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生物化学综合实验报告

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生物化学综合实验实验报告

项目名称：核酸的分离纯化及性质研究

指导教师：商亚芳

班级：食品科学与工程类13-04班

姓名：俞海清

学号：2013218687 日期：2015/07/02-07/03 小组成员：俞海清曾斯棋

核酸的分离纯化及其性质研究

摘要：提取植物组织DNA和动物肝脏的DNA，先要破碎细胞，然后通过离心获得沉淀。分理

出脱氧核糖蛋白（DNP）。利用阴离子除垢剂（SDS），将蛋白质和DNA 分离开来，用氯仿-异戊醇去蛋白质蛋白质变性，然后离心除去变性蛋白质，之后用乙醇将DNA沉淀出来，得到粗蛋白质。为了获得高纯度的DNA，采用适量的RNase来降解残留的RNA，再利用乙醇来

提取DNA，重复多次来获得较纯的DNA。再利用DNA紫外吸收特性测定DNA的纯度时，发现提取出来的DNA纯度比较高。利用二苯胺法测定DNA的含量，发现DNA含量偏低。DNA产率很低。最后采用琼脂糖凝胶电泳来分离DNA，测定DNA片段的分子质量。结果实验成功的在紫外线下观察出了标准DNA条带以及待测样品条带。

Abstract: In order to extract the plant’s DNA and the pluck’s DNA.we should break cells,then separate the e the SDS to break protein and DNA.Phenol – chloroforM – isoaMyl alcohol Mixture can make protein denaturation .place it on the centrifugal machine to remove the protein .Then,take let the DNA dip into ethylalcohol.it can separate the DNA .

生物化学跟分子生物学实验1文档

4、使用滴管时，滴管尖端朝下，避免试剂流入橡皮帽内。 5、使用有毒试剂及强酸强碱时，尽可能用量筒取，若用吸管
只能用吸耳球取，切勿用嘴吸取，以免造成意外。
使用过的玻璃仪器的清洗
1、一般非计量玻璃仪器或粗容量仪器，如烧杯、试管、量筒等先用肥皂水刷洗，再用自来水冲洗干净，最后用蒸馏水冲洗1－2次，倒置晾干。
2、容量分析仪器，如滴定管、容量瓶等先用自来水冲洗，沥干后，浸于铬酸洗液浸泡数小时。然后用自来水反复冲洗干净，干燥备用。
3、用完比色杯后，立即用自来水反复冲洗。切忌用刷子、粗糙的布或纸擦拭。洗净后，倒置晾干备用。
吸量管的种类和使用
1、分类 1）奥氏吸量管供准确量取0.50、1.0、2.0、3.0ml液体所用。这种吸量管只有一个刻度，当放出所量取的液体时，管尖余留的液体必须吹入容器内。 2）移液管常用量取50.0、25.0、10.0、5.0、2.0、1.0ml的液体，这种吸量管只有一个刻度，放液时，量取的液体自然流出后，管尖需在容器内滞留15秒。注意管尖残留的液体不要吹出。 3）刻度吸量管供量取10 ml以下任意体积的溶液。一般刻度包括尖端部分。将所量液体全部放出后，还需要吹出残留于管尖的溶液。此类吸量管为“吹出式”，吸量管上端标有“吹”字。未标“吹”字的吸量管，则不必吹出管尖的残留液体。
3、调刻度吸量管与地面保持垂直，下口与试剂瓶接触，并成一角度；用食指控制液体下降至最上一刻度处；液体凹面、刻度和视线应在一水平面上。

生物化学与分子生物学实验指导书.docx

生物化学实验指导书

生命科学与工程学院

2007. 09

实验一总糖的测定 (2)

实验二蛋白质及氨基酸的呈色反应 (5)

实验三蛋白质的等电点测定和沉淀反应 (9)

实验四氨基酸的分离鉴定一纸层析法 (13)

实验五血清蛋白的醋酸纤维薄膜电泳 (15)

实验六酪蛋白的制备 (18)

实验七酵母核糖核酸的分离及组分鉴定 (20)

实验八肝细胞核中核酸（RNA和DNA）的分离与测定 (22)

实验九紫外吸收法测定DNA含量 (25)

实验十维生素C的定量测定 (26)

实验-一酶的特性 (29)

实验十三小麦萌发前后淀粉酶活力的比较 (37)

实验十四植物体内的转氨基作用 (40)

实验十五SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳测定蛋白质分子量 (44)

实验十六葡聚糖凝胶过滤层析法测定蛋白质分子量 (50)

实验十七质粒DNA的提取 (55)

实验十八质粒DNA的酶切 (57)

实验十九PCR基因扩增 (59)

实验二十琼脂糖凝胶电泳检测DNA (61)

实验二十一真核生物基因组DNA制备 (63)

附录 (65)

实验一总糖的测定

一、目的

掌握肓接测定法测定总糖的原理和方法。

二、原理

样品经处理除去蛋白质等杂志后，加入盐酸，在加热条件下使蔗糊水解为还原性单糊, 以直接滴定法测定水解后样品屮的还原糖总量。

三、器材

1•电炉2.滴定管3.锥形瓶4.容量瓶

四、试剂

1.6mol/L盐酸溶液

2.0. 1%甲基红乙醇溶液:称取0. lg甲基红,用60%乙醇溶解并定容至100mlo

3.20%氢氧化钠溶液。

4.0. 1%转化糖标准溶液：称取105°C烘干至恒重的纯蔗糖1.9000g,用水溶解并移入

生物化学与分子生物学实验

1.分光光度计

（1）基本原理：溶液溶质在其一定波长的吸收光中,其吸光度值与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比,即遵循朗伯—比尔定律,通过也在一定液体厚度时测定其

吸光度来与标准曲线比较从而测得待测液溶质浓度;

（2）吸光度与液层厚度和溶液浓度的乘积成正比,称为朗伯—比尔定律,简称比尔定律,即光的吸收定律;其数学表达式为：

A＝-lgT＝εbc

A：吸光度,又称光密度“”；

ε：吸光系数L·mol－1·cm－1；比例常数,称吸光系数

b：样品光程cm,通常使用的吸收池,则b=1cm；

c：样品浓度mol/L;

吸光度“A”具有加和性,即混合物的总吸光度等于溶液中的各组份各自在该波长下吸光度的算术和;这是多元混合物分光光度法定量分析的基础;

若溶液中各溶质的吸光系数ε相同,则各溶质吸光度的大小与溶质浓度成比例;

例：尿嘧啶核苷酸溶液用1cm石英吸收池测定 260nm的吸光度为,用同一吸收池测定纯溶剂的吸光度为,已知其摩尔吸光系数 = ×103 M-1cm,计算其摩尔浓度.

∵A＝εbC

∵A＝溶剂加样品的吸光度－溶剂的吸光度

∴A＝－＝

∵b＝1cm

∴C==×10-5 mol / L

2等电点的计算方法；

标准曲线的制作

1配置一系列浓度不同的标准溶液;

2在测定条件相同的情况下,分别测定其吸光度;

3以标准溶液浓度为横坐标不必考虑显色剂等引起的浓度变化,以相应的吸光度为纵坐标,绘制A-C关系图;

4在相同条件下测出样品溶液的吸光度,从标准曲线上查出浓度;

2、酪蛋白的提取过程：

1.原理；牛乳中主要的蛋白质是酪蛋白,它是一些含磷蛋白质的混合物,等电点为; 利用蛋白质在等电点时溶解度最低的性质,将牛乳的PH调至时,酪蛋白就沉淀出来;用乙醇洗涤沉淀物,除去脂类杂质后便可得到纯化的酪蛋白;

生物化学综合实验报告

实验目的：

1、学会和掌握核酸制备的一些基本操作和方法，并通过分光光度

法和电泳等实验技术研究核酸的性质；

2、学习用紫外分光光度计和水平琼脂糖凝胶电泳检测DNA的纯

度、浓度的原理与方法。

3、掌握利用限制性内切酶酶切DNA的原理和方法,培养学生利用

限制性内切酶位点图谱进行实验设计的能力；

4、学会通过琼脂糖凝胶电泳法分析不同材料之间DNA的亲缘关

系。

关键词：

核酸制备，CTAB法，限制性内切酶，分光光度法，电泳

Abstract：

1.The extraction of plant DNA.

2.Determination of plant DNA purity

and concentration.

3.Plant DNA restriction endonuclease

enzymatic.

4.DNA agarose gel electrophoresis to

separate DNA fragments.

5.Studies on the relationships of plant

DNA.

Key words:

Nucleic acid preparation, CTAB, Restriction endonuclease, Spectrophotometry, Electrophoesis.

一．黄豆芽DNA的提取

1.材料：正在生长的黄豆芽

2.主要仪器和用具：

（1）高速冷冻离心机（16 000 r/min）;(2) 恒温水溶；（3）紫外可见光分光光度计；（4）电泳仪及微型电泳槽；（5）电冰箱；（6）凝胶成像系统或手提式紫外检测仪；（7）微波炉；（8）电子天平；（9）纯水系统；（10）1.5 mL离心管及离心架；（11）微量移液管10 uL、200uL、1 000uL各1支及各量程吸头；（12）常用玻璃仪器及滴管等；（13）一次性塑料手套。

分子生物学实验报告

本科学生综合性实验报告

学号084120077 姓名董云顺

学院生命科学学院专业、班级08级生科B班

实验课程名称生物化学实验

教师及职称杜朝昆（高级实验师）

开课学期2009 至2010 学年上学期填报时间2009 年12 月30 日

云南师范大学教务处编印

二．实验报告

常见的生物化学与分子生物学实验

一动物组织蛋白质得提取

【目得要求】1掌握动物组织蛋白质得提取方法。2了解动物组织蛋白质提取得原理。

【实验原理】由于蛋白质种类很多,性质上得差异很大,即或就是同类蛋白质因选用材料不同使用方法差别也很大，且又处于不同得体系中,因此不可能有一个固定得程序适用各类蛋白质得分离。但多数分离工作中得关键部分基本手段还就是共同得,大部分蛋白质均可溶于水、稀盐、稀酸或稀碱溶液中,少数与脂类结合得蛋白质溶于乙醇、丙酮及丁醇等有机溶剂中。因此可采用不同溶剂提取、分离及纯化蛋白质.蛋白质在不同溶剂中溶解度得差异主要取决于蛋白分子中非极性疏水基团与极性亲水基团得比例,其次取决于这些基团得排列与偶极矩。故分子结构性质就是不同蛋白质溶解差异得内因.温度、ｐH、离子强度等就是影响蛋白质溶解度得外界条件。提取蛋白质时常根据这些内外因素综合加以利用将细胞内蛋白质提取出来,并与其它不需要得物质分开。但动物材料中得蛋白质有些以可溶性得形式存在于体液如血浆、消化液等中可以不必经过提取直接进行分离.蛋白质中得角蛋白、胶原及丝蛋白等不溶性蛋白质,只需要适当得溶剂洗去可溶性得伴随物，如脂类、糖类以及其她可溶性蛋白质,最后剩下得就就是不溶性蛋白质.蛋白质经细胞破碎后用水、稀盐酸及缓冲液等适当溶剂将蛋白质溶解出来,再用离心法除去不溶物即得粗提取液。

【试剂器材】1实验小鼠20、9ＮaCｌ3动物组织蛋白裂解缓冲液Ｔris 50ｍＭ，ＮａC1150mM ，ＥＤTA ０、5mM ，DTT 1mM ,TriｔoｎＸ—1001,去氧胆酸钠０、5,SDＳ0、14，PＭSF/异丙醇储备液100mM，174mg／1０mｌ于—20℃储存5－2０℃储存得冰块。

高考生物大一轮复习第四部分生物化学与分子生物学技术实践课件-苏教版选修1

结果示意图，请据图回答问题：
（1）该图所示的鉴定方法称为
。
（2）基线一般距底边 cm。
（3）A、B、C、D四点中，属于标准样品的样点是
，属于提取样品的样点是
。点样
的要求是
。
（4）在图中的层析谱中，①代表的物质是
，
②代表的物质是
。
（5）该层析的目的是
，
而在“绿叶中色素的提取和分离”的实验中层析的
目的是
优点
简单易行，便于分离
局限性
水中蒸馏会导致原料焦糊和有效成分水解等问题
压榨法
通过机械加压，压榨出果皮中的芳香油
（1）石灰水浸泡、漂洗（2）压榨、过滤、静置（3）再次过滤
适用于柑橘、柠檬等易焦糊原料的提取
生产成本低，易保持原料原有的结构和功能
分离较为困难，出油率相对较低
有机溶剂萃取
对位训练 1.为了提取血红蛋白，从学校附近的屠宰场索取新
鲜的猪血，对猪血处理的正确操作是（ A ） A.要在采血容器中预先加入抗凝血剂柠檬酸钠 B.取血回来后，马上进行高速长时间离心 C.将离心后的血细胞加入清水缓慢搅拌 D.重复洗涤直到上清液呈红色为止
2.洗涤红细胞时，离心所用方法为
（B）
A.低速长时间离心
B.低速短时间离心
C.高速长时间离心
D.高速短时间离心

关于高级生物化学与分子生物学综合实验报告

一、引言

高级生物化学与分子生物学是现代生物学领域中的重要学科，研究的

对象涉及生物体内的各种化学反应和分子生物学机制。本实验旨在通过实

际操作，探究一些高级生物化学与分子生物学方面的实验操作和实验结果。

二、实验目的

1.熟悉DNA的提取与鉴定方法；

2.掌握基因克隆技术，并进行目的基因的克隆；

3.了解蛋白质的表达与检测方法。

三、实验材料与方法

1.材料：PCR试剂盒、DNA提取试剂盒、RNA提取试剂盒、质粒、菌

落PCR引物、PCR反应裂解液、跑图和变性聚丙烯酰胺凝胶等。

2.方法：

a.DNA提取与鉴定：按照DNA提取试剂盒的说明书进行操作，提取样

本中的DNA，并使用凝胶电泳检测提取的DNA是否成功。

b.基因克隆：将目的基因的DNA片段扩增后，连接到质粒上，利用细

菌进行转化，最后通过PCR和凝胶电泳检测克隆是否成功。

c.蛋白质的表达与检测：利用RNA提取试剂盒提取RNA，再通过反转

录PCR方法进行cDNA的合成，最后进行蛋白质的表达和检测。

四、实验结果

1.DNA提取与鉴定：经过DNA提取试剂盒的操作，成功从样本中提取到DNA，并通过凝胶电泳发现DNA片段呈现清晰的带状。

2.基因克隆：通过PCR扩增得到目的基因的DNA片段，并成功连接到质粒上。经过细菌转化后，经过PCR和凝胶电泳检测发现克隆成功。

3. 蛋白质的表达与检测：通过RNA提取试剂盒提取到RNA，进行反转录PCR合成cDNA。最后通过Western blot技术检测到蛋白质的表达。

五、讨论与分析

1.DNA提取与鉴定：DNA提取试剂盒是一种快速、简便的DNA提取方法，能够有效地提取纯度较高的DNA样本。凝胶电泳是一种常用的DNA鉴定方法，能够通过DNA片段的迁移情况来判断提取的DNA质量和浓度。

生物化学与分子生物学基本试验试验一蛋白质的盐析与透析试验

生物化学与分子生物学

基本实验

实验一蛋白质的盐析与透析

实验目的

了解蛋白质的盐析与透析的原理和意义

实验原理

血清中的蛋白质，用盐析的方法，可以分离出清蛋白、α、β球蛋白和γ-球蛋白三种。详情见盐析技术。另选择适宜孔径的半透膜，使蛋白质分子被截留，小分子的中性盐透出而达分离的目的。但透析时正负离子透过半透膜的速度不同，如硫酸铵中的NH4+的透出较快，膜内SO42-剩余而生成H2SO4，其酸度足以使蛋白质变性，因此，除盐时开始应对0.14 mol·L-1的NH4OH透析。本实验分别用双缩脲试剂和Nessler试剂检验蛋白质和NH4+的存在。

仪器材料和试剂药品

仪器材料：（1）离心管、试管及试管架。

（2）2m1刻度吸管、玻璃棒、小烧杯。

（3）透析袋。

（4）离心机。

试剂药品：（1）饱和硫酸铵溶液。

（2）硫酸铵粉末。

（3）双缩脲试剂称取CuSO4·5H2O 2.5g，加蒸溜水少许，微热溶解后稀释至100ml。另取酒石酸钾钠（NaKC4H4O6·H2O）10g和KI 5g，溶于500ml蒸馏水中，再加入20％氢氧化钠300ml，混匀后，慢慢加入硫酸铜溶液中，加蒸馏水至1000ml。此液可长期储存。

（4）Nessler试剂称取150g碘化钾置于三角烧瓶中，加蒸馏水100ml使之溶解，再加入110g碘，待完全溶解后加140g～150g汞，用力振摇10分钟左右，此时产生高热，须将三角烧瓶放入水中继续摇动，直至棕红色的碘转变成带绿色的碘化汞钾为止。将上清液倾入2000ml容量瓶中，并用蒸馏水洗涤瓶内的沉淀数次，将洗涤液一并倒入容量瓶内，用蒸馏水稀释至刻度，此为贮存液，储于棕色瓶中备用。

生物化学与分子生物学课件：实验五、TP、Alb测定

进行定量测定。
由于生物样品中常混有核酸，核酸对紫外光也有吸收，但其峰值在 260nm附近，因此可用下列经验公式计算蛋白质浓度。
Lowry-Kalckar公式：蛋白质浓度(g/L)=1.45A280－0.74A260 Warburg-Christian公式：蛋白质浓度(g/L)=1.55A280－0.76A260 A280 、A260分别代表光径为1cm ，波长为280nm和260nm时样品的吸光度。
AU AS
KU LU CU KS Baidu NhomakorabeaSCS
CU CS
CU
AU AS
CS
Cmuo的l/L单。位随Cs的单位而定。如Cs是moL/L，则Cu也是
分光光度计光路示意图
检测系统一般包括：光电管、微安计、显示器等。
722s型分光光度计
722s操作步骤：
1、揭开样品室盖，接通电源预热仪器15min； 2、旋动波长旋钮选择应用波长； 3、调0％T：选测试模式为T，按下“O％T”，屏幕显示“0”； 4、调100％T：盖下样品室盖，将空白溶液置于光路，按下“100％T”，屏幕显示100；(重复3、4步骤2～3次至T“0”、T“100”重现稳定) 5、吸光度测定：盖下样品室盖，测试模式为A，此时空白溶液A为0，拉动拉杆，置样品溶液于光路，读屏幕。读数完毕应立即打开样品室盖。 6、取出所有比色杯，用于纱布搽拭清洁仪器，断电，盖下样品室盖。

生物化学实验报告

引言：

生物化学实验是一种重要的科学研究方法，通过对生物体内分子结构和功能的研究，可以深入了解生物体的生理过程和疾病发生机制。本实验旨在探究某种生物体内的特定分子的结构和功能，以及其在生理过程中的作用。

实验目的：

本实验的目的是通过生物化学实验手段，研究某种生物体内的特定分子的结构和功能，以揭示其在生理过程中的作用。

实验材料与方法：

1. 实验材料：

- 某种生物体组织样本

- 适量的缓冲液

- 试剂盒中的相关试剂

- 实验仪器：离心机、显微镜等

2. 实验方法：

- 样本制备：将生物体组织样本取出，并使用缓冲液进行处理，以提取目标分子。

- 分子结构分析：通过质谱、核磁共振等技术，对目标分子的结构进行分析。 - 功能实验：通过酶活性测定、反应动力学等实验手段，研究目标分子在生理过程中的功能。

实验结果与讨论：

1. 分子结构分析：

通过质谱和核磁共振技术，我们成功确定了目标分子的分子结构。该分子由

若干个原子组成，通过键的连接形成一个稳定的结构。进一步的分析表明，该

分子具有特定的功能基团，这些功能基团在生理过程中起到了重要的作用。

2. 功能实验：

通过酶活性测定和反应动力学实验，我们研究了目标分子在生理过程中的功能。结果显示，该分子具有催化反应的能力，可以加速特定的生化反应。此外，我们还发现该分子在调节细胞信号传导、维持细胞内环境稳定等方面起到了重

要的作用。

结论：

通过本实验，我们成功研究了某种生物体内特定分子的结构和功能。该分子具

有特定的分子结构，并在生理过程中发挥重要作用。这些研究结果对于深入了