
贮藏营养物质或代谢废 物，如淀粉粒、硫粒
菌 落
几 种 菌 落
三册书中所有细菌的种类
例如： 细胞类型：原核细胞 代谢类型：异养厌养 代谢产物：乳酸
乳酸菌的有关知识
生产用途：酸奶、泡菜 可产生乳酸的生物：
微生物：指形体微小(小于0.1mm)，结构简 单，在适宜环境中能迅速生长繁殖，易变异，通 常要借助显微镜才能看清楚的生物。大约有10万 种。
病毒 (噬菌体、艾滋病毒)
微生物
原核生物界 (细菌、放线菌、蓝藻) 真菌界 (酵母菌、霉菌、大型真菌)
原生生物界 (草履虫、变形虫、衣藻)
衣藻、草履 虫、变形虫
一、课题目标： 了解有关培养基的基础知识，进行无 菌技术的操作，进行微生物的培养。 二、课题重点和难点：无技术的操作。三、技能目标：
掌握培养基的制备、高压蒸气灭菌和 平板划线法等基本操作技术，熟练、规范 地进行无菌操作，成功地培养微生物。
一、基础知识：
（一）培养基 培养基（培养液）是由人工方法配制而成 的，专供微生物生长繁殖使用的混合营养液。 1.培养基的类型和用途 （1）按物理状态来分：培养基可分为固体培 养基和液体培养基。其中固体培养基用于菌 种分离、鉴定菌落等。 （2）按功能来分，可分为选择培养基和鉴别 培养基。 （3）按成分来分，可分为天然培养基和合成 培养基。
伤 寒 杆 菌 细 胞 壁 中 含 毒 素
结构
细胞壁
化学本质
功能或应用
主要是肽聚糖 保护和维持细胞形状等 同真核生物 同真核生物 细胞膜 多种成分 新陈代谢的主要场所 基质 细 核糖体 同真核生物 同真核生物 胞 质粒 小型DNA 分子
控制细菌的抗药性、 固氮、抗生素生成
贮藏营养物质或代谢废 物，如淀粉粒、硫粒
菌 落
几 种 菌 落
三册书中所有细菌的种类
例如： 细胞类型：原核细胞 代谢类型：异养厌养 代谢产物：乳酸
乳酸菌的有关知识
生产用途：酸奶、泡菜 可产生乳酸的生物：
人教版高二生物选修一课件：2.1微生物的实验室培养2 (共51张 PPT)
特点
不加凝固剂
用途
工业生产 观察微生物的运动、 分类鉴定 微生物分离、鉴定、 活菌计数、保藏菌 种 工业生产 科研 培养、分离出特 定微生物
化学成分
合成培养基
选择培养基 用途
鉴别培养基
在培养基中加入某种指示剂 鉴别不同种类微 或化学药品, 生物
5. 配制原则
⑴目的明确： 根据微生物的种类、培养目的选择原料 自养型： 不加碳源（CO2碳源） 异养型： 有机碳源
2.右表是某微生物培
编号
成分
含量
养基成分，请据此
回答： （1）右表培养基可
①
② ③
粉状硫 （NH4） 2SO4
K2HPO4
10g
0.4g 4.0g
培养的微生物代谢
类型是：
自养型微生物
④
⑤ ⑥
MgSO4
FeSO4 CaCl2
9.25g
0.5g 0.5g
⑦
H2 O
100ml
（2)若除去成分②， 加入（CH2O），该
⑵营养全面、浓度适宜、比例恰当
加入缓冲剂 ⑶适宜的pH值：
牛肉膏蛋白胨培养基 是一种应用最广泛和最普通的细菌基础培养基。
1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方
琼脂 蛋白胨 20.0g 5g 10g
牛肉膏
Nacl
H2 O
5g
定容至1000ml
请分析各成分的作用？
【典例解析】
例:关于微生物营养物质的叙述中， 正确的是( D ) A.是碳源的物质不可能同时是氮 源 B.凡碳源都提供能量 C.除水以外的无机物只提供无机 盐 D.无机氮源也能提供能量
自养微生物
②有机碳源：糖类、脂肪酸、花生粉饼、石油 等
人教版高中生物选修一课件：2.1微生物的实验室培养 (共43张PPT)
微生物需要的五大类营养要素物质： 1.碳源 2.氮源 3.生长因子 4.无机盐 5.水 1.碳源
⑴概念 ：凡是能为微生物提供碳元素的营养物质。
⑵来源： ①无机碳源：CO2；NaHCO3等 ②有机碳源：糖类、脂肪酸、石油等
⑶作用： ①构成细胞物质和一些代谢产物 ②异养微生物的能源
2.氮源
⑴概念： 凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。
不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物
加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞 back
——
伊 红 美 蓝 培 养 基
（四）无菌技术
1.概念
无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防 止杂菌污染的方法。 2.消毒与灭菌
⑴消毒定义： 利用化学或物理方法，杀死部份微生物的过程。
培养基的种类
划分标准
培养基种类
液体培养基
半固体培养基
物理性质
固体培养基
特点 不加凝固剂
加凝固剂，如琼脂
用途
工业生产 观察微生物的运 动、分类鉴定
微生物分离、 鉴定、活菌计 数、保藏菌种
化学成分 用途
天然培养基 合成培养基
选择培养基
含化学成分不明确的天然物质
培养基成分明确 在培养基中加入某种化学物质, 以抑制不需要的微生物的生长, 促进所需要的微生物的生长
鉴别培养基
在培养基中加入某种指示剂或 化学药品,用以鉴别不同种类的
微生物
工业生产 分类、鉴定 培养、分离出 特定微生物
鉴别不同种 类微生物
液体培养基：
表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长
半固体培养基：
无动力
固体培养基：菌落
⑴概念 ：凡是能为微生物提供碳元素的营养物质。
⑵来源： ①无机碳源：CO2；NaHCO3等 ②有机碳源：糖类、脂肪酸、石油等
⑶作用： ①构成细胞物质和一些代谢产物 ②异养微生物的能源
2.氮源
⑴概念： 凡是能够为微生物提供N元素的营养物质。
不加氮源的无氮培养基 分离固氮菌
不加含碳有机物的无碳培养基 分离自养型微生物
加入青霉素等抗生素的培养基 分离导入了目的基因的受体细胞 back
——
伊 红 美 蓝 培 养 基
（四）无菌技术
1.概念
无菌操作泛指在培养微生物的操作中，所有防 止杂菌污染的方法。 2.消毒与灭菌
⑴消毒定义： 利用化学或物理方法，杀死部份微生物的过程。
培养基的种类
划分标准
培养基种类
液体培养基
半固体培养基
物理性质
固体培养基
特点 不加凝固剂
加凝固剂，如琼脂
用途
工业生产 观察微生物的运 动、分类鉴定
微生物分离、 鉴定、活菌计 数、保藏菌种
化学成分 用途
天然培养基 合成培养基
选择培养基
含化学成分不明确的天然物质
培养基成分明确 在培养基中加入某种化学物质, 以抑制不需要的微生物的生长, 促进所需要的微生物的生长
鉴别培养基
在培养基中加入某种指示剂或 化学药品,用以鉴别不同种类的
微生物
工业生产 分类、鉴定 培养、分离出 特定微生物
鉴别不同种 类微生物
液体培养基：
表面生长 均匀混浊生长 沉淀生长
半固体培养基：
无动力
固体培养基：菌落
高中生物选修1课件：2.1微生物的实验室培养(共40张PPT)
(3) 为 避 免 周 围 环 境 中 _微__生__物___ 的 污 染 ， 实 验 操 作 应 在 ___酒__精__灯__火__焰__附__近___进行。
(4) 实 验 操 作 时 应 避 免 已 经 灭 菌 处 理 的 材 料 用 具 与栏目
周__围__的__物__品__相接触。
链 接
2．消毒和灭菌
包括某些大量元素
无机化合物
特别 提醒
①对异养微生物来说，含C、H、O、N的化合物既是碳 源又是氮源、能源。
②一些天然营养物质，如酵母膏、蛋白胨、动植物组织
提取液等可为微生物提供生长因子。
栏 目
链
接
③不同微生物对营养的需求不同，因此，首先根据不同
微生物的营养需求配制针对性强的培养基。
④营养物质过少不能满足微生物的营养需要，过多对微 生物的生长有抑制作用。
花生饼、石油等
接
氮源
能为微生物的代谢提供 氮元素的物质
无机氮源：N2、NH3、 NO、NH有机氮源：蛋 白胨、尿素、蛋白质等
生长因子
生长必不可少的微量有 机物
维生素、氨基酸、碱基 等
在生物体内含量很高， 水 在低等生物体内含量更
高
外界摄入
栏
目
链
接
为微生物提供碳源、氮 无机盐 源以外的各种重要元素，
目
分利用营养物质；氮源主要是作为微生物合成蛋白质和核酸 链
接
的原料；牛肉膏主要为微生物提供碳源、磷酸盐和维生素。
答案：B
变式 训练
1．下列制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的叙述，错误的是 ()
A．操作顺序为计算、称量、溶化、倒平板、灭菌
B．将称好的牛肉膏连同称量纸一同放入烧杯
2019_2020学年高二人教版生物选修一课件：2.1 微生物的实验室培养(二)
专题2 微生物的培养与应用第5课时 微生物的实验室培养(二)学习导航 1.通过阅读教材P16～17“(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基”，掌握配制培养基的步骤和倒平板操作的过程。
2.结合教材P18～19“(二)纯化大肠杆菌”，理解并掌握利用平板划线法和稀释涂布平板法来纯化微生物的方法。
重难点击 1.掌握制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法。
2.学会用平板划线法和稀释涂布平板法纯化微生物。
内容索引一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基二、微生物的分离与纯化技术当堂检测一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基基础梳理牛肉膏蛋白胨固体培养基是细菌培养中常用的一种培养基，大肠杆菌的纯化就是用的该培养基。
1.牛肉膏蛋白胨培养基的成分及各成分提供的营养培养基组分提供的主要营养物质牛肉膏5.0 g碳源、氮源、磷酸盐和维生素蛋白胨10.0 g碳源、氮源和维生素NaCl 5.0 g无机盐蒸馏水定容至1 000 mL氢元素、氧元素2.制备步骤(1)培养基的配制计算：根据牛肉膏蛋白胨培养基的比例，计算配制100 mL培养基时各成分的用量↓称量 ↓0.5 g牛肉膏：比较黏稠，用称取1 g ：易吸潮，要(牛肉膏也是) 0.5 g NaCl2 g_____琼脂配方称量纸蛋白胨迅速称取溶化 │ ↓：1 moL 的NaOH 、pH 试纸，将pH 调为7.4 ～7.6 ↓牛肉膏和称量纸＋水 ↓加热溶化后取出称量纸加蛋白胨和NaCl ↓微火加热、不断搅拌溶解后加 (需不断用玻棒搅拌，防止琼脂糊底而导致烧杯破裂) ↓熔化后，补加蒸馏水至 mL 调节pH 琼脂100：趁热分装到洁净锥形瓶中 ↓加棉塞：用棉花不用脱脂棉，脱脂棉吸水↓包扎：外包纸，且挂标签牛皮分装(2)灭菌(3)倒平板①将 的培养皿放在的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶，左手拔出棉塞。
②右手拿锥形瓶，使瓶口。
③用左手将培养皿打开一条 的缝隙，右手将锥形瓶中的培养基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。
人教版高二生物选修一 2.1微生物的实验室培养(课件) (共31张PPT)
约50℃
倒平板
灼烧灭菌， 防止瓶口的微生物污染培养基
防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染
二.大肠杆菌的纯化培养： ㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 ㈡纯化大肠杆菌： 1.接种： ⑴平板划线法： 接种环
菌种
防止划破培养基
（重复实验） 划3个平板 1个不划线 （空白对照）
第一次灼烧 每次划线之前灼烧
目的 避免污染 杀死上次划线结束后 接种环上残留的菌种， 使每次划线的菌种来 自上次划线末端 杀死残留菌种， 避免污染环境、 感染操作者
专题2 :微生物的培养与应用
一.培养基：微生物的直接生存环境包含了：
1.基本成分：碳源、氮源、水、无机盐 自养微 无机碳源：CO2、CO32-、HCO3- 生物 ⑴碳源 有机碳源： 牛肉膏、蛋白胨等 异养微 生物 ＋ NH4 、NO3 无机氮源： ⑵氮源 有机氮源：牛肉膏、蛋白胨、 酵母膏、尿素等 注：含CHON的有机物是异养型微生物的碳源、 氮源、能源
四.大肠杆菌的纯化培养：分散成单个细胞,形成单个菌落
（一）制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 1.计算： 培养基用量 依配方计算各成分的用量 2.称量： 牛肉膏黏稠，用称量纸称取 牛肉膏、蛋白胨易吸潮，要快、加盖
3.溶化： 牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸
→蛋白胨、NaCl→琼脂 →补水定容 4.调pH、分装、封口： 5.灭菌：培养基、培养皿 6.倒平板：
请你判断以下材料或用具是否需要消毒或 灭菌。如果需要，请选择合适的方法。 （1） 培养细菌用的培养基与培养皿 （2） 玻棒、试管、烧瓶和吸管 （3） 实验操作者的双手
2.无菌范围：
操作者的手、衣着消毒 实验用具灭菌
实验操作空间消毒 实验操作过程
酒精灯旁操作
新人教版高中生物选修1-2.1_微生物的实验室培养(共53张PPT)
蛋培白养包基括的动营物蛋养白构（成酪:碳蛋源白、、氮肉源类、）水、、植无物机蛋盐＋特殊营养物质
白（豆类）、微生物蛋白（酵母）等三种。能
为1微.基生物本提成供分C源：、N碳源源、、生长氮因源子、等水营、养无物质机。盐
⑴碳源
无机碳源：CO2、CO32-、HCO3- 自养微生物 有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、 异养微生物
才能用来倒平板？
灼烧灭菌， 防止瓶口的微生 物污染培养基
3.用左手将培养皿打 开一条稍大于瓶口的 缝隙，右手将锥形瓶 中的培养基(约10～ 20mL)倒入培养皿， 左手立即盖上皿盖。
倒平板注意事项：
3 4 ①温度：50℃左右
②操作：在酒精灯火焰附近 ③冷凝后平板倒置
4.等待平板冷却凝固 （约需5～10min）。 然后，将平板倒过来 放置，使皿盖在下， 皿底在上。
微生物实验室培养的基本操作程序
1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存
例如：
㈠制备牛肉膏蛋白胨
大肠杆菌的纯化培养 固体培养基
㈡纯化大肠杆菌
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算称量溶化调节pH灭菌倒平板无菌检查
1.计算：培养基用量 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方
依配方计算各成分琼的脂用量 20.0g
2.称量：牛 牛肉 肉膏 膏黏 、稠蛋，白用胨称易牛量吸肉纸潮膏称，取要快5、g 加盖
蛋白胨 10g
3.溶化：牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸
Nacl
5g
→蛋白胨、NaCl→琼脂、搅拌 →补水定容 4.调pH、分装、封口：加棉塞H2、O 包牛定皮容纸至、1橡00皮0m筋l 勒紧
100 ℃煮沸5～6 min
白（豆类）、微生物蛋白（酵母）等三种。能
为1微.基生物本提成供分C源：、N碳源源、、生长氮因源子、等水营、养无物质机。盐
⑴碳源
无机碳源：CO2、CO32-、HCO3- 自养微生物 有机碳源：葡萄糖、牛肉膏、 异养微生物
才能用来倒平板？
灼烧灭菌， 防止瓶口的微生 物污染培养基
3.用左手将培养皿打 开一条稍大于瓶口的 缝隙，右手将锥形瓶 中的培养基(约10～ 20mL)倒入培养皿， 左手立即盖上皿盖。
倒平板注意事项：
3 4 ①温度：50℃左右
②操作：在酒精灯火焰附近 ③冷凝后平板倒置
4.等待平板冷却凝固 （约需5～10min）。 然后，将平板倒过来 放置，使皿盖在下， 皿底在上。
微生物实验室培养的基本操作程序
1、器具的灭菌 2、培养基的配制 3、培养基的灭菌 4、倒平板 5、微生物接种 6、恒温箱中培养 7、菌种的保存
例如：
㈠制备牛肉膏蛋白胨
大肠杆菌的纯化培养 固体培养基
㈡纯化大肠杆菌
㈠制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
计算称量溶化调节pH灭菌倒平板无菌检查
1.计算：培养基用量 1000ml牛肉膏蛋白胨培养基的配方
依配方计算各成分琼的脂用量 20.0g
2.称量：牛 牛肉 肉膏 膏黏 、稠蛋，白用胨称易牛量吸肉纸潮膏称，取要快5、g 加盖
蛋白胨 10g
3.溶化：牛肉膏、称量纸 、少量水加热溶解 →取纸
Nacl
5g
→蛋白胨、NaCl→琼脂、搅拌 →补水定容 4.调pH、分装、封口：加棉塞H2、O 包牛定皮容纸至、1橡00皮0m筋l 勒紧
100 ℃煮沸5～6 min
人教版高中生物选修1-2.1《微生物的实验室培养》精品课件
9．倒平板: 待培养基冷却到50 ℃左右时，在酒精灯附近倒
平板。2d后观察平板，无杂菌污染才可用来接种。 10．无菌检查：
将灭菌的培养基放入37℃的温室中培养24—48 小时，以检查灭菌是否彻底。
问题讨论
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时，才能用 来倒平板。你用什么办法来估计培养基的温度？ 答：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶 的温度下降到刚刚不烫手时，就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答：通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培养基。
液体培养基
表面生长
均匀混浊生长
沉淀生长
固体培养基
半固体培养基
无动力 有动力(弥散)
2.不同的微生物往往需要采用不同的培养基配方
3.不管哪种培养基，一般都含有水、碳源、和氮 源、 无机盐等营养物质，另外还需要满足微生物 生长对pH、特殊营养物质以及氧气的要求。
培养基
应用
加入青霉素
分离酵母菌、霉菌等真菌
A C
B
B.右手拿锥形瓶，使
瓶口迅速通过火焰。
D
A C
倒平板技术
B D
C.用左手的拇指和食指 将培养皿打开一条稍大 于瓶口的缝隙，右手将 锥形瓶中的培养基(约10~ 20mL)倒入培养皿，左手 立即盖上培养皿的皿盖
A C
倒平板技术
B D
D.等待平板冷却凝固 大约需5~10min。然 后，将平板倒过来放 置，使皿盖在下，皿 底在上。
（二）纯化大肠杆菌 1.平板划线法：
接种环
菌种
平板划线接种
第五区域 第四区域
第一区域 第二区域 第三区域
问题讨论
1.为什么在操作的第一步以及每次划线之前 都要灼烧接种环？在划线操作结束时，仍然 需要灼烧接种环吗？为什么？
2019-2020学年高中生物人教版选修1课件：2.1微生物的实验室培养
知识梳理
重难聚焦
典例透析
一
二
三
四
五
六
2.纯化大肠杆菌操作过程中的注意事项 (1)平板划线法中多次灼烧接种环进行灭菌
灼烧时期 目的
取菌种前 杀死接种环上原有的微生物
杀死上次划线后接种环上残留的菌种,使下次划线 每次划线前 的菌种直接来自于上次划线末端,使每次划线后的
菌种数目减少,达到分离菌株的目的
接种结束后
-18-
课题1 微生物的实验室培养 目标导航
知识梳理
重难聚焦
典例透析
一
二
三
四
五
六
六、微生物的纯化
1.纯化大肠杆菌 (1)原理:在培养基上将细菌稀释或分散成单个细胞,使其长成单 个的菌落,这个菌落就是纯化的细菌菌落。 (2)纯化微生物的接种方法
平板划线法
稀释涂布平板法
通过接种环在琼脂固体培
养基表面连续划线的操作,
-14-
课题1 微生物的实验室培养 目标导航
知识梳理
重难聚焦
典例透析
一
二
三
四
五
六
四、几种消毒和灭菌方法及其适用范围
适用范围
操作方法
煮沸消毒 法
日常食品,罐装食品
100 ℃煮沸 5~6 min
巴氏消毒 牛奶、啤酒、果酒等不宜
70~75 ℃煮 30 min
法
进行高温灭菌的液体
或 80 ℃煮 15 min
-10-
课题1 微生物的实验室培养 目标导航
知识梳理
重难聚焦
典例透析
一
二
三
四
五
六
类别 概念
主要来源
最常利用 作用
2019-2020学年高中生物人教版选修1课件：2.1 微生物的实验室培养
探究点一 探究点二 探究点三
归纳提升 倒平板操作注意事项 (1)培养基灭菌后,需冷却至50 ℃左右时才能倒平板,原因是温度 过高,易造成冷凝水过多,落入培养基,造成污染,温度过低,琼脂会凝 固。 (2)培养皿打开一条稍大于瓶口的缝隙,不要完全打开。 (3)整个操作过程要在酒精灯火焰旁进行,避免杂菌污染。 (4)平板冷凝后要倒置的原因:防止皿盖上的冷凝水落入培养基, 造成污染。 (5)若倒平板时,培养基溅在皿盖和皿底之间的部位,这个平板应 弃用。
探究点一 探究点二 探究点三
(2)在培养基上划线操作中,操作的第一步及每次划线之前都要 灼烧接种环。在第二次及以后的划线,总是从上一次划线的末端开 始。这样做的原因是什么?划线后,线条末端细菌的数目比线条起 始处要少,每次从上一次划线的末端开始,能使细菌的数目随着划 线次数的增加而逐步减少,最终能得到由单个细菌繁殖而来的菌落。 同时注意最后一区(图中5区)的划线与第一区(图中1区)不要相连。
答案:D
类型一
类型二
类型三
变式训练1 下表为某培养基的配方,下列叙述正确的是( )
成分 蛋白胨 葡萄糖 K2HPO4 伊红 美蓝 蒸馏水
含量 10 g 10 g 2 g
定容至 0.4 g 0.065 g 1 000 mL
A.从物理性质看该培养基属于液体培养基,从用途看该培养基属 于选择培养基
B.该培养基中属于碳源的物质是葡萄糖和蛋白胨,属于氮源的物 质是蛋白胨
水
在生物体内含量很高,在 不仅是优良的溶剂,而且是细胞 低等生物体内含量更高 结构的重要组成成分
无机 盐
为微生物提供除碳、氮元 素以外的各种重要元素, 包括某些大量元素
细胞的组成成分,生理调节物 质;某些化能自养菌的能源,酶 的激活剂等
优 生物：2.1《微生物的实验室培养》课件(新人教版选修1)高二
1.培养基灭菌后，需要冷却到50 ℃左右时， 才能用来倒平板。你用什么办法来估计培养 基的温度？ 提示：可以用手触摸盛有培养基的锥形瓶， 感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时， 就可以进行倒平板了。 2.为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生物污染培 养基
3.平板冷凝后，为什么要将平板倒置？ 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基 表面的湿度也比较高， 将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥 发，又可以防止皿盖上的水珠落入培养基，造成污染。
无菌技术：泛指培养微生物操作中，所有防 止杂菌污染的方法。
2. 无菌技术除了用来防止实验室的培养物被其他外来 微生物污染外，还有什么目的？（P15旁栏思考） 无菌技术还能有效避免操作者自身被微生物感染。 3. 消毒和灭菌有何不同？
消毒：使用较为温和的物理或化学方法，仅杀死物体表面或 内部的一部分对人体有害的微生物（不包括芽孢和孢子）。
每次划线前灼烧接种环： 杀死上次划线结束后，接种环上残留的菌种，使 下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线 的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌 种的数目逐渐减少，以便得到菌落。 划线结束后灼烧接种环： 及时杀死接种环上残留的菌种，避免细菌污染环境和感 染操作者。
2.在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行 划线？
灭菌：使用强烈的理化因素，杀死物体内外所有的微生物 （包括芽孢和孢子）的过程。
4.常用的消毒与灭菌的方法
(1)消毒的方法：
1、煮沸消毒法:100℃煮沸5-6min
饮水、食物和餐具等
2、巴氏消毒法：70-75 ℃下煮30min或 80 ℃ 下 煮15min 牛奶 3、化学药剂消毒法:用75%酒精、新洁尔灭等进行 皮肤消毒;氯气消毒水源 接种室、接种箱或超 4、紫外线消毒…… 净工作台
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在一起培养？未接种的培养基表面是否有菌落生长很关键。如果有菌落
生长，说明了什么？
答案 培养未接种培养基的作用是对照。未接种的培养基在恒温箱中保
温1～2 d后无菌落生长，说明培养基的制备是成功的；若有菌落生长，
说明培养基灭菌不彻底，或培养基被污染，需要重新制备。
答案
归纳 总结
两种接种方法比较
用途 优点
答案
(2)分析右图，回答①、②问题： ①为什么需要使锥形瓶的瓶口通过火焰？ 答案 通过灼烧灭菌，防止瓶口的微生 物污染培养基。 ②从防止杂菌污染的角度思考，平板冷凝后将平板倒置的原因是什么？ 答案 平板冷凝后，皿盖上会凝结水珠，凝固后的培养基表面的湿度也 比较高，将平板倒置，既可以使培养基表面的水分更好地挥发，又可以 防止皿盖上的水珠落入培养基造成污染。
专题2 微生物的培养与应用
第5课时 微生物的实验室培养(二)
学习导航 1.通过阅读教材P16～17“(一)制备牛肉膏蛋白胨固体培养基”，掌握配
制培养基的步骤和倒平板操作的过程。 2.结合教材P18～19“(二)纯化大肠杆菌”，理解并掌握利用平板划线法
和稀释涂布平板法来纯化微生物的方法。 重难点击 1.掌握制备牛肉膏蛋白胨固体培养基的方法。 2.学会用平板划线法和稀释涂布平板法纯化微生物。
答案
(3)为什么在操作的第一步以及每次划线之前都要灼烧接种环？ 答案 操作的第一步灼烧接种环是为了避免接种环上可能存在的微生物 污染培养物。每次划线前灼烧接种环是为了杀死上次划线结束后，接种 环上残留的菌种，使下一次划线时，接种环上的菌种直接来源于上次划线 的末端，从而通过划线次数的增加，使每次划线时菌种的数目逐渐减少， 以便得到菌落。 (4)在划线操作结束时，仍然需要灼烧接种环吗？为什么？ 答案 需要。划线结束后灼烧接种环，能及时杀死接种环上残留的菌种， 避免细菌污染环境和感染操作者。
答案
2.制备各种牛肉膏蛋白胨固体培养基，关于倒平板的具体描述正确的是
①待培养基冷却至40 ℃左右时，在酒精灯火焰附近倒平板 ②将灭过菌
的培养皿放在桌面上，左手拔出棉塞 ③右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通
过火焰 ④用左手的拇指和食指完全打开皿盖 ⑤右手将锥形瓶中培养
基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖 ⑥等待平板冷却5～10 s，
缺点
平板划线法
稀释涂布平板法
一般用于菌种的纯化
一般用于筛选菌株
可对混合菌进行分离
可以计数
不能计数
较麻烦，平板干燥效果不好；若菌液 浓度大则长不出单菌落
培养结果
拓展应用
3.稀释涂布平板法是微生物培养中常用的一种接种方法。下列相关叙述 错误的是 A.操作中需要将菌液进行一系列的梯度稀释 B.需将不同稀释度的菌液分别涂布到固体培养基表面 C.不同浓度的菌液均可在培养基表面形成单个菌落 D.操作过程中对培养基和涂布器等均需进行严格灭菌处理
将平板倒过来放置，使皿盖在下，皿底在上
A.①③④⑤
B.④⑤⑥
C.③⑤
D.①②④⑥
问题导析 解析 答案
问题导析 (1)培养基灭菌后，需冷却至50 ℃ 左右时才能倒平板，原因 是琼脂在44 ℃以下凝固。 (2)倒平板的过程要在 酒精灯火焰 附近进行。
返回上页 答案
解析 琼脂是一种多糖，在98 ℃以上可溶解于水，在44 ℃以下凝固， 倒平板时高于50 ℃则会烫手，低于50 ℃时若不能及时操作，琼脂会凝 固。无菌操作应贯穿于操作的全过程，皿盖全打开则空气中的微生物会 进入培养基。等待平板冷却凝固(大约需5～10 min)后，将平板倒过来放 置，使皿盖在下，皿底在上。
答案
(3)怎样判断制备的培养基是否合格、成功，是否受到污染？ 答案 未接种的培养基在恒温箱中保温一段时间后，如果无菌落生长， 说明培养基制备成功、合格，未受到污染。
答案
拓展应用
1.某学校开展大肠杆菌培养活动，首先对实验室进行清扫和消毒处理，然 后准备各种原料和用具。请回答下列问题： (1)对买回来的菌种进行扩大培养，首先制备试管培养基，写出制备牛肉膏蛋 白胨固体培养基所需的原料：牛肉膏、蛋白胨、蒸馏水、NaCl、琼脂 。 (2)微生物在生长过程中对各种成分需求量不同，配制培养基时各成分要有合 适的比例 。在烧杯中加入琼脂后要不停 搅拌，防止琼脂糊底引起烧杯破裂 。 (3)将配制好的培养基分装到试管中，加棉塞后若干支试管一捆，包上牛皮 纸并用皮筋勒紧放入 高压蒸汽灭菌锅中灭菌。灭菌完毕后拔掉电源，待压 力表的压力自然降到0时，将试管取出。如果棉塞上沾有培养基，此试管 应 废弃 。
培养基
临时保藏 频繁使用 的菌种 固体斜面 培养基
甘油管藏 长期保存 的菌种
液体 培养基
保藏温度
4℃
－20 ℃
接种到固体斜面培养基上→ 甘油瓶中装入甘油后灭菌 →
具体方法 适宜温度下培养→ 4 ℃ 冰箱 将菌液转移至甘油瓶中→混
中保藏
匀后冷冻箱中保存
问题探究
1.平板划线操作注意事项 (1)平板划线法接种菌种时，哪些操作可防止杂菌污染？ 答案 ①接种前将接种环放在酒精灯火焰上灼烧。 ②划完一个区域后，将接种环灼烧，冷却后再划下一区域。 ③接种环沾取菌液时，要将试管口、棉塞等通过火焰。 ④划线时将培养皿打开一条缝隙，将沾有菌种的接种环迅速伸入平板内。 (2)在灼烧接种环之后，为什么要等其冷却后再进行划线？ 答案 避免接种环温度太高，杀死菌种。
内容索引 一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基 二、微生物的分离与纯化技术 当堂检测
一、制备牛肉膏蛋白胨固体培养基
基础梳理
牛肉膏蛋白胨固体培养基是细菌培养中常用的一种培养基，大肠杆菌的 纯化就是用的该培养基。 1.牛肉膏蛋白胨培养基的成分及各成分提供的营养
培养基组分
提供的主要营养物质
牛肉膏5.0 g
答案
(5)在做第二次划线以及其后的操作时，为什么总是从上一次划线的末端 开始划线？ 答案 划线后末端含有的细菌数目较少，每次从上一次的末端开始划线能 够使细菌的数目随划线次数的增加而逐渐减少，最终分散成单个的细菌。 (6)为何最后一次划线不能与第一次划线相连？ 答案 最后一次划线已经将细菌稀释成单个的细胞，如果与第一次划线 相连则增加了细菌的数目，得不到纯化的效果。
答案
2.稀释涂布平板操作注意事项
(1)涂布平板的所有操作都应在火焰附近进行。结合平板划线与系列稀释的
无菌操作要求，想一想将菌液滴加到培养基上时应如何进行无离
要合适，吸管头不要接触任何其他物体，吸管要在酒精灯火焰附近等。
(2)操作结束后，为什么要将一个未接种的培养基和一个接种的培养基放
域内划线。重复以上操作，完成三、四、五区域内划线。注意不
│ ↓
要将最后一区的划线与第一区 相连
培养：将平板 倒置 ，放入培养箱中培养
(2)稀释涂布平板法 ①原理：将菌液进行一系列的梯度稀释 ，然后将不同稀释度的菌液分别
涂布到琼脂固体培养基的表面，进行培养。
②步骤 Ⅰ.系列稀释操作 a.编号为101～106试管中分 别盛有 9 mL 水。 b.用移液管吸取 1 mL 培养 的菌液，注入101倍稀释的试管中，得到稀释菌液。 c.从101倍稀释的试管中吸取1 mL稀释液，注入102倍稀释的试管中。依次 类推，完成菌液的稀释。 注意 移液管要经过灭菌，并且操作应在酒精灯火焰附近完成。
↓
a.在酒精灯 火焰旁 冷却接种环，并打开盛有菌液的试管的_棉__塞__ b.将试管口通过 火焰 达到消灭试管口杂菌的目的 取菌种 c.将已冷却 的接种环伸入菌液中，沾取一环菌液 d.将试管口通过火焰 ，并塞上棉塞
│ ↓
a.左手将皿盖打开一条缝隙，右手把沾有菌种的接种环迅速伸入平
板内，划 三至五条平行线，盖上皿盖。注意不要划破培养基 。 平板 b.灼烧接种环，待其冷却后，从第一区域划线的末端 开始往第二区 划线
碳源、氮源、磷酸盐和维生素
蛋白胨10.0 g
碳源、氮源和维生素
NaCl 5.0 g
无机盐
蒸馏水定容至1 000 mL
氢元素、氧元素
2.制备步骤
(1)培养基的配制 计算：根据牛肉膏蛋白胨培养基 配方 的比例，计算配制100 mL培养基时
各成分的用量
↓ 0.5 g牛肉膏：比较黏稠，用称量纸 称取 1 g 蛋白胨 ：易吸潮，要迅速称取 (牛肉膏也是)
返回上页
一题多变 倒平板的过程需要进行无菌操作，在培养基的制备过程中，还有哪些环 节需要进行无菌操作？ 答案 要对培养基进行高压蒸汽灭菌，对培养皿进行干热灭菌，酒精灯 火焰旁属于灼烧灭菌。
答案
二、微生物的分离与纯化技术
基础梳理
1.纯化大肠杆菌 (1)平板划线法 ①原理：通过接种环在琼脂固体培养基表面连续划线 的操作，将聚集的 菌种逐步 稀释分散 到培养基的表面。 ②步骤 接种环灭菌：将接种环放在酒精灯火焰上灼烧直至烧红
↓
分装 ：趁热分装到洁净锥形瓶中 ↓ 加棉塞：用棉花不用脱脂棉，脱脂棉吸水 ↓ 包扎：外包牛皮 纸，且挂标签
①培养基：高压蒸汽 灭菌 (2)灭菌 ②培养皿：干热 灭菌
(3)倒平板 ①将 灭过菌的培养皿放在 火焰旁的桌面上，右手拿装有培养基的锥形瓶， 左手拔出棉塞。 ②右手拿锥形瓶，使瓶口迅速通过火焰 。 ③用左手将培养皿打开一条稍大于瓶口 的缝隙，右手将锥形瓶中的培养 基倒入培养皿，左手立即盖上培养皿的皿盖。 ④等待平板冷却凝固后，将平板倒过来放置 。
问题探究
1.填表比较溶化时两次使用玻棒搅拌的目的
操作
搅拌的目的
往烧杯中加入蛋白胨和氯化钠后用玻 棒搅拌
_促__使__蛋__白__胨__和__氯__化__钠__溶__解__
加入琼脂，加热使其熔化的过程中使 _防__止__琼__脂__糊__底__而__导__致__烧__杯__破__裂__ 用玻棒搅拌
2.倒平板时的注意事项 (1)培养基灭菌后，需要冷却至50 ℃左右时，才能倒平板的原因是什么？ 你用什么办法来估计培养基的温度？ 答案 琼脂是一种多糖，在98 ℃以上熔化，在44 ℃以下凝固，倒平板 时高于50 ℃则会烫手，低于50 ℃时若不及时操作，琼脂会凝固。可以 用手触摸盛有培养基的锥形瓶，感觉锥形瓶的温度下降到刚刚不烫手时， 就可以进行倒平板了。