细胞培养知识讲课稿

细胞培养知识细胞培养知识VERO细胞培养、纯化灭活的狂犬病毒vero细胞Vero细胞被成功的用来培养狂犬病疫苗、乙脑疫苗等多种疫苗，在非典期间又为研究冠状病毒做出贡献，在医药研究种广泛应用。

来源：非洲绿猴肾细胞形态：上皮细胞生长特性：贴壁注释：该细胞是日本千叶大学的Y. Yasumura和Y. Kawakita于1962年3月27日从一只正常的成年非洲绿猴肾组织培养出来的。

培养液：MEM（含 2 mM L-谷氨酰胺和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸钠）， 10%胎牛血清传代：吸去培养液。

用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。

加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。

加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。

加适量的细胞到新的培养器皿中。

（以1:3至1:6为宜，传代期间培养液每周更换2-3次）冻存： 95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。

CHO-K1细胞CHO-K1细胞是实验中非常常用的一个细胞株，在生物制药中使用也非常广泛。

该细胞株培养条件简单，贴壁强度适中，比较容易转染，很适合用它来研究一般哺乳动物基因的功能。

来源：Cricetulus griseus (中国仓鼠) 卵巢形态：表皮细胞生长特性：贴壁注释：CHO-K1由CHO衍生而来，CHO是T. T. Puck 在1957年从一只成年中国仓鼠卵巢获得的（1）。

培养液：Ham's F12K （含2 mM L-谷氨酰胺，1.5 g/L NaHCO3）， 10% 胎牛血清。

传代：吸去培养液。

用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。

加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。

加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。

加适量的细胞到新的培养器皿中。

（以1：4到1：8为宜，传代期间培养液更换1-2次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。

1. Puck TT , et al. Genetics of somatic mammalian cells III. Long-term cultivation of euploid cells from human and animal subjects. J. Exp. Med. 108: 945-956, 1958. PubMed: 13598821293细胞293细胞比较容易转染，是一个很常用的表达研究外源基因的细胞株。

293细胞的一个衍生株：293T/17的转染效率更高，成为广大研究者研究基因功能的一个强大工具。

293细胞的缺陷是生长过程中贴壁强度比较小。

所以在实验过程中容易流失，从而影响实验结果。

如果一个实验室新得到的293细胞是邮寄得到的并且细胞在培养瓶中，就需要让细胞沉降几天时间，因为大量细胞会漂浮在培养液里。

来源：人体肾脏形态：上皮细胞生长特性：贴壁注释：该细胞含腺病毒5 DNA 。

培养液： MEM（含 2 mM L-谷氨酰胺和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸钠）， 10% 马血清（热灭活）。

传代：吸去培养液。

用0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。

加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。

加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。

加适量的细胞到新的培养器皿中。

（以1：2到1：4为宜，传代期间培养液2-3天更换1次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。

NIH-3T3细胞NIH-3T3细胞在实验室常用来做转染及基因表达的研究。

易感病毒有鼠肉瘤病毒和鼠白血病毒。

来源： Mus musculus（小家鼠）胚胎形态：成纤维细胞样生长特性：贴壁注释：为得到适合转染得细胞株，NIH-3T3细胞至少连续克隆过5次。

NIH-3T3细胞容易转染DNA，鼠痘病毒阴性。

培养液：DMEM（含4mM L-谷氨酰胺、4.5g/L葡萄糖、1.5g/L碳酸氢钠），10%小牛血清传代：吸去培养液。

（不要让细胞长满培养器皿，长满80%为宜）用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。

加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。

加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。

加适量的细胞到新的培养器皿中。

（以3-5x103/cm2为宜，传代期间培养液每周更换2次）冻存： 95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。

PC-12细胞PC-12细胞是一个常用的神经细胞株。

来源：Rattus norvegicus (褐家鼠) 肾上腺嗜铬细胞瘤（一种交感神经系统的肿瘤）形态：多角型细胞生长特性：贴壁较松，容易成团注释：PC-12细胞株来源于一种可移植的鼠嗜铬细胞瘤，该细胞对神经生长因子（NGF）有可逆的神经元显形反应，该细胞不合成肾上腺素。

培养液：Ham's F12K （含2 mM L-谷氨酰胺，1.5 g/L NaHCO3）+15%马血清+2.5% 胎牛血清。

传代：吸去培养液。

加入新的培养液，用吸管吹下细胞或用手拍打培养瓶或刮下细胞到培养液中，用移液器把细胞吹散。

加适量的细胞到新的培养器皿中。

（以1：4为宜，传代期间2-3天更换培养液）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。

Hela细胞Hela细胞是在所有细胞株中最著名的。

它来源于美国的HelenLane，她1951年死于子宫颈癌。

但源自她的肿瘤的细胞却在世界各地的实验室中得到广泛的使用。

来源：人宫颈癌形态：上皮细胞生长特性：贴壁注释：Hela细胞显角蛋白免疫沉淀染色阳性，包含HPV-18序列，有正常水平的pRB和p53的低水平表达。

培养液：MEM（含 2 mM L-谷氨酰胺和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸钠）， 10%胎牛血清传代：吸去培养液。

用0.25%（w/v）Trypsin-0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶活性）。

加2-3毫升Trypein-EDTA，放37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。

加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。

加适量的细胞到新的培养器皿中。

（以1：2到1：6为宜，每周传代2-3次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。

Sf9细胞Sf9细胞常在Baculovirus（杆状病毒）表达系统中用作宿主细胞，来表达外源蛋白。

来源：Spodoptera frugiperda（草地夜蛾）卵巢细胞形态：上皮细胞生长特性：贴壁注释：Sf-9细胞是由G.E. Smith 和 C.L. Cherry 在1983年从细胞株IPLB-SF 21 AE得来的一个克隆。

IPLB-SF 21 AE是1977年由Vaughn等从草地夜蛾蛹的卵巢组织得到的。

培养液：TNM-FH培养液：照厂家的说明配好Grace's Antheraea 培养液，每升培养液加3.3g酵母粉和3.3g乳白蛋白水解物，用1M KOH调pH到6.2-6.4过滤除菌，4℃保存。

完整培养液在使用前加入10%热灭活的胎牛血清。

传代：用吸液管吹洗细胞使其悬浮，或用手从侧面拍打细胞培养瓶(当用大细胞培养瓶时)重悬细胞。

（当用来接种的细胞重悬前就有很多细胞漂浮，要吸掉漂浮细胞及旧培养液，加入新培养液重悬细胞。

按合适比例传代细胞到新培养器皿中。

（以1：5或更多为宜，每2-3天传代一次） 28℃培养（不用CO2培养箱）。

冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。

BHK21细胞来源：叙利亚仓鼠肾细胞形态：纤维原细胞生长特性：贴壁注释：这个细胞来自于一只出生一天的新生仓鼠，随后被改造成一个易于作表达的宿主细胞株。

培养液：MEM（含 2 mM L-谷氨酰胺和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸钠）+ 10%胎牛血清传代：吸去培养液。

用0.25%（w/v）Trypsin-0.03 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶活性）。

加2-3毫升Trypein-EDTA，放37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。

加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。

加适量的细胞到新的培养器皿中。

（以1：2到1：10为宜，每周传代1-2次）冻存：95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。

HepG2细胞Hep G2细胞来源于一个15岁白人的肝癌组织。

该细胞分泌多种血浆蛋白：清蛋白、α2-巨球蛋白、血纤维蛋白溶酶原、铁传递蛋白等。

该细胞能大容量培养，乙肝表面抗原阴性，对G418有抗性，对人生长激素有刺激反应。

来源：人肝癌细胞形态：上皮细胞生长特性：贴壁注释：该细胞表达3-羟基-3-甲基戊二酸辅酶A还原酶和肝甘油三酸脂脂肪酶。

该细胞在有百草枯(英文名：gramoxone)的环境下过氧化氢酶mRNA表达增加，ApoA-I mRNA 表达减少。

培养液：MEM（含 2 mM L-谷氨酰胺和 Earle's BSS，1.5 g/L NaHCO3, 0.1 mM 非必需氨基酸, 1.0 mM 丙酮酸钠）+ 10%胎牛血清。

传代：吸去培养液。

用 0.25% (w/v) Trypsin- 0.53 mM EDTA洗一次，以去除血清（血清会抑制胰酶的活性）。

加2-3毫升Trypsin-EDTA，放在37℃培养箱内约5分钟，直到细胞全部脱落。

加6-8毫升培养液，用移液器把细胞吹散。

加适量的细胞到新的培养器皿中。

（以1:4至1:6为宜，传代期间培养液每周更换2次）冻存： 95%培养液+5%DMSO冻存于液氮。

细胞培养液简介虽然细胞培养的实验早在19世纪末就开始了，但用于培养细胞的培养液主要是动物的血清或淋巴液。

被人称为细胞培养之父的Ross Harrison就是利用青蛙的淋巴液来培养神经细胞的。

这样的培养液不但性质不稳定，而且只能进行非常小规模的细胞培养。

第一个人工配制的培养液是由Lewis & Lewis在1911年由海水、血清、胚胎提取物和盐和蛋白胨为原料配制成的。

但是人们对于培养液中的化学成分并不清楚。

直到1948年，Fisher才研制成了第一个化学成分清楚的细胞培养液CMRL1006。