毛竹愈伤组织培养中褐变现象的研究

壮毛竹 笋为 外植体 ， 流水 洗净 ， 掉笋箨 ， 超净 台， 用 去 置
用 ７ ％乙醇擦拭 外表皮 ， ５ 在无 菌条件下 ， 已 消毒 的竹 将
笋外表皮用解剖刀削去 ， 并取 中上部位切成 ２ｍｌ ２ｍｌ ｉ× ｉ ｌ ｌ
ｘ２ ｍ颗粒。 ｍ
诱导 出愈伤组织 的材料的褐变情况。
［］盛长忠， ２ 王淑芳， 王宁宁， 红豆杉愈伤组织培养中褐变现象的 等．
愈伤组织培养过 程中 ， 褐变程度随温度 的上升而加重。
表 ４ 不同温度对愈伤组织褐化的影响
初探［］南开大学学报（ 然科学版）２０，４４ ：２— ２． Ｊ． 自 ， １３（）１ １１ ０ ０ ［］崔堂兵， 勇， ３ 郭 张长远， 植物组织培养中褐变现象的产生机 等． 理及克服方法［］广东农业科学， Ｏ ，３ ： 一８ Ｊ． ２ ０（）１ ｌ． Ｏ ６ ［］高国训． ４ 植物组织培养中的褐变问题 ［］ 植物生理学通讯， Ｊ．
１ ９３ （）５１ ５６ ９ ， ６ ： —０ ． ９ ５ ０
２ ３ 光 照对愈伤组织褐变程度的影响 ．
［］陈正华． ５ 木本植物组织培养［ ］北京： Ｍ． 高等教育出版社。９６ １ ． ８
理学教学及科研 工作 。
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硼夯报告 ・ ５・
２ 结果 与分析
２ １ 激素对诱导愈伤组织的影响 ．
设置温 度 ２ ２℃ 、 周 期 １ 、 强 ２００ｌ， ５－ ４ 光 ２ｈ 光 ０ 在 ｘ
光照对对 愈伤组织褐变 的影 响见 表 ５ 结果 表明光 ， 照对愈伤组织褐变有较大的影响 ， ２ 从 ０ ｄ统计 数据的结
份， 每份５０ｎ， 养基冷 却 至 ４ ０ ｌ培 ｒ ０℃左右 时分 别加 入经
过滤灭 菌的 Ａ Ｎ ３１ ｇＬ １ ｇＬ ０ｍ ／ ． ｇ Ｏ ０ｍ ／、 ／ 、 ｇＬ 分装接种后 ｍ
置于 ２ ０℃进行暗培养 ，０ｄ ２ 后统计 已诱导 出愈伤组织的
材料的褐变情况。
作者简介 ： 韩文军（９０ ） 男 ， 师 ， 士 。 １ 一， 讲 ７ 硕 主要 从事植 物 生
摘 要： 在毛竹组织培养过程中， 愈伤组织褐变非常严重 ， 直接影响愈伤组织的继代及分化。通过对激素种类、 温 度、 光照及褐变抑制剂等影响毛竹愈伤组织褐变因素的研究， 找到最大限度避免或减轻毛竹愈伤组织褐变的方法。
关键词 ： 毛竹 ； 愈伤 组织 ； 变 褐
中图分类号 ： ５７ Ｓ ９． ７
对褐变有一定 的抑制作用。
表 ６ 褐变抑制剂对愈伤组织褐化的影响
３ 结论与讨论
结果表明 ２４ Ｄ对 毛竹 愈伤组 织 的褐 变有显著 影 ，一 响， 高浓度的 ２４ Ｄ对褐变有 明显 的抑 制作 用 ， Ｎ Ａ ，一 而 Ａ 和 ６ Ａ对褐变的影响没有达到显著水平 。 一Ｂ 温度对愈伤组织 褐变有 明显 的影 响。在 高温 下 培
制作用 ， 而在培养基中添加 ２４ Ｄ对 毛竹愈伤组织 的褐 ，一 变有显著影响 ， 高浓度 的 ２４ Ｄ对褐变有 明显 的抑制作 ，一
用。
响 ，５℃时毛竹愈伤组织 不褐化 ；０℃时 毛竹愈伤组 织 １ ２
褐化轻微 ；５℃时毛竹愈伤组织褐化非常严重 。在 毛竹 ２
参考文献 ：
［］火树华． １ 树木学（ 第二版）Ｍ ． ［ ］北京： 中国林业出版社，９４ １ ． ９
收稿 日期 ： ０４ ０ —０ ２０— ３ ２ 修订 日期 ： ０４ ０— ４ ２０— ４ １
１２５ 褐 变抑制 剂对褐 变的影 响 以 Ｍ ．． Ｓ为基 本培 养
基， 添加 ３ ｇＬ２４ Ｄ＋１ ｇＬ６ Ｂ ／ ，一 ｍ ／ 一 Ａ和 ３ ｍ ％蔗糖 ，． ％ ０９ 琼脂 ， 灭菌前调节 ｐ Ｈ至 ５８ １１ ．，２ ℃下灭菌 １ ｉ， ５ ｎ 分成 ３ ｍ
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湖南林业科技 ２０年第３卷第３ ０４ １ 期
研 奔 报告
毛竹愈伤组织 培养 中褐变现象 的研究
韩文军 ， 宏 ， 周 何 钢
． 广东 韶关 ５２０ ） １ ０ ６ （． １中南林学 院生命科学与技术学 院， 湖南 株洲 ４２０ ； ２韶关九 曲水林杨 ， １０６
１２２ 不同激 素组 合对褐化 的影 响 以 Ｍ ．． Ｓ为基本 培
养基 ， 按表 １ 补加 不 同浓 度 、 同组合 的激 素 和 ３ 不 ％蔗
糖 ，．％琼脂 ， 菌前调 节 ｐ ０９ 灭 Ｈ至 ５ ８ １１ ． ，２ ℃下灭 菌 １ ５
ｍｎ 将 已准备好 的材料接种于 固体培养基 中 ， ｉ， 作者在 ２ ５ ℃、 光周期 １ ／ ２ｈ １ ｈ下进行 培养 ，０ｄ 统计 已诱导 出 ２ ２ 后 愈伤组织的材料 的褐变情况 。
果可看出 ， ２ 在 ０℃暗培养条件下毛竹 愈伤组织基本不褐 化； 而光培养条件下褐化严重。
表 ５ 不同光照对愈伤组织褐化的影响
Ｈ Ｇ ４０ Ｐ －０ Ｈ人工气候箱培养并观察愈伤组织的诱导及褐
变情况 ， 结果见表 ２ 由表 ２可见 ， ２ ２℃、 。 在 ５ － ４ 光周期 １ 下进行培养时 ， ２ｈ 不论何种激 素组合均会产 生褐变现 象， 但褐变程度有差异。表 ３是 通过对不 同激 素对褐变
１２４ 光照对褐变情况的影响 以 Ｍ ．． Ｓ为基本培 养基 ，
添加 ３ ｇＬ２４ Ｄ＋１ ｇＬ６ Ｂ ／ ， 一 ｍ ／ 一 Ａ和 ３ ｍ ％蔗糖 ， ．％琼 ０９ 脂， 灭菌前调节 ｐ Ｈ至 ５ ８ １１ ． ，２ ℃下灭菌 １ ｍｎ 将 已准 ５ ｉ， 备好的材料接种于 固体培养基 中 ， 调节温度 为 ２ ０℃， 各
文献标识码 ： Ｂ
文章编号 ： ０３ ５ １（０４０—０４ ０ １０— ７０２０）３ ００ －２
毛竹（ ｈｌｓ ｃ ｓ ｅｒ＇ｌ ｔｒ ｐｂ ｃｔ 是禾本 Ｐｙｏｔ ｈ ｔ， ｃ 尥 ． ｕｅ ｅｓ ｌ ａ ｙ ｈ ｅｘ ａ． ｙ ｓ ｒ） 科竹亚科刚竹属植物 ， 为我 国分布最广 、 面积最 大 、 蓄积
Ａ Ｏ 对褐变 的影 响是 由于 Ａ ： ３ ｇ是重金 属元 素 ， 与
表 ３ 不 同激 素对 褐变程度 影响的方差分析 表
酶结合时对酶 的活性 的破坏作用。
另外 ， 培养时 间的长短 对褐变 也有 非常 大 的影 响， 无论何种处理 ， 果 ２ 如 ５ｄ左右还不继 代 ， 愈伤 组织基 本
都会 发生褐变 。
综上所述 ， 在毛 竹愈伤组 织培 养过程 中， 温下 暗 低 培养有利 于抑制褐 变的发生 ， ｇ ｏ 对 褐变有 一定 的抑 ＡＮ＝ ； ２２ 温度对愈伤组织褐变程度 的影响 ．
温度对毛竹愈伤组织 褐变程 度的影 响结果见表 ４ 。 从表 ４ 见 ， 度对 愈伤 组织 的 褐变 程 度有 明 显 的影 可 温
化， 严重时甚至导致死亡【 ５。这是 毛竹组 织难 以成功 ２Ｊ － 的重要原 因之一。本文通过调节培养 基中激素组成 、 添 加适量褐变抑制 剂 、 改变培 养温度 及光 照条件 等， 研究 了它们与褐变程度和生长状态之 间的关 系 ， 以期为今后
寻找减轻或消除褐变的途径提供实验依据。
表 １ 诱导愈伤组织的不同激素组合
量最多、 用途最广 的经济 竹种ｌ 。在毛竹组织 培养过程 ｌ Ｊ 中， 愈伤组织褐 变非 常严 重 ， 接影 响愈伤组 织 的继代 直
及分化。一般认 为褐 变是 由于 多酚类 物质被 多酚氧化
酶氧化为醌类 物质所 致 ， 这些醌 类物质 呈现红 褐色 ， 能 抑制很多代谢酶的活性 ， 从而影响培养 材料的生长与分
１ 材料 与方法
１ １ 试验材料 ． 毛竹采 自中南林 学院标本 园。
１２ 方法 ．
１２ １ 消毒 与接种 ．．
在春季 ３ 月份挖取 刚出土的健 ～５ 将 已准备好的材料接种于 固体培 养基 中， 调节光 周期 为
１ ／２ ， ２ｈ１ 分别置于 １ 、０ ２ ℃进行培养 ，０ 后统计 已 ｈ ５ ２ 、５ ２ ｄ
养 比在低温下培养褐化程度要 高 ， 这是 由于与褐化有关
的多酚氧化酶 的活性在高温时 比较高。 光照对 毛竹愈伤组织的褐变 也有一定 的影响 ， 暗培
养条件下有 利于抑 制褐变。之所 以光培养 时褐化情 况
注： ＋表示轻微褐变 ， ＋ ＋ 表示 褐变较 严重 ， ＋＋＋表示褐变严 重
严重 Hale Waihona Puke Baidu 由于光 照可 以增强多酶氧化酶的活性 。 是
取２ ０瓶分别置于黑暗和光周期 １ ｈ１ ２ ／２ ｈ下进行 培养 ，０ ２ ｄ 后统计 已诱导出愈伤组织 的材料的褐变情况 。
１ ． 培养温度对褐变情况的影响 以 Ｍ ．３ ２ Ｓ为基本培
养基 ， 添加 ３ｍ ／ ， 一 ｇＬ２ ４ Ｄ＋１ ｇ Ｌ６ Ｂ ／ 一 Ａ和 ３ ｍ ％蔗 糖 ， ０９ ．％琼脂 ， 菌前 调 节ｐ ｉ ． ，２ ℃下 灭菌 １ ｉ， 灭 Ｈ？５ ８ １１ ￣ ５ ｎ ｍ
的影响程度 的方 差分析 ， 结果表 明 ， ， 一 ２ ４ Ｄ对褐 变有显
著影 响， 高浓度 的 ２４ Ｄ对褐变有 明显的抑 制作用 。 ，一
表 ２ 不 同激 素组合对愈伤 组织诱导 的影响
２ ４ 褐变抑制剂对愈伤组织褐变程度 的影响 ． Ａ Ｏ 对褐变的影 响结果见 表 ６ 结 果表 明 ， ｇ ０ ： ３ ， ＡＮ ３