第04章 紫外-可见分光光度计
(完整版)紫外可见分光光度计--原理及使用
应用
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或者酶活。
基本原理
分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即
A= kcl
式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。
组成
各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。
1.光源
在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。
2．单色器
单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。
单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。色散元件常用棱镜和光栅。
3.吸收池
吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。
4、检测器
检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。
5、信号显示系统
常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。
紫外可见分光光度计原理及操作.ppt
A bc
比a更常用。越大，表示方法的灵敏度越高。与波长有关，因 此， 常以表示。
二、紫外-可见分光光度计 结构及类型
UV示意图
仪器结构
紫外 - 可见分光光度计仪器由光源、单色器、吸收池、检测器和数 据系统五部分组成。
一、光源
对光源基本要求：足够光强、稳定、连续辐射且强度随波长变化小。 1. 钨及碘钨灯：340~1500 nm，多用在可见光区；
紫外可见分光光度计原理及操作
潘睿睿
目录
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
紫外-可见分光光度计仪器原理
1
紫外-可见分光光度计结构及类型
2 3
UV-Vis分光光度法的应 用和分析条件的选择
4
UV-Vis分光光度计的保 养与故障处理
一、紫外-可见分光光 度计仪器原理
原理
波长 200 400 800 3200(nm)
g -X-射线
紫外
吸收光谱曲线，可根据吸收光谱上的某些特征波长处的吸光度的高低判别或
测定该物质的含量，这就是分光光度定性和定量分析的基础。 3）紫外分光光度法使用基于朗伯-比耳定律(Lambert－Beer)。
朗伯-比耳定律是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法
定量分析的依据和基础。
朗伯-比耳定律
一、透射率T%
dT d lg T 0.434 bdc T
(完整版)紫外可见分光光度计--原理及使用
应用
分光光度计已经成为现代分子生物实验室常规仪器。常用于核酸、蛋白定量以及细菌生长浓度的定量。我们实验室主要是用来测物质的光度以求得物质的浓度或
者酶活。
基本原理
分子的紫外可见吸收光谱是由于分子中的某些基团吸收了紫外可见辐射光后，
发生了电子能级跃迁而产生的吸收光谱。它是带状光谱，反映了分子中某些基团的信息，可以用标准光谱图再结合其它手段进行定性分析。
朗伯-比尔定律：当一束平行单色光通过含有吸光物质的稀溶液时，溶液的吸光
度与吸光物质浓度、液层厚度乘积成正比，即
A= kcl
式中比例常数k与吸光物质的本性，入射光波长及温度等因素有关。c为吸光物质浓度，l为透光液层厚度。
组成
各种型号的紫外－可见分光光度计，就其基本结构来说，都是由五个基本部分
组成，即光源、单色器、吸收池、检测器及信号指示系统。
1.光源
在紫外可见分光光度计中，常用的光源有两类：热辐射光源和气体放电光源。
热辐射光源用于可见光区，如钨灯和卤钨灯；气体放电光源用于紫外光区，如氢灯和氘灯。
2．单色器
单色器的主要组成：入射狭缝、出射狭缝、色散元件和准直镜等部分。
单色器质量的优劣，主要决定于色散元件的质量。色散元件常用棱镜和光栅。
3.吸收池
吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于紫外区。吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。
4、检测器
检测器的作用是检测光信号，并将光信号转变为电信号。现今使用的分光光度计大多采用光电管或光电倍增管作为检测器。
5、信号显示系统
常用的信号显示装置有直读检流计，电位调节指零装置，以及自动记录和数字显示装置等。
紫外可见分光光度计操作指南说明书
紫外可见分光光度计操作指南说明书
一、引言
紫外可见分光光度计是一种用于测量物质在紫外可见光范围内的吸光度的仪器。本操作指南旨在向用户提供关于紫外可见分光光度计的操作方法、注意事项以及维护保养等方面的详细说明，以帮助用户正确使用仪器并获得准确可靠的测量结果。
二、仪器的组成
1.主机：包含光源、光学系统、检测器等核心部件；
2.配件：包括试样室、光路比色镜、滤光片等辅助部件；
3.控制系统：用于控制和调节仪器的操作模式、参数设置等。
三、操作步骤
1. 准备工作
在使用紫外可见分光光度计之前，确保以下准备工作已完成：
- 仪器通电并预热至稳定状态；
- 检查样品室、光路比色镜、滤光片等配件是否干净并完好；
- 准备好需测量的样品及相关试剂。
2. 仪器启动
按下电源按钮，待仪器启动完成后，进入操作界面。
3. 选择工作模式
根据实际需求选择合适的工作模式，可选择紫外吸收、可见光吸收、浓度计算等模式。
4. 准备样品
取适量的样品并制备成所需浓度。
5. 校准仪器
根据仪器型号和校准要求，进行相应的校准操作，以保证测量结果
的准确性。
6. 设置测量参数
根据样品特性，设置合适的测量波长、光程、初始吸光度等参数。
7. 进行测量
将样品放置于试样室中，调节光程，点击“开始测量”按钮，待测量
完成后，记录下测量结果。
8. 数据处理
根据需要进行数据处理，如计算吸光度差、浓度等。
四、注意事项
1. 实验过程中，请严格按照操作指南进行操作，遵循仪器使用规范；
2. 测量之前请确保仪器处于稳定状态，并进行相关校准和调试；
3. 样品的制备应符合实验要求，保持样品的纯净度和一致性；
紫外-可见分光光度计的正确使用方法
紫外-可见分光光度计的正确使用方法
紫外-可见分光光度计是一种常见的实验室仪器，用于测量化学物质在紫外和可见光区域的吸收光谱。正确使用该仪器需要以下步骤：
一、仪器准备
1. 打开仪器电源，等待仪器自检完成。
2. 打开仪器软件，选择合适的测量模式。
3. 准备好样品，将其转移到透明的石英或玻璃比色皿中。
二、样品测量
1. 将比色皿放入样品室中，调整样品室的位置，使其与光路对齐。
2. 选择合适的波长范围和波长，调整仪器的光路，使其与样品室中的样品对齐。
3. 点击“开始测量”按钮，仪器会自动扫描样品的吸收光谱，并将结果显示在屏幕上。
4. 根据需要，可以保存测量结果或者进行数据处理。
三、仪器维护
1. 每次使用后，应该清洗样品室和比色皿，以防止样品残留影响下次测量。
2. 定期校准仪器，以保证测量结果的准确性。
3. 保持仪器干燥、清洁和安全，防止损坏和事故发生。
以上是紫外-可见分光光度计的正确使用方法，希望对您有所帮助。
紫外可见分光光度计功能详述
紫外可见分光光度计功能详述紫外可见分光光度计（UV-Vis分光光度计）是一种用于研究物质的吸收、透射和反射光谱特性的仪器。它由光源、光栅、样品室、检测器和数据处理单元等组成。以下是对其功能进行详述。
1.宽波长范围：紫外可见分光光度计可以在紫外至可见光范围（190-1100nm）内进行光谱扫描。这个范围涵盖了大部分无机和有机物质的吸收区域，因此可以用于许多领域的应用，例如化学、物理、生物和环境科学等。
2.定量分析：紫外可见分光光度计可以通过测量样品的吸光度来定量分析物质的浓度。它根据比尔－朗伯定律，即吸光度与样品溶液浓度成正比关系，利用这个关系可以推导出样品的浓度。
3.质量控制：在工业生产中，紫外可见分光光度计可以用来监测原料、中间产品和最终产品中的成分变化。通过测量样品吸光度的变化，可以及时探测到质量问题，并从而采取相应措施进行调整。
4.物质识别：每种物质都有其特有的光谱吸收特性。紫外可见分
光光度计可以根据物质的特征光谱图在样品中识别和鉴别物质。这在
犯罪现场分析、药物识别以及食品和饮料检测中具有重要意义。
5.动力学研究：紫外可见分光光度计可以配合温度控制装置，对
吸收光谱在时间上的变化进行实时监测和分析。这使得它在动力学研
究中的应用非常广泛，例如反应动力学、酶动力学和酸碱滴定等。
6.样品稳定性研究：紫外可见分光光度计可以用来评估某个物质
在不同环境条件下的稳定性，例如光照、温度和湿度等。通过对光谱
形状和吸光度的变化进行分析，可以判断物质的稳定性和降解机制。
7.溶液动力学研究：紫外可见分光光度计可以配合流动注射技术，对溶液中吸收光谱的变化进行测量。这在药物溶解度、胶体稳定性和
紫外-可见分光光度计工作原理
紫外-可见分光光度计工作原理
紫外-可见分光光度计（UV-Vis spectrophotometer）是一种用
于测量物质吸光度的仪器。它的工作原理基于比尔-朗伯定律，即吸光度与溶液中物质浓度之间的线性关系。
下面是紫外-可见分光光度计的工作原理：
1. 光源：紫外-可见分光光度计使用可见光或紫外光作为光源。这些光源通常是氘灯（白炽灯带有氘灯或钨灯）、氙灯或者LED等Xe光源。光源发出的宽谱光经过光学系统聚焦形成一
束平行光通过物质样品。
2. 样品室：样品室是光路中的一个空间，用于容纳待测样品。样品可以是液体、溶液或者固体经过适当的预处理后放置在样品室中。待测样品能够吸收一定波长范围内的光。
3. 分光器：分光器将平行进入的光束按照不同的波长进行分离。这通常是通过光栅、光柱或者棱镜等光学元件完成的。分光器可以调节光束的波长范围。
4. 选择性检测器：分光器将不同波长的光分离后，光束通过选择性检测器进行探测。可见光范围内常见的检测器包括光电二极管（Photodiode）和光电倍增管（Photomultiplier tube，PMT），紫外光范围内常用的检测器是具有UV增益的PMT。
5. 数据采集和显示：分光光度计通过检测器获取到的光强度信号通过转换电路转换成电信号，然后将其输入数显器、计算机
等数据采集和显示设备。在数显器上，用户可以观察到吸光度值随波长变化的光谱曲线。
根据比尔-朗伯定律，吸光度与样品中的物质浓度之间有一个线性关系。因此，通过测量样品的吸光度，可以得到物质在不同波长下的吸光度光谱，从而研究物质的颜色、浓度、变化等信息。
紫外—可见分光光度计的原理
紫外—可见分光光度计的原理
紫外—可见分光光度计是一种常用的实验室仪器，用于测量溶液中吸光度的变化。它基于紫外—可见光谱原理，通过测量样品在特定波长下吸收或透过光的能力来确定溶液中物质的浓度。
紫外—可见分光光度计的原理主要涉及三个方面：光源、光路和探测器。
首先，光源是紫外—可见分光光度计的重要组成部分。常见的光源有氘灯和钨灯。氘灯主要发射在紫外区域的光，而钨灯则主要发射在可见区域。根据所需测量的波长范围，可以选择适当的光源。
其次，光路是样品和探测器之间的光传输路径。紫外—可见分光光度计通常包
括一系列的光学元件，如光栅、反射镜和滤光片，用于精确控制光的传输和分散。光栅是一种具有周期性凹槽的光学元件，通过调整光栅的角度，可以选择特定的波长成为入射光。而反射镜用于将入射光线反射到样品容器中，以及将透射光线反射到探测器。滤光片则用于滤除非目标波长的干扰光。
最后，探测器是紫外—可见分光光度计中用于检测透射或散射光强的元件。常
见的探测器包括光电二极管（Photodiode）和光电倍增管（Photomultiplier Tube）。这些探测器能够将光信号转换为电信号，并通过电路系统进行放大和处理，最终得到吸光度的数值。
总结来说，紫外—可见分光光度计的原理是利用光源产生特定波长的光，经过
光路的调节和选择，最后由探测器转化为电信号进行测量和分析。通过这种原理，我们能够准确测量溶液中物质的浓度，为化学和生物实验提供了重要的工具。
第04章 紫外-可见吸收光谱分析
是 由 于 芳香 族 化 合物 的 π→π*
跃迁而产生的精细结构吸收带。 吸收峰在230~270 nm之间，εma
2 。 B 吸收带的精细结构常 ≈ 10 x
用来判断芳香族化合物，但苯
环上有取代基且与苯环共轭或
在极性溶剂中测定时，这些精 细结构会简单化或消失。 图 苯在乙醇中的紫外吸收光谱 32
（4）E吸收带（取自德文：ethylenic band，乙烯型谱带）
27
二、 助色团 通常含有未成键 n电子，本身在紫外 -可见区域不一定产生 吸收峰，但与发色团相连时，能使发色团吸收峰向长波方 向移动，并使吸收强度增强的杂原子或基团，如-NH2、-O H、-OR、-SR、-X等。 助色能力：
-F<-CH3<-Cl<-Br<-OH<-OCH3<-NH2<-N(CH3)2<-O如苯和苯胺的最大吸收：
30
• 随着共轭体系的增长，K 吸收带红移，ε增大. 例： 1-己烯 λmax 177 ε 104
1.5-己二烯
1.3-己二烯 1.3.5-己三烯
178
217 258
2×104
2.1 × 104 4.3 × 104
• K 吸收带是共轭分子的特征吸收带，可用于判断共轭结构— —应用最多的吸收带
31
（3）B吸收带（取自德文： benzenoid band, 苯型谱带）
紫外-可见分光光度计操作规程完整
紫外-可见分光光度计操作规程完整
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紫外-可见分光光度计操作规程
(TU1810)
版次： 6.0
起草：职位：⽇期：
审核：职位：⽇期：
审核：职位：⽇期：
批准：职位：⽇期：
⽣效⽇期：年⽉⽇
有效期⾄：年⽉⽇
1．⽬的：制订本标准的⽬的是为规检验⼈员在质量检验过程中的操作，保证检验结果的正确性。
2．适⽤围：本标准适⽤于⼆⼚检验员对产品质量的检验。
3．职责： QC检验员对本标准的实施负责。
4．程序：
4.1 简述
紫外-可见分光光度法是利⽤物质分⼦对紫外可见光谱区的辐射的吸收来进⾏分析的⼀种仪器分析⽅法。这种分⼦吸收光谱产⽣于价电⼦和分⼦轨道上的电⼦在电⼦能级间的跃迁，它⼴泛⽤于⽆机和有机物质的定性和定量分析。
朗伯—⽐⽿定律（Lambert—Beer）是光吸收的基本定律，俗称光吸收定律，是分光光度法定量分析的依据和基础。当⼊射光波长⼀定时，溶液的吸光度是吸光物质的浓度及吸收介质厚度（吸收光程）的函数。其常⽤表达式为，式中为系数：
A=ε·ι·C
式中A为吸光度；
ε为吸收系数；
C为溶液浓度；
ι为光路长度。
如溶液的浓度（C）为1%（g/ml），光路长度（L）为1cm，相应的吸光度即为吸收系数以E cm%11表⽰。如溶液的浓度（C）的摩尔浓度（mol/L），光路长度为1cm时，则相应有吸收系数为摩尔吸收系数，以ε表⽰。
4.2 仪器
紫外可见分光光度计是基于紫外可见分光光度法的原理⼯作的常规分析仪器。根据光路设计的不同，紫外可见分光光度计可以分为单光束分光光度计、双光束分光光度计和双波长分光光度计。
04紫外可见分光光度法-1
4.4 光度分析的方法和仪器
4.4.1 光度分析的方法 1.目视比色法 1.目视比色法 用眼睛观察、比较溶液颜色深度以确定物质含量 的方法称为目视比色法。将一系列不同量的标准溶 液依次加入各比色管中，再分别加入等量的显色剂 和其他试剂，并控制其他实验条件相同，最后稀释 至同样体积，配成一套颜色逐渐加深的标准色阶。 将一定量的被测溶液置于另一比色管中，在同样条 件下进行显色，并稀释至同样体积，从管口垂直向 下（有时由侧面）观察颜色。如果被测溶液与标准 系列中某溶液的颜色相同，则被测溶液的浓度就等 于该标准溶液的浓度。如果被测试液浓度介于相邻 两种标准溶液之间，则试液的浓度就介于这两个标 准溶液浓度之间。
4.2.2 电磁波和能量
4.2.3 光的基本性质
光的波长λ(cm)、频率 系是： (Hz) ，它们与光速c的关
λγ = c
c
在真空介质中，光速为2.9979×1010cm/s。单个 光子的能量E与上述三要素的关系是：
E = hγ = h
λ
E－－光子的能量，J；h－－普朗克常数（6.625×10－34Js）
A＝abc
若b以 cm为单位，c以 molL-1为单位时，则将k cm为单位，c mol 为单位时，则将k 称为摩尔吸光系数，以符号ε 称为摩尔吸光系数，以符号ε表示，其单位为 Lmol-1cm-1。 ε的物理意义表达了当吸光物质的 浓度为1mol ，液层厚度为1cm时溶液的吸光度。 浓度为1molL-1，液层厚度为1cm时溶液的吸光度。 在这种条件下上式可改写为: 在这种条件下上式可改写为:
紫外可见分光光度计主要功能
紫外可见分光光度计主要功能
紫外可见分光光度计（UV-Vis Spectrophotometer）是一种常用的实验仪器，主要用于测量物质在紫外和可见光波段的吸光度，具有多种功能和应用。本文将从几个方面介绍紫外可见分光光度计的主要功能。
一、吸收光谱测量
紫外可见分光光度计的主要功能之一是测量物质的吸收光谱。吸收光谱是指物质对不同波长的光的吸收情况。通过测量样品在不同波长下的吸光度，可以得到吸收光谱曲线。吸收光谱曲线可以用于分析物质的结构、浓度和纯度等信息。这对于化学、生物、药学等领域的研究具有重要意义。
二、定量分析
紫外可见分光光度计可以用于定量分析。通过建立标准曲线，测量未知样品的吸光度，并根据标准曲线确定样品的浓度。这种定量分析方法被广泛应用于环境监测、食品安全、药物分析等领域。紫外可见分光光度计的高精度和灵敏度使其成为定量分析的重要工具。
三、动力学研究
紫外可见分光光度计可用于动力学研究。动力学研究是研究化学反应速率和反应机理的重要手段之一。通过测量反应物或产物在不同时间点的吸光度变化，可以推断出反应速率和反应机理。紫外可见分光光度计的高时间分辨率和灵敏度使其成为动力学研究的有力工
具。
四、荧光测量
紫外可见分光光度计还可以进行荧光测量。荧光是物质受激发后发出的特定波长的光。通过测量样品在不同波长下的荧光强度，可以研究物质的结构和性质。荧光测量在生物医学、环境监测等领域具有广泛应用。
五、扫描测量
紫外可见分光光度计还具有扫描测量的功能。扫描测量可以快速获取整个波长范围内的吸光度数据。这对于快速分析和杂质检测非常有用。扫描测量还可以用于寻找物质的吸收峰和波长范围，为后续的定量分析和质谱分析提供重要信息。
紫外可见分光光度计课件.ppt
wps.cn/moban
4、紫外-可见分光光度计 2 单色器
单色器的主要组成：入射狭缝、 出射狭缝、色散元件和准直镜等部 分。 单色器质量的优劣，主要决定于 色散元件的质量。色散元件常用棱 镜和光栅。
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4、紫外-可见分光光度计 3 吸收池
吸收池又称比色皿或比色杯，按材料可分 为玻璃吸收池和石英吸收池，前者不能用于 紫外区。 吸收池的种类很多，其光径可在0.1~10cm 之间，其中以1cm光径吸收池最为常用。
4. 反应生成物的组成恒定。
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5、分析条件的选择 三 参比溶液的选择
测定试样溶液的吸光度，需先用参比 溶液调节透光度（吸光度为0）为100%， 以消除其它成分及吸光池和溶剂等对光的 反射和吸收带来的测定误差。
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5、分析条件的选择
参比溶液的选择视分析体系而定，具体有： 1．溶剂参比 试样简单、共存其它成分对测定波 长吸收弱，只考虑消除溶剂与吸收池等因素； 2．试样参比 如果试样基体溶液在测定波长有吸 收，而显色剂不与试样基体显色时，可按与显色反 应相同的条件处理试样，只是不加入显色剂。
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5、分析条件的选择
3．试剂参比 如果显色剂或其它试剂在测定 波长有吸收，按显色反应相同的条件，不加入 试样，同样加入试剂和溶剂作为参比溶液。
紫外可见分光光度计原理及操作
紫外可见分光光度法的原理及应用
原理：
紫外可见分光光度法基于物质对紫外-可见光的吸收特性进行测定。
当光线通过样品时，样品中的分子会吸收特定波长的光，从而产生吸收峰。通过测量样品吸收的光强，可以得到样品在不同波长下的吸光度。常用的
光谱仪器是分光光度计，它能够实现对不同波长光的选择和测量。
应用：
1.定量分析：紫外可见分光光度法可以用于定量分析各种物质。根据
比尔定律，吸光度与物质浓度之间存在一定的线性关系，因此可以根据吸
光度测量值推算出物质的浓度。这在医药、环境监测、食品安全等领域中
具有重要意义。
2.药物分析：紫外可见分光光度法广泛应用于药物分析中。例如，可
以利用紫外光谱测定药物的浓度、纯度和含量，评价药物的质量。同时，
通过分析药物在不同波长下的吸收特性，可以了解药物的结构和反应机理，为新药的研发提供重要的信息。
3.生化分析：生物体内的很多生物分子都具有紫外可见吸收特性，这
使得紫外可见分光光度法成为生化分析中常用的工具。例如，可以通过测
定蛋白质和核酸在特定波长下的吸光度来研究其构象和浓度。此外，也可
以用于测定血液中的代谢产物、激素和维生素等的浓度。
4.环境监测：在环境监测中，紫外可见分光光度法可用于分析水质、
空气中的有害物质和污染物。例如，可以利用其测定水中化学需氧量（COD）、氨氮（NH3-N）和磷酸盐等的浓度。这对于环境保护和水质安全
具有重要意义。
5.食品检测：紫外可见分光光度法在食品行业中也具有广泛应用。可以通过测定食品中的营养成分和添加剂的含量来评价食品质量和安全性。例如，可以测定维生素、氨基酸、酚类和色素等在食品中的含量。
《仪器分析实验》紫外-可见分光光度法
紫外-可见分光光度法的原理
紫外-可见分光光度法是通过测量物质对紫外和可见光的吸收来分析样品的成 分和浓度。该方法基于分子的电子跃迁，利用波长选择性吸收的特性来获取 分析信息。
紫外-可见分光光度法的应用领域
药物分析
紫外-可见分光光度法可用 于药物中成分的含量测定 和质量控制。
环境监测
该方法可以检测水质和大 气中的污染物，以及环境 中的其他重要分析参数。
食品安全
紫外-可见分光光度法可用 于食品中添加物和有害物 质的检测，确保食品安全。
紫外-可见分光光度法的实验步骤
1
样品准备
首先，准备好待测样品，并根据实验
仪器调节
2
要求进行必要的稀释或前处理。
将样品装入分光光度计中，调节仪器
参数使其满足测量需求，如选择合适
的波长范围和测量模式。
3
数据记录
进行测量并记录吸光度值，可以通过
对照样品进行校正以提高准确性。
数据处理
4
根据测量结果绘制吸光度曲线，计算 样品中目标物质的浓度。
wenku.baidu.com验结果分析与讨论
根据实验测定的吸光度值和对照标准，可以计算出样品中特定物质的浓度。 进一步分析和讨论结果，可以评估样品的质量和性质，以及实验结果的准确 性和可靠性。
总结和展望
通过本次实验，我们深入了解了紫外-可见分光光度法的原理和应用，掌握了实验步骤和数据处理技巧。 希望这个实验能够为大家提供宝贵的实验经验，并启发更多的研究和应用。
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第一节 来自百度文库外-可见分光光度计 的工作原理和基本结构
• 吸收光谱（absorption spectrum）：不 同的物质会吸收不同波长的光。改变入射 光的波长，并依次记录物质对不同波长光 的吸收程度，就得到该物质的吸收光谱 。
一、紫外-可见分光光度计的工作原理
每一种物质都有其特定的吸收光谱，因 此可根据物质的吸收光谱来分析物质的构、 含量和纯度，这就是吸收光谱分析法的理论 基础。 光的吸收定律（朗伯-比尔定律 ）：当 用一束单色光照射吸收溶液时，其吸光度 与液层厚度b及溶液浓度c的乘积成正比。
第四章 紫外-可见分光光度计
学习要求
掌握：紫外-可见分光光度计工作原理、基本 类型及其特点 紫外-可见分光光度计的基本结构及各 部件的基本功能 熟悉：紫外-可见分光光度计的性能指标 、常 见故障及排除方法 了解：紫外-可见分光光度计准确性的影响因 素和应用
内 容 提 要
紫外-可见分光光度计的工作原理和基本结构
光源
单色器
吸收池
检测器
显示系统
二、紫外-可见分光光度计的基本结构
光源（light source）：提供入射光的装置。 不同类型的分光光度计根据需要配有不 同的光源，但对光源有两个基本要求： 1.在所需波长范围的光谱区域内发射连续光谱； 2.有足够的辐射强度并能长时间稳定。
二、紫外-可见分光光度计的基本结构 几种常用光源比较
单色器（monochromator）：是将来自光源的 复合光分解为单色光并分离出所需波段光束的 装置，是分光光度计的关键部件。 主要包括： 入射狭缝 色散元件，包括棱镜和光栅 准直镜 出射狭缝组成。
二、紫外-可见分光光度计的基本结构
吸收池（absorption cell）：又称为比色皿、 比色杯、样品池或液槽等，是用来盛放被测 溶液的器件。同时也决定着透光液层厚度、 特定波长光的透光度等多种参数，应具有良 好的透光性和较强的耐腐蚀性。可见光范围 内：用无色光学玻璃或塑料制作；紫外光范 围内：需用能透紫外线的石英玻璃或蓝宝石 制作。
测光精度不准
波长移位，吸收池受污染 样品混浊，配制溶液不准确
噪声指标异常
预热时间不够，光源老化 环境振动过大，空气流速过 大，样品室不正，电压低
第五节
紫外-可见分光光度计的应用
一、基本分析方法 （一）定性分析 （二）定量分析 （三）纯度鉴定 二、应用实例 （一）可见光谱分析——血清葡萄糖测定 （氧化酶法） （二）紫外光谱分析——血清丙氨酸氨基转 移酶测定（紫外-乳酸脱氢酶法）
双波长分光光度计结构示意图
第三节
紫外-可见分光光度计的 性能指标及准确性影响因素
一、性能指标 (一)波长准确度和波长重复性 (二)光度准确度 (三)光度线性范围 (四)分辨率 (五)光谱带宽 (六)杂散光 (七)基线稳定度 (八)基线平直度
一、 紫外-可见分光光度计的性能指标
(一)波长准确度和波长重复性 波长准确度也叫波长精度，是指仪器 波长指示器上所指示的波长值与仪器实际输 出的波长值之间的符合程度。 波长重复性是指在对同一个吸收带或 发射线进行多次测量时，峰值波长测量结果 的一致程度。
单光束分光光度计结构示意图
光源
单色器
吸收池
检测器
显示 系统
双光束分光光度计特点
①从光源到检测器有试样光路和参考光路两条 通路，可同时对检测样品和参考样品进行测定， 直接获得检测数据 ； ②一般采用两个光栅或棱镜加光栅的双单色器， 能有效地提高分辨率和降低杂散光 ； ③可装备各种附件，光、电、机紧密结合，功 能范围较宽 ； ④大大简化测定程序，可以进行波长自动扫描。
二、紫外-可见分光光度计的基本结构
检测器：把光信号转换为电信号的装置称为检 测器，又称为光电转换器。 常用的检测器有： 光电管 光电倍增管 光电二极管阵列
二、紫外-可见分光光度计的基本结构
信号显示系统：是把放大的信号以适当的方式 显示或记录下来的装置。 常用的信号显示装置有： 指针显示 LD数字显示 VGA屏幕显示 计算机显示
双光束分光光度计结构示意图
光束分裂器 光源 单色器
比值
吸收池
检测器
显示 系统
双波长分光光度计特点 ①从同一光源发出的光分为两束，分别经两个 单色器分光后得到两束不同波长（λ 1，λ 2） 的单色光，经切光器使两束光以一定频率交替 照射同一样品，然后经过检测器显示出两个波 长下的吸光度差值（Δ A=Aλ 1-Aλ 2）； ②双波长分光光度计不用参比溶液，只用一个 待测溶液，能较好的解决由于非特征吸收信号 影响而带来的误差，大大提高检测的准确度。
光源 钨灯 卤钨灯 波长范围(nm) 330~2500 330~2500 特 点
氢灯
氘灯 汞灯
150~400
150~400 254~734
钨丝易蒸发，寿命短。主 要用于可见光区 加入卤素使用寿命延长， 稳定性好 用于紫外区 发光强度比氢灯高3～5倍 用于紫外或荧光分析仪
二、紫外-可见分光光度计的基本结构
一、紫外-可见分光光度计的工作原理 朗伯-比尔定律：
T I I0
A lg T lg I I0 lg I0 I lg 1 T kbc
10
kbc
I0：入射光强度 b:液层厚度 T:透光度 k:吸光系数
C:溶液浓度 I:透射光强度 A:吸光度
一、紫外-可见分光光度计的工作原理
第二节 紫外-可见分光光度计的分类
按其光学系统分可分为 单波长分光光度计：
单光束单波长分光光度计 双光束单波长分光光度计
双波长分光光度计
单光束分光光度计特点 ①单光束光路，从光源到试样至接收器只有一 个光通道，使用中依次对参考样品和待测试样 进行测定； ②只有一个色散元件，工作波长范围较窄； ③通常采用直接接收放大显示的简单电子系统， 用电表或数字显示； ④结构简单、附件少、功能范围小，不能做特 殊试样测定。
朗伯-比尔定律适用的条件是： ①入射光为单色光。波长范围越大，单色光 纯度越低，对朗伯-比耳定律的偏离就越大。 ②溶液浓度不能过大。在一定浓度范围内的 溶液中，邻近分子的存在并不改变每一给 定分子的特性，即分子间互不干扰。当溶 液浓度很大时，由于溶液分子的相互干扰， 该定律不再成立。
二、紫外-可见分光光度计的基本结构
紫外-可见分光光度计的分类
紫外-可见分光光度计的性能指标 及准确性影响因素
紫外-可见分光光度计的常见故障及排除方法
紫外-可见分光光度计的应用
第一节 紫外-可见分光光度计 的工作原理和基本结构 • 分光光度计：指能够从含有各种波长的 混合光中将每一单色光分离出来并测量 其强度的仪器。根据其使用光的波长范 围不同，分光光度计又可分为紫外分光 光度计、可见光分光光度计、红外分光 光度计和全波段分光光度计。 现代常用的分光光度计通常将紫外 分光光度计和可见光分光光度计合并在 一起，称为紫外-可见分光光度计
一、 紫外-可见分光光度计的性能指标
(四)分辨率 分光光度计的分辨率是指仪器对于紧密 相邻的峰可分辨的最小波长间隔，反映仪器 分辨吸收光谱微细结构的能力，是衡量仪器 性能的综合指标。 (五)光谱带宽 是指从单色器射出的单色光最大强度的 1/2处的谱带宽度。
一、 紫外-可见分光光度计的性能指标
(六)杂散光
二、影响因素 （一）单色光不纯的影响 （二）杂散光的影响 （三）吸收池的影响 （四）电压、检测器负高压波动的影响 （五）仪器狭缝宽度的影响 （六）背景吸收的影响 （七）其它因素的影响
第四节
故障现象
紫外-可见分光光度计的 常见故障及排除方法
故障原因
电源线接触不良，
保险丝坏，电路故障 光门不能完全关闭 微电流放大器损坏 光能量不够，光源损坏 比色器架没安装到位， 光门未完全打开
排除方法
接好电源线，检查保险丝， 更换新的保险丝
检修光门盖，更换放大器 变换灵敏度开关，调整光源 更换新的光源 检查比色器架子，摆正位置 检修光门 进行波长校正，清洗吸收池 重新配制溶液 需预热20分钟以上，更换光 源，调换仪器运行环境。对 正样品室。加稳压器
接通电源后，指示灯不亮，
仪器不工作 不能调零（即0％T） 不能置100％T
除所需波长单色光以外其余所有的光都 是杂散光，杂散光是测量过程中的主要误差 来源，会严重影响检测准确度。 (七)基线稳定度 基线稳定度是指在不放置样品的情况 下，扫描100%T或0%T时读数偏离的程度。 (八)基线平直度 是指在不放置样品的情况下，扫描 100%T或0%T时基线倾斜或弯曲的程度。
二、 影响紫外-可见分光光度计准确性的因素
一、 紫外-可见分光光度计的性能指标
(二)光度准确度 是指仪器在吸收峰上读出的透射率或吸 光度与已知真实透射率或吸光度之间的偏差。 该偏差越小，光度准确度越高。 (三)光度线性范围 是指仪器光度测量系统对于照射到接收 器上的辐射功率与系统的测定值之间符合线 性关系的功率范围，即仪器的最佳工作范围。