实验一 苯酚降解菌的分离及降解性测定
苯酚降解细菌实验报告
苯酚降解细菌实验报告引言苯酚是一种有机溶剂和消毒剂，在工业生产和日常生活中广泛使用。
然而，由于其具有较强的毒性和对环境的潜在危害，苯酚的降解成为了一个重要的研究领域。
本实验旨在从自然环境中分离得到能够降解苯酚的细菌，并对其降解效果进行评估。
实验方法物质及设备- 实验材料：含有苯酚的培养基、蒸馏水、苯酚溶液- 实验仪器：培养皿、移液管、恒温振荡器、烧杯、离心机实验步骤1. 从自然环境中采集土壤、水样品。
2. 将土壤、水样品分别加入含有苯酚的培养基中。
3. 分别在不同温度下（比如25、37）进行恒温振荡培养，培养时间根据实验需求确定。
4. 取样品进行稀释，并分别接种在含有苯酚的琼脂培养基上。
5. 利用平板计数法，计算出细菌的菌落数目。
6. 采用高效液相色谱法检测苯酚的含量。
7. 进一步筛选表现出较强降解能力的细菌，进行进一步鉴定。
实验结果细菌菌落数目在实验过程中，我们成功分离到了一株对苯酚具有较强降解能力的细菌。
经过平板计数法的计算，其细菌菌落数目为1.2x10^6 CFU/ml。
苯酚的降解效果我们利用高效液相色谱法对苯酚的降解情况进行了检测。
实验结果表明，在细菌作用下，苯酚的降解速率较快。
在48小时内，苯酚的浓度从初始浓度的100 mg/L 降至5 mg/L，降解率达到了95%以上。
数据分析与讨论细菌的降解机制细菌通过代谢苯酚的酶系将苯酚降解为无机化合物，并利用其作为碳源和能源。
该细菌可能通过以下途径降解苯酚：1. 将苯酚通过羟化作用转化为苯酚羟化物；2. 苯酚羟化物经进一步代谢，生成苯甲酸、邻苯酚等化合物；3. 经过一系列代谢反应，最终生成无机化合物，如水和二氧化碳。
细菌的应用前景本实验分离得到的对苯酚具有降解能力的细菌，拥有较高的降解效率和广泛的适应性。
这些细菌可应用于苯酚的处理和环境修复，对于解决苯酚污染问题具有良好的应用前景。
结论通过本次实验，我们成功地分离出具有苯酚降解能力的细菌，并对其降解效果进行了评估。
苯酚降解菌的分离和鉴定
目录目录 (1)摘要 (2)Abstract (3)第一章绪论 (4)1.1 苯酚降解菌的定义及分类 (4)1.2苯酚降解菌的性质及其用途 (4)1.3苯酚降解的研究现状 (5)1.4苯酚降解菌生产菌的筛选 (6)1.5本课题的研究思路及意义 (6)第二章材料与方法 (7)2.1试验材料 (7)2.2试验方法 (8)2.2.2苯酚降解菌的驯化 (8)2.2.3菌种在不同条件下的降解能力 (9)2.2.4最优菌种的鉴定 (9)3.1苯酚降解菌筛选结果及性状初步研究 (11)3.11筛选结果 (11)3.1.1.1初步筛选的结果 (11)3.1.1.2 菌种驯化中的结果 (11)3.1.2 H-1菌株的性状初步结果 (13)3.2 H-1菌株分类鉴定结果 (13)第四章结论 (14)4.1菌种的筛选结果 (14)4.2菌种的鉴定 (14)参考文献 (15)致谢.......................................................................................... 错误!未定义书签。
一株苯酚降解菌的分离和鉴定摘要为了寻找能高效降解苯酚的微生物, 从土壤中筛选得到了一株苯酚降解菌,通过逐渐增加苯酚的浓度,然后驯化出一株高效降解苯酚的细菌H-1. 当在30 ℃培养48h 时其降解率高达92.11%. 经理化特征测定及外观鉴定,将其初步鉴定为假单胞菌属.再经过对比实验测各种因素(碳源、温度、pH、通气) 对该菌生长及降解苯酚能力的影响,得知该菌能以苯酚作为唯一碳源,最适生长温度为32 ℃,最适pH 为7.0. 该菌为好氧菌,在空气充足的条件下可提高降解能力.该菌菌落较小，菌落呈微黄色。
菌体呈直或微弯的杆装，没有菌柄也没有鞘。
不产芽孢。
对该菌做生化鉴定，可知该菌革兰氏染色为阴性，可水解苯酚，生长温度为32℃，生长pH为pH 6.5～7.5。
苯酚降解菌TX1的分离鉴定及其降解特性
Ｋｅ ｒ ｓ Ｐｈ ｎ Ｉ Ｔ ／ ｈ ｓ ｏ ｏ Ｃａ ｅ ｈ １ ２ ｄ ｏ ｙ ｅ ａ ｅ Ｇｒ ｗｔ ｉ ｅ ｉｓ ｙ ｗｏ ｄ ： ｅ ｏ ｒ ｏ ｐ ｒ ｎ ｃ ｔ ｃ ｏＩ ． － ｉ ｘ ｇ ｎ ｓ ｏ ｈ ｋｎ ｔ ｃ
Ｉｄ ｃｂｅ ｉｔａ ｅｌ ｌ ｅ ｚ ｍ ｅ Ｗ ｉ ｈｅｄａａ ｏｂ ａｎ ｄ ｉ ａ ｃ ｕｔ ｆ ｈ ｔａｎ ＴＸ１ ｔ ｗｔ ｉｅ ｉｓ ｎ ｕ ｉｌ ｎ ｒ ｃ ｌ ａｒ ｎ ｙ ． ｕ ｔ ｔ ｔ ｔ ｉｅ ｎ ｂ ｔ ｈ ｃ ｌ ｒ ｏ ｅ ｓ ｒ ｉ ｈ ｕｅ ｔ ，ｉ ｇ ｏ ｈ ｋｎ ｔ ｓ ｒ ｃ
ｇｅ ｕ ｒｃ ｏ ｐ ｒ ｎ ｓ ｎ ｍ ｅ Ｘ１ ｎ ｓＴｉｈ ｓ ｏ ｏ ｐ． ａ ｄＴ ．Ｔｈ ｒ ｌ ｎ ｒ ｔ ｄ ｎｔ ｅｍｅ ａ ｏｉ ａ ｈ ｙｏ ｈ ｏ ｂ ｕ ｓｓｒ ｎ ｅｐ ｅｉ ａ ｙｓｕ ｙｏ ｈ ｔ ｂ ｌ ｐ ｔｗａ ｆｐ ｅｎ ｌ ｏ ｌｈｉ ｔａｉ ｍｉ ｃ ａ ｔ
Ｓａｇ ａ ｎｉ ｓ ｅｔ Ｓｉ］ ｓ ｈｎ ｈｉ Ｅ ｖ ｏｍ ｎａ ｃ ｒｅ ｒＴ ｌ ｅｃ
苯 酚降解 菌 Ｔ 的分 离鉴 定及其 降解特性 Ｘ１
邱凌峰
苯酚降解菌 Ｔ 的分离鉴定及其降解特性 Ｘ １
ｓ ｌｔｏ ，Ｉｅ ｔｆ ａ ｉｎ ｎ Ｃｈ ｒｃ ｅ ｉａ ｉｎ ｆ ｈ ｎ —Ｄｅ ｒｄｎ ｏａ ｉｎ ｄ ｎ ｉｉ ｔｏ ａ ｄ ｃ ａａ ｔｒｚ ｔＯ Ｏ Ｐ ｅ ＯＩ ｇ ａ ｉｇ
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氧 酶 （ ２ ０） 位 途 径 开 环 ， 成 丙 酮 酸 和 乙醛 。 后 Ｃ ３ 间 形 最
苯酚降解菌的分离鉴定及降解特性的初步研究
菌 ，研究 了其 生长 条件 及降 解特 性 ，可为 工业 化生 物处理 含 苯酚类 污染 物提 供理 论依据 。
１ 试验 材 料 及 方 法
１ １ 材 料 ．
ｉ ）菌株 来源 取 荆州 市 沙隆达 农药 厂 排污 口处 的污泥 作 为试验 的原始 菌 液 。 ２ ）培 养 基 ① 选 择 培 养 基 （ 机 盐 培 养 基 ） ：ＮＨ ＮＯ．１０ ，Ｃ Ｃ ０ ｉ ， Ｋ ＨＰ ０ ５ ， 无 ］ ． ． ｇ ａ １ ．ｇ 。 Ｏ ． ｇ
按 上述方法 培养 驯化 ，苯 酚浓 度增 加 至 １ ５ ． ｇ Ｌ。 ． 、２ ０ ／
将含 ２ ５／ ．Ｏ ／： ｍｌ ０ 含 ． ｇ Ｉ苯酚的新 鲜选 择培养基 中 ，重复上 述培养
驯化 ，至苯酚浓度达 到 ２ Ｏ ／ ．ｇ Ｉ ，完成 １ 个驯 化周期 。共进行 ３个驯化周期 ，得到耐 高浓度苯酚的 菌种 。
苯 酚 降解 菌 的分 离鉴 定 及 降解 特 性 的初 步研 究
马 立 安 ，石 磊 （ 长江大学生命科学学院， 北 荆州 ４４２） 湖 ３０ ３
［ 要 ］ 为 了 筛选 高 效 降解 苯 酚 的微 生 物 ， 为 工 业 化 生 物 处 理 受 苯 酚 类 污 染 的 工 业 废 水及 污 染 物提 供理 论 摘
维普资讯
长 江 大学 学 报 （ 自科 版 ）理 工 卷 ２０ 年 １ 月 第 ４ 第 ４ ０７ ２ 卷 期 Ｊ ｕ ｎ ｌ ｆ ａ ｇｚ ｎｖｒｉ Ｎ ｔ ｃ Ｅ ｉ ｃ ｏ ｒ ａ ｏ ｎ ｔ Ｕ ｉｅｓ ｙ（ ａ Ｓ ｉ ｄｔ ｉ＆ Ｅ ｇ Ｖ Ｄ ｃ ２ ０ ．Ｖ １ ・ Ｙ ｅ ｔ ）Ｓ ｎ ｅ． ０ ７ ｏ． Ｎｏ ４ ４
１ ２ 方 法 ．
１ ）选择增 茵与驯化
某种苯酚降解细菌的分离,纯化,鉴定
某种苯酚降解细菌的分离、纯化、鉴定一、引言近年来，环境污染问题日益突出，其中有机污染物的排放成为了一个备受关注的话题。
苯酚作为一种有机化合物，其在工业生产和生活中被广泛使用，但是其排放也给环境造成了不小的压力。
寻找一种能够高效降解苯酚的细菌成为了当下研究的热点之一。
本文将围绕某种苯酚降解细菌的分离、纯化、鉴定展开讨论。
二、苯酚降解细菌的分离1. 采样地点选择在开始分离苯酚降解细菌之前，首先需要明确采样地点的选择。
一般来说，苯酚的排放源比较集中，因此我们可以选择一些工业废水排放口、化工厂周围土壤和水体等地点进行采样。
2. 细菌分离方法经过采样后，我们可以利用稀释涂布法将采样的土壤或水样涂布在琼脂平板上，然后在适宜的温度和培养基条件下进行培养。
通过分离光圈和纯化培养，我们可以获得一系列有苯酚降解能力的细菌菌落。
三、苯酚降解细菌的纯化1. 选优菌落的鉴定在得到一系列有苯酚降解能力的细菌菌落之后，我们需要通过形态学、生理生化特性等手段对细菌进行初步鉴定，筛选出表现最佳的细菌进行后续的纯化培养。
2. 纯化培养方法对选优细菌进行纯化培养可以采用多次转接法，即将单一细菌菌落进行二次以上的转接，以获得单一细菌培养物。
四、苯酚降解细菌的鉴定1. 生化鉴定利用生化试剂对细菌进行生化反应鉴定，例如利用氧化酶试剂对细菌进行氧化酶试验，利用酚红素试剂对细菌进行酚氧化酶试验等，从而初步判断细菌的代谢特性。
2. 分子生物学鉴定通过16S rRNA基因测序鉴定细菌的亲缘关系，确定其属种级别的分类位置。
五、个人观点和总结苯酚降解细菌的分离、纯化、鉴定是一项具有挑战性的工作，需要从多个角度进行综合分析和判断。
通过本文的探讨，我们不仅仅了解了苯酚降解细菌的基本分离和纯化方法，还深入了解了细菌鉴定和分类的相关技术。
希望通过这些工作，能够为环境污染治理和资源开发提供一些有益的参考和借鉴。
苯酚是一种常见的工业化合物，在工业生产和生活中被广泛使用。
苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究
上海师范大学硕士学位论文苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究姓名：何小丽申请学位级别：硕士专业：微生物学指导教师：肖明20090501上海师范大学硕士学位论文摘要论文题目：苯酚降解菌的筛选、鉴定及其降解特性的研究学校专业：微生物学学位申请人：何小丽指导教师：肖明摘要酚类化合物为细胞原浆毒物，属高毒性物质。
这类物质来源广泛，通常污染水源，毒死鱼虾，危害农作物，并严重威胁人类的健康。
含酚有机物的毒性还在于其只能被少数的微生物分解。
从自然界中筛选分离出能够降解特定污染物的高效菌种，有针对性的投加到已有的污水处理系统中的生物强化技术，能够快速提供大量具有特殊作用的微生物，在有毒有害污染物治理中显示出巨大的潜力。
1、本研究从胜利油田河口采油厂的飞雁滩油田土壤样品中分离得到10株能够利用并降解苯酚的菌株P1-P4、P7、P9-P13。
该10株苯酚降解菌能够在以苯酚为唯一碳源和能源的培养基上生长，经16S rDNA分子鉴定和生理生化检测，该10株降酚菌分别被鉴定到属或种。
其中降酚菌株P1、P3和P4这3株菌株分别属于劳尔氏菌属(Ralstonia)、贪噬菌属（Variovorax）和节杆菌属（Arthrobacter）里的种。
其它7株降酚菌株P2、P7、P9-P13都属于假单胞菌属（Pseudomonas）里的种。
这4个属里的细菌在国内外都已被报道有降解苯酚的特性，其中有关假单胞菌降解环境有机物的报道较多。
2、培养液中的苯酚含量通过4-氨基安替比啉分光光度法测定，通过苯酚降解效率的比较，菌株P2降解苯酚的能力较其它9株菌株要强。
于是将菌株P2作为本研究中进一步研究的对象，研究了不同的环境条件下该菌株降解苯酚和菌体生长的情况。
3、通过苯酚羟化酶特异性引物的设计，从菌株P2扩增出苯酚羟化酶大亚基基因，该基因片段编码对苯酚有催化活性的多肽，催化苯酚代谢的第一步反应；表明菌株P2能降解苯酚是由于细胞具有降解苯酚的遗传基础。
苯酚降解菌MW-1的分离及其降解特性研究
苯酚降解菌ＭＷ－1的分离及其降解特性研究摘要：用以苯酚为唯一碳源和能源的无机盐驯化液对沈阳某煤气厂土壤进行驯化培养。
从中分离筛选到1株苯酚降解菌。
编号为MW-1。
试菌株最高可耐受1600苯酚，其降解性能研究表明：该菌具有较强的苯酚降解能力。
在30。
C，pH5.5—7.5。
装液量为60mL，接种量20％，摇床振荡速度120 r／min的每件下，振荡培养6 h后可使400=e,／L的苯酚降解率逮80％以上。
虽然葡萄糖对该菌体的生长及降解苯酚均有一定的抑制作用。
但有葡萄糖(600 me／L)存在的情况下，该菌对苯酚的降解率仍接近60％。
这对处理含有其它碳源的含酚度水具有一定的意义。
关键词：苯酚；苯酚降解菌；特性试验文献标识码：A苯酚是焦化、造纸、石油、塑料、纺织、制药等工业废水中的主要污染物，也是生物降解多种人工合成化合物如杀虫剂时产生的一种中间代谢物。
大量酚类物质及其衍生物在土壤和水体中的排放和积累导致了生态环境的日趋恶化，许多国家已将其列入环境优先控制污染物的黑名单中。
近年来，国内外在苯酚生物降解方面进行了广泛的研究，已鉴定具有降解苯酚能力的微生物有细菌、酵母菌等。
利用培养优势菌群的微生物法降解酚类化合物因其投资少、处理效率高、运行成本低、无二次污染等优点而得到越来越广泛的应用。
本试验从沈阳某废弃煤气厂土壤中分离筛选到一株高效苯酚降解菌，并对其降解特性进行了研究，旨在找到对酚类化合物具有高效降解能力的优势菌株，为今后的进一步研究及含酚废水的生物处理奠定基础。
1材料与方法1.1菌种的来源沈阳某废弃煤气厂土壤1.2培养基驯化培养液：为无机盐溶液中添加一定浓度的苯酚配制而成。
各种无机盐的含量为(g／L)：NaO0.2；NH4.N03 1.0。
分离及保存培养基：为含200 m#L儿苯酚的牛肉膏蛋白胨固体培养基。
1.3苯酚降解菌的驯化、筛选与分离取一定量的菌源土壤加入到苯酚浓度为300mv／L的驯化培养液中,室温通气富集培养，定时取样测定苯酚浓度，至苯酚完全降解后，再加入新的以苯酚为唯一碳源的驯化培养液进行驯化培养。
一株苯酚降解菌的筛选及其降解特性的初步研究
２１ ０ ０年 ２月
生 物 学 杂 志
Ｊ ＲＮＡＬ ＯＦ Ｂ ＯＬ ＯＵ Ｉ ＯＧＹ
Ｖｏ＿ ７ Ｎｏ ｌ２ ．１ Ｆｅ ｂ，２ ０ ０１
ｄ ｉ１ ． ９ ９ ｊ ｉ ｎ １ ０ ｏ：０ ３ ６ ／．ｓ ． ０ ８—９ ３ ． ０ ０ ０ ． ３ ｓ ６ ２ ２ １ ． １０ １
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ｃ “ 严 重抑 制 该 菌株 对 苯酚 的 降解 ， 碱 性 环境 有 利 于 其 对 苯 酚 的 降 解 。 ｕ 但
关键 词 ： 酚 ； 苯 生物 降解 ；类 产碱 假 单 胞 菌 ； 酚 羟 化 酶 ； 苯 系统发 育
中图分类 号 ：９ ３ １ Ｑ ３— ３
文献标 识码 ： Ａ
文章编号 ：０ ８— ６２ ２ １ ） １ ０ ３ — ４ １０ ９ ３ （０ ０ ０ — ０ １ ０
ｇ ｎ ｓ Ｐｓｕｄ ｍｏ ａ ｓ ｕ ｏ ｃ ｌ ｎ ｓ Ｔｈ ｏ ｇ ｓｇ ｆｓ ｃｆｃ ＰＣＲ ｒｍ ｅｓ ｔ ｈｅ ｏ ｙ ｒ ｘ ｌｓ ｅ ｕ ｅ ｏ ｎ ｓｐ ｅ ｄ ａｌａｉ ｇｅ ｅ． ｒ ｕ ｈ ｄｅ ｉｎ ｏ ｐｅ ｉ ｉ ｐ ｉ ｒ ｏｔｐ ｎ ｌｈ ｄ ｏ ｙａ ｅ，ｔ ｅ ｅ ｅ ｃ ｄｎｇ ｔ ｅ ｌｒ ｅ ｔ ｈｅ ｇ ｎ ｎ ｏ ｉ ｈ ａｇ ｓ
高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究
高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究引言石油、化工、煤气、焦化及酚类等生产厂排放的废水当中含有大量的苯酚[1]。
未经净化的含酚废水可导致水源被污染，致使鱼类死亡，危害农作物，最终威胁人类的健康。
许多国家将苯酚列为重要的污染物之一。
目前，国内外处理含酚废水的方法主要有物理法、化学法、微生物法及各种结合法[2]。
其中微生物法主要利用微生物的代谢活动去除废水中的有毒物，处理方法无2次污染且安全、经济。
目前，已鉴定具有降解苯酚能力的微生物主要有假单胞菌（Pseudonomonas.sp）[3]、芽孢杆菌（Bacillus.sp）[4]、酵母菌（Yeast trichosporon）[5]、根瘤菌（Rhizobia）[6]、醋酸钙不动杆菌（A. calcoaceticus）[7]等，降酚菌株多存在于酚类污染物企业排放的废水、污泥和被废水污染的土壤中[8]。
本课题拟从被苯酚废水污染的污泥中进行菌株筛选，得到耐酚菌后在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养上筛选降酚菌株，进一步测定苯酚降解的影响因素。
对特定菌株降解含酚废水的应用价值进行研究。
1 实验材料和方法1.1 菌株来源采集原黑龙江省佳木斯东郊黑龙农药化工集团废弃排污口处污泥进行菌株筛选。
1.2 培养基基础培养基：NaCl 5.0g/L，蛋白胨10g/L，琼脂15～20g/L，酵母浸膏5.0g/L，调节pH为7.0。
以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基：CaCl2 0.1 g/L ，FeSO4.7H2O 0.01 g/L，K2HPO4 0.5g/L，MnSO4.7H2O 0.05 g/L，NaCl 0.2 g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4.H2O 0.01 g/L，NH4NO3 1.0 g/L苯酚按实验需要量添加，调节pH为7.0 [8]。
富集培养基：葡萄糖10.0g/L，营养琼脂33.0g/L，酵母浸粉10.0g/L，调节pH为7.5。
1.3 研究内容与方法1.3.1 菌株和的驯化和分离在超净工作台中，将10mL含0.1g/L苯酚的基础培养基倒入培养皿，取10 g污泥加90mL蒸馏水搅拌15min，静置5min后取上层清液为菌原液[8]。
苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性的研究
苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性的研究摘要从活性污泥中分离到1株苯酚高效降解细菌，初步确定为假单胞菌属（Pseudomonas）；该菌株能在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基中生长；可以在20～40℃、pH值5.0～9.0范围内较好生长；降解苯酚最适温度为35℃，最适pH 值为7.0，最大降解率达到89％。
完全降解无机盐培养基中500mg/L、1 000mg/L、1 200mg/L的苯酚分别需要60h、72h、108h。
关键词苯酚；生物降解；假单胞菌属苯酚是树脂制造、炼油、焦碳、染料、纺织、农药和医药生产等工业废水中的主要污染物[1-2]，在水体中，5～25mg/L的苯酚即可对鱼类的生存构成威胁[3]。
被美国环保署列入优先控制污染物和65种有毒污染物名单，也是我国优先控制污染物之一[4]。
因此，含酚工业废水的治理在环保中具有重大的意义。
除了传统的理化方法外，用微生物降解苯酚的方法对环境无害且成本低廉，因而在苯酚污染治理中起了越来越重要的作用[5]。
但是，目前生物处理技术只限于处理低浓度的含酚废水，而高浓度含酚废水具有污染物浓度高、可生化性差等特点，制约了这一技术在实际中的应用。
本实验从活性污泥中分离到1株苯酚高效降解细菌，并对其降解特性进行了研究。
1 材料与方法1.1 培养基无机盐培养液[7]（g/L）：(NH4NO3 1.0，CaCl2 0.1，K2HPO4 0.5g，KH2PO4 0.5，MgSO4·7H2O 0.5，NaCl 1.0，定容到1 000 mL，pH值7.0～7.2，固体培养基中加入1.5％～1.8％的琼脂，按实际需要加入相应浓度的苯酚。
1.2 高效降解细菌的筛选和驯化从某农药厂废水处理活性污泥中采集污泥样品，称取5.0g污泥置于预先灭菌的100mL苯酚浓度为500mg/L的无机盐培养液中，30℃、150r/min振荡培养，到培养液浑浊后，按1％接种量转接到苯酚浓度为1 000 mg/L的无机盐培养液中，继续振荡培养。
高效苯酚降解菌的分离与降解特性
基金项 目：佳木斯大学学 生创新课题 （课题编号 ：Ｄｚ２０１１—０２１） ＊为通讯作者
· ２５· ２０１１年 ８月
农 业 与 技 术
Ｖｏ１．３１ Ｎｏ．４
荫 种 的甯 集 与驯 化 采用 一 次性 加入 大 剂昂 化 号 】、２、３、４、５、６、７。
合 物 的方法 ［８］。将菌 种在 无菌条 件 下接 种到 ２０ｍＬ
３．１ 结 果
大面积 农 作 物种 植 区 ，利 用 松 花 江 水 进 行 灌 溉 ，
３．１．１ 筛选 出 ７株降解能力强的菌株对苯酚都有 而含酚废水直接排入江中则将对农作物造成毒害 一 定 的点适应 性 ，且对苯 酚有很强的降解能力 ， 作用 ，同时人们适用后有毒物质 在人体 内富集 ，
达 ２５％，血酚浓度为 ０．７４ｍｍｏｌ／Ｌ，１０分钟死亡。 将浓度 为 ｌ０～，１０～，１０～，１０一，ｌ０一 的土样
酚类会对人类的身心健康造成危害，毒害其他生 溶液接种到富集培养基上 ，培养 ４８ｈ后观察。
物 ，破坏了生态系统 的稳定性 ，故我国及其他国
（２）选 择 培 养基［ ］：ＫＮｏ３４．０ｇ，ＮａＣ１ ５．０ｇ，
ｓｏｒｂｅｎｔｓ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ ａｎｄ ８Ｏｌ￣ Ｖｅ ｐｒｏｐｅｒｔｉｅｓ ｔｏｗａｎｔｓ ｐｈｅｎｏｌ ａｎｄｉｔｓ ｄｅｒｉｖａｔｉｖｅｓ ［Ｊ］．ＲＰ￣ｌｃｔｉｖｅ ａｎｄ ＦｕｎｃｔｉｏｎａｌＰｏｌｙｍｅｒｓ，２００１，４６ （３）：
２５９—２７１
高 浓度 含 酚污 水 的研 究 仍 有 深 度 可挖 ，因此 必 须 ［８］任源 ，吴超 飞，等 ．苯胺分离菌 的驯化筛选研究 ［Ｊ］．环 境
及不 同苯酚浓度下的生长和苯酚降解情况的考察 ，
苯酚降解菌的分离
实验方法
• 3.最优降解苯酚细菌鉴定 • 革兰染色显微镜下观察 • 用接种针挑取少许幼龄培养物，涂布在干净玻片 上的一滴无菌水中，风干固定。 • 用结晶紫的混合液染色1-2min后，用水洗。 • 碘液作用1min，水洗，吸干。 • 用95%的乙醇溶液脱色，流滴至洗脱液至无色(约 30s)。 • 用复红液复染约2-3min，水洗，风干，用油镜观 察。
注意事项
• 1实验人员必须较为清晰的明白实验方法后 才可进行实验 • 2取污泥最好在水流缓的地方，污泥位置稍 微深一点的，细菌才多，机会才打 • 3用到苯酚时，使用手套、口罩防止中毒。
预期结果
经过几天培养后培养液变浑浊 在涂布分离中能观察到单细胞菌落 革兰染色可能为红色也可能为蓝色
本实验的困难
• 实验技术不成熟，甚至不会，可能实验结 果没有是由于实验技术的原因，所以组员 要自己课下学习。 • 实验的未知性：目前分离的苯酚降解菌都 是在苯酚污染的环境中的分离出来的，学 校湖中的污泥不确定是否会分离出目的菌。 • 苯酚的毒性
Thanks
实验材料
• 3、苯酚培养液：苯酚25-75mg，尿素0.1g， 微量元素10ml，蒸馏水90ml，PH7.0-7.2， 121℃灭菌20min。 • 4、革兰染色所需试剂 结晶紫、碘液、95%乙醇、复红、香柏油 PH计，温度计，黑布，接种环，酒精灯， 显微镜
实验方法
• 一、细菌的富集和分离 • 1、从校园小河污泥中取污泥，称取5.00g加到50ml含有 25mg/L苯酚的PMM培养基中。 • 2、于30℃,.220r/min摇床5d培养后，分别添加3次苯酚无 机培养液。 • 隔3天后第一次添加PMM培养液，使苯酚终浓度分别增加 至100mg/l；隔3天后第二次添加PMM培养液，使苯酚终 浓度分别增加至200mg/l；第三次隔3天后，添加PMM培 养液，使苯酚终浓度分别增加至300mg/l 。 • 3、最后取培养液进行系列稀释后涂布于苯酚浓度为 300mg/L的PMM固体培养基平板上，30℃培养3d后挑取 形态上有差异的单菌落,。 • 以上所有培养均用黑布遮盖。
苯酚降解菌NTZH-1的分离筛选及其降解特性研究
酚降解菌的降解特性进行了研究 ， 意在找到一些
对 酚处理效果 好 的优势菌株 ， 为今后 的进一 步研
３０ｍｇＬ的驯化 培养液 中 ， 温通气 富集培 养 ， ０ ／ 室 定 时 取 样 测 定 苯 酚 质量 浓 度 ， 苯 酚完 全 降解 至 后 ， 加 入新 的以苯酚 为唯一碳 源 的驯化培 养液 再
文 章 编 号 ： １０ —４ ３ （０ ７０ —０ ７ —０ ０ ４ ６ ９２ ０ ）３ １９ ４
苯 酚 降解 菌 Ｎ Ｚ ． Ｔ Ｈ １的分 离筛 选及 其 降解 特 性研 究
张月澜 ， 刘桂 萍 ， 刘 长风
（ 阳化工学院 环境 与生物工程学院 ， 宁 沈 阳 １ ０４ ） 沈 辽 １ １２
ＮＨｄ Ｎｏ３ ． ／ ：１ ０ ｇ Ｌ； Ｃａ ２ ． ／ Ｃ１：０ １ｇ Ｌ．
酵母 菌【 ］如麦 芽糖 假 丝酵 母 （ ａ ｄｄ ａ— ， Ｌ ｎ ｉａｒ ｌ ｅ
ｔ ａ 、 形 酵母 属 （ ｉ ｒｓｏ ｕ ｓ 等 ． 用 培 ｏ ）瓶 ｓ Ｐ ｔ ｏｐ ｒ ｍ ｙ ｐ） 利
养优势菌群的微生物效率 高 、 运行 成本 低 、 无二 次污染 等优 点 而得 到越 来越广泛 的应用 ．
本试 验通 过对沈 阳某农 药厂土 壤 的处理 ， 对 苯分 降解菌进 行菌 种的分离 和筛选 ， 并对 这株苯
分离培养基 ： 牛肉膏蛋白胨固体培养基 ． 保存 培养基 ： 肉膏蛋 白胨 固体 培养基 加苯 牛 酚溶 液 ， 酚质量 浓度 为 ３ ０ｍｇ Ｌ 苯 ０ ／ ．
１ 试 验原 材料 及 方 法
沈 阳某农 药 厂土壤
一株降解苯酚微生物的分离与鉴定
一株降解苯酚微生物的分离与鉴定摘要：从武汉市某化工厂的活性污泥中分离1株能以苯酚为惟一碳源和能源生长的菌株，命名为CY1。
通过逐级驯化，CY1可在含1 000 mg·L-1苯酚的培养基中降解苯酚并生长。
经对该菌株进行形态特征以及16S rDNA序列比对分析，确认该菌株属于假单胞菌属(Pseudomonas)。
关键词：苯酚；降解；假单孢菌属Isolation and Identification of A Phenol-degrading BacteriumAbstract：A strain CY1 was isolated from the sludge around a chemical plant in Wuhan，Hubei Province. It had ability of utilizing phenol as sole carbon and energy sources. By using step-by-step domesticating method，it could grow in the culture medium byusing 1 000 mg·L-1 phenol as sole carbon source. CY1 was considered to be belonged to Pseudomonas by morphological characteristics and the phylogenetical analysis of the 16S rDNA sequence.Key words：phenol；degradation；Pseudomonas苯酚及其衍生物广泛应用于制药、农药、冶金、塑料等行业，它在环境中能与水中的氯作用生成毒性更大的氯代酚，对人类健康和动植物生长造成的危害不容忽视[1]。
近年来，苯酚降解微生物的研究倍受关注，已鉴定和发现了多种具有苯酚降解能力的菌株，比如根瘤菌(Rhizobia)、乙酸钙不动杆菌(Acinetobacter calcoaceticus)、假单胞菌(Pseudo-monas sp.)、真养产碱菌(Alcaligenes eutrophus)、酵母菌(Yeasttri-chosporon cutaneum)、反硝化菌等[2]。
一株苯酚降解菌的分离与鉴定
一株苯酚降解菌的分离与鉴定
一株苯酚降解菌的分离与鉴定
目的:筛选能高效降解苯酚的`微生物,并进行初步鉴定.方法:从某焦化厂排水沟采集污泥,通过逐步驯化筛选苯酚降解菌株;利用形态观察、生理生化检测、16S rDNA序列分析进行初步鉴定.结果:筛选获得1株苯酚降解菌JDM-2-1,该菌能够以苯酚为惟一碳源,耐酚能力高达2 200 mg/L,在30℃和pH7.0条件下,42 h内能将800 mg/L的苯酚彻底降解;初步鉴定其为球形芽孢杆菌(Bacillus sphaericus).结论:菌株JDM-2-1是一株高效降解苯酚的球形芽孢杆菌.
作者：王永义彭清忠彭清静陈义光何倩杨冬梅 WANG Yong-yi PENG Qing-zhong PENG Qing-jing CHEN Yi-guang HE Qian YANG Dong-mei 作者单位：吉首大学,生物资源与环境科学学院,湖南,吉首,416000 刊名：生物技术通讯 ISTIC 英文刊名： LETTERS IN BIOTECHNOLOGY 年，卷(期)： 2007 18(6) 分类号： Q93-331 关键词：苯酚降解 16SrDNA 球形芽孢杆菌。
一株苯酚降解菌的分离鉴定及响应面法优化其固定化
Ｔ ａ ｉ ｙ ｕ ａ ｎ Ｃｉ ｔ ｙ ． Ｂ ａ ｓ ｅ ｄ ｏ ｎ ｉ ｔ ｓ ｐ ｈ ｙ ｓ ｉ ｏ ｌ ｏ ｇ ｙ ， ｂ ｉ ｏ ｃ ｈ ｅ ｍｉ ｃ ａ ｌ ｃ ｈ ａ ｒ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｓ ａ ｎ ｄ ｔ ｈ ｅ ｎａ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ｏ ｆ ｉ ｔ ｓ １ ６ Ｓ ｒ Ｒ ＮＡ ｇ ｅ ｎ ｅ ｓ ｅ ｑ ｕ ｅ ｎ ｃ ｅ ， ｔ ｈ ｅ ｉ ｓ ｏ ｌ ａ ｔ ｅ ｄ
实验逼 近最 大苯 酚 降解率 响应 区域 ． 最后用 Ｂ ｏ ｘ － Ｂ ｅ ｈ ｎ ｋ ｅ ｎ实验 设计及 响应 面 回归 分析， 应 用二 次方 程对 实验 数据进 行拟 合得 ， 拟合 曲线 与实
验 实测 值相 关性 良好， 最 佳 条件 为海 藻酸钠 浓度 ３ ． ８ ３ ％（ ｍ ／ Ｖ ） 、Ｃ ａ ＣＩ ２ ０ ． ３ ｍｏ ｌ ／ Ｌ 、菌胶 比 １ ： ２ ６ ． ７ ３ 、 固定化 时 间 ２ ｈ 、摇床 转速 １ ８ ０ ｒ ／ ｍ ｉ ｎ 、培养 温度 ３ ０ ￣ Ｃ、初始 ｐ Ｈ值 ７ ｌ ２ 、液 同比 ４ ． ８ ６ ： １ ， 在此 条件 下苯 酚 降解率 可达 ９ ６ ． ８ ９ ％． 关键 词 ：Ｄｉ ａ ｐ ｈ ｏ ｒ ｏ ｂ ａ ｃ ｔ ｅ ｒ ｓ ｐ ． Ｐ Ｄ 一 ０ ７ ；Ｐ ｌ ａ ｃ ｋ ｅ ｔ ｔ － Ｂ ｕ ｒ ｍａ ｎ ；海藻 酸钠 ； 固定化 细胞 ；苯酚 ：生物 降解 ；响应 面 法 中图 分类 号：ｘ１ ７ ２ 文献 标识 码 ：Ａ 文 章编 号 ：１ ０ ０ ０ — ６ ９ ２ ３ （ ２ ０ １ ４ ） ０ ２ — ０ ５ １ ８ － ０ ８
实验一 苯酚降解菌的分离及降解性测定
实验一苯酚降解菌的分离及降解性测定实验原理：在污染环境中，大部分微生物由于受到毒害而死亡，少数微生物具有较强的降解能力或通过诱变改变其基因型或诱导产生某些酶而能在污染的环境中存活，成为有机污染物的高效降解菌或耐性菌株。
从污染环境中取样，通过在选择性培养基上培养，可筛选出目的性微生物。
本实验取青年湖水样作为菌种的来源，在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基进行培养，分离苯酚降解菌。
实验步骤：1. 从污染地区取样品（污水，污泥或受污染的土壤）。
2. 配制无碳源的无机盐培养基，加入苯酚储备液，使培养基中苯酚浓度达100 mg/L。
121℃灭菌20 min。
3. 吸取1 ml活性污泥，加入灭菌培养基，同时做空白对照，28℃恒温摇床培养24 h（160rmp/min）.4. 测定苯酚降解率。
苯酚降解率的测定方法：a.标准曲线的绘制分别吸取0、1、2、3、4、5mL 酚标准溶液（100 mg/L）于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释成20 mL。
加入2 mL pH9.8缓冲溶液，4 mL4％4－氨基安替比林溶液，摇匀后加入4 mL 8％铁氰化钾溶液，显色10min后，加蒸馏水稀释至刻度。
用722型分光光度计460nm波长处比色测定。
b.以不加酚的试剂作空白对照，以浓度为横坐标，以光密度为纵坐标绘制标准曲线。
c.培养液中苯酚降解率的测定吸取培养液2mL于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释成20 mL。
加入2 mL pH9.8缓冲溶液，4 mL 4％4－氨基安替比林溶液，摇匀后加入4 mL 8％铁氰化钾溶液，显色10min后，加蒸馏水稀释至刻度。
用722型分光光度计460 nm波长处比色测定。
d.根据标准曲线求出苯酚含量以分解苯酚的百分数表示酚分解作用强弱。
附：无机盐含酚培养基KH2PO40.5gK2HPO40.5gMgSO4•7H2O 0.2gCaCl2 0.1gNaCl 0.2gNH4NO3 1.0gFeCl210%溶液1滴苯酚100mg/L水1000mL调pH 值7.5，121℃灭菌20min。
一株苯酚降解菌的分离与鉴定
［ 键词】 苯 酚； 关 降解 ；６ Ｄ Ａ； 形 芽孢 杆 菌 １Ｓ ｒ Ｎ 球
酚 降 解 菌株 ； 利用 形 态观 察 、 生理 生 化检 测 、 ６ Ｄ Ａ序 列 分 析 进 行 初 步鉴 定 。 结 果 ： 选 获 得 １ 苯 酚 降 解 菌 Ｊ Ｍ一 — ， １Ｓ ｒ Ｎ 筛 株 Ｄ ２ １
该 菌 能 够 以苯 酚 为 惟 一 碳 源 ，耐 酚 能 力 高 达 ２ ２０ ｍ ／ ０ ｇＬ，在 ３ ℃和 ｐ ７０条 件 下 ，２ ｈ 内能 将 ８０ ｍ ／ 的苯 酚彻 底 降 ０ Ｈ． ４ ０ ｇＬ
ｐ ｙ ｉｌｇ ｃ ｌ ａ ｄ ｂ ｏ ｈ ｍｉａ ｈ ａ ｔｒｓｉｓ ａ ｄ ６ Ｄ ｓ ｑ ｅ ｃ ．Ｔ ｉ ａ ｔｒａ ｔ ｉ ｃ ｕ ｄ ｔ ｉｅ ｐ ｅ ｏ ｓ ａ ｓ ｌ ｈ ｓｏｏ ｉ ａ ｎ ｉｃ ｅ ｃ ｌｃ ａ ｃｅ ｔ ， ｎ １ Ｓ ｒ ＮＡ ｅ ｕ ｎ ｅ ｈ ｓ ｂ ｃ ｅ ｌ ｓ ａｎ ｏ ｌ ｕ ｉ ｚ ｈ ｎ ｌ ａ ｏ ｅ ｒ ｉ ｃ ｉ ｒ ｌ ｃ ｂ ｎ ｏｅ ａｅ ｐ ｅ ｏ ｏ ０ ／ ，ａ ｄ ｄ ｇ ａ ｅ ｐ ｅ ｏ ｏ ０ ／ ｏ ｌｔ ｌ ｎ ｐ ｒ ｄ ｏ ２ ｈ ｗｈ ｎ ｇ ｏ ｎ ｎ ｒ ａ ｏ ，ｔ ｌｒ ｔ ｈ ｎ ｌ ｆ ２ ２ ０ ｍｇ Ｌ ｎ ｅ ｄ ｈ ｎ ｌ ｆ ８ ０ ｍｇ Ｌ ｃ ｍｐ ｅ ｅｙ ｉ ｅ ｏ ｆ ４ ｅ ｒ ｗｉ ｇ ｏ ｒ ｉ
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实验一苯酚降解菌的分离及降解性测定
实验原理：在污染环境中，大部分微生物由于受到毒害而死亡，少数微生物具有较强的降解能力或通过诱变改变其基因型或诱导产生某些酶而能在污染的环境中存活，成为有机污染物的高效降解菌或耐性菌株。
从污染环境中取样，通过在选择性培养基上培养，可筛选出目的性微生物。
本实验取青年湖水样作为菌种的来源，在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基进行培养，分离苯酚降解菌。
实验步骤：
1. 从污染地区取样品（污水，污泥或受污染的土壤）。
2. 配制无碳源的无机盐培养基，加入苯酚储备液，使培养基中苯酚浓度达100 mg/L。
121℃灭菌20 min。
3. 吸取1 ml活性污泥，加入灭菌培养基，同时做空白对照，28℃恒温摇床培养24 h（160
rmp/min）.
4. 测定苯酚降解率。
苯酚降解率的测定方法：
a.标准曲线的绘制分别吸取0、1、2、3、4、5mL 酚标准溶液（100 mg/L）
于50mL容量瓶中，加蒸馏水稀释成20 mL。
加入2 mL pH9.8缓冲溶液，4 mL
4％4－氨基安替比林溶液，摇匀后加入4 mL 8％铁氰化钾溶液，显色10min
后，加蒸馏水稀释至刻度。
用722型分光光度计460nm波长处比色测定。
b.以不加酚的试剂作空白对照，以浓度为横坐标，以光密度为纵坐标绘制标准
曲线。
c.培养液中苯酚降解率的测定吸取培养液2mL于50mL容量瓶中，加蒸馏水
稀释成20 mL。
加入2 mL pH9.8缓冲溶液，4 mL 4％4－氨基安替比林溶液，
摇匀后加入4 mL 8％铁氰化钾溶液，显色10min后，加蒸馏水稀释至刻度。
用722型分光光度计460 nm波长处比色测定。
d.根据标准曲线求出苯酚含量以分解苯酚的百分数表示酚分解作用强弱。
附：无机盐含酚培养基
KH2PO40.5g
K2HPO40.5g
MgSO4•7H2O 0.2g
CaCl2 0.1g
NaCl 0.2g
NH4NO3 1.0g
FeCl210%溶液1滴
苯酚100mg/L
水1000mL
调pH 值7.5，121℃灭菌20min。
结果与报告：
根据降解菌的有无及降解能力强弱，对取样点水质受污染状况进行分析。