体外培养Schwann细胞缺氧模型的建立

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实验十五分子毒理基础实验-体外细胞培养

实验十五分子毒理基础实验－体外细胞培养一、实验目的1、理解体外细胞培养的方法。

2、掌握体外细胞培养的操作。

二、实验原理1、组织细胞培养的发展史：人们对组织和细胞的研究经历了四个世纪，其中组织培养是伴随着移植医学及病毒学的发展而开展起来的，经过了三个阶段。

早期培养：1885年德国人Roux首先尝试用温生理盐水培育鸡胚神经板组织数月，且第一次采用“Tissue culture”这个名词。

1898年Ljunggren 将人体皮肤保存在腹水中几天至几周后再作移植手术获得成功。

这些工作为后来组织培养方法的建立和发展提供了依据。

组织细胞培养的建立与发展：美国生物学家Harrison(1907）采用单盖片覆盖凹窝玻璃的悬滴培养法，以淋巴液为培养基，观察了蛙胚神经细胞突起的生长过程，首创了体外组织培养法。

Maximow(1925)年将单盖片悬滴培养法改良为双盖片培养法，虽然悬滴培养法操作简便，但细胞生长空间狭小，气体不足，培养基少，细胞易老化，需经常更换培养基，因而易污染。

美国生物学家Carrel（1923）设计了卡氏瓶培养法，扩大了组织细胞的生存空间，且换液传代方便，减少了污染机会。

Dulbecco和Moscona等采用胰蛋白酶消化和液体培养基获得了单层细胞，确定了细胞培养法。

现代组织细胞培养：50年代末组织技术进入繁盛阶段。

1950年，在美国遇到大规模开发脊髓灰质炎疫苗的机会，利用组织培养法，并加以改良简化，使研究培养更加普遍广泛。

随着各种仪器设备的开发研究、培养基等各种试剂的商品化，组织培养已日益成为生物工程的生产手段。

2、体外培养细胞的分型根据离体细胞在瓶皿中生长时是否贴壁的性质，将其分为贴壁型与悬浮型两类。

贴壁型细胞：培养细胞需贴附在支持物上生长，也称锚着依存性细胞（anchorage-dependent cells），大多数细胞属此型。

细胞贴壁后，分化现象常变得不显著，易失去原有组织性，形态上表现单一化。

体外共培养模型实验步骤

体外共培养模型实验步骤英文回答：In vitro co-culture model experimental procedure.1. Cell culture:Isolate and culture the desired cell types in appropriate growth media.Optimize culture conditions (e.g., temperature, CO2, media composition) to ensure cell viability and proliferation.2. Establishment of co-culture system:Seed the cell types onto a suitable substrate (e.g., tissue culture plate, transwell insert) to create the co-culture system.Optimize the seeding ratio and spatial arrangement of the cells to promote cell-cell interactions.3. Co-culture duration and analysis:Incubate the co-culture system for the desired duration to allow cell-cell interactions and communication.Monitor the co-culture over time to assess cell growth, morphology, and interactions.Perform assays (e.g., microscopy, flow cytometry, gene expression analysis) to evaluate the effects of co-culture on cell behavior and function.4. Controls:Include appropriate controls to account for the effects of individual cell types and culture conditions.Establish monoculture controls for each cell type and a co-culture control without cell-cell contact.5. Data analysis and interpretation:Analyze the experimental data to identify changes in cell behavior and function induced by co-culture.Compare the results with controls to determine the specific effects of cell-cell interactions.Draw conclusions based on the data and discuss the implications for understanding cell-cell communication and tissue interactions.中文回答：体外共培养模型实验步骤。

培养Schwann细胞用于构建毛囊神经嵴干细胞定向分化饲养层

Ｃｉ２ｅｅｐｅｔａｄＲｅｅｅａｉｎＫｅａｏａｏｙｏｉｕｎＰｒｖｎｅｈｎｄｄｃｌＣｌｇ，ｈｎａ；．ＤｖｌｍｎｎｇｎｒｔｙＬｂｒｔｒｆＳｃａｏｉｃＣｅｇｕＭｅｉｏｌｅｏｏｈＩａｅ
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够稳定分泌神经生长因子（ｅｖｒｗｔａｔｒＮ）ｎｒｅｇｏｈｆｃｏ，ＧＦ和脑源性神经营养因子（ｒｉｄｒｅｅｒｔｏｈｃｆｃｏ，ｂａ－ｅｉｄｎｕｏｒｐｉａｔｒｎｖＢＦ，ＤＮ）可诱导毛囊神经嵴干细胞定向分化。结论无血清的培养基更利于毛囊神经嵴干细胞饲养层的构建。饲
成医学院学报２ｌｅｏ１ＤｃＪｕｎｆｈｎｄｅｉｌｇｏｒａｅｇｕＭｅｃｌｌｅｌＣｏｄｄｉａＣｏｅｕｄｃａ，（）６４
３０９
ｄｉ１．９９ｊｉｎ１７—２７２１．４０９ｏ：０３６／．ｓ．６４２５．０１０．０ｓ
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细胞缺氧复氧模型的建立方法与应用

3、统计分析
3、统计分析
运用统计分析方法对实验结果进行处理，可以得出更准确的结论。例如，可以通过t检验或方差分析等方法，比较各组之间的差异。同时，可以通过相关分析和回归分析等手段，探讨缺氧复氧模型中各因素之间的相互关系和影响程度。
三、应用领域
1、神经科学
1、神经科学
细胞缺氧复氧模型在神经科学领域具有广泛的应用价值。例如，可以用于研究脑缺血和脑梗塞等疾病的发生机制和治疗方法。通过模拟缺氧和再灌注过程，探讨神经细胞的损伤和修复机制，为临床治疗提供理论依据。
四、未来展望
在此基础上，推进细胞缺氧复氧模型在药物研发、疾病治疗等方面的应用，为人类健康事业做出更大的贡献。
参考内容
摘要
摘要
细胞缺氧复氧模型是一种用于研究细胞在缺氧条件下代谢和功能变化的实验模型。近年来，该模型在多个领域如医学、工业和基础研究中得到了广泛应用。本次演示将综述细胞缺氧复氧模型建立方法的最新研究进展，包括模型建立、应用、存在的问题和未来发展方向。
四、未来展望
四、未来展望
随着科技的不断进步，细胞缺氧复氧模型将在更多领域得到应用，同时也会面临一些挑战。未来，需要进一步探索细胞缺氧复氧模型的分子机制，深入研究不同因素对细胞的影响，以便更好地应用于临床实践。此外，需要加强跨学科合作，综合运用多学科知识，提高模型的可重复性和可靠性。应注重动物实验和临床试验的研究设计，确保实验结果的准确性和可靠性。
一、建立细胞缺氧复氧模型
1、细胞培养
1、细胞培养
细胞缺氧复氧模型可以通过细胞培养的方法建立。首先，选取适当的细胞类型进行培养，例如神经细胞、肿瘤细胞等。在培养过程中，通过控制培养条件的氧气浓度和温度等因素，模拟缺氧环境。细胞在缺氧环境下生存一定时间后，再恢复正常的氧供应，观察细胞的变化。

两种不同方法建立乳鼠神经细胞缺氧／复氧损伤模型

８
· １９５９ ·
学杂志，２０１７；３７（２３）：５７５２￣．８薛韬，仝秀清．宁痫颗粒联合卡马西平对难治性癫痫模型大鼠炎
症反应的影响［Ｊ］．中国老年学杂志，２０１６；３６（２０）：４９８５－６．９孟陆亮，毋荣荣，史正刚，等．平痫冲剂对幼年海人酸颞叶癫痫模型
基金项目：吉林省教育厅“十二五”科学技术研究规划项目（吉科教合字［２０１５］第４０８号）
１吉林医药学院形态学实验室通信作者：金宏（１９７５一），女，副教授，硕士，主要从事脑肿瘤药物
研究。第一作者：刘威（１９７６－），女，实验师，硕士，主要从事脑肿瘤药物
（编辑苑云杰）
两种不同方法建立乳鼠神经细胞缺氧／复氧损伤模型
刘威王爽温娜。王洪羽万晓明金宏（吉林医药学院临床技能实验室，吉林吉林１３２００１）
（摘要）目的研究利用过氧化氢（Ｈ：０）和氯化钴（ＣｏＣ１：）建立大鼠乳鼠神经细胞缺氧损伤模型，寻找最适宜的浓度和时间。方法提取原代乳鼠神经细胞，待细胞生长良好后加入不同浓度的Ｈ０：和ＣＯＣ１：作用不同时间，利用ＭＴＹ法检测细胞存活率。结果Ｈ０可快速导致细胞缺氧损伤，以６００、８００ｐ，ｍｏｌ／Ｌ作用于神经细胞３ｈ为适宜。ＣｏＣ１：引起的细胞损伤较缓慢，以３００、４Ｏ０￣ｕｎｏｌ／Ｌ作用２４ｈ效果较好。结论Ｈ２０２和ＣｏＣ１２均可导致细胞氧化损伤，效果确切。
大鼠学习记忆行为的影响［Ｊ］．西部中医药，２０１３；２６（４）：１９－２２．

体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立

ＴｈｅＣＭＥＣｓｗｅｒｅｃｕｌｔｕｒｅｄｂｙｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｐｌａｎｔｉｎｇｍｙｏｃａｒｄｉｕｍｔｉｓｓｕｅ．Ｉｔｓｓｐｅｃｉｆｉｃａｎｔｉｇｅｎｗｅｒｅｏｂｓｅｒｖｅｄｂｙｉｍｍｕｎｏｃｙｔｏｃｈｅｍｉｓｔｒｙ．
ｒａｔｉｏｎｏｆｌｏｗｏｘｙｇｅｎｄａｍａｇｅｍｏｄｅｌ（Ｉ），ｗｉｔｈｎｏｒｍａｌｓｅｒｕｍｆｒｅｅｏｘｙｇｅｎｔｒａｉｎｉｎｇａｓｔｈｅｃｏｎｔｒｏｌｇｒｏｕｐ（Ｎ）．Ｉｎｖｅｒｔｅｄｐｈａｓｅｃｏｎｔｒａｓｔｍｉ — ｃｒｏｓｃｏｐｅｏｂｓｅｒｖａｔｉｏｎｏｆｃｅｌｌｍｏｒｐｈｏｌｏｇｉｃａｌｃｈａｎｇｅｓｂｅｆｏｒｅａｎｄａｆｔｅｒｈｙｐｏｘｉａ，ＭＴＴｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｅｃｅｌｌｖｉｔａｌｉｔｙ，ＡｎｎｅｘｉｎＶ —ＦＩＴＣａｎｄＰＩｄｏｕｂｌｅｍａｒｋｉｎｇｍｅｔｈｏｄｔｏｄｅｔｅｒｍｉｎｅｃｅｌｌａｐｏｐｔｏｓｉｓｒａｔｅ．ＲｅｓｕｌｔｓＣｕｌｔｕｒｅｄｒａｔＣＭＥＣｓｈａｓｔｈｅｔｙｐｉｃａｌｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓｏｆｍｉｃｒｏｖａｓｃｕｌａｒ

人血脑屏障体外实验模型的建立及缺氧-复氧对其通透性的影响

人血脑屏障体外实验模型的建立及缺氧-复氧对其通透性的影响冯洁;叶丽亚;张文健;刘杰文;娄晋宁;李成辉【期刊名称】《中国医药生物技术》【年(卷),期】2008(003)002【摘要】目的建立人血脑屏障体外实验模型,并探讨缺氧-复氧对血脑屏障模型通透性的影响.方法将分离、纯化的人脑微血管内皮细胞(HB-MVEC)在细胞插入器上培养至汇合状态,以液面试漏试验确定血脑屏障模型的形成,并通过形态学检查、跨内皮细胞电阻(TEER)测定和辣根过氧化物酶(HRP)通透率对血脑屏障模型进行鉴定;以未达汇合状态的HB-MVEC及培养至汇合状态的人脐静脉内皮细胞(HUVEC)作为对照.观察缺氧.复氧处理(缺氧2h和复氧1、2、4、8、24h)和缺氧-复氧时存在白细胞激活产物(缺氧2 h后在有白细胞激活产物存在情况下复氧1 h)对血脑屏障模型通透性的影响,以及前列腺素E、α1抗胰蛋白酶和丹参单体764-3对血脑屏障模型的保护作用.各项实验均观察3孔细胞.结果 HB-MVEC在细胞插入器培养至汇合状态后,液面试漏试验呈阳性;扫描电镜观察显示细胞间无间隙,透射电镜检查证实细胞间存在紧密连接.血脑屏障模型、未达汇合状态HB-MVEC和HUVEC的TEER 分别为(46.0±1.3)、(30.8±1.4)、(7.5±2.1)Ω/cm2;向细胞插入器内加入含HRP的培养基培养1 h后,HRP通透率分别为0.17%±0.03%、0.26%±0.04%和0.94%±0.07%;缺氧2h和复氧1、2、4、8、24h HRP通透率分别为3.97%±0.94%、6.06%±0.75%、7.17%±0.18%、7.96%±0.47%、8.57%±0.62%、10.37%±0.78%.血脑屏障模型缺氧2 h后在有白细胞激活产物的情况下复氧1 h,其HRP通透率为8.87%±0.76%,明显高于无白细胞激活产物组(7.20%±0.87%);而前列腺素E、α1抗胰蛋白酶和丹参单体764-3能够减弱这种情况下的血脑屏障模型通透性增加,3组的HRP通透率分别为7.08%±0.89%,6.01%±0.57%和5.53%±0.62%.结论应用HB-MVEC可以构建血脑屏障体外模型,缺氧.复氧明显增加血脑屏障模型的通透性,前列腺素E、α1抗胰蛋白酶和丹参单体764-3具有保护血脑屏障模型的作用.【总页数】7页(P109-115)【作者】冯洁;叶丽亚;张文健;刘杰文;娄晋宁;李成辉【作者单位】100029,北京,中日友好医院临床医学研究所;100029,北京,中日友好医院临床医学研究所;100029,北京,中日友好医院临床医学研究所;300020,天津,中国医学科学院天津血液学研究所;100029,北京,中日友好医院临床医学研究所;100029,北京,中日友好医院手术麻醉科【正文语种】中文【中图分类】R3【相关文献】1.冰片联合灯盏花素对缺氧/复氧损伤血脑屏障通透性的影响 [J], 徐露;张太君2.MMP-9和细胞骨架肌动蛋白参与缺氧缺血诱导的体外血脑屏障模型通透性增加[J], 甘娜;尹飞;彭镜;王卫东3.丹酚酸B对缺糖缺氧／复糖复氧的体外血脑屏障模型的影响 [J], 何吉洪;杨海洋;龙江4.缺氧缺血对体外血脑屏障通透性的影响及其机制的研究 [J], 王卫东;黄虹;邹浩元;林红5.血脑屏障氧糖剥夺体外模型中缺氧诱导因子-1α的表达及血脑屏障通透性的变化[J], 马腾;刘云会;薛一雪因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

体外培养雪旺氏细胞三种方法的比较

体外培养雪旺氏细胞三种方法的比较【摘要】目的找到一种适合修复周围神经缺损要求的雪旺氏细胞培养方法。

方法分别采用三种不同方法进行雪旺氏细胞培养,并比较各种方法培养的雪旺氏细胞的生长情况及纯度。

结果先用酶消化后组织块贴壁培养的的方法,雪旺氏细胞“爬出”速度较直接组织贴壁培养方法快,但较直接酶消化法慢,而纯度均较其他二种方法高。

结论先用酶消化组织块,后再将组织块贴壁培养的方法【关键词】雪旺氏细胞;体外培养;新方法雪旺氏细胞是周围神经的一种胶质细胞,是周围神经的髓鞘细胞,排列成串,一个一个的包裹着周围神经轴突,其外面包有一层基膜。

在有髓神经纤维中,雪旺氏细胞形成神经的髓鞘,是周围神经系统的髓鞘形成细胞,在周围神经再生中起重要的作用,对于周围神经缺损修复有重要的意义。

故体外培养雪旺氏细胞是神经生物学研究的一个重要方面。

本文作者通过对三种不同方法培养出雪旺氏细胞的速度和纯度进行比较,找到一种简易的、稳定的、受外界影响小的、高纯度、大数量的雪旺氏细胞培养法。

1材料与方法1.1设备及试剂普通显微镜、显微手术器械、CO2培养箱(德国产)以及普通细胞培养器材一套,直径50mm一次性培养皿(德国生产)若干个,D-Hank,s液,含10%胎牛血清(杭州四季青产)的F12(Hyclone产)+DMEM(Gibco产)培养液(F12+DMED=1∶1),IV型胶原酶(Gibco产),胰蛋白酶(Sigma公司),EDTA(华美公司)。

1.2雪旺氏细胞的取材注射过量的水合氯醛处死出生3d的SD乳鼠6只,浸于75%医用酒精消毒3min,取出用无菌D-Hank,s液反复冲洗4次,在无菌条件下取出坐骨神和臂层神经,解剖显微镜下仔细剥除神经基膜,再用D-Hank,s液反复冲洗3次,用显微手术剪,将组织块剪成约2mm长的组织碎块,再用D-Hank,s液反复冲洗3次,吸干,置于一次性离心管中。

1.3雪旺氏细胞的培养1.3.1酶消化、组织块贴壁培养往上述离心管中加入等体积0.5%的胰蛋白酶和0.06%IV型胶原,使二者的总体积约为组织块体积的4倍。

体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立

体外培养大鼠心肌微血管内皮细胞缺氧模型的建立马培泽;宋宪波;刘宁;姜月华;戴国华【摘要】目的建立大鼠心肌微血管内皮细胞(CMECs)缺氧模型.方法植块法培养CMECs,免疫细胞化学鉴定微血管内皮细胞特异性标志.将原代培养的CMECs在1%O2-94%N2-5%CO2低氧气体环境中培养24 h制备低氧损伤模型(L组),以无血清常氧培养作为对照组(N组).倒置相差显微镜观察缺氧前后细胞形态变化,MTT 法测定细胞活力,Annexin V-FITC和PI双标记法测定细胞凋亡率.结果植块法培养的大鼠CMECs具备典型微血管内皮细胞特征;Ⅷ因子、CD31相关抗原免疫染色鉴定均阳性.缺氧前后细胞形态无明显变化;与N组比较,L组细胞活力明显增加(P＜0.05);细胞凋亡率明显降低(P＜0.05),其中早期凋亡降低最明显(P＜0.01).结论本方法可以成功建立简便、易行的CMECs细胞缺氧模型.【期刊名称】《中西医结合心脑血管病杂志》【年(卷),期】2014(012)001【总页数】3页(P83-84,107)【关键词】心肌微血管内皮细胞;缺氧模型;细胞活力;细胞凋亡【作者】马培泽;宋宪波;刘宁;姜月华;戴国华【作者单位】山东中医药大学第一临床学院,250014;山东中医药大学第一临床学院,250014;山东中医药大学第一临床学院,250014;山东中医药大学附属医院,250011;山东中医药大学附属医院,250011【正文语种】中文【中图分类】R329.2;R285.5缺血性心脏病已成为威胁人类生命健康的主要杀手，而心肌微血管内皮细胞（CMECs）功能障碍一直是缺血性心脏病病因、发病机制及其防治研究领域中的热点［1］。

在体CMECs的功能受多种因素的影响，而体外培养的CMECs能否耐受缺氧，以及缺氧对CMECs活力及凋亡的影响还未明确。

本研究通过大鼠CMECs培养，建立体外缺氧CMECs模型，观察了缺氧对大鼠CMECs活力及凋亡的影响。

用于细胞缺氧培养的装置的制作方法

用于细胞缺氧培养的装置的制作方法
本发明涉及用于细胞缺氧培养的装置的制作方法。

具体地说，本发明涉及一种能够提供稳定的缺氧环境的细胞培养装置的制作方法，包括以下步骤：
1. 准备细胞培养器材，包括细胞培养瓶、培养基、细胞培养箱等。

2. 选择适当的气体混合物，通常为95%氮气和5%二氧化碳的混合物，以产生缺氧环境。

3. 准备含有缺氧气氛的培养箱，可以使用商业上可获得的缺氧培养箱，或自行制作。

4. 使用缺氧气氛转移系统将培养瓶从含有正常氧气环境的培养箱中转移到含有缺氧气氛的培养箱中。

5. 在缺氧气氛下进行细胞培养。

6. 监测细胞生长情况，如果需要，可以更换培养基或添加其他培养物质。

通过使用上述制作方法，可以得到一种适用于细胞缺氧培养的稳定装置，可以用于研究细胞在缺氧条件下的生理和生化过程，以及研究缺氧与疾病发生、发展的关系。

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细胞缺氧／复氧模型的建立方法与应用

细胞缺氧／复氧模型的建立方法与应用杜毓菁;徐一心;王紫璇;石蕊;黄杉(综述);万福生(审校)【期刊名称】《南昌大学学报（医学版）》【年(卷),期】2015(000)002【摘要】本文介绍了缺氧／复氧模型建立的基本方法并简述了几种常用建模细胞的缺氧特性。

参阅国内外学者建模的研究，分析了缺氧复氧模型优劣与适用选择原则。

据此为实验室选择建模方法提出更多参考思路。

%This article describes the basic establishment methods of hypoxia/reoxygenation models and outlines the characteristics of several types of common modelingcells.According to studies abroad,the advantages,disadvantages and selection principles of hypoxia/reoxygenation models are analyzed to provide references for laboratory choice of modeling methods.【总页数】4页(P88-91)【作者】杜毓菁;徐一心;王紫璇;石蕊;黄杉(综述);万福生(审校)【作者单位】南昌大学第二临床医学院，南昌 330006;南昌大学公共卫生学院，南昌 330006;南昌大学第二临床医学院，南昌 330006;南昌大学口腔医学院，南昌 330006;南昌大学第二临床医学院，南昌 330006;南昌大学基础医学院，南昌330006【正文语种】中文【中图分类】R-332【相关文献】1.心肌细胞缺氧/复氧损伤模型研究与应用进展 [J], 阿迈·塔勒比;张永杰;陈西敬2.小胶质细胞缺氧再复氧模型的建立方法 [J], 王珊;玛娜璐璐;高永红;娄利霞;吕晞滢;董玢;孙逸坤;赵一舟3.细胞缺氧复氧模型建立方法的研究进展 [J], 关欣;李应东4.细胞缺氧／复氧模型的建立方法与应用 [J], 杜毓菁;徐一心;王紫璇;石蕊;黄杉（综述）;万福生（审校）;5.细胞缺氧复氧模型制备方法及应用 [J], 叶乃菁;吴新萍;李明权;王志勇因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

小胶质细胞缺氧再复氧模型的建立方法

ｍＲＮＡ的表达用ＴＲＩＺＯＩ法提取总ＲＮＡ，在紫外分光光度计中测ＯＤ２６０、ＯＤ２８０值，计算ＲＮＡ浓度和含量，ＯＤ２６０／２８０
１．２主要试剂
ＤＭＥＭ培养基（Ｇｉｂｃｏ公司，货号１２１（】（］一
关键词：小胶质细胞；缺氧／复氧；缺血再灌注中图分类号：Ｒ３２９．２文献标识码：Ａｄｏｉ：１０．３９６９／ｊ．ｉｓｓｒｋ１６７２ —１３４９．２０１４．０１．０４１文章编号：１６７２ —１３４９（２０１４）０１ —００７４０２
培养２４ｈ、３６ｈ。１．６ＭＴＴ比色法检测ＢＶ２细胞活力在缺氧１２ｈ、再复氧１２
ｈ及再复氧２４ｈ后分别吸弃上清液，每孔加入１００ｔｘＩＭＴＴ溶液，置细胞培养箱内３７℃ 避光孵育４ｈ；吸弃上清液，每孑Ｌ加入１５０／＊ＩＤＭＳＯ溶液，轻轻震荡１０ｍｉｎ，使Ｆｏｒｍａｚａ结晶物充分溶解；在酶联免疫检测仪选择４９２ｎｍ波长测Ａ值。１．７ＥＩＩＳＡ检测ＴＮＦ— Ｑ收集各组细胞上清液一８０￣Ｃ保存，测定各组细胞上清液ＴＮＦ一水平。
１．８实时荧光定量ＰＣＲ检测ＢＶ２细胞环氧酶一２（ＣＯＸ２）

细胞缺氧复氧模型建立方法的研究进展

ｏｙｏｉ— ｅｘｇｎｔｏｄｌｉｅｅｔｙａｓｉｃｕｉｇｏｉｌｈｓｃｄｌｓｍｐｅｃｅｃｄｌｆｈｐｘａｒｏｙｅａｉｎｍｏｅｎｒｃｎｅｒ，ｎｌｄｎｆｓｍｐｅｐｙｉａｍｏｅ，ｉｌｈｍｉａｍｏｅｌｌ
５Ｏ％Ｃ培养箱中复氧２ｈ为缺血预适应组。作缺氧复氧损伤模型的建立对于机体缺血／再灌注及１２混合气体培养法是物理性缺氧模型中最常．缺血预适应／后适应从细胞水平进行生理生化、理见的，病应用较前述方法更为普遍。如Ｗｅｅｔｒｂｓ等ｅ药理及临床等深入研究有着重要意义。本文就细胞方法：先培养１ｈ去掉培养液，入预先用Ｎ预；加饱缺氧复氧损伤模型的文献综述如下。
关
中图分类号：３１Ｒ－３
欣李应东，
文章编号：０６２８２０）８２３－３１０－０４（０８１－７７０
（．１甘肃中医学院，兰州７００２甘肃中医学院科研实验中心，３００；．兰州７００３００）文献标识码：Ａ
缺血性疾病严重危害人类健康。因此，缩短组织缺血时间、早恢复血流是防治缺血损伤的最有尽效措施。然而，定情况下在恢复血流同时，一组织器官损伤往。常发生于心、、等重要器官。因此，胞Ｊ脑肾细

巨噬细胞缺氧复氧模型的制作方法及其生物学意义

巨噬细胞缺氧复氧模型的制作方法及其生物学意义张艳美;廖晗;郑付春;李伟秋;郑燕珊;徐涵;刘幸平;石刚刚【期刊名称】《汕头大学医学院学报》【年(卷),期】2013()1【摘要】目的:建立一种简单可行的巨噬细胞缺氧复氧(H/R)模型。

方法:采用制备缺氧液与氮气饱和相结合的方法制造细胞缺氧环境。

巨噬细胞系RAW264.7分为对照组、缺氧(30、60和120min)复氧(15或30min)组及H/R+不同剂量的依达拉奉(EDA)组,借助于倒置荧光显微镜及流式细胞仪观测巨噬细胞内活性氧(ROS)浓度的变化,作为评判H/R模型成功与否的标准。

结果:与各自对照组比,缺氧60min 复氧15 min组即可引起ROS浓度明显升高(P<0.05),随着H/R时间延长,ROS生成呈进行性增加趋势。

ROS清除剂EDA能剂量-依赖地抑制H/R所致ROS的大量生成。

结论:应用制备缺氧液与氮气饱和相结合的方法可成功建立巨噬细胞H/R 模型,该模型适于不同脏器缺血再灌注损伤共同分子机制的探讨及寻找共同治疗策略的相关研究。

【总页数】4页(P13-15)【关键词】巨噬细胞;缺氧复氧;模型;氧化应激【作者】张艳美;廖晗;郑付春;李伟秋;郑燕珊;徐涵;刘幸平;石刚刚【作者单位】汕头大学医学院药理学教研室;汕头大学医学院第一附属医院药剂科;汕头大学医学院分析细胞学实验室【正文语种】中文【中图分类】R363【相关文献】1.黄芪甲苷对小鼠RAW264.7巨噬细胞缺氧复氧损伤的影响 [J], 杨椹;冯俊霞;段燕灵;张云芳;李红艳2.丙酮酸乙酯对缺氧/复氧损伤小鼠腹腔巨噬细胞一氧化氮生成及白细胞介素-1和6表达的影响 [J], 杨涛;颜光涛;司艺玲;王录焕3.IL-37通过促进巨噬细胞M2型极化在缺氧/复氧诱导的肝细胞损伤中的保护作用[J], 朱迪;李婷婷;陈青松;牟童;汤成泳4.全反式维甲酸对缺氧复氧小鼠巨噬细胞RAW264.7的影响 [J], 赵世莉;冯俊霞;李静纯;苏彩虹;张云芳;李红艳5.巨噬细胞移动抑制因子通过调控自噬抗H9c2心肌细胞缺氧/复氧损伤 [J], 李金玉;黄丹梅;张艳美;石刚刚;汪彬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。