实验二 荧光法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量
荧光分光光度法测维生素B2的含量
荧光分光光度法测维生素B2的含量一、实验目的1.了解荧光分析法的原理2.学习荧光公光光度计的使用方法二、实验原理维生素B2在230—490nm范围波长的照射下，激发出峰值在526nm左右的绿色荧光，在pH=6-7的溶液里荧光最强，在pH=11时荧光消失。
三、仪器与试剂荧光分光光度计、容量瓶、玻璃棒10.0ug/ml维生素B2标准液：称取10.0mg维生素B2，先溶解于少量的1%乙酸中，然后用1%乙酸定容至1000ml。
溶液应该保存在棕色瓶中，置于阴凉处。
四、实验步骤1. 标准系列溶液的配制取6个25ml比色管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0ml及2.5ml维生素B2标准溶液，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
2．测定荧光激发光谱和发射光谱取上述第3号标准系列溶液，测定激发光谱和发射光谱。
先固定发射波长为525nm，在400—500nm区间进行激发波长扫描，获得溶液的激发光谱和荧光最大激发波长λex再固定激发波长为λex，在480—600nm区间进行发射波长扫描，获得溶液的发射光谱和荧光最大发射波长λem。
3.标准曲线的绘制（1）波长的设定：将激发波长和发射波长分别设定为上述得到的λex T和λem 值。
（2）绘制标准曲线：用1号标准系列溶液将荧光强度“调零”，然后分别测定2—6号标准系列溶液的荧光强度。
4.未知试样测定取未知试样溶液2ml置于25ml容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，测定此溶液的荧光强度。
五、实验数据及结果（1）从绘制的维生素B2的激发光谱和发射光谱曲线上，确定其最大激发波长和最大发射波长；（2）从绘制维生素B2的标准曲线，并从标准曲线上确定未知试样溶液中维生素B2的浓度；（3）计算出原始未知试样中维生素B2的浓度。
六、注意事项测定的顺序要从稀到浓，以减小测量误差。
七、思考题（1）什么是荧光激发光谱？如何绘制荧光激发光谱？（2）什么是荧光发射光谱？如何绘制荧光发射光谱？。
维生素B2含量的测定(荧光)
维生素B2含量的测定一、实验目的：学习分子荧光产生的原理；利用荧光分光光度计绘制荧光激发与发射光谱图；学会判断谱图中各种峰的类型的方法。
二、实验原理：分子吸收短波长（高能量）的光后，能量释放以光的形式出现，而发射较激发光波长更长的荧光。
三、实验内容：1.维生素B2荧光激发光谱与发射光谱的绘制；打开软件并打开Edit窗口，根据实验目的设置测定参数。
例如：绘制发射光谱，设定激发波长为377nm（或者454nm），发射波长范围400～700nm。
绘制激发光谱可设定发射波长为527nm，激发波长范围为200～500nm。
根据图形，确定激发光谱和发射光谱荧光峰的位置。
2.维生素B2系列标准溶液的配制；分别取0.1000g/L标准溶液0.2 、0.4 、0.6 、0.8 、1.0ml定量转移至25ml 容量瓶中，用去离子水稀释至25ml。
3.在选定激发波长（λ1）下测量系列标准溶液的荧光发射光谱，测定在选定波长（λ2）下的荧光强度并绘制标准工作曲线；4.维生素B2片的处理：取维生素B2片（约0.065g）一片，用玻璃棒捣碎后定量转移至250ml容量瓶中，然后取5.00ml溶液稀释至25.00ml，在选定激发波长（λ1）下测量待测溶液的荧光发射光谱，测定在选定波长下（λ2）的荧光强度并计算维生素B2的浓度（g/L）；5.根据以上数据，求出维生素B2的含量（以百分比浓度表示x％）。
四、注意事项：1.绘制标准工作曲线与待测溶液所选定的波长λ1/λ2应一致；2.能正确识别荧光光谱中的干扰峰（拉曼光等）五、思考题1. 为何荧光分析的灵敏度通常比紫外可见吸收光谱的灵敏度高2～4个数量级？2. 具有哪些结构的分子通常具有较高的荧光量子产率？。
荧光分光光度法测定维生素B2片的含量
荧光分光光度法测定维生素B2片的含量
张群英;吴培云;袁孝友
【期刊名称】《安徽中医学院学报》
【年(卷),期】2006(25)4
【摘要】目的:建立荧光分光光度法测定维生素B2 (VB2)片剂的含量.方法:激发波长为464 nm,发射波长为520 nm.结果:VB2片剂在0.2～1.0 mg/L浓度范围内,荧光强度与浓度呈良好线性关系,回收率为98.8%(n=5),RSD=2.32%.结论:该方法简便、准确,专属性强,试样量少,可用于对VB2片剂的质量控制.
【总页数】2页(P50-51)
【作者】张群英;吴培云;袁孝友
【作者单位】安徽中医学院药学院,安徽,合肥,230031;安徽中医学院药学院,安徽,合肥,230031;安徽大学化学化工学院
【正文语种】中文
【中图分类】R927.2
【相关文献】
1.光纤化学传感荧光法测定维生素B2片剂含量的研究 [J], 章立华;刘伟星;李健;艾尔肯·依布拉音
2.荧光法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量 [J], 张福娣;蔡碧琼;杨远才
3.HPLC法测定复合维生素B片维生素B1、维生素B2、烟酰胺的含量及含量均匀度 [J], 陈华龙;刘旺培
4.维生素B2片剂中维生素B2的荧光分光光度测定法 [J], 张俊清
5.荧光法测定维生素B2片剂含量及其均匀度的研究 [J], 潘雅南; 李艳萍; 梁梓超; 周启高; 钟桂冬; 罗惠玲; 张泽蓉; 朱瑞琦; 王健龙; 陈仲运
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荧光光度法测定样品中维生素B2的含量
实验六荧光光度法测定样品中维生素B2的含量一、目的与要求1．掌握用荧光光度法测定维生素B2的原理;2．加深对荧光光度法原理的理解;3．巩固荧光光度计的基本操作。
二、方法原理维生素B2又称核黄素，溶于水，在ω为0.05的乙酸溶液中是一个强荧光物质，在中性和酸性溶液中，对热稳定，在碱性溶液中较易被破坏。
维生素B2在一定波长光照射下产生荧光。
在稀溶液中，其荧光强度与浓度成正比，即：F = Kc故可采用标准曲线法测定维生素B2的含量。
三、仪器与试剂1．930型荧光光度计及其附件。
2．容量瓶：25 mL。
3．维生素B2标准贮备液（100 mg·L-1）：准确称取25mg维生素B2，用ω为0.05的乙酸溶解，转移至250 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，保存于冰箱中。
4．维生素B2标准工作液（0.5mg·L-l）：吸取上述贮备液0.50mL于100 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，随用随配。
5．含维生素B2的水样（自行制备）：取VB2片剂一片，用ω为0.05的乙酸溶液溶解（若有不溶杂质，过滤即可），稀释适当倍数后测量。
四、内容与步骤1．标准系列溶液的配制吸取维生素B2标准工作液0，0.50，1.00，2.00，3.00和4.00 mL，分别加入6个25 mL 容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀。
2．样品的准备吸取含维生素B2的水样5.00 mL于25 mL容量瓶中，用ω为0.05的乙酸溶液稀释至刻度，摇匀。
3．标准系列与样品溶液的测定按仪器的使用方法准备好仪器(仪器操作流程如下)。
待仪器稳定后，以360 nm或400 nm 为激发波长，以550 nm为荧光发射波长，用1 cm荧光皿及ω为0.05的乙酸溶液作参比（凋荧光强度为“0”），用标准系列溶液中最高浓度的溶液调节其荧光强度为“100”，分别测定其他标准系列溶液和样品溶液的荧光强度。
2荧光光度法测定维生素B2的含量
实验五荧光光度法测定维生素B2的含量一、实验目的1、学习荧光分光光度法测定维生素B2的分析原理；2、掌握荧光分光光度计的操作技术与测定维生素Bgq方法。
二、实验原理1、荧光光度法原理(1)常温下，处于基态的分子吸收一定的紫外可见光的辐射能成为激发态分子，激发态分子通过无辐射跃迁至第一激发态的最低振动能级，再以辐射跃迁的形式回到基态,发出比吸收光波长长的光而产生荧光。
在稀溶液中，荧光强度IF与物质的浓度c有以下的关系：I F = 2.3034I。
血当实验条件一定时,荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系：I F = Kc这就是荧光光谱法定量分析的理论依据。
(2)荧光分析法的特点：a、与紫外-可见分光度法比较,荧光分析法具有更高的灵敏度。
b、选择性好。
荧光法既能依据发射光谱，又能依据吸收光谱来鉴定物质。
c、所需试样量少、操作方法简便。
(3)荧光光谱激发光谱：固定测量波长(选最大发射波长)，化合物发射的荧光强度与照射光波长的关系曲线。
激发光谱曲线的最高处,处于激发态的分子最多，荧光强度最大。
发射光谱：固定激发光波长(选最大激发波长)，化合物发射的荧光强度与发射光波长关系曲线。
固定发射光波长进行激发光波长扫描，找出最大激发光波长，然后固定激发光波长进行荧光发射波长扫描，找出最大荧光发射波长。
激发光波长与发射荧光波长的选择就是本实验的关键。
(4)荧光分析仪器常用的荧光分析仪器由激发光源、单色器、液槽、检测器与显示记录器五部分构成,如下图所示：2、荧光光度法测定多维葡萄糖粉中维生素B2的含量维生素BJ又叫核黄素,VB）就是橘黄色无臭的针状结晶,其结构式为:O维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂,在中性或酸性溶液中稳定,光照易分解，对热稳定。
维生素B2溶液在430〜440 nm蓝光的照射下，发出绿色荧光, 荧光峰在535 nm。
维生素B在pH=6〜7的溶液中荧光强度最大,在pH=11的碱性溶液中荧光消失,所以可以用荧光光度法测维生素B2的含量。
荧光法测定维生素B_2含量
荧光法测定维⽣素B_2含量荧光法测定维⽣素⽒含量【摘要】维⽣素B?是⼈体必须的营养营养物质之⼀，为体内黄酶类辅基的组成部分，在⼈体内具有长⼤的⽣理意义。
本实验通过荧光法测定标准维⽣素B2的溶液的荧光强度，从⽽获取其浓度与荧光强度的线性关系，进⽽通过测定未知样的荧光强度来对维⽣素B2的含量进⾏定量分析。
【关键词】荧光法、维⽣素B2、含量1、引⾔维⽣素B2 （⼜叫核黄素，VB2）为体内黄酶类辅基的组成部分（黄酶在⽣物氧化还原中发挥递氢作⽤），为缺乏时，就影响机体的⽣物氧化，使代谢发⽣障碍。
其病变多农现为⼝、眼和外⽣殖器部位的炎症，如⼝⾓炎、唇炎、⾆炎、眼结膜炎和阴囊炎等，故维⽣素B2可⽤于上述疾檢的防治。
体内维⽣素B2的储存是很有限的，因此每天都要由饮⾷提供。
2、实验原理维⽣素B2是橘黄⾊⽆臭的针状结晶，化学名称为7, 8-⼆甲垄-10-（1' T-核糖醇歴）异咯嗪，其结构式为：O由于分⼦中有三个芳⾹环，具有平⾯刚性结构，因此它能够发射荧光。
维⽣素B? 易溶于⽔⽽不溶于⼄瞇等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定，在碱性溶液中较易被破坏。
维⽣素B?溶液在450~470nm蓝光的照射下，发出绿⾊荧光，荧光峰在535nm附近。
维⽣素B?在pH = 6~7的溶液中荧光强度最⼤，⽽且其荧光强度与维⽣素B?溶液浓度呈线性关系（在稀溶液中，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=KC）,因此可以⽤荧光光度法测维⽣索B?的含量。
维⽣索B?在碱性溶液中经光线照射会发⽣分解⽽转化为另⼀物质⼀⼀光黄素，光黄素也是⼀个能发荧光的物质，其荧光⽐维⽣素B?的荧光强得多，故测维⽣素B?的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进⾏。
3、荧光法测定维⽣素B?含量3. 1、仪器试剂仪器：荧光分光光度计（天津港东280型），⽯英⽐⾊⽫试剂：维⽣素B?,⼄酸3.2、实验步骤3.2.1、配制系列标准溶液和待测溶液（1）标准溶液配制：取维⽣素B? （5.0 mg⁄mL）标准溶液1.00汕、2.00 mL、3. 00 mL、4. 00 mL、5. 00 InL分别置于50 InL的容量瓶中，⽤1%⼄酸稀释⾄刻度，摇匀。
分子荧光法测定维生素B2的含量
【实验项目】分子荧光法定量测定维生素B2的含量【实验目的】1.掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。
2.了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。
【实验原理】荧光是光致发光。
任何荧光物质都具有激发光谱和发射光谱,发射波长总是大于激发波长。
荧光激发光谱是通过测定荧光体的发光通量随波长变化而获得的光谱，反映不同波长激发光引起荧光的相对效率。
荧光发射光谱是当荧光物质在固定的激发光源照射后所产生的分子荧光，是荧光强度对发射波长的关系曲线，表示在所发射的荧光中各种波长相对强度。
由于各种不同的荧光物质有它们各自特定的荧光发射波长，可用它来鉴定荧光物质。
有些发荧光的物质其荧光强度与物质的浓度成正比，故可用荧光分光光度法测定其含量。
维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，发出绿色荧光，荧光峰在535nm 附近。
维生素B2在pH＝6~7的溶液中荧光强度最大，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。
维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质——光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，荧光强度F与物质的浓度c有以下关系：F＝2.303ФI0εbc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc【仪器与试剂】1.仪器：荧光分光光度计（型号：F2500 HITA[H]）；1cm石英比色皿；50mL容量瓶2.试剂：维生素B2标准溶液（10.0μg/mL）（已加乙酸）【实验内容与步骤】1.系列标准溶液和待测溶液的配制取维生素B2（10.0μg/mL）标准溶液1.00mL、2.00mL、3.00mL、4.00mL、5.00mL 分别置于50mL的容量瓶中，标定，摇匀。
取2.00mL待测溶液于50mL的容量瓶中，标定，摇匀。
PPT-荧光法测定维生素B2片剂中维生素B2的含量--实验PPT
五、实验步骤
o 样品测定
（1）波长的选择：选2号标准系列溶液：测定其最大激发波长，记录 激发光谱、选定最大激发波长。记录发射光谱、选定最大发射波长。 （2）绘制工作曲线：设定最大激发波长（λex=470nm）和最大发射波 长（λem=525nm），按顺序测定H2O(空白)以及标准溶液的荧光强度 F0、F1、F2、……F5，以荧光强度为纵坐标，以浓度值为横坐标绘 制工作曲线或求出回归方程。 （3）样品测定：避光操作，取样品储备液0.5ml,置于10 ml的量瓶中 ，以水稀释至刻度。测定此溶液的荧光值，用回归方程或在工作曲线 上求得其浓度，并求算出维生素B2片剂的标示含量。
五、实验步骤
o 扫描荧光光谱 波长范围： 400～700 nm
o 标准曲线的绘制
1）10mg/L维生素B2标准储备液的配制 精密称量10.0mg的维生素B2 标准品，以0.03mol/L的HAc溶液稀释至1000ml即可。 2）标准系列溶液的配制 取此储备液0.2、0.4、0.6、0.8、1.0ml分别置 于10ml的量瓶中，用水稀释至刻度。 3）样品储备溶液的配制 取维生素B2片（5mg/片）共20片，精密称 量总重，置于研钵中，研细，从中取出适量（约相当于维生素B210mg ）精密称定。以0.03mol/L的HAc溶解，并稀释至1000ml，超声助溶 10min，将此溶液过滤，弃去初滤液，接续滤液，放置待用。
l测量荧光的 仪器主要由四 个部分组成： 激发光源、样 品池、双单色 器系统、检测 器。 l特殊点：有 两个单色器， 光源与检测器 通常成直角。
四、实验条件
o 固定激发光波长λex为420 nm（即滤 光片的波长），用1.0 mg/ml维生素B2 标准溶液绘制荧光光谱，找出最大荧 光波长λem作为测定波长。
荧光分光光度法测定药液维生素B2的含量
仪器部件
a.光源：在荧光计中常用卤钨灯作光源；荧光分度 计常采用高压汞灯或氙弧灯做光源。
b.单色器：荧光计的单色器是滤光片，只能用于定 量分析；荧光分光光度计采用两个光栅单色器，可 获得激发光谱和荧光光谱。
c.检测器：荧光计采用光电管作检测器；荧光分光 光度计采用光电倍增管作检测器。
药液维生素B2含量的测定
维生素B2（又叫核黄素，VB2）是橘黄色无臭的针状结 晶，其结构式为：
维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸 性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B2溶液在430～440 nm蓝光的照射下，发出绿色 荧光，其峰值波长为525 nm。VB2的荧光在pH=6～7时最强， 在pH=11时消失。维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生 分解而转化为光黄素，光黄素的荧光比核黄素的荧光强的多，
c. 所需试样量少、操作方法简便。
激发光谱
荧光光谱
激发光谱：固定测量波长(选最大发射波长)，化合物发射的荧光强度与
照射光波长的关系曲线。激发光谱曲线的最高处，处于激发态的分子最多，
荧光强度最大。
发射光谱
发射光谱：固定激发光波长(选最大激发波长), 化合物发射的荧光强度与 发射光波长关系曲线。
固定发射光波长进行激发光波长扫描，找出最大激发光波长，然后固定 激发光波长进行荧光发射波长扫描，找出最大荧光发射波长。激发光波长 和发射荧光波长的选择是本实验的关键。
在稀溶液中，荧光强度IF与物质的浓度c有以下的关系：
I F 2.303I0bc
当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系：
I F Kc 这是荧光光谱法定量分析的理论依据。
荧光分析法的特点
a. 与紫外-可见分光度法比较，荧光分析法具有更 高的灵敏度。
实验二 荧光法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量
Cx ( ug/ml) 25 ( ml ) 500( ml ) V ( ml )
六、注意事项
操作应该在避光的条件下进行。
样品池轻拿轻放，垂直放入，小心使用。
不要关闭电脑上的荧光仪联机软件。
七、结果记录
根据测定的样品相对荧光强度ΔF＝F－F0，从标准曲线上 查出样品溶液对应的维生素B2的浓度Cx，并计算维生素B2 片中B2的含量，计算公式如下：
维生素 B 2的 含 量 ( ug )
注：F0为空白溶液的荧光强度。
三、仪器及试剂
棱光F96荧光分光光度计，石英样品池（四面透 光），25 ml比色管，一次性吸管，500 ml容量瓶， 漏斗，滤纸等。
维生素B2标准溶液：10 ug/ml，贮存于棕色试剂 瓶中；1% 醋酸溶液；样品维生素B2片。
四、实验条件
固定激发= KC
采用标准曲线法进行定量：
配制一系列浓度不同的标准溶液，分别测出它们 的荧光强度，以横坐标表示浓度C，纵坐标为相 对荧光强度ΔF（ΔF=F-F0），绘制出标准曲线。 若要测定未知溶液的浓度，则在相同条件下测出 未知溶液的相对荧光强度ΔF，在标准曲线上就可 以直接查出对应的未知液浓度Cx。
实验二 荧光法测定医用维生素B2 片剂中维生素B2的含量
中山大学公共卫生学院 肖琴
一、实验目的
了解荧光分析法的基本原理； 了解荧光分光光度计的使用。
二、实验原理
维生素B2又称核黄素。
在紫外光照射下，维生素B2就会发出绿色的荧光。 当荧光物质溶液的浓度较低时( abc≤0.05 )，若入 射光的强度不变，则物质发出的荧光强度F与其 浓度C成正比：
荧光法测维生素b2的含量
华南师范大学实验报告学生姓名：杨秀琼 学号： 20082401129 专业： 化 学 年级班级：08化二实验类型：综 合 实验时间：2010/3/25一、实验目的1、学习荧光分析法的基本原理，了解荧光光度计的构造，掌握其基本操作。
2、掌握标准曲线法测定分析维生素B2的含量 二、实验原理1、维生素B2（又叫核黄素，VB2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
2、某些物质经紫外光或波长较短的可见光照射后，会发射出波长更长的荧光。
荧光光谱能反映物质的特性。
对同一物质而言，在稀溶液 (即 A = abc <0.05 ) 中，荧光强度 F 与该物质的浓度 c 有以下关系3CH 3CNNR NNHOO[O]CH 3C(35.1)式中φf 为荧光过程的量子效率，a 为荧光分子的吸光系数，b 为试样的吸收光程，I0 为入射光的强度。
当I0 及 b 不变时，上式为 F=Kc (35.2)式中K 为常数。
荧光法具有灵敏度高(超过分光光度法2~3 个数量级)，取样少，时间快等特点。
3、在430~440 nm 蓝光照射下，维生素B2 就会发生绿色荧光，荧光峰值波长为535 nm。
在pH = 6~7 的溶液中其荧光最强，在pH = 11 时其荧光消失。
三、仪器与试剂1.仪器930 型荧光光度计；容量瓶 50 毫升6个；吸量管 5毫升l支；胶头吸管小烧杯2.试剂维生素B2标准溶液，10.0微克/毫升：称取10.0毫克维生素B2，先溶解于少量的1%醋酸中，然后在l升容量瓶中，用1%醋酸稀释至刻度，摇匀。
溶液应保存在棕色瓶中，置于阴凉处。
四、实验步骤1.系列标准溶液的制备取五个50毫升容量瓶，分别用吸量管准确加入 1.00，2.00，3.00，4.00及5.00毫升维生素B2标准溶液，用蒸馏水水稀释至刻度，摇匀，待测。
2.待测样品溶液的制备用吸量管准确吸取2.0ml未知试样溶液置于50毫升容量瓶中，用蒸馏水稀释至刻度，摇匀，待测。
荧光法测定药品中维生素B2含量的综合型实验设计
荧光法测定药品中维生素B2含量的综合型实验设计
程春英;尹学博
【期刊名称】《实验室研究与探索》
【年(卷),期】2014(033)012
【摘要】将本科实验转型为研究性、综合型实验对于提高学生的实验技能、发散思维以及发现问题和解决问题的能力发挥着重要的作用.讨论了将荧光分光光度法测维生素B2的含量实验调整为研究性、综合型实验的内容和过程,包括学生的课前预习以了解维生素B2结构、性质等;通过考察pH对荧光性质的影响确定最优的检测pH条件;与紫外分光光度法结合,考察光照产物吸收光谱和荧光光谱的变化,提出维生素B2光分解的初步机理;分析了实际药品中维生素B2测定中可能存在的干扰.以此为基础建立了药品中维生素B2测定的荧光光谱法.
【总页数】4页(P159-162)
【作者】程春英;尹学博
【作者单位】南开大学化学学院化学实验教学中心和分析科学研究中心,天津300071;南开大学化学学院化学实验教学中心和分析科学研究中心,天津300071【正文语种】中文
【中图分类】O6-3
【相关文献】
1.荧光法测定荠菜中维生素B2的含量 [J], 刘程程;赵荣飞;廖莉玲
2.光纤化学传感荧光法测定维生素B2片剂含量的研究 [J], 章立华;刘伟星;李健;艾
尔肯·依布拉音
3.荧光法测定医用维生素B2片剂中维生素B2的含量 [J], 张福娣;蔡碧琼;杨远才
4.荧光法测定蘑菇中维生素B2的含量 [J], 刘艳红;努娜;马晓光
5.荧光法测定维生素B2片剂含量及其均匀度的研究 [J], 潘雅南; 李艳萍; 梁梓超; 周启高; 钟桂冬; 罗惠玲; 张泽蓉; 朱瑞琦; 王健龙; 陈仲运
因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
分子荧光法定量测定维生素B2的含量
分子荧光法定量测定维生素B2的含量一、实验题目：分子荧光法定量测定维生素B2的含量二、实验目的：1．掌握标准曲线法定量分析维生素B2的基本原理。
2．了解荧光分光光度计的基本原理、结构及性能，掌握其基本操作。
三、实验原理：维生素B2（又叫核黄素，V B2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：由于分子中有三个芳香环，具有平面刚性结构，因此它能够发射荧光。
维生素B2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
维生素B2溶液在430~440nm蓝光的照射下，而且其荧光强度与维生素B2溶液浓度呈线性关系，因此可以用荧光光谱法测维生素B2的含量。
维生素B2在碱性溶液中经光线照射会发生分解而转化为另一物质—光黄素，光黄素也是一个能发荧光的物质，其荧光比维生素B2的荧光强得多，故测维生素B2的荧光时溶液要控制在酸性范围内，且在避光条件下进行。
在稀溶液中，荧光强度F在物质的浓度c有以下关系：F=2.303φIoεbc当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度呈线性关系：F=Kc这是荧光光谱法定量分析的依据。
四、仪器与试剂：1．仪器荧光分光光度计；石英皿：1cm；容量瓶：50mL。
2．试剂维生素B2标准溶液(10.0μg/mL)：准确称取10.0000mg维生素B2置于100mL烧杯中，加1%乙酸溶液使其溶解，定量转移入1000mL容量瓶中，并用1%乙酸溶液稀释至刻度，摇匀，将溶液保存在冷暗处。
1%乙酸溶液。
五、实验内容与步骤：1．系列标准溶液的制备取维生素B2标准溶液(10.0μg/mL)0.50mL、1.00mL、1.50mL、2.00mL、2.50mL 分别置于50mL的容量瓶中，各加入蒸馏水稀释至刻度，摇匀。
待测。
2．待测样品溶液的制备取维生素B2样品液2.0mL于25mL容量瓶，加水稀至刻度，摇匀，待测。
3．激发光谱和荧光发射光谱的绘制分别设置λem=522.0nm为发射波长，在200~500nm范围内扫描，记录荧光发射强度和激发波长的关系曲线，便得到激发光谱。
荧光分析法测定复合维生素B片中B2的含量
荧光分析法测定复合维⽣素B⽚中B2的含量+2014年11⽉7⽇，温度 25.℃，相对湿度实验⼆⼗⼀荧光分析法测定复合维⽣素B⽚中B2的含量⼀、实验⽬的1、熟悉荧光物质的结构特征。
2、掌握掌握荧光分光光度计的定量分析⽅法。
3、了解⽚剂中标⽰量百分含量的计算。
⼆、实验原理1、维⽣素B2⽔溶液能发出黄绿⾊荧光。
2、荧光分光光度法是⼀种灵敏度⾼于紫外-可见分光光度发的常⽤的定量分析⽅法。
三、实验讨论1、荧光分光光度计与紫外分光光度计相⽐其主要部件上有何区别？答：区别（1）荧光分光光度计有两个单⾊器，⽽紫外只有⼀个单⾊器。
（2）荧光分光光度计的⽐⾊⽫是四壁均为光学⾯，⽽紫外仅两⾯为光学⾯。
（3）荧光分光光度计的光源和检测器是成直⾓分布的，⽽紫外是成⼀条直线的。
（4）荧光分光光度计以氘灯作为光源，⽽紫外以氢灯或氘灯作为紫外区光源。
2、能产⽣紫外可见较强吸收的物质，是否能发⽣较强的荧光？答：不⼀定。
同⼀波长处能产⽣光吸收的物质并⾮都是能发光的物质。
3、为了获得线性良好的⼯作曲线，可采取哪些措施？答：（1）样品的浓度要⾜够低。
（2）确保⽐⾊⽫上⽆杂质影响。
（3）配置好的标准溶液避免强光照射。
4、在荧光定量分析中，如何选择激发波长和发射波长？答： 1.查寻资料，有个基本范围2.固定发射波长，测定激发光谱；再固定激发波长，测定发射光谱；通常选择在最⼤激发波长和最⼤发射波长进⾏物质测定四、实验步骤配制维⽣素B2系列标准溶液量取10⽚维⽣素B2，研磨后称量出1/10总的维⽣素B2的质量溶解样品过滤滤去前10ml滤液取其后滤液量取2ml维⽣素B2滤液于50ml⽐⾊管中稀释到50ml 选择371nm激发波长和525nm发射波长以蒸馏⽔调零从低到⾼浓度测量绘制⼯作曲线得出结论五、实验记录。
编号 1 2 3 4 5 样品溶液V VitB2(ml) 1.0 2.0 3.0 4.0 5.0 2.0V总（ml) 50 50 50 50 50 50C V itB2(ug/ml) 0.2 0.4 0.6 0.8 1.0 0.68 荧光强度 5.6 10.8 15.3 20.5 24.5 17.3六、结果由⽬标函数y = 23.75x + 1.09知，当y=17.3时，CV itB2=0.68复合维⽣素B⽚中CV itB2标⽰量百分含量的计算标⽰量%=0.68×0.06320×2500/（0.06620×1.5×1000）×100%=七、讨论1.实验中要精确记录称量物品重量，并且使实验在室温下进⾏，不可受阳光照射；2.在测量荧光强度时最好在同⼀只⽐⾊⽫下进⾏操作，减⼩系统误差；3.本实验选⽤两只⽐⾊⽫进⾏试验，有⼀定误差，并且在配置好样品溶液后没有及时测量，造成⼀定试验误差。
荧光光度分析法测定维生素B2的含量
荧光光度分析法测定维生素B 2的含量引言荧光分光光度法简介有些物质，当用紫外光照射时，它吸收某种波长之后还会发射出各种颜色和强度不同的光；而当紫外光停止照射后，这种光线也随之消失，这种光线称为荧光。
荧光的波长比吸收的紫外光波长要长。
由于物质分子结构不同，所吸收的紫外光波长和发射的荧光波长也有所不同。
利用物质的这个特性，可以对物质进行定性分析。
同一种分子结构的物质，用同一种波长的紫外光照射，可发射相同波长的荧光；若该物质的浓度不同，所发射的荧光强度也不同，利用这个性质可以对物质进行定量分析。
这种定量方法称为荧光分析法，简称荧光法。
测量荧光的仪器有滤光片荧光计，滤光片—单色器荧光计和荧光分光光度计。
荧光法的选择性好，灵敏度比紫外-可见分光光度法高2~3数量级，检出限低，可以达到10~12g ／m1，线性范围宽。
现在主要应用的是荧光分光光度计。
【实验目的】1. 学习荧光光度法测定维生素B 2的含量的基本原理和方法。
2. 熟悉荧光光度计的结构及使用方法。
【实验原理】在经过紫外光或波长较短的可见光照射后，一些物质会发射出比入射光波长更长的荧光。
在稀溶液中，荧光强度IF 与物质的浓度c 有以下关系：bc I 303.2I 0F εφ=当实验条件一定时，荧光强度与荧光物质的浓度成线性关系：Kc I F =这种以测量荧光的强度和波长为基础的分析方法叫做荧光光度分析法。
荧光强度与激发光强度成正比，提高激发光强度，可成倍提高荧光强度。
同时，提高仪器灵敏度，可提高荧光光度法的灵敏度。
而吸收光度法，无论是提高激发光强度还是提高仪器灵敏度，入射光和出射光同时增大，其灵敏度不变。
因此，荧光光度法比吸收光度法灵敏度高。
VB2(即核黄素)在430～440nm蓝光照射下，发出绿色荧光，其峰值波长为535nm。
VB2的荧光强度在pH6～7时，在pH=11时基本消失。
维生素B2（又叫核黄素，VB2）是橘黄色无臭的针状结晶，其结构式为：VB2易溶于水而不溶于乙醚等有机溶剂，在中性或酸性溶液中稳定，光照易分解，对热稳定。
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Cx ( ug/ml) 25 ( ml ) 500( ml ) V ( ml )
实验二 荧光法测定医用维生素B2 片剂中维生素B2的含量
中山大学公共卫生学院 肖琴
一、实验目的
了解荧光分析法的基本原理； 了解荧光分光光度计的使用。
二、实验原理
维生素B2又称核黄素。
在紫外光照射下，维生素B2就会发出绿色的荧光。 当荧光物质溶液的浓度较低时( abc≤0.05 )，若入 射光的强度不变，则物质发出的荧光强度F与其 浓度C成正比：
六、注意事项
操作应该在避光的条件下进行。
样品池轻拿轻放，垂直放入，小心使用。
不要关闭电脑上的荧光仪联机软件。
七、结果记录
根据测定的样品相对荧光强度ΔF＝F－F0，从标准曲线上 查出样品溶液对应的维生素B2的浓度Cx，并计算维生素B2 片中B2的含量，计算公式如下：
维生素 B 2的 含 量 ( ug )
注：F0为空白溶液的荧光强度。
三、仪器及试剂
棱光F96荧光分光光度计，石英样品池（四面透 光），25 ml比色管，一次性吸管，500 ml容量瓶， 漏斗，滤纸等。
维生素B2标准溶液：10 ug/ml，贮存于棕色试剂 瓶中；1% 醋酸溶液；样品维生素B2片。
四、实验条件
固定激发光波长λex为420 nm（即滤光片的波长），
用1.0 mg/ml维生素B2标准溶液绘制荧光光谱，找 出最大荧光波长λem作为测定波长。
五、实验步骤
扫描荧光光谱 波长范围： 400～700 nm 标准曲线的绘制 样品测定
维B2片 溶于少量 1% 醋酸 转入500 ml容量瓶 蒸馏水洗涤 合并 定容摇匀
过滤
取一定量(体积为V)于25 ml比色管，定容摇匀源自F = KC
采用标准曲线法进行定量：
配制一系列浓度不同的标准溶液，分别测出它们 的荧光强度，以横坐标表示浓度C，纵坐标为相 对荧光强度ΔF（ΔF=F-F0），绘制出标准曲线。 若要测定未知溶液的浓度，则在相同条件下测出 未知溶液的相对荧光强度ΔF，在标准曲线上就可 以直接查出对应的未知液浓度Cx。