实验：计数法测定细胞生长曲线
细胞生长曲线的绘制实验报告
细胞生长曲线的绘制实验报告篇一：实验五微生物生长量的测定及生长曲线的绘制一、实验目的学习了解微生物生长量测定的方法学习了解细菌生长曲线的绘制方法学习掌握血细胞计数板的使用方法微生物生长量的测定计数法重量法生理指标法1、显微镜直接计数法利用血细胞计数板计数涂片计数2、活菌菌落计数法3、滤膜法细菌生长曲线将单细胞细菌接种到恒定容积的液体培养基中，不补充营养物或移去培养物，细菌以二分裂方式繁殖，以时间为横坐标，细菌数目的对数值为纵坐标，可画出一条反映细菌在整个培养期间菌数变化规律的曲线，称为生长曲线篇二：细胞生长曲线的测定细胞生长曲线的测定一、实验目的掌握测定细胞生长曲线的方法。
二、实验器具24孔细胞培养板、微量加样器、eppendorf管、吸头、吸头盒、显微镜、细胞计数板、载玻片、盖玻片、吸管、试管架、普通显微镜、细胞悬液、0.4%台盼蓝。
三、实验方法1. 培养细胞：首先在24孔细胞培养板内分别接种相同数量的细胞，计数并记录接种的细胞悬液密度，接种时间记为0小时。
2. 计数细胞密度：从接种时间算起，每隔24小时计数3孔的细胞密度，算出平均值。
为提高准确率，对每孔细胞可计数2-3次，如此操作至第七天结束。
3. 绘制曲线：以培养时间为横坐标、细胞密度为纵坐标，将全部结果在坐标纸上绘图，即得所培养细胞的生长曲线。
篇三：MTT法绘制生长曲线实验材料：1，5%FBS-L-DMEM, 5x104个/ml细胞悬液，5mg/mlMTT溶液，DMSO,0.01M PBS,2, 96孔板共7个,酶标仪,50ml离心管，1.5ml离心管，0.22μm滤膜，锡箔纸，MTT工作液实验步骤：1，分别选取生长良好的P1、P3、P5代BMSCs消化后制备成细胞悬液，调整细胞密度为5x104/ml。
接种到96孔板，每孔接种200μl 细胞悬液进行培养。
2，培养16-48后，每天选择6个培养孔各自加入MTT溶液20μl，37℃继续孵育。
微生物实验报告：测定细菌生长曲线
测定细菌生长曲线一、实验目的1．了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2．学习液体培养基的配制以及接种方法；3．反复练习无菌操作技术；4．了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5．掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；二、实验原理将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。
单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。
不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。
本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示，其计算公式为：G＝（t2-t1）/[(lgW1-lgW2)/lg2]式中t2和t1为所取对数期两点的时间，W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。
三、实验器材大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基；取液器(5000ul, 1000ul 各一支)，无菌1000ul吸头若干，无菌5000ul吸头若干，比色皿10个及共用参比杯一个，培养箱3台，722s分光光度计；四、实验步骤1．活化菌种将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块；2．接种6人大组分为3个小组，按表1接种。
细胞计数及活力测定
2．细胞活力 ①将细胞悬液以0.5ml加入试管中。 ②加入0.5ml 0.4%台盼兰染液，染色2一3分钟。 ③吸取少许悬液涂于载玻片上，加上盖片。 ④镜下取几个任意视野分别计死细胞和活细胞数， 计细胞活力。 死细胞能被台盼兰染上色，镜下可见深兰色的细胞， 活细胞不被染色，镜下呈无色透明状。另外，活力 测定可以和细胞计数合起来进行，但要考虑到染液 对原细胞悬液的加倍稀释作用。
【作业与思考题】
1．根据实验结果，画出生长曲线。 2．试述用MTT法测定细胞生长曲线的过程及注意事项。 3．细胞接种的密度与细胞生长曲线的测量结果之间有 什么关系？ 4．为什么细胞计数时，细胞悬液逸出槽外时要重做？
Experiment 18
细胞计数及活力测定
【实验目的】
1．练习进行细胞计数，并用细胞计数法绘制生长 曲线，以了解培养细胞的生长发育特性 2．掌握测定细胞活力的方法
【实验目的】
培养的细胞在一般条件下要求有一定的密度才能生长 良好，所以要进行细胞计数。计数结果以每毫升细胞数表示。 细胞计数的原理和方法与血细胞计数相同。 在细胞群体中总有一些因各种原因而死亡的细胞，总 细胞中活细胞所占的百分比叫做细胞活力，由组织中分离细 胞一般也要检查活力，以了解分离的过程对细胞是否有损伤 作用。复苏后的细胞也要检查活力，了解冻存和复苏的效果。 用台盼兰染细胞，死细胞着色，活细胞不着色，从而 可以区分死细胞与活细胞。利用细胞内某些酶与特定的试剂 发生显色反应，也可测定细胞相对数和相对活力。
【注意事项】
1．细胞计数时的注意事项 ①消化单层细胞时，务求细胞分散良好，制成单个细胞悬液。否则 会影响细胞计数结果。 ②取样计数前，应充分混匀细胞悬液。在连续取样计数时尤应注意 这一点。否则，前后计数结果会有很大误差。 ③镜下计数时，遇见2个以上细胞组成的细胞团，应按单个细胞计数。 如细胞团占10%以上，说明消化不充分。 ④细胞数少于200个/10mm2或多于500个/10mm2时，说明稀释不当， 需重新制备细胞悬液。 ⑤在计数板上盖玻片的一侧加微量细胞悬液时，加液量不要溢出盖 片，也不要过少或带气泡。 ⑥在计数过程中，对大方格的边缘压线细胞应按数上不数下，数左 不数右的原则进行计数。 2．MTT法的原理是测定细胞线粒体琥珀酸脱酶的活性，反映的是细 胞代谢和增殖活力，而非绝对的细胞数量。
细胞生长曲线实验步骤
细胞生长曲线实验步骤一、准备细胞与培养基1.选择适宜于实验的细胞系，并确保细胞状态良好，无污染。
2.准备所需的培养基，按照说明书进行配制，并在使用前进行无菌过滤处理。
3.准备所需的无菌器械、吸管、离心管等。
二、接种细胞至培养板1.在无菌操作台上，用无菌吸管吸取适量的细胞悬液。
2.将细胞悬液均匀接种至培养板中，每个孔内的细胞数量应保持一致。
3.将接种好的培养板放入培养箱中，设置适宜的温度、湿度和二氧化碳浓度。
三、定时观察与计数1.在接种后的不同时间点（如每天或每24小时）观察细胞的生长情况。
2.使用倒置显微镜观察细胞的贴壁生长和形态变化，以及细胞数量的变化。
3.在特定时间点，使用血细胞计数板或自动细胞计数器对细胞进行计数。
四、记录数据1.将每次观察和计数的结果详细记录下来，包括细胞数量、形态变化等。
2.记录实验过程中的温度、湿度、二氧化碳浓度等环境参数。
五、绘制生长曲线1.根据记录的数据，以时间为横轴，细胞数量为纵轴，绘制细胞生长曲线图。
2.生长曲线应反映出细胞数量随时间的变化趋势。
六、数据分析1.分析生长曲线，计算细胞的倍增时间、生长速率等参数。
2.比较不同条件下的细胞生长情况，分析影响细胞生长的因素。
七、清洗与消毒1.实验结束后，将使用过的器械、培养板等进行清洗和消毒处理。
2.清洗可使用去离子水或清洗剂，消毒可使用75%酒精或紫外线照射等方法。
八、实验总结1.总结实验过程中的经验教训，分析可能存在的误差来源。
2.根据实验结果，提出改进实验方法的建议或对未来研究方向的展望。
请注意，以上步骤仅为一般性的细胞生长曲线实验步骤，具体实验过程可能因细胞类型、实验条件等因素而有所不同。
在实际操作中，请遵循实验室的安全规定和操作规程，确保实验结果的准确性和可靠性。
细胞生长状况有关指标的检测方法
细胞生长状况有关指标的检测方法一、细胞计数这是细胞培养中常用的基本技术之一。
所用材料为细胞计数板。
巴氏吸管和显微镜。
步骤如下。
l 取清洁计数板和专用盖玻片，用丝绸布轻轻擦干。
l 取细胞悬液0.3ml，加入0.9结晶紫染液，混匀后滴半滴于细胞计数板内，以充满不外溢为宜。
也可直接将细胞悬液在一侧滴加到盖玻片中，不要溢出，也不要过少或出现气泡。
l 在显微镜下用10X物镜观察计数四角大方格中的细胞数。
代入下式得出细胞密度。
细胞数（ml）=（4大格细胞数之和/4）×104×稀释倍数台盼蓝染色法可计算出活细胞和死细胞数以测定细胞存活百分率。
一般0.5%-1.0%的台盼蓝染液可使死细胞染成蓝色，活细胞不着色。
此外还可用0.02%的藻红b染液将死细胞或受损细胞染成红色，或用0.05%的苯胺黑染液将死细胞染成黑丝。
细胞存活率=[4大格活细胞数/（4大格活细胞数+4大格死细胞数）]×100%在进行细胞计数操作时，必须把细胞悬液准备好，细胞应分散良好，并充分混匀，若出现较多细胞团或细胞数少于200个/10mm2或多于500个/100mm2时，需重制细胞悬液，重新计数。
二、细胞生长曲线和生长倍数细胞生长曲线是细胞培养实验中最基本的指标，是测定细胞绝对增值数值和生长繁殖基本规律常用的简便方法。
常用的方法为：在同一规格的培养瓶中，接种等量的同一代细胞，经培养后每隔24h取出几瓶细胞进行计数，以培养时间为横坐标，不同时刻的细胞数的对数为纵坐标，标出各点并连成线，即为该细胞的生长曲线，可反映出细胞生长的动态。
测定生长曲线的另一种方法是用96孔/24孔细胞培养板，分7组，每组3孔，培养1周（7天），期间逐日检测一组，计数，最后把7天中的细胞数值绘成图，即为细胞生长曲线。
也可采用MTT法来进行生长曲线测定。
标准的细胞生长曲线近似“S”形，一般在传代后第一天细胞数有所减少，经过一段时间的潜伏期，再进入对数生长期，达到平台期后生长稳定，最后衰老。
细胞计数PPT
—— 细胞培养组：孟竺（指导：丁一）
细胞计数板
一、实验原理 当待测细胞悬液中细胞均匀分布时，通过测定一定体积悬液中的细胞 数目，即可算出每毫升细胞悬液中的细胞数目 二、构造 计数区： 细胞计数板中间的一个大方格，长和宽各为1mm，深度0.1mm， 体积0.1mm3 两种规格： 1）计数区分为16个大方格（大方格用三线隔开），每个大方格分成25 个小方格 2）计数区分成25个大方格（大方格之间用双线分开），每个大方格分 成16个小方格 每一个大方格均由16*25=25*16=400个小方格组成
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
MTT比色法操作步骤
一、实验原理 活细胞线粒体中的琥珀酸脱氢酶能使外源性MTT还原为水不溶性的蓝 紫色结晶甲瓒（Formazan）并沉积在细胞中，而死细胞无此功能。 DMSO能溶解细胞中的甲瓒，用酶联免疫检测仪在490nm波长处测定 其光吸收值，可间接反映活细胞数量。在一定细胞数范围内，MTT结 晶形成的量与细胞数成正比 二、实验材料 试剂： MTT、DMSO、DMEM、PBS
材料： 15mL离心管、1.5mL EP管、1mL和200μL枪头、排槽
仪器： 超净台、CO2培养箱、显微镜、离心机、单道及八道移液枪、 细胞计数板，酶标仪等
三、操作步骤
1）接种细胞：细胞悬液，每孔1000-10000个/200ul胞接种到96孔板， 设5个复孔。加100ul培养液在垂直悬空加100ul细胞悬液 2）分组给药：分阴性对照组（K）、阳性对照组（E2）、给药组 （10-4~10-9） 3）培养细胞：同一培养条件，培养3~5天 4）呈色：培养后，20ul/孔 5mg/ml MTT溶液。继续孵育4 h，终止培 养，小心吸弃孔内培养上清液，每孔加150ul DMSO，脱色摇床振荡 10min，使结晶物充分融解。 5）比色：选择490nm波长，在酶联免疫监测仪（预热30min）上测定 各孔光吸收值，SPSS分析数据
细胞生长曲线的测定
（一）细胞生长曲线的测定（细胞计数法）1．取生长良好接近汇合的细胞，用胰酶消化，用新培养基制成细胞悬液后计数(见四、细胞传代培养的实验步骤)。
如是非粘壁细胞，则离心弃旧培养基后，换上一定量的新鲜培养基然后制成细胞悬液计数。
2．根据细胞计数结果按每个小方瓶5×104／mL作传代培养接种细胞，共接种21瓶细胞。
3．24 h后开始计数细胞，以后每隔24 h计数一次，每次取3瓶细胞，分别进行计数。
计算平均值。
连续计数7 d。
4．根据细胞计数结果，以单位细胞数(细胞数／mL)为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。
(细胞计数方法请参照实验三)(二)细胞生长曲线测定(MTT法) 1．制备1 mL细胞悬液。
空白对照以1 mL培养基代替细胞悬液。
加入0．1 mL MTT于37℃孵育4 h。
使MTT还原为蓝紫色甲月赞结晶。
2．加1 mL DTW脱色液，37℃至少静置30 min(甚至过液)，使甲质颗粒充分溶解。
3．吸取200 μL该溶解液至96孔板孔中，在酶标仪上读取OD值，检测波长570 nm，参考波长630 nm。
4．每隔24 h测量一个点，每个点为3个平行样品的平均值。
（二）细胞蛋白电泳一.细胞总蛋白抽提细胞裂解液三去污裂解液:50 mmol/L Tris-cl (pH 8.0)，150 mmol/L NaCl，0.2 g/L叠氮钠，1 g/LSDS，100 mg/L Aprotin，10 g/L NP-40，5 g/L去氧胆酸钠，100 mg/L 苯甲基磺酰氟(PMSF)总蛋白抽提程序：1.PBS洗细胞3 次2.加入裂解缓冲液（1.5x10 6 个细胞大约加入100µL 裂解液，或100ml细胞瓶中加入100µL 裂解液），冰上放置20min3.收集裂解液4.离心，12000转，2~10min5.吸取上清，蛋白定量，分装，保存在-78度备用。
试剂：1. 30% 聚丙烯酰胺：29g 丙烯酰胺，1g N,N'-亚甲双丙烯酰胺，100ml 水，0.45um 滤膜过滤，棕色瓶，室温保存2. 10% 过硫酸铵：1g 过硫酸铵，10ml 水，4℃保存3. 10% SDS：100g SDS，1000ml 水，68℃助溶，pH 7.24. TEMED：lml TEMED，99ml 水，棕色瓶，4℃保存5. 5X Tirs-甘氨酸电泳缓冲液：15.1g Tirs碱，94g 甘氨酸，50ml 10%SDS，1000ml 水，使用时配制成1X【操作步骤】l.将电泳槽玻璃板洗净，吹干，安装好；2.用1％的琼脂糖电泳缓冲液（1g琼脂糖溶于100ml电泳缓冲液）封严玻璃板的边和底（保证不漏胶）；3.配分离胶，将配好的分离胶立即倒入凝胶槽内，至凝胶槽高三分之二处，加入蒸馏水密封。
细胞增殖凋亡检验方法汇总
细胞增殖、凋亡-检测方法汇总1.直接计数法面单粗暴、傻瓜式的检查方法！利用计数板或计数仪得出细该数目•然后对数目逬行比较。
方法需要对不同时间原的细胞分别固定•而后在光疑下计数,可绘制出细胞生长曲线。
而具不足之处在于无法区分壇蓿细胞与非增殖抵胞，下适合样品奴星參和评估特定亚群的情况。
2「H・TdR渗入法OH腺龜碇核百(TdR )是DNA持有的滅基「也是DNA合成的必需物氐用同位素中标记TdR即3H-TdR作为DNA合成的前体渗入DNA合成代谢过程,通过液体闪烁计数器可迴走细胞的放射性强虐，间接放映出细胞增殖情况。
该方法优点在于敏感性高”客观性强,盍每性好.但是爲要一走设备集件，也存在放时性核素污染问题。
3、Brdu/EdU检测法Brdu&EdU均是胸腺嚅睫的衍生物r均可代替胸腺嚅噪在DNA合成期掺入细胞中。
不同的是J Brdu检测法可利用B「du专性抗体和具他細胞标记物对细'进行双重染色,可判断増殖细胞的种类及増殖速度，不仅适用于体外实验也能用于活体实验。
这个方法最大的缺点需要变性DNA才能与抗体结合,破坏了DNA双链结构r导致染色弥散、准确性降低等问题。
EdU检测法则基于EdU与Apollo荧光染料的特异性反应检测DNA复制活性r适用于细胞増殖、细胞标记示踪筈方IEI的研究，尤其适合进行siRNA、miRNA、小分子化合物及其他药物的筛选实验。
EdU检测染料只有BrdU抗体大小的1/500,®田胞内很容易就扩散,无需DNA变性。
rdU与EdU检测优缺点综合比较BrdU EdU 检测分子大很小检测方式免疫反应化学反应影响其他标记是否DNA变性需要不需要实验时间过夜 2.5小时检测灵敏度一般灵敏4、WITT检测法&CCK8检测法MTT检测法反映细胞的能臺代谢「是检测细胞増殖活力的一种简便准确方法°其原理是在活纟田胞生长和增殖过程中,线粒体内的脱氢酶可将黄色的MTT分解为蓝紫色的水不溶性的甲瓒(Formazan ),并沉积在细胞中(死细胞无此功能。
克隆形成实验
创作编号：GB8878185555334563BT9125XW创作者：凤呜大王*克隆形成实验细胞生长状况有关指标的检测方法一、细胞计数这是细胞培养中常用的基本技术之一。
所用材料为血球计数板，巴氏吸管和显微镜。
细胞计数的基本步骤：(1)取清洁计数板和专用盖玻片，用丝绸布轻轻拭干.(2)取细胞悬液0.3mL，加入0.9mL结晶紫(或台盼至)染液，混匀后滴半滴于血球计数板内，以充满不外溢为宜。
也可直接将细胞悬液在一侧滴加到盖玻片中，不要溢出，也不要过少或出现气泡. (3)在显微镜下用10×物镜观察计数四角大分格中的细胞数。
代入下式得出细胞密度。
细胞数/ml=(4大格细胞数之和/4)×104×稀释倍数台盼蓝染色法可计算出活细胞数和死细胞数以测定细胞存活百分率。
一般0.5%～1%的台盼蓝染液可使死细胞染成蓝色，活细胞不着色。
此外还可用0.02%的藻红B染液将死细胞或受损细胞染成红色，或用0.05%的苯胺黑染液将死细胞染成黑色。
细胞存活百分率=（4大格活细胞数/4大格活细胞+死细胞数）×100%细胞计数除用上述方法外，目前还有新型的自动计数仪，可供大规模细胞计数工作使用。
各种型号的计数操作不尽相同，可根据使用说明进行操作。
在进行细胞计数操作时，必须把细胞悬液准备好，细胞应分散良好，并充分混匀，若出现较多细胞团或细胞数少于200个/10mm2或多于500个/10mm2时，需重制细胞悬液，重新计数。
二、细胞生长曲线和生长倍数细胞生长曲线是细胞培养实验中最基本的指标，是测定细胞绝对增长数值和生长繁殖基本规律常用的简便方法。
常用的方法为：在同一规格的培养瓶中，接种同等量的同一代细胞，经培养后每隔24小时取出几瓶细胞进行计数，以培养时间为横座标，不同时刻的细胞数的对数为底座标，标出各点并连成线，即为该细胞的生长曲线，可反应出细胞生长的动态。
测定生长曲线的另一种方法是用96孔/24孔细胞培养板，分7组，每组3孔，培养一周(7天)，期间逐日检测一组，计数，最后把7天中的细胞数值绘成图，即为细胞生长曲线。
微生物实验报告：测定细菌生长曲线
测定细菌生长曲线一、实验目的1．了解细菌生长曲线特征，测定细菌繁殖的代时；2．学习液体培养基的配制以及接种方法；3．反复练习无菌操作技术；4．了解不同细菌，不同接种方法在同一培养基上生长速度的不同；5．掌握利用细菌悬液混浊度间接测定细菌生长的方法；二、实验原理将一定量的菌种接种在液体培养基内，在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数做纵坐标，以培养时间做横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。
单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整期（迟滞期）、对数期（生长旺盛期）、平衡期（稳定期）、死亡期（衰亡期）。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的的全过程动态。
不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的。
测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法。
本实验才用比浊法，由于细胞悬液的浓度与混浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的菌液的浓度。
将所测得的光密度值（OD600）与对应的培养时间做图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌和死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示，其计算公式为：G＝（t2-t1）/[(lgW1-lgW2)/lg2]式中t2和t1为所取对数期两点的时间，W1和W2分别为对应时间测得的细胞含量或OD。
三、实验器材大肠杆菌，枯草杆菌菌液及平板；培养基(100mL/250mL三角瓶×10瓶/大组):牛肉膏蛋白胨葡萄糖培养基；取液器(5000ul, 1000ul 各一支)，无菌1000ul吸头若干，无菌5000ul吸头若干，比色皿10个及共用参比杯一个，培养箱3台，722s分光光度计；四、实验步骤1．活化菌种将细菌接种到牛肉膏蛋白胨葡萄糖三角瓶培养基中，37℃振荡培养18h，另外准备单菌落平板各1块；2．接种6人大组分为3个小组，按表1接种。
实验九 测定细菌生长曲线
实验九测定细菌生长曲线实验九测定细菌生长曲线[实验目的] 1(了解细菌生长曲线特征:2(学习液体培养基的配制以及注意事项。
3(学习液体种子和固体种子的不同接种方法和注意事项。
4(利用细菌悬液浑浊度间接测定细菌生长。
[仪器和材料]1(实验材料(1)大肠杆曲，枯草杆曲培养液及大肠杆菌平板。
(2)牛肉膏蛋门胨葡萄糖培养基(150ml,250ml 三角瓶X 4瓶,大组)，配方:牛肉膏5g，蛋白胨10g，NaCl 5g，葡萄糖10g，加水至1000ml，pH7(5。
2(实验仪器取液器(5000μl，1000μl，200tμl 各一支); 培养箱(摇床，722s分光光度汁; 1000μl 无菌吸头100个;5000μl 无菌吸头2个;1ml或4ml玻璃或塑料比色皿4个，共用参比杯一个。
[实验原理]将一定量的细菌接种在液体培养基内(在一定的条件下培养，可观察到细菌的生长繁殖有一定规律性，如以细菌活菌数的对数作纵坐标，以培养时间作横坐标，可绘成一条曲线，称为生长曲线(图9 1)。
单细胞微生物发酵具有4个阶段，即调整(迟滞期)、对数期(生长旺盛期)、平衡期(稳定期)、死亡期(衰亡期)。
生长曲线可表示细菌从开始生长到死亡的全过程动态。
不同微生物有不同的生长曲线，同一种微生物在不同的培养条件下，其生长曲线也不一样。
因此，测定微生物的生长曲线对于了解和掌握微生物的生长规律是很有帮助的(测定微生物生长曲线的方法很多，有血细胞计数法，平板菌落计数法，称重法和比浊法等。
本实验采用比浊法测定，由于细菌悬液的浓度与浑浊度成正比，因此，可以利用分光光度计测定菌悬液的光密度来推知菌液的浓度。
将所测得的光密度值(测OD550或 OD620或OD600或OD420，可任选一波长)与对应的培养时间作图，即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线。
注意，由于光密度表示的是培养液中的总菌数，包括活菌与死菌，因此所测生长曲线的衰亡期不明显。
从生长曲线我们可以算出细胞每分裂一次所需要的时间，即代时，以G表示。
实验八 细菌生长曲线的测定及【内容充实】
实验八细菌生长曲线的测定及血球计数板测定微生物生长一、细菌生长曲线的测定及★细菌的生长曲线就是把一定量的菌体细胞接种到恒容积的液体培养基中，在适宜的条件下进行培养，在此过程中，其细胞数目将随培养时间的延续而发生规律性的变化，如以细胞数目的对数值(或O.D.值)为纵坐标，以培养时间为横坐标作一条曲线，即为细菌的生长曲线，它反映了细菌的群体生长规律。
★大多数细菌的繁殖速率很快，在合适的条件下，一定时期的大肠杆菌细胞每20min分裂一次。
★依据其生长速率的不同，可把细菌的生长曲线划分为延滞期，对数期，稳定期和衰亡期等四个时期。
★微生物OD值是反映菌体生长状态的一个指标，OD是optical delnsity（光密度）的缩写，表示被检测物吸收掉的光密度。
通常400～700nm 都是微生物测定的范围，505nm测菌丝菌体、560nm测酵母、600nm测细菌。
★本实验测定细菌生长曲线的方法是，将待测菌种接入一只大试管的培养液中，在适宜的培养温度和良好的通气状态下，定时取出此试管，在600纳米波长处测定菌液浓度(O．D．值)，在一定的范围内，菌液浓度与光密度值成线性关系。
因此，根据菌液的O．D．值可以推知细菌生长繁殖的进程。
将所测得的一组O．D．值与其相应的培养时间作图，即可绘制出该菌的生长曲线。
☆实验操作1、菌种培养：取大肠杆菌斜面菌种1支，以无菌操作挑取1环菌苔，接入肉膏蛋白胨培养液（LB）中，静止培养12--14h，备用。
2、制备LB培养基100ml置于200ml三角瓶内，备用。
3、标记：取11支无菌大试管，用记号笔分别标明培养时间，即0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h。
4、接种：分别用5ml无菌吸管吸取5ml大肠杆菌培养液(培养12~14h)转入盛有100ml LB液的三角瓶内，混合均匀后分别取5ml混合液放入上述标记的11支无菌大试管中。
5、培养：将已接种的试管置摇床37℃振荡培养(振荡频率250r/min)，分别培养0、1.5、3、4、6、8、10、12、14、16和20h，将标有相应时间的试管取出，立即放冰箱中贮存，最后一同比浊测定其光密度值。
微生物生长曲线的制作及特点
主讲人：杨雪璇
什么是微生物的生长曲线？
微生物生长曲线是以微生物数量（活细菌个数或细 菌重量）为纵坐标，培养时间为横坐标画得的曲线。 一般说，微生物（细菌）重量的变化比个数的变化更 能在本质上反应出生长的过程。曲线可分为三个阶段 即生长率上升阶段（对数生长阶段）、生长率下降阶 段及内源呼吸阶段。
指数期 稳定期 衰亡期
细胞分裂（生长）最快，细胞进行平衡生长，酶系活跃，代谢旺盛。生 长速率由营养成分和培养条件决定。
新繁殖的细胞与死亡细胞数目相等，菌体产量达到最高，细胞开始储藏 糖原、脂肪等储藏物，产芽孢的开始形成芽孢，开始合成次生代谢产物。 可能由于营养物的消耗或抑制生长的代谢产物积累，细胞停止增殖，但 仍存活。
特点：生长速率最快、代谢旺盛、酶系活跃、活细 菌数和总细菌数大致接近、细胞的化学组成形态理化 性质基本一致。
成因:经过调整期的准备，为此时期的微生物生长 提供了足够的物质基础，同时外界环境也是 最佳状态。
特点：活细菌数保持相对稳定、总细菌数达到最高 水平、细胞代谢产物积累达到最高峰、是生产的收获 期、芽孢杆菌开始形成芽孢。
1)接种：取13支装有牛肉膏蛋白胨培养液的试管， 贴上标签，按无菌操作法用吸管向每管准确加入 0.2mL的大肠杆菌培养液，接种后，轻轻摇荡，使菌 体混匀。另一支不接种的培养管用作对照。
2)培养：将接种后的培养管置于摇床上，在37℃下 振荡培养。其中9支培养管分别于培养的0、1．5、3、 4、6、8、10、12和14h后取出，放冰箱 中贮存。
微生物生长曲线的特点？
典型的微生物生长曲线包括四个时期：迟缓期、 对数期、稳定期、衰亡期。
下面我带大家依次了解一下这四个时期的特点以 及形成的原因。
细胞生长曲线的测定
细胞生长曲线的测定细胞生长曲线是测定细胞绝对生长数的常用方法，也是判定细胞活力的重要指标，是培养细胞生物学特性的基本参数之一。
一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮然后贴壁，随后度过长短不同的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期。
在细胞达到饱和密度后，停止生长，进入平顶期，然后退化衰亡。
为了准确描述整个过程中细胞数目的动态变化，典型的生长曲线可分为生长缓慢的潜伏期，斜率较大的指数生长期，呈平台状的平顶期及退化衰亡4个部分。
以存活细胞数(万／mL)对培养时间(h或d)作图，即得生长曲线。
测定细胞生长曲线有三种常用的方法，计数法、MTT法和CCK-8法，下面就这几种常用方法做详细说明。
计数法1．取对数生长期细胞，用胰酶消化收集，调整单细胞悬液密度为104~105/mL视细胞贴壁后的大小，倍增时间等因素确定接种密度。
根据需要接种到96或24孔板中，每天每组三复孔，切记各孔的接种密度一致2．置37℃、5％CO2气相和饱和湿度的CO2培养箱中培养3．24 h后开始计数细胞，以后每隔24 h计数一次，计算平均值，连续计数7 d4．根据细胞计数结果，以单位细胞数(细胞数／mL)为纵坐标，以时间为横坐标绘制生长曲线。
MTT法1．取对数生长期细胞，用胰酶消化收集，调整单细胞悬液密度为104~105/mL视细胞贴壁后的大小，倍增时间等因素确定接种密度。
根据需要接种到96或24孔板中，每天每组三复孔，切记各孔的接种密度一致2．置37℃、5％CO2气相和饱和湿度的CO2培养箱中培养3．24 h后开始检测细胞生长情况，制备1 mL细胞悬液。
空白对照以1 mL培养基代替细胞悬液。
加入0．1 mL MTT于37℃孵育4 h，使MTT还原为蓝紫色甲月赞结晶4．加1 mL DTW脱色液，37℃至少静置30 min(甚至过液)，使甲质颗粒充分溶解5．吸取200 μL该溶解液至96孔板孔中，在酶标仪上读取OD值，检测波长570 nm，参考波长630 nm。
实验4测定细菌生长曲线
一、实验目的
1.了解细菌生长曲线的特征，认识微生物在一定条 件下生长繁殖的规律。
2.掌握用细菌悬液的浑浊度间接测定细菌生长的方 法。
3.学习液体培养基的配制及接种方法。
二、 实验内容
测定大肠杆菌、枯草杆菌的生长曲线
三、实验原理
将一定量的细菌接种在液体培养基内，一定条件 下培养，细菌的生长繁殖具有一定的规律性。 以细菌活菌数的对数作纵坐标，培养时间作横坐 标，可绘成一条曲线，称为生长曲线。
测定（OD）
每小时吸取200ul培养液到2800ul蒸馏水中摇匀， 以蒸馏水为对照，选420nm波长进行光密度（OD值） 的测定（注意应测定0h的光密度值）。
每台分光光度计固定在1个参比杯，每人只能在同 一台分光光度计上测量（注意波长调好后，不要动 波长旋钮）。
六、结果与讨论
1）绘制大肠杆菌和枯草杆菌在两种接种方法下的生长曲线。 （标出生长曲线中四个时期的位置和名称） 2）为什么用比浊法测定的细菌生长只是表示细菌的相对生长 状况？ 3）生长曲线中为什么会出现稳定期和衰退期？在生产实践中 怎样缩短延迟期？怎样延长对数期及稳定期？怎样控制衰退期？ 4）接种时种子在什么条件下为宜，液体种子比斜面种子为什 么优越？
• 将所测的光密度值（OD）与其对应的培养时间作图， 即可绘出该菌在一定条件下的生长曲线（注意：由于 光密度表示的是培养液的总数，包括活菌与死菌所测 的生长曲线衰亡期不明显）。
微生物的典型生长曲线图 Ⅰ.延滞期，Ⅱ.指数期，Ⅲ.稳定期，Ⅳ.衰亡期
四、实验仪器、材料和用具
仪器： 摇床、分光光度计、取液器。
微生物材料 大肠杆菌菌液、枯草杆菌菌液
培养基 肉汤蛋白胨液体培养基
用具 玻璃比色皿，三角瓶，酒精灯，接种环。
显微镜直接计数法实验报告
显微镜直接计数法实验报告实验报告：显微镜直接计数法一、实验目的本实验旨在通过显微镜直接计数法，测定微生物样品中细胞的数量，以了解其生长和繁殖情况，为生物工程、生物医学、环境科学等领域的研究提供依据。
二、实验原理显微镜直接计数法是一种通过显微镜直接观察并计数样品中微生物数量的方法。
该方法具有操作简便、快速等优点，适用于测定样品中微生物的数量和生长情况。
通过显微镜直接计数法，可以观察到微生物的形态、大小、分布等情况，从而对其生长环境、生长状况等进行评估。
三、实验步骤1.样品制备：将待测样品进行适当稀释，使微生物细胞分散均匀。
2.显微镜观察：将样品滴加到显微镜载玻片上，用盖玻片固定，调整显微镜焦距，观察并计数微生物的数量。
3.计数方法：采用直接计数法，即直接观察并计数样品中的微生物数量。
对于压在盖玻片下的细胞，可以通过轻轻移动盖玻片进行观察和计数。
4.数据记录：记录每个样品中微生物的数量，并计算平均值。
同时记录观察到的细胞形态、大小、分布等情况。
5.结果分析：根据实验数据，分析微生物的生长情况、繁殖速度等。
四、实验结果及数据分析1.实验数据（见附表1）附表1：显微镜直接计数法实验数据2.数据分析通过附表1的数据，我们可以得出以下结论：（1）样品A中微生物的数量较少，而样品B、C、D中微生物的数量较多。
这表明不同样品中微生物的数量存在差异。
（2）在相同稀释倍数下，观察到的细胞数越多，计数结果越准确。
因此，选择合适的稀释倍数对于准确测定微生物数量至关重要。
在本实验中，选择100倍和1000倍作为稀释倍数，可以较为准确地测定微生物数量。
（3）通过对比不同样品在同一稀释倍数下的计数结果，可以得出不同样品中微生物的生长情况。
例如，样品B和D在1000倍稀释下的计数结果较高，说明这两个样品中微生物的生长情况较好。
而样品A和C在100倍稀释下的计数结果较低，说明这两个样品中微生物的生长情况较差。
（4）根据实验数据，可以进一步分析微生物的生长规律和繁殖速度。
生物计数方法
生物计数方法
生物计数方法是生物学研究中常用的一种方法，它可以用来测量生物体的数量、密度、分布等。
生物计数方法的应用范围非常广泛，包括生态学、微生物学、植物学、动物学等领域。
本文将介绍几种常用的生物计数方法。
1. 直接计数法
直接计数法是最简单、最直接的生物计数方法。
它适用于生物体数量较少的情况，如细胞、微生物等。
直接计数法的原理是将待测生物体分散在一个已知面积的载玻片上，然后在显微镜下直接计数。
这种方法的优点是简单易行，但缺点是需要显微镜和高度训练的技术人员，而且对于数量较多的生物体不适用。
2. 间接计数法
间接计数法是通过测量生物体的某些特征来推算数量的方法。
这种方法适用于数量较多的生物体，如细菌、微藻等。
常用的间接计数方法包括：
（1）光密度法：利用生物体的吸光度与浓度成正比的关系，通过测量生物体的吸光度来推算数量。
（2）荧光法：利用生物体的荧光强度与浓度成正比的关系，通过测量生物体的荧光强度来推算数量。
（3）生长曲线法：利用生物体在培养基中的生长规律，通过测量生物体的生长曲线来推算数量。
3. 样带法
样带法是一种适用于生态学研究的生物计数方法。
它的原理是在一个已知面积的样带上，记录下样带内所有生物体的数量和种类，然后通过统计分析来推算生物体的密度和分布。
样带法适用于研究生物体的群落结构和生态位分布等问题。
生物计数方法是生物学研究中不可或缺的一种方法。
不同的生物计数方法适用于不同的研究对象和问题，研究人员应根据具体情况选择合适的方法。
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实验内容：计数法测定细胞生长曲线
作者：王卫东实验日期：2001.10.24-2001.10.31
实验目的：学习细胞计数的方法；熟悉测定生长曲线的基本原理、方法，了解其应用。
实验原理：一般细胞传代之后，经过短暂的悬浮后贴壁，随后度过长短不一的潜伏期，即进入大量分裂的指数生长期，在达到饱和密度后，细胞停止
生长，进入平顶期，然后退化衰老。
典型的生长曲线即可分为潜伏期、
指数生长期、平顶期及退化衰老四个部分，其中的三个不同生长时相
（潜伏期、指数生长期和平顶期）是每个细胞系所共有的特征。
通过
测定生长曲线，不仅可以了解培养细胞生物学特性的基本参数、测定
细胞绝对生长数、判断细胞活力，而且也可用于测定药物等外来因素
对细胞生长的影响。
本实验采用计数法测定细胞生长曲线，通过连续
对细胞计数（通常为7d，一般应每次计数3瓶细胞取平均值），然后
以存活细胞数对培养时间作图，即得该种细胞的生长曲线。
仪器、材料和试剂：
1、仪器：CO2培养箱、超净工作台、倒置显微镜、血球计数板
2、材料：培养瓶、试管、吸管、移液管、废液缸、HeLa细胞、盖玻片、酒精灯
3、试剂：培养基（含小牛血清）、0.25%胰蛋白酶
实验步骤：
1、细胞悬液制备：取生长良好接近汇合的HeLa细胞，胰酶消化，再加新鲜培
养基制成细胞悬液后计数。
2、接种：根据细胞计数结果，按每瓶5×104个接种细胞（加3mL培养基，实
际接种每瓶5.9×104个）作传代培养（理论上应该每人接种21瓶细胞，每天取3瓶计数，但实际每人只接种7瓶）。
3、计数：24h后开始作细胞计数，以后每隔24h计数一次，连续计数7天。
4、绘图：根据计数结果，绘制HeLa细胞生长曲线。
结果与讨论：
1、细胞计数结果如下：。