实验：计数法测定细胞生长曲线

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细胞生长曲线的绘制实验报告

篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制

一、实验目的

学习了解微生物生长量测定的方法

学习了解细菌生长曲线的绘制方法

学习掌握血细胞计数板的使用方法

微生物生长量的测定

计数法重量法生理指标法

1、显微镜直接计数法

利用血细胞计数板计数

涂片计数

2、活菌菌落计数法

3、滤膜法

细菌生长曲线

将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线

篇二：细胞生长曲线的测定

细胞生长曲线的测定

一、实验目的

掌握测定细胞生长曲线的方法。

二、实验器具

24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。

三、实验方法

1. 培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。

2. 计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。

3. 绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。

篇三：MTT法绘制生长曲线

实验材料：

1，5%FBS-L-DMEM, 5x104个/ml细胞悬液，5mg/mlMTT溶液，DMSO,0.01M PBS,2, 96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管，1.5ml离心管，0.22μm滤膜，锡箔纸，MTT工作液

微生物实验报告：测定细菌生长曲线

测定细菌生长曲线

一、实验目的

1．了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；

2．学习液体培养基的配制以及接种方法；

3．反复练习无菌操作技术；

4．了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；

5．掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；

二、实验原理

将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。

测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。

从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示，其计算公式为：

G＝（t2-t1）/[(lgW1-lgW2)/lg2]

式中t2和t1为所取对数期两点的时间，W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。

细胞生长曲线实验步骤

一、准备细胞与培养基

1.选择适宜于实验的细胞系，并确保细胞状态良好，无污染。

2.准备所需的培养基，按照说明书进行配制，并在使用前进行无菌过滤处理。

3.准备所需的无菌器械、吸管、离心管等。

二、接种细胞至培养板

1.在无菌操作台上，用无菌吸管吸取适量的细胞悬液。

2.将细胞悬液均匀接种至培养板中，每个孔内的细胞数量应保持一致。

3.将接种好的培养板放入培养箱中，设置适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。

三、定时观察与计数

1.在接种后的不同时间点（如每天或每24小时）观察细胞的生长情况。

2.使用倒置显微镜观察细胞的贴壁生长和形态变化，以及细胞数量的变化。

3.在特定时间点，使用血细胞计数板或自动细胞计数器对细胞进行计数。

四、记录数据

1.将每次观察和计数的结果详细记录下来，包括细胞数量、形态变化等。

2.记录实验过程中的温度、湿度、二氧化碳浓度等环境参数。

五、绘制生长曲线

1.根据记录的数据，以时间为横轴，细胞数量为纵轴，绘制细胞生长曲线图。

2.生长曲线应反映出细胞数量随时间的变化趋势。

六、数据分析

1.分析生长曲线，计算细胞的倍增时间、生长速率等参数。

2.比较不同条件下的细胞生长情况，分析影响细胞生长的因素。

七、清洗与消毒

1.实验结束后，将使用过的器械、培养板等进行清洗和消毒处理。

2.清洗可使用去离子水或清洗剂，消毒可使用75%酒精或紫外线照射等方法。

八、实验总结

1.总结实验过程中的经验教训，分析可能存在的误差来源。

2.根据实验结果，提出改进实验方法的建议或对未来研究方向的展望。

请注意，以上步骤仅为一般性的细胞生长曲线实验步骤，具体实验过程可能因细胞类型、实验条件等因素而有所不同。在实际操作中，请遵循实验室的安全规定和操作规程，确保实验结果的准确性和可靠性。

生长曲线

微生物污染防治： 1，抗生素多用于预防污染。已发生的污染多难以根除，反复使用会使微生物耐药，而且对细胞生长也有影响。当有价值的细胞污染时，可抗生素抢救：一般用常用量的5~10倍做冲击疗法。用药24~48h后，再换常规培养液，有时污染早期此法可能奏效。 2，加温处理支原体对热敏感，可将支原体污染的细胞置于41C作用5~10h，最长不超过18h，以杀灭支原体。但如此高温对细胞生长也有很大影响，因而在实验前应先用少量细胞做实验以找出最合适的时间和温度，以尽可能保证既杀灭支原体又使细胞不致受到太大损伤。 3，动物体内接种：将受支原体污染的细胞接种在同种动物的皮下或腹腔，借动物体内的免疫系统消灭支原体。待一定时间后取出细胞，做原代培养再进行繁殖。目前国外有能滤除支原体的新型滤膜系统。能滤除培养液中的支原体，但不能滤除细胞上的支原体。
3，支原体是大小介于细菌和病毒之间（最小0.2um）并独立生活的微生物，约有 1%可通过滤菌器。支原体无细胞壁，形态多变，可为圆形、丝状或梨形。多数支原体适合于偏碱性条件下生存（7.6~8.0）。对酸耐受性差，对一般抗生素不敏感。支原体污染后，培养液可不发生混浊，多数情况下细胞病理变化轻微或不显著，细微变化也可由于传代换液而缓解，因此易被忽视。但严重者可致细胞增殖缓慢，甚至脱落。
• •
简单地说：MTT是一种检测细胞存活和生长的方法。 MTT主要有两个用途 1．药物（也包括其他处理方式如放射线照射）对体外培养的细胞毒性的测定； 2．细胞增殖及细胞活性测定。 MTT检测原理为: 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜（DMSO）能溶解细胞中的甲瓒，用酶标仪在490nm波长处测定其光吸收值，在一定细胞数范围内，MTT结晶形成的量与细胞数成正比。根据测得的吸光度值（OD值），来判断活细胞数量，OD值越大，细胞活性越强（如果是测药物毒性，则表示药物毒性越小）。

MTT法测定细胞生长曲线

1、取生长状况良好的细胞，常规消化制成单细胞悬液并计数，调整细胞成六个浓度梯度，依次为：5x103、1x104、2x104、3x104、4x104、5x104/ml，均匀接种细胞于96孔细胞培养板，每孔加细胞悬。

液200ul，每个浓度组设6个复孔,共接种7块培养板，37℃、5%C02浓度，饱和湿度培养箱中连续孵育24/48/72/96/120/148/172小时后。

2、每孔加入20ulMTT溶液(smg/m1用PBS配)，继续孵育4h后终止培养。

3、快速翻转培养板,弃去上清液,每孔加入150ulDMSO,振荡10min，使MTT蓝紫色结晶完全溶解。

4、用酶联免疫检测仪于490nm处检测各孔的吸光值(OD值)，并以未接种细胞只加培养基孔的吸光值为空白对照调零，取6孔平均值。

5、实验重复3次，以培养“时间”为横轴，“吸光值”为纵轴绘制细胞生长曲线。

实验6-2酵母菌等单细胞微生物生长曲线的测定

实验酵母菌等单细胞微生物生长曲线的测定

1 目的要求

（1）了解酵母菌、细菌等单细胞微生物生长曲线的特点及测定原理；

（2）学习用血球计数板计数法和比浊法分别测定酵母和细菌的生长曲线。

2 基本原理

生长曲线是单细胞微生物在一定环境条件下于液体培养时所表现出的群体生长规律。测定时一般将一定数量的微生物纯菌种接种到一定体积的已灭菌的适宜的新鲜培养液中，在适温条件下培养，定时取样测定培养液中菌的数量，以菌数的对数为纵坐标，生长时间为横坐标，绘制得到生长曲线。不同的微生物其生长曲线不同，同一微生物在不同培养条件下其生长曲线亦不同。但单细胞微生物的生长曲线规律基本相同，生长曲线一般分为延迟期、对数期、稳定期和衰亡期四个时期。测定一定培养条件下的微生物的生长曲线对科研和实际生产有一定的指导意义。

测定生长曲线时需要对生长的单细胞微生物定时取样计数，对于酵母细胞和比较大的细菌细胞可采用血球计数板计数法计数，亦可采用比浊法计数，但对于小的细菌细胞一般采用比浊法。

比浊法是根据培养液中菌细胞数与混浊度成正比，与透光度成反比的关系，利用光电比色计测定菌悬液的光密度值（OD值），以OD值来代表培养液中的浊度即微生物量，然后以培养时间为横坐标，以菌悬液的OD值为纵坐标绘出生长曲线。此方法所需设备简单，操作简便、迅速。

血球计数板法是利用一块血球计数板来进行计数的。血球计数板是一块特制的厚玻璃片，中央平台比两边平台低0.1mm，上有两个被精细刻化为400个小方格的格网，面积为1mm2，加盖盖玻片后即构成0.1 mm3体积的计数室。血球计数板有两种规格：一种是将1 mm2面积的网格划分为25个大格，每个大格再分成16个小格，既25´16；另一种为16´25。计数时只需无菌操作将稀释到适宜浓度的菌悬液取一滴从盖玻片一侧渗入到计数室，待静置平衡后于显微镜高倍镜下计数，用下面公式算出菌液中细胞数。

细胞生长曲线测定

细胞生长曲线

概念

方法

概念

方法

展开

编辑本段概念

细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平顶期，然后退化衰亡。为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。以存活细胞数(万／mL)对培养时间(h或d)作图，即得生长曲线。

编辑本段方法

计数法

1．取生长良好接近汇合的细胞，用胰酶消化，用新培养基制成细胞悬液后计数(见四、细胞传代培养的实验步骤)。如是非粘壁细胞，则离心弃旧培养基后，换上一定量的新鲜培养基然后制成细胞悬液计数。

2．根据细胞计数结果按每个小方瓶5×104／mL作传代培养接种细胞，共接种21瓶细胞。

3．24 h后开始计数细胞，以后每隔24 h计数一次，每次取3瓶细胞，分别进行计数。计算平均值。连续计数7 d。

4．根据细胞计数结果，以单位细胞数(细胞数／mL)为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。

MTT法

1．制备1 mL细胞悬液。空白对照以1 mL培养基代替细胞悬液。加入0．1 mL MTT于37℃孵育4 h。使MTT还原为蓝紫色甲月赞结晶。

2．加1 mL DTW脱色液，37℃至少静置30 min(甚至过液)，使甲质颗粒充分溶解。

3．吸取200 μL该溶解液至96孔板孔中，在酶标仪上读取OD 值，检测波长570 nm，参考波长630 nm。

生长曲线和细胞生长周期的测定

MTT比色法绘制生长曲线

生长曲线测定一般可用细胞计数法进行，但数值不够精确，可有20%-30%的误差，需结合其他指标进行分析。

原理：MTT，商品名噻唑蓝，是一种能接受氢原子的染料的四唑盐。活细胞的线粒体中的琥珀脱氢酶能使外源性的MTT还原为难溶的蓝紫色结晶物并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。二甲基亚砜能溶解细胞中的蓝紫色复合物，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定其光吸收值，可间接反映细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结晶物形成的量与细胞数成正比。

步骤;1.接种：用含%10胎小牛血清的培养液配成细胞悬液，以每孔1000-10000个细胞接种到96孔板，每孔体积200ul.

2细胞培养：同一培养条件，培养3-5天

3呈色：培养3-5天后，每孔加MTT溶液（5mg/ml用PBS配制，ph=7.4）20ul.继续孵育4h。终止培养，小心吸弃孔内培养基上清液，对于悬浮细胞需要分离后再吸弃孔内上清液。

每孔加150ul DMSO，脱色摇床震荡10min，使结晶充分溶解。

4.比色；选择490nm(570nm)波长，在没脸免疫检测仪上测定各孔光吸收值，记录时间，以时间为横坐标，吸光值为纵坐标绘制细胞生长曲线。

流式细胞仪测细胞生长周期：

流式测细胞周期，只需在实验结束后收集细胞（细胞数量须达到2-5x105）,离心，用PBS洗三次，再转移到1.5ml的EP管内，用预冷的70百分之的酒精固定1小时，就可以送到流式细胞仪检测。

流式细胞仪细胞周期检测流程

1，做前提前换液，调整细胞状态，小皿或大皿（保证细胞达到10--100万个）。

细胞生长曲线的绘制实验报告范文

2020

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篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制

一、实验目的

学习了解微生物生长量测定的方法

学习了解细菌生长曲线的绘制方法

学习掌握血细胞计数板的使用方法

（一）微生物生长量的测定

计数法重量法生理指标法

1、显微镜直接计数法

（1）利用血细胞计数板计数

（2）涂片计数

2、活菌菌落计数法

3、滤膜法

（二）细菌生长曲线

将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线（growthcurve）

篇二：细胞生长曲线的测定

细胞生长曲线的测定

一、实验目的

掌握测定细胞生长曲线的方法。

二、实验器具

24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。

三、实验方法

1.培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。

细胞培养与生长测定

【结果分析】 1. 正常细胞不被着色。细胞死亡后，细胞膜通透性增加，台盼蓝进入细胞内，故细胞呈蓝色。 2. 细胞活力（%）=（细胞总数-着色细胞数） /细胞总数×100%
注意事项
1. 如果含有台盼蓝的细胞悬液放臵时间过长，正常细胞可摄取染料，从而影响染色结果。 2. 台盼蓝染色法是一种粗略的检测存活细胞的方法，不能准确的反映细胞活性的差异。因此，应使用MTT比色法或凋亡检测法评价细胞活性或检测早期凋亡细胞。
冷冻保存温度
冷冻保存温度是指能长期保存细胞的超低温度，在此温度下，细胞生化反应极其缓慢甚至停止，但经过长期保存，在复苏后仍能保持正常的结构和功能。 1. 从实际和效益的观点出发，液氮温度（-196 ℃ ）是目前最佳的冷冻保存温度。在-196 ℃ 时，细胞的生命活动几乎完全停止，但复苏后细胞的结构和功能完好。 2. 如果冷冻过程得当，一般生物样品在-196 ℃ 下均可保存十年以上。 3. 应用-70 ℃ ～-80 ℃保存细胞，短期内对细胞的活性无明显影响，但随着冻存时间延长，细胞存活率明显降低。 4. 在冰点到-40 ℃范围内保存细胞的效果不佳。
【操作程序】 1. 计算细胞密度2次，得出细胞密度平均值。然后，将细胞悬液等量加入培养板的每个孔中，培养时间计为0天。 2. 每隔24小时吸去3个孔的培养液，加入消化液，混悬细胞，计算细胞数目。每个孔计数2次，得出细胞密度平均值。 3. 连续7天，绘制细胞生长曲线，横坐标为培养时间，纵坐标为细胞密度。

深圳大学MTT比色法测定细胞生长曲线细胞生长曲线拟合及细胞群体倍增时间的简化计算共20页文档

，因此可根据光吸收值推算出活细胞的数目。
•
由于死细胞中不含琥珀酸脱氢酶，因此加入
MTT 不会有反应。
•
• 1.标准曲线的测定:
•
例如：用培养液将待检细胞重悬，得到
细胞悬液，按照4x10^4/ml细胞密度梯度 ,分
别接种于 96孔板 ,每孔 100μl,重复 3孔;采用
MTT法测量吸光值A值,同一浓度下测得的A值
氮唑溴盐
• 商品名：噻唑蓝，是一种黄颜色的染料。
•
活细胞的线粒体中琥珀酸脱氢酶能够使外源性
的MTT还原，同时在细胞色素C 的作用下，生成不
溶于水的蓝色（或蓝紫色）络合物甲臜。
•
按照时间间隔，通过酶联免疫检测仪在490nm
（或570nm）波长处测定甲臜的光吸收值（A值）
。
•
在通常情况下，甲臜生成量与活细胞数成正比
t(2 4 h (L g 2 /b ((t t0 )L g 2 )
t[24h( Lg 2 / (bgt gLg 2)]
24h/b
• 结果
• 曲线一.
•
b=0.855
T d24h/b28.070h
• 曲线二. • b=0.921
T d24h/b26.059h
THANK YOU
1.MTT比色法测定细胞生长曲线
细胞生长曲线
• 细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。

细胞生长曲线的测定

（一）细胞生长曲线的测定（细胞计数法）

2．根据细胞计数结果按每个小方瓶5×104／mL作传代培养接种细胞，共接种21瓶细胞。

3．24 h后开始计数细胞，以后每隔24 h计数一次，每次取3瓶细胞，分别进行计数。计算平均值。连续计数7 d。

4．根据细胞计数结果，以单位细胞数(细胞数／mL)为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。(细胞计数方法请参照实验三)

(二)细胞生长曲线测定(MTT法) 1．制备1 mL细胞悬液。空白对照以1 mL培养基代替细胞悬液。加入0．1 mL MTT于37℃孵育4 h。使MTT还原为蓝紫色甲月赞结晶。

2．加1 mL DTW脱色液，37℃至少静置30 min(甚至过液)，使甲质颗粒充分溶解。

3．吸取200 μL该溶解液至96孔板孔中，在酶标仪上读取OD值，检测波长570 nm，参考波长630 nm。

4．每隔24 h测量一个点，每个点为3个平行样品的平均值。

（二）细胞蛋白电泳

一.细胞总蛋白抽提细胞裂解液

三去污裂解液:50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0)，150 mmol/L NaCl，0.2 g/L叠氮钠，1 g/LSDS，100 mg/L Aprotin，10 g/L NP-40，5 g/L去氧胆酸钠，100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF)

总蛋白抽提程序：

1.PBS洗细胞3 次

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