实验一苯酚降解菌的分离及降解性测定

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苯酚降解细菌实验报告

引言

苯酚是一种有机溶剂和消毒剂，在工业生产和日常生活中广泛使用。然而，由于其具有较强的毒性和对环境的潜在危害，苯酚的降解成为了一个重要的研究领域。本实验旨在从自然环境中分离得到能够降解苯酚的细菌，并对其降解效果进行评估。

实验方法

物质及设备

- 实验材料：含有苯酚的培养基、蒸馏水、苯酚溶液

- 实验仪器：培养皿、移液管、恒温振荡器、烧杯、离心机

实验步骤

1. 从自然环境中采集土壤、水样品。

2. 将土壤、水样品分别加入含有苯酚的培养基中。

3. 分别在不同温度下（比如25、37）进行恒温振荡培养，培养时间根据实验需求确定。

4. 取样品进行稀释，并分别接种在含有苯酚的琼脂培养基上。

5. 利用平板计数法，计算出细菌的菌落数目。

6. 采用高效液相色谱法检测苯酚的含量。

7. 进一步筛选表现出较强降解能力的细菌，进行进一步鉴定。

实验结果

细菌菌落数目

在实验过程中，我们成功分离到了一株对苯酚具有较强降解能力的细菌。经过平

板计数法的计算，其细菌菌落数目为1.2x10^6 CFU/ml。

苯酚的降解效果

我们利用高效液相色谱法对苯酚的降解情况进行了检测。实验结果表明，在细菌作用下，苯酚的降解速率较快。在48小时内，苯酚的浓度从初始浓度的100 mg/L 降至5 mg/L，降解率达到了95%以上。

数据分析与讨论

细菌的降解机制

细菌通过代谢苯酚的酶系将苯酚降解为无机化合物，并利用其作为碳源和能源。该细菌可能通过以下途径降解苯酚：1. 将苯酚通过羟化作用转化为苯酚羟化物；

2. 苯酚羟化物经进一步代谢，生成苯甲酸、邻苯酚等化合物；

苯酚降解菌TX1的分离鉴定及其降解特性

Ｋｓ
氧酶（２０）位途径开环，成丙酮酸和乙醛。后Ｃ３间形最
１前言
酚类物质是重要的工业原材料，广泛用作防腐被
通过不同的下游途径进入三羧酸循环【。生物降解４在＿苯酚过程中，酚羟化酶和邻苯二酚双加氧酶是苯酚苯
ｍｏｅｆｈｅｒｄｔｎｏｈｎｌｏｌｅｆｔｄｗｉｌａｅｅｕｔｎａｄｔｅｒｌｔｄｐｒｍｅｅｓｏｄｅｄｇａａｉｆｅｏｕｄｂｉｅｔＨａｄｎｑａｉ，ｎｈｅａｅａａｔｒｆＪｔｏｏｐｃｔｈｏ
ＳａｇａｎｉｓｅｔＳｉ］ｓｈｎｈｉＥｖｏｍｎａｃｒｅｒＴｌｅｃ
苯酚降解菌Ｔ的分离鉴定及其降解特性Ｘ１
邱凌峰
苯酚降解菌Ｔ的分离鉴定及其降解特性Ｘ１
ｓｌｔｏ，ＩｅｔｆａｉｎｎＣｈｒｃｅｉａｉｎｆｈｎ —ＤｅｒｄｎｏａｉｎｄｎｉｉｔｏａｄｃａａｔｒｚｔＯＯＰｅＯＩｇａｉｇ
Biblioteka Baidu
ＳｒｉｒｈｓｏｏｐＴｔｎａＴ／ｏｐｒｎＳＸ１ｃ

苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性研究

ｔａｉｎｙＷｕｔＣｒｔｏｓｂｓ－
２４固定化Ｗｕｔ．ｓＣ对苯酚的降解效果－
通过比较采用２５１、、０ｍＬ注射器制作的ＷｕｔＣ固定化小球（别记为１２３ｓ— 分、、小球）
当三角烧瓶中无机Fra Baidu bibliotek盐培养基的装液量为９ＯｍＬ时，菌种（Ｄ。≈０６接菌量为１Ｏ。．）０ｍＬ。以下试验均是利用该菌株在上述条件下进行的。２２Ｗｕｔ．ｓＣ的生长与苯酚的降解－将Ｗｕｔｓ— Ｃ接入初始苯酚浓度为１０／０ｍｇＬ０
阈值低、留少、二次污染等优点，用前景十残无应
分广阔。近年来，内外已有不少从事苯酚降］国
３Ｃ、０／ｎ的摇床中培养３ｄ然后依次转Ｏ。２０ｒｍｉ，
接至苯酚浓度分别为５０１００１５０ｍｇＬ的０、０、０／
质的处理，有经济、具安全以及所能处理的污染物
Ｆｅ（Ｏ４３・Ｈ２００ＮａＭｏ２Ｓ）Ｏ．１ｇ、２Ｏ４・２Ｏ．１Ｈ２００

苯酚降解菌的分离

• 3.最优降解苯酚细菌鉴定 • 革兰染色显微镜下观察 • 用接种针挑取少许幼龄培养物，涂布在干净玻片
上的一滴无菌水中，风干固定。 • 用结晶紫的混合液染色1-2min后，用水洗。 • 碘液作用1min，水洗，吸干。 • 用95%的乙醇溶液脱色，流滴至洗脱液至无色(约
30s)。 • 用复红液复染约2-3min，水洗，风干，用油镜观
• 实验技术不成熟，甚至不会，可能实验结果没有是由于实验技术的原因，所以组员要自己课下学习。
• 实验的未知性：目前分离的苯酚降解菌都是在苯酚污染的环境中的分离出来的，学校湖中的污泥不确定是否会分离出目的菌。
• 苯酚的毒性
Thanks
Βιβλιοθήκη Baidu
机培养液。 • 隔3天后第一次添加PMM培养液，使苯酚终浓度分别增加
至100mg/l；隔3天后第二次添加PMM培养液，使苯酚终浓度分别增加至200mg/l；第三次隔3天后，添加PMM培养液，使苯酚终浓度分别增加至300mg/l 。 • 3、最后取培养液进行系列稀释后涂布于苯酚浓度为 300mg/L的PMM固体培养基平板上，30℃培养3d后挑取形态上有差异的单菌落,。 • 以上所有培养均用黑布遮盖。
湖水污泥微生物中苯酚降解菌的分离与特性测定
实验意义
苯酚是染料、农药、医药等行业的重要生产原料和中间体,是工业废水中的常见污染物之一。由于它具有较强的生物毒性,许多国家已将其列入重点污染物名单之中,并且采取各种措施来消除环境中的苯酚污染。而且它的水体污染很难去除。所以在这些措施中,生物修复是一种低成本的环境友好型污染消除方式,它的关键是获得具有苯酚降解功能的微生物。

高效苯酚降解菌Bacillus sp. L5-1的分离及其降解特性

中国环境科学 2021,41(5)：2441~2448 China Environmental Science 高效苯酚降解菌Bacillus sp. L5-1的分离及其降解特性

刘庆辉,李剑*,杨航,王志宇,李艳,张玮川,贾银娟,张秋根,罗旭彪(南昌航空大学,重金属污染物控制与资源化国家地方联合工程研究中心,江西南昌 330063)

摘要：从污水处理厂活性污泥中分离筛选出一株高效苯酚降解菌L5-1,经菌落形态观察和16S rDNA基因测序,结果表明菌株L5-1为蜡样芽胞杆菌(Bacillus cereus),美国国家生物信息中心(NCBI)的注册号为MN784421.将苯酚设置为唯一碳源,对其生长和苯酚降解特性展开研究.结果表明: 菌株L5-1在10%接种量、温度30~35℃、pH值7~8的条件下,均能高效降解培养基中苯酚(培养基体积为100mL,初始苯酚浓度为500mg/L,14h时降解率>93%).而在最优降解条件下(10%接种量,培养温度为35,pH

℃值7.0,NaCl浓度为1%),初始苯酚浓度为500mg/L,菌株在14h内的苯酚降解率可达97.1%;而当初始苯酚浓度为1000mg/L,菌株也可在46h内达到97.71%的降解率.运用Haldance方程动力学模拟菌株在不同浓度苯酚下的生长过程,其最大比生长速率为0.355h-1,半饱合常数104.27mg/L,抑制常数为322.83mg/L,R2=0.997. 菌株L5-1为目前已报道的Bacillus菌属中降解苯酚能力较强的菌株,为实际处理含酚废水中提供理论参考.

苯酚降解菌的分离鉴定及降解特性的初步研究

［键词］苯酚；降解菌；选择性增菌；生物降解；降解条件关［图分类号］Ｑ９；Ｘ０中３７３［献标识码］Ａ文［章编号］１７ —１０（０７４Ｏ５３文６３４９２０）０一Ｎ５一Ｏ
苯酚是重要的化工原料，被广泛应用于酚醛树脂、炼油、焦碳、染料、纺织、杀虫剂、农药和医药的生产中，并成为这些工业废水中的主要污染物ｎｊ。苯酚毒性较大，对皮肤粘膜有腐蚀作用，可使蛋白质变性，作用中枢神经引起痉挛。苯酚被美国环保局和我国相继列入有毒污染物名单。因此，治理含苯酚污染的工业废水及废物具有重大意义。者在这方面进行了大量研究，处理含酚废水的方法有多种，其中生物降解法是一种高效、低成本且无二次污染的方法，诸多学。笔者从长期受苯酚污染的污泥中分离出一株能高效降解苯酚的假单胞
菌，研究了其生长条件及降解特性，可为工业化生物处理含苯酚类污染物提供理论依据。
１试验材料及方法
１１材料．
ｉ）菌株来源取荆州市沙隆达农药厂排污口处的污泥作为试验的原始菌液。２）培养基 ① 选择培养基（机盐培养基）：ＮＨＮＯ．１０，ＣＣ０ｉ，ＫＨＰ０５，无］．．ｇａ１．ｇ。Ｏ．ｇ

高效苯酚降解菌的分离及降解性能的研究

引言

石油、化工、煤气、焦化及酚类等生产厂排放的废水当中含有大量的苯酚[1]。未经净化的含酚废水可导致水源被污染，致使鱼类死亡，危害农作物，最终威胁人类的健康。许多国家将苯酚列为重要的污染物之一。目前，国内外处理含酚废水的方法主要有物理法、化学法、微生物法及各种结合法[2]。其中微生物法主要利用微生物的代谢活动去除废水中的有毒物，处理方法无2次污染且安全、经济。目前，已鉴定具有降解苯酚能力的微生物主要有假单胞菌（Pseudonomonas.sp）[3]、芽孢杆菌（Bacillus.sp）[4]、酵母菌（Yeast trichosporon）[5]、根瘤菌（Rhizobia）[6]、醋酸钙不动杆菌（A. calcoaceticus）[7]等，降酚菌株多存在于酚类污染物企业排放的废水、污泥和被废水污染的土壤中[8]。本课题拟从被苯酚废水污染的污泥中进行菌株筛选，得到耐酚菌后在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养上筛选降酚菌株，进一步测定苯酚降解的影响因素。对特定菌株降解含酚废水的应用价值进行研究。

1 实验材料和方法

1.1 菌株来源

采集原黑龙江省佳木斯东郊黑龙农药化工集团废弃排污口

处污泥进行菌株筛选。

1.2 培养基

基础培养基：NaCl 5.0g/L，蛋白胨10g/L，琼脂15～20g/L，酵母浸膏5.0g/L，调节pH为7.0。

以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基：CaCl2 0.1 g/L ，FeSO4.7H2O 0.01 g/L，K2HPO4 0.5g/L，MnSO4.7H2O 0.05 g/L，NaCl 0.2 g/L，KH2PO4 0.5g/L，MgSO4.H2O 0.01 g/L，NH4NO3 1.0 g/L苯酚按实验需要量添加，调节pH为7.0 [8]。

苯酚降解菌的筛选及其降解特性初探

６．５，ｉｕｄｖｌｍｅｉａｋ１０ｍＬａｄｒｔｆｓａｉｇｉｃａｏ２／ｍｉ８ｌｑｉｏｕｎｆｓ０ｎａｅｏｈｋｎｎｕｂｔｒ１０ｒｌｎ，ｐｅｏｔｈｎｌｗｉｈｉｔａｏｃｎｒｔｏ００ｍｇｏｌｅｄｇａｅｐｔ５％ａｔｒ２ｎｉｌｃｎｅｔａｉｎ１０／Ｌｃｕｄｂｅｒｄｄｕｏ９ｉｆｅ４ｈ．Ｍｏｅｖｒｔｗａｒｏｅ，ｉｓ
ｄｔｎｗｔｔｉｓｏｅｈｔｉｎｃｌｍｍｏｎ％，ｅｅａｕｅ３ ℃ ，Ｈｖｌｅａｉｉｓｒｎ１ｈｗｄｔａ，ｗｔｉｏｕｕａｕｔ３ｏｈａｈｔｍｐｒｔｒ０ｐａｕ
关键词：生物降解；热带假丝酵母；苯酚；降解特性
中图分类号：１２Ｘ７文献标识码：Ａ文章编号：６２— ９６２１）４— ５４— ６１７０４（０１００４０
Ｉｏａｉｎｏｅｏ－ｅｒｄｉｇｓｒｉｎｒｌｉｒｓｌｔｏｆｐｈｎｌｄｇａｎｔａｎａｄｐｅｉｎａｙｍ
ｓｕｄｅｎｔｇａｉｈａａｔｒｓｉｓｔｉｓｏｉｓｄｅｒｄｎｇｃｒｃｅｉｔｃ

一株苯酚降解菌(Alcaligenes faecalis BC2001)的PCR检测

（ｌａｉｅｅｆｅａｉＢ２０）ＡｃｌｎｓａｃｌＣ０ｇｓ１
ＬＩＺｉｍｉｏｇＹａｎ，ＹＡＯｅ— ｉＮｈ－ｎ，Ｓｎ－ａＭｉｎ，ＣＨＥＮｎｂＢｉ，ＺＨＥＮＧｅ— ｎＷｉｗｅ
（．Ｂ０Ｐ００Ｉｓｔｔ，ｉｎＡａｅｆＡｒｕｔｒｌＳｉｎｅ，ｕｈｕＦｊａ３００，Ｃｉａ１￡ＺｇｎｔｕｅＦａｃｄｍｙｏｇｉｌａｃｃｓＦｚｏ，ｕｉｎ５０３ｈｎ；ｃｉｃｕｅ
ｃｎｎｌｎｅｔｙＢａｔｈｅｕｎｅｓａｅ９ｈｍｏｏｙｗｉｈｐｅｏ— ｅｒｄｎｏｅｂｃｅｉｍＬ－１ｔａｎｉｇａｄａｉｍｎｌｓ，ｔｅｓｑｅｃｈｒ７ｇｂｏｌｇｔｈｎｌｄｇａｉｇＰｒｔｏａｔｒｕ－８ｓｒｉ
中图分类号：Ｑ７９７８；Ｘ１２文献标识码：Ａ
ＰＣＲｅｅｔｏｎｈａａｔｒｚｔＯｏｈｅｏ — ｅｒｄｉｇｂｃｅｉｄｔｃｉｎａｄｃｒｃｅｉａｉｎｆａｐｎｌｄｇａｎａｔｒａ

苯酚降解菌的固定化及其降解特性的研究

摘
要ｉ海藻酸钠为载体，苯酚降解菌进行细胞固定化，对其降解特性进行了研究。通过单因素实验确定较以对并
佳的固定化条件为：藻酸钠质量浓度３０、ａ１量浓度４０、菌体量０４ｇｌ海．ＣＣ质．湿．／ＯｍＬ海藻酸钠溶液；固定化细胞
４ ℃冰箱放置１，到直径均匀的固定化细胞颗粒。２ｈ得用无菌水冲洗后即可使用。１３苯酚含量的测定．采用４氨基安替吡啉直接光度法Ｌ。将培养液于一７］５０・ｎ离心１ｎ取上清液１０址００ｒｍｉ０ｍｉ，０Ｌ加入到１０ｍＬ的试管中，蒸馏水至５ｍＬ；入１０Ｌ０５加加０．ｍｏ・的氨水溶液，ｐ值６８的磷酸缓冲溶液ｌＬ用Ｈ．调ｐ值至７９左右；５Ｌ２的４氨基安替吡Ｈ．加Ｏ“ 一
２１，Ｉ７ｏ１００Ｖ．．０２Ｎ２亿亏与生物Ｚ狸
Ｃｈｍｉｒ＆ＢｉｅｇｎｅｉｇｅｓΒιβλιοθήκη Baiduｙｔｏｎｉｅｒｎ
苯酚降解菌的固定化及其降解特性的研究

苯酚高效降解菌的筛选及其降解特性的研究

摘要从活性污泥中分离到1株苯酚高效降解细菌，初步确定为假单胞菌属（Pseudomonas）；该菌株能在以苯酚为唯一碳源的无机盐培养基中生长；可以在20～40℃、pH值5.0～9.0范围内较好生长；降解苯酚最适温度为35℃，最适pH 值为7.0，最大降解率达到89％。完全降解无机盐培养基中500mg/L、1 000mg/L、1 200mg/L的苯酚分别需要60h、72h、108h。

关键词苯酚；生物降解；假单胞菌属

苯酚是树脂制造、炼油、焦碳、染料、纺织、农药和医药生产等工业废水中的主要污染物[1-2]，在水体中，5～25mg/L的苯酚即可对鱼类的生存构成威胁[3]。被美国环保署列入优先控制污染物和65种有毒污染物名单，也是我国优先控制污染物之一[4]。因此，含酚工业废水的治理在环保中具有重大的意义。除了传统的理化方法外，用微生物降解苯酚的方法对环境无害且成本低廉，因而在苯酚污染治理中起了越来越重要的作用[5]。但是，目前生物处理技术只限于处理低浓度的含酚废水，而高浓度含酚废水具有污染物浓度高、可生化性差等特点，制约了这一技术在实际中的应用。本实验从活性污泥中分离到1株苯酚高效降解细菌，并对其降解特性进行了研究。

1 材料与方法

1.1 培养基

无机盐培养液[7]（g/L）：(NH4NO3 1.0，CaCl2 0.1，K2HPO4 0.5g，KH2PO4 0.5，MgSO4·7H2O 0.5，NaCl 1.0，定容到1 000 mL，pH值7.0～7.2，固体培养基中加入1.5％～1.8％的琼脂，按实际需要加入相应浓度的苯酚。

高效苯酚降解菌的分离与降解特性

７．６１．２５６
２．２苯酚初始浓度的影响
菌悬液，按１２ｍＬ的接种量接到ｐＨ７．２，苯酚初始
将用选择培养基扩大培养的生长状况良好的浓度分别为Ｏ．０５、０．１０、０．１５、０．２０、０．２５、
待测的各种菌体分离出来，用筛选培养基培养分０３０、０．３５、０４０、０．４５０．５０、０５５、０６０
张跃华
【摘要】从佳木斯黑龙化工厂活性污泥中筛选到７株高效苯酚降解茵。其可以利用苯酚作为唯一的碳源和能源物质。通过这７
株茵在不同的温度、ｐＨ值及浓度下生长和苯酚降解情况的研究，确定了此７株茵的最适生长温度２５℃ ，最适ｐＨ值７．２，并测得降解最大的酚浓度７００￣：／Ｌ。该７株苯酚降解茵的降解能力研究表明：其具有较强的苯酚降解能力，在２５℃ ，ｐＨ值７．２、装液量１０８￣Ｌ、接种量１２ｍＬ、摇床振荡速度１１０ｒ／ｍｉｎ及固体培养条件下培养４８ｈ，观察抗性茵生长的状态，茵落数量及测定吸光度值从而
（３）菌种鉴定：①用接种环挑取少量菌落接
细菌富集固体培养基中，２５℃培养箱中培养４８ｈ种于鉴别培养基，２５℃恒温培养４８ｈ后观察并记
后，挑拣长势好的菌体分别接种于苯酚含量为录。②细菌的简单染色实验和革兰氏染色实验见

对降解性细菌的分离实验

面对日益增多的含酚类物质的污水 ,利用生物方法处理高效、简捷、成本低、二次污染小。将分离到的细菌进行扩大培养 ,接种于污泥中 ,培育成活性污泥 ,让污水排出到自然界之前在活性污泥池中停留一段时间 ,降解菌就能将污水中酚类物质很大程度地降解。也可将分离到的菌株作为目的基因的宿主细胞 ,利用基因工程方法将其他能降解它种难降解化合物的基因整合在宿主细胞中 ,从而获得“多质粒超级细菌”,使得一种细菌能同时降解多种污染物质。同时也可以对菌体进行有效利用 ,在菌体中含有大量的蛋白质和氨基酸 ,可通过微生物发酵生产单细胞蛋白质和氨基酸等 ,从而变废为宝 ,为动物提供很好的饲料 ,为人类提供食品。
表 1 菌株特征
种类
形态
菌落特征
革兰氏培养染色特性
出现频率
球形 ,单生 , 圆形隆起 ,
球菌对生或四叠、光滑湿润 , 土 G+
八叠丛生
黄色
需氧 + + +
棒状或微呈弯近似圆形 ,
杆菌杆形
湿润较光滑 , G+ / G- 需氧
+
浅褐色
3. 1. 2 结果分析。在该取样的工业废水中有两大类能降解苯酚的菌株 ,即球菌和杆菌 (其中 G+ / G- 代表在分离的杆菌经革兰氏染色后 ,既出现阳性菌株又出现阴性菌株) ,主要是呈革兰氏阳性的球菌在起作用。在液体培养中大量的敏感性菌株被淘汰 ,剩余的菌株生长较缓慢 ,可能是细菌在特定底物苯酚的诱导作用下 ,才能在菌体内合成苯酚羟化酶等一系列诱导酶 , 而并非菌体本身的结构酶 ;发现的都是需氧型菌株 ,在培养过

苯酚降解菌筛选及降解特性研究

苯酚降解菌筛选及降解特性研究
李鲜珠，沈玉冰，马溪平，王闻烨，李万龙，张宏亮，徐成斌
（辽宁大学环境学院，辽宁沈阳１１００３６）
摘要：针对焦化废水生物难降解有机物含量高、实际生产过程中的水质和水量变化大的特点，开展了高效菌株处理含酚废水的试验研究。从某焦化厂水处理车间生物处理装置曝气池活性污泥中驯
化、分离和筛选得到４株以苯酚为唯一碳源的高效降解茵，并对其进行鉴定及降解特性研究。结果
表明：初步鉴定ｈ３２ａ２、ｂ３１Ｂ、ｈ３１Ａ和ｂ４１ａ为假单胞菌属（Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａ￥ｓｐ．）；通过溴化容量法测定苯酚含量，确定了菌株的最佳降解条件为：温度３２ｏＣ，ｐＨ值７．５，培养时间１６ｈ，接种密度１％，且单一
第３ｌ卷第３期
Ｖｏ１．３１Ｎｏ．３
水
资
源
保
护
２０１５年５月
Ｍａｙ２０１５
ＷＡＴＥＲＲＥＳＯＵＲＣＥＳＰＲ０ＩＥＣＴ【０Ｎ

苯酚高效降解菌的筛选鉴定及其降酚特性研究

温度、Ｈ、ｐ接种量及最适条件下的降酚能力．果表明：结筛选获得１株耐酚能力达２２０ｍｇＬ的苯酚高效降解菌株０／
ＪＭ－— ，Ｄ２１初步鉴定其为球形芽孢杆菌（．ｐａｒｃｓ．Ｂｓｈｅｉｕ）菌株ＪＭ－— Ｄ２１降酚的最佳温度为３５℃，佳ｐ值为５０最Ｈ．，
Ｂａｉｌｓｓｈｅｉｕ．ｅｏｔｍａｅｐｒｔｒｆｐｅｏｅｒｄｔｏｓ３ ℃ 。ｎｈｐｉｌｐｖｌｅｃｌｕｐａｒｃｓＴｈｐｉｌｔｍｅａｕｅｏｈｎｌｄｇａａｉｎｗａ５ａｄｔｅｏｔｍａＨａｕ
ＷＡＮＧｎ — ｉ，ＹｏｇｙＧＡＯｎｃｅｇ，Ｘｉ—ｈｎＰＡＮｏｇｙｏ，ＡｏｗｕＺｈｎ－ａＭＴａ —
（．ｎｎＺｕｄａｒｃｌｒｌＳｈｏ，ｈｍａｉｎ４３０Ｃｈｎ；．ｌｇｆＢｉｌｇｎ１ＨｅａｈｍａｉｎＡｇｉｕｔａｃｏｌＺｕｄａ６００，ｉａ２Ｃｏｌｅｏｏｏｙａｄｕｅ
Ｓｃｅｎｎｇ，ｄｎｔｆｃｔｏｎｄｄｇｒｄｎｇｃｒｃｅｉｔｃｒｅｉｉｅｉｉａｉｎａｅａｉｈａａｔｒｓｉｓ

苯酚的生物降解特性研究-丁霞

“有机污染物——苯酚的生物降解特性研究”设计方案

丁霞

一、实验目的

酚类化合物为原生质毒物，毒性较大。焦化、煤气、石油、木材防腐、造纸、合成氨等工业废水中都含有高浓度的苯酚。含酚废水在我国水污染控制中被列为重点解决的有害废水之一。利用降解菌来控制苯酚的污染，越来越受到人们的重视。本项目拟采用微生物培养、苯酚生物降解的途径及其降解关键酶的分析、微生物DNA的提取、分光光度计测定、PCR、TA克隆等实验技术，阐明苯酚降解菌株的生长特性和苯酚的生物降解特性，苯酚降解菌的系统发育。对学生从事有机污染工业废水的生物处理以及有机污染的土壤或水体的生物原位修复方面的科学研究具有深远的意义。

二、实验原理

利用以苯酚为唯一碳源和能源的无机盐溶液作为驯化液，对某废水处理厂活性污泥进行驯化培养，从中分离筛选出苯酚降解菌。利用比浊法测定微生物生长量，4-氨基安替比林直接光度法测定苯酚浓度，分析苯酚生物降解的途径及其降解关键酶，PCR扩增细菌的16s RNA进行苯酚降解菌的系统发育分析。

1）微生物生长量的测定方法——比浊法

比浊法是实验室中常用的用来测定微生物生长量的方法，以反映微生物数量或浓度的一种指标。该方法是根据当某一波长的光线通过混浊的液体后，光的强度将被减弱。入射光与透过光的强度比与样品液的浊度和液体的厚度相关。根据

所测得的吸光值，就可以得到微生物的生长量。本实验采用的波长为600nm，使用空白培养基作为对照。

2) 苯酚浓度的测定方法

见后面附录。

3）苯酚降解菌的系统发育分析

16S rRNA基因是细菌染色体上编码rRNA相对应的DNA序列，存在于所有细菌的染色体基因组中。16S rRNA具有高度的保守性和特异性。随着PCR技术的出现及核酸研究技术的不断完善，16S rRNA基因检测技术已成为微生物检测和鉴定的一种强有力工具。该技术主要有三个步骤：首先，基因组DNA的获得；其次，16S rRNA基因片段的PCR扩增，并进行TA克隆用于测序分析；最后，进行16S rRNA基因序列的系统发育分析。