红曲霉培养培养条件的研究
真菌固液培养红曲霉实验报告
真菌固液培养红曲霉实验报告
一、实验目的
本次实验的目的是通过观察和探究红曲霉菌在不同条件下的生长情况,了解其生长特点和规律,掌握真菌固液培养的方法和技巧。
二、实验材料与方法
1.实验材料:红曲霉、营养琼脂平板、蒸馏水、盐水、酒精灯、显微镜等。
2.实验步骤:(1)取适量红曲霉接种于营养琼脂平板上;(2)将平板分别放置于不同的培养环境中:无菌环境下的恒温培养箱中、含盐水中和含酒精中的培养皿中;(3)观察并记录各培养环境中红曲霉的生长情况。
三、实验结果与分析
1.在无菌环境下的恒温培养箱中,红曲霉生长迅速,形态完整,颜色鲜艳,呈现出典型的酵母菌形态。
2.在含盐水中的培养皿中,红曲霉生长缓慢,且形态不完整,颜色较淡,呈现出类似于植物细胞的结构。这是因为盐水会抑制微生物的生长繁殖,而红曲霉属于微小单细胞生物,对盐度的变化比较敏感。
3.在含酒精中的培养皿中,红曲霉无法生长繁殖。酒精具有杀菌消毒的作用,能够有效地杀死微生物,因此不适合微生物的生长。
四、实验结论
通过本次实验,我们得出了以下结论:
1.红曲霉是一种微小单细胞生物,对环境的变化比较敏感。
2.在适宜的环境下,红曲霉能够迅速生长繁殖,形成典型的酵母菌形态。
3.盐水和酒精都不适合微生物的生长繁殖,因此不能作为红曲霉的培养基。
4.真菌固液培养是一种常用的微生物培养方法,可以用于分离、纯化和鉴定各种微生物。
五、实验心得体会
通过本次实验,我深刻地认识到了微生物在自然界中的重要作用,也更加了解了真菌固液培养的方法和技巧。在今后的学习和生活中,我将继续关注和研究微生物领域的知识,为保护环境、促进人类健康做出自己的贡献。
红曲霉高产菌株筛选及固态发酵研究
红曲霉高产菌株筛选及固态发酵研究
红曲霉(Monascus)是一种重要的微生物资源,具有很高的发酵能力和广泛的应用价值。红曲霉可以产生丰富的红色素,被广泛用于食品、饮料和保健品等行业。本研究旨在
筛选高产红色素的红曲霉菌株,并研究其在固态发酵过程中的生长和产色情况。
从市场上购买了几种红曲粉样品,并进行菌株筛选。将样品接种到琼脂平板培养基中,培养一段时间后,观察和比较菌落数量和颜色深浅,筛选出产菌量高和颜色鲜艳的菌株。
然后,选取产色较高的红曲霉菌株进行固态发酵实验。制备适合红曲霉生长和产色的
固态培养基。将红曲菌株接种到培养基上,使用恒温器控制温度和湿度。在发酵过程中,
定期对培养基进行观察和采样,分析红色素含量的变化和菌落的生长情况。
通过对筛选出的菌株进行固态发酵研究,我们可以获得以下几个方面的结果:
1. 菌株的生长情况:通过观察和比较不同菌株的菌落直径和菌丝密度,可以确定哪
些菌株在固态发酵过程中具有较好的生长能力。
2. 产色情况:通过测定固态培养基中红色素的含量和颜色的深浅,可以确定产色较
高的菌株。可以通过比较不同菌株在不同发酵时间下的红色素含量的变化趋势,确定最佳
的发酵时间。
3. 培养条件的优化:通过调节培养基的成分、pH值、温度和湿度等条件,可以进一
步提高红曲霉的产色能力和生长速度。可以通过单因素实验和响应面实验等方法,确定最
佳的培养条件。
本研究通过筛选高产红色素的红曲霉菌株,并在固态发酵过程中研究其生长和产色情况,可以为红曲霉的产业化生产和利用提供科学依据和技术支持。
红曲霉深层液态培养的研究进展
高 ,因此 ,进一 步开发 利用 红 曲红 色素 有着 十分重
要 的意义 。
的微 生物 ,红 曲红色 素是红 曲霉生 长代谢 过程 中大 量产 生 的一 种 代谢 产 物 ,其 代谢 产 物 不但 有 抑 菌 、 抗疲 劳 、增强 免 疫力 的作 用 ,还具 有 明显 降血 脂 、
血压 、血糖 的功 效 。红 曲霉 可 以产 生许 多有特 殊 ]
( . Ag 1
g g Teh iu sa c n t u e P r c n q eRee rh I si t ,Fu nAc d my o Ag iut r lS in e ,Fu h u t Ja a e f rc lu a ce cs i zo ,
F i n 3 0 0 a 5 0 3,C ia;2 C le eo o in e hn . o lg f Fo d Sce c ,F inAgrc lu ea d Fo ety a iut r n rsr
霉 有 8种 4 8个 菌 株 , 其 中 ,紫 红 红 曲 霉 有 2 2
株口 。1 7 ] 9 9年 , 日本 远 藤 章 教 授 从 红 色 红 曲 霉 ( n su rbr) 中 分 离 出 了 其 代 谢 产 物 Mo a c s u e Mo aoi n c l K后 ,各 国学 者对 红 曲霉 生理 活性 物 质 n 进行 了广 泛而 深入 的研究 。从 各项 研究 报道 中可 以 看 出 ,红 曲霉是 目前 世界上最 主要 的生产 食用 色素
红曲霉高产菌株筛选及固态发酵研究
红曲霉高产菌株筛选及固态发酵研究
红曲霉(Monascus)是一种重要的食品、药用真菌,具有制作红曹和红曲色素的能力。红曲霉色素是一种天然的食品着色剂,被广泛应用于食品加工和制药工业。而红曲霉也是一种可以用于生物转化生产脂质和多糖等重要化合物的微生物。红曲霉高产菌株的筛选及固态发酵研究对于提高红曲霉发酵产物的产量和质量具有重要意义。
一、红曲霉高产菌株筛选
1. 优良菌株的选择
红曲霉菌株的筛选是红曲生物技术研究的关键之一。目前,常用的筛选方法是通过对菌株的培养条件、生理生化特性以及代谢产物等进行评价,从中选取表现出高产、高效、高稳定性的优良菌株。在筛选过程中,需要考虑到不同菌株之间的遗传变异、发酵产物的生产能力等因素,综合评价后确定优良菌株。
2. 根据菌株代谢产物进行筛选
红曲霉菌株具备多样的代谢产物,包括红曲素、黄酮素、黄酮甾醇和多糖等。在筛选优良菌株时,可以通过检测这些代谢产物的合成能力,选择产量高、纯度高、质量好的优良菌株。还可以采用高通量筛选技术,如基因组学、代谢组学和蛋白质组学等方法,加快筛选速度,提高筛选效率,为选取优良菌株提供科学依据。
3. 利用基因工程技术筛选优良菌株
利用基因工程技术,可以对红曲霉的代谢途径进行调控和优化,从而提高其生产产物的能力。通过转录组分析和基因功能鉴定,可以筛选出与产物合成相关的关键基因,并通过基因工程技术对这些基因进行改造、调控,从而提高产物的产量和质量。
二、红曲霉固态发酵研究
1. 固态发酵的基本原理
固态发酵是指微生物在不同有机物基质中进行生长和代谢过程。相比于液态发酵,固态发酵具有体系复杂、生物多样性丰富、营养物质丰富等优点。对于红曲霉来说,固态发酵可以有效提高产物的产量和质量,加快生长速度,促进代谢物的生成,增强抗胁迫能力。
实验8-3红曲液体菌种的制备
实验8-3 红曲液体菌种的制备
一、实验目的
1. 了解红曲霉液体菌种的制备方法。
2. 为下一步实验准备足够的红曲种子。
二、实验原理
红曲霉是一种好氧性微生物,种子的制备除了可用三角瓶固体培养基外,还可以用液体摇瓶培养的方法来获得。
液体摇瓶培育法制备种曲快速方便,作为种子与固体培养基(饭粒)的接触比较均匀,但因含水量大,接种时接种量不能太高,否则因湿度太大而容易导致细菌污染。
三、实验器材
1. 豆芽汁培养基
2. 器材三角瓶、恒温摇床、超净工作台、高压蒸汽灭菌锅等。
四、实验步骤
1. 配制豆芽汁培养基(或其他合适的培养基)。
2. 500 mL三角瓶中装豆芽汁培养基100 mL,以8层纱布封口,加牛皮纸包扎后0.08 MPa 灭菌30 min。
3. 冷却后,每瓶豆芽汁中接入1/2支红曲斜面菌苔。
4. 30℃恒温摇床中180 r/min摇瓶培养3~5 d,至培养液深红色即可。
5. 4℃冰箱保存备用。
五、注意事项
1. 注意无菌操作。
2. 夏季若室温高于30℃,应打开摇瓶机的门,后则,温度过高影响种子质量。最好用带制冷设备的摇瓶机或在空调房间内培养。
3. 三角瓶中液体培养基的装量不能太多,否则摇瓶时容易晃出,而且会造成液体中溶解氧含量的不足;另外摇床转速不能太慢,否则菌丝体会结成大球。摇床转速快,结成的球数量多,体积小,有利于接种时分布均匀。
六、思考题
1. 比较液体种子与固体种子的优缺点。
2. 为什么摇瓶培养时摇床转速快,结成的球数量多而体积小,摇床转速慢,结成的球数量少而体积大?
酯化红曲霉菌液态培养条件研究
收稿日期: 2007-02-11 作者简介: 马歌丽(1963-),女,河南漯河人,副教授,主要从事工业发酵专业教学与科研工作。
2007 No.8
·18· S erial No.173
China Bre wing
Research Report
1.1.2 仪器设备 DHG-9145-A型电热恒温鼓风干燥箱:上海一恒科
加无菌水于红曲霉试管斜面中,在快速混匀器上 混匀,将所得孢子悬浮液接种到液体种子培养基(装液 量100mL/300mL)中,于温度28℃、150r/min的摇床上培 养。采用723型分光光度计[8]每隔2h测1次液体种子发酵 液的浓度,以不接菌种的PDA培养基为空白参比,液体 种子发酵液用取液器转接到比色杯中,测量红曲霉生 物量[9],严防染菌。生物量测定结果和红曲霉生长曲线 见附图。
摘 要: 以红曲霉为原始菌株,经分离筛选获得1株产酯能力较高的红曲霉菌,并对其培养基配方和培养条件进行了研究。试验 结果表明,液态发酵培养红曲霉的最佳培养基组成为可溶性淀粉70 g/L,黄豆饼粉10 g/L,酵母浸膏10 g/L,MgSO4 1 g/L,NaNO32 g/L, NaH2PO4 1 g/L;最佳发酵条件为培养基初始pH值为4.5,接种量16%,装液量100mL/300mL,发酵时间为6d,红曲霉的酯化力达 0.4678g/100mL。 关 键 词: 红曲霉;酯化;培养基;发酵条件 中图分类号: TQ925 文献标识码: A 文章编号: 2054- 0571( 2007) 08- 0017- 05
培养条件对红曲霉产红曲红色素及桔霉素影响的研究
关 键 词 :红 曲霉 ;色 素 ;桔 霉 素 ;培养 条 件
中图 分 类 号 :T 2 23 S0 . 文 献 标 识 码 :A 文 章 编 号 :10 2 1 (0 0 0 O 1 O 0 6— 5 3 2 1 )1一 l2一 4
If e c fc l r o dt s o h r d cin n l n e o ut e c n ion n t e p o u t u u i o
方 面 的研 究还较 少 ,尤 其是 在 如何 提 高 色 素产 量
的同时 ,降低桔 霉 素 的含 量方 面 研究 得 更 少 。本
红曲的研究_生产及应用
有人用红曲霉固体培养物和液体发酵液对 14 种 微生物进行抑菌试验 。结果发现其对蜡状芽孢杆菌 、 枯草杆菌 、金黄色葡萄球菌 、萤光假单胞杆菌有较强 的抑制作用 ;对绿脓杆菌 、大肠杆菌有一定的抑制作 用 ;对八叠球菌 、啤酒酵母 、产黄青霉不抑制 ;对黑曲 霉分生孢子的形成有强烈的抑制作用 。以上试验证 明红曲霉在其生长代谢过程中能产生广谱杀菌和抑 菌生理活性物质 。
015 % 焦磷酸
加热至
红曲米
钠水溶液
浸泡
100 1~
℃ 3mi
n
过滤
滤渣
液体红曲色素 →干燥 →粉状红曲色素 。
滤液 1 再次提取
滤液 2
混合 分离 浓缩
90 年代以来 ,国内外研究用液体深层发酵法生 产红曲色素方面也有重大突破 ,如宁夏轻工业设计研
产红曲色素取得很大进展 。如日本可以利用不同生 究院研究的液Байду номын сангаас深层发酵法生产红曲色素的技术已
近几年 ,许多生产厂家采用了液体 、固体两步法
生产红曲的技术 。即用液体种子进行固体培养制造
红曲 ,此法较简便 ,质量也有保证 ,既缩短了发酵周期
又提高了成品的色价 。生产用种子做到了纯种制备 ,
培养皿红曲霉色素色阶判断
培养皿红曲霉色素色阶判断
(最新版)
目录
1.培养皿红曲霉色素概述
2.红曲霉色素的色阶判断方法
3.色阶判断的实际应用
4.结论
正文
一、培养皿红曲霉色素概述
培养皿红曲霉色素是一种由红曲霉产生的天然色素,其颜色鲜艳且具有稳定性,被广泛应用于食品、饮料、化妆品等行业。红曲霉色素主要包
括红曲红色素、红曲黄色素和红曲棕色素,这三种色素具有不同的颜色和
性质,因此需要对其进行色阶判断。
二、红曲霉色素的色阶判断方法
1.目测法:通过肉眼观察培养皿中红曲霉的颜色变化,初步判断色素
的色阶。这种方法简便易行,但准确性较低,受主观因素影响较大。
2.光谱光度法:利用光谱光度计测量红曲霉培养液在特定波长下的吸光度,通过比较吸光度的大小来判断色素的色阶。这种方法具有较高的准
确性,但需要专业设备。
3.色度测量法:利用色度计测量红曲霉培养液的颜色参数,如 L 值、
a 值和
b 值,通过计算得出的色阶来判断色素的色阶。这种方法较为简便,适用于实验室和生产现场。
三、色阶判断的实际应用
红曲霉色素的色阶判断在生产和研究中具有重要意义。通过色阶判断,
可以筛选出符合需求的红曲霉菌株,以生产特定颜色的色素。此外,色阶判断还可以用于监测红曲霉培养过程中的生理变化,从而优化培养条件,提高色素的产率和纯度。
四、结论
培养皿红曲霉色素的色阶判断是评价和优化色素生产的重要手段。通过目测法、光谱光度法和色度测量法等方法,可以较为准确地判断红曲霉色素的色阶,从而为生产和研究提供依据。
红曲霉、红曲、培养技术及应用
用。
关 键 词 : 红 曲霉
目前 ,红 曲 霉 的种 类 已报导 高 达 8 4 种 ,然 而
产 生少 量 色 素 ,在 玉米 淀 粉 培养 基 中能产 生 大量
有 的种界限不清楚,在实际生产 中经常应用的仅
有 紫 色红 曲霉 和 烟色 红 曲霉 。 红 曲霉 的用 途很 多 ,我 国早 在 明朝 就 用 它培 制 红 曲 ,做 为 药 用 和酿 制 红酒 和 红 醋 。近 代发 酵 工 业 用 它们 生 产 葡萄 糖 、酒 精 发 酵 和红 曲色素 及 用 于调 节 血脂 、降低 血 压 等 系列 功 能性 红 曲制 品
自然 。
wk.baidu.com
《 本 草 纲 目》 中 引 用 朱 丹 溪 的 话 说 ,红 曲 “ 消 食 、活血 、健脾 、燥 胃 、治 赤 、 白痢 、下水 谷 、
陈久 者 良 ”。
二 十 世纪 8 0 年 代 , 日本 学 者 远藤 章 从红 色 红 曲霉 ( M. r u b e r ) 的发 酵产 物 中分 离 出一种 新 的可 降 低胆 固醇 的物 质 ,并 命名 为 Mo n a c o l i n K( 莫 纳 可 的关 键 酶HMG— C o A还 原 酶 ( 3 一 羟基. 3 . 甲基 . 戊 二 酰基一 辅 酶A还 原 酶 ) 的活 性 ,从 而控 制 胆 固醇 的 生 物合 成 ,具 有调 节 人体 内异 常血 脂 的作 用 。无
红曲霉高产菌株筛选及固态发酵研究
红曲霉高产菌株筛选及固态发酵研究
红曲霉(Monascus spp.)是一种能够产生红色素的真菌,广泛应用于米酒、食品着色和制取红曲米等工业生产中。红曲霉高产菌株的筛选和固态发酵研究对于提高红曲霉的生产效率和产品质量具有重要意义。本文将对红曲霉高产菌株筛选及固态发酵研究进行探讨。
一、红曲霉高产菌株筛选
1. 红曲霉高产菌株的选择
红曲霉高产菌株的筛选是通过将已有的红曲霉菌株进行筛选和培养,以获得具有高产色素和其他相关代谢产物的菌株。通常采用的方法有:采用可溶性淀粉或葡萄糖等作为碳源,进行培养和发酵实验;在不同的培养条件下,如温度、pH值等条件下进行培养实验,通过检测发酵产物的数量和质量来筛选出高产菌株。
2. 分子生物学方法在高产菌株筛选中的应用
随着分子生物学技术的发展,如PCR、基因克隆、基因表达等技术的应用,可以通过对红曲霉菌株进行基因分析,筛选出具有高产色素和其他相关代谢产物的菌株。分子生物学方法不仅可以准确地鉴定菌株类型,还可以帮助筛选出更加适合工业生产的高产菌株。
3. 发酵产物分析
通过对红曲霉菌株的培养和发酵产物的分析,可以鉴定出产色素和其他相关代谢产物的菌株。通过对产物的数量和质量的测定和分析,可以筛选出高产菌株。
二、红曲霉固态发酵研究
1. 固态发酵培养基的优化
固态发酵的培养基是影响红曲霉生长和代谢产物产生的重要因素。常用的固态发酵培养基包括糯米、黄米、小麦等。固态发酵培养基的优化可以通过调整碳源、氮源、微量元素和水分等因素,以提高红曲霉的生长和代谢产物的产量。
2. 发酵条件的优化
实验8红曲固体发酵
★专题实验8
红曲固体发酵
红曲的应用在我国已有上千年的历史,我们的祖先很早就开始用红曲霉来酿酒、防腐、治病和制作传统食品。早在1590年,李时珍就在《本草纲目》第25卷中记载了红曲的“消食活血”、“健脾壮胃”等药效。近20年来世界各国更对红曲进行了大量的研究,发现红曲霉发酵产生的醇、酸、醋及多种次级代谢产物具有良好的保健效用,可应用于食品、医药等多个领域,并为此申请了两百多项专利。本系列实验的目的就是通过红曲的制作,了解固体发酵的大致流程,并熟悉从红曲培养物中提取红色素及其他生理活性物质的方法。
一、红曲霉的形态与分类
红曲霉隶属于真菌界、子囊菌门、子囊菌纲(Ascomycetes)、散囊菌目(Eurotiales)、红曲科(Monascaceae)、红曲霉属(Monascus)。在自然界分布广泛。
红曲霉具有霉菌的典型特征,菌丝多分枝,具横隔,细胞多核,菌丝体可出现菌丝融合现象。无性繁殖形成分生孢子,单生或2~6个成链,大多为梨形,多核,由于孢子梗顶部缢缩而成。有性繁殖形成子囊和子囊孢子,但只在特定的条件下发生。菌丝成熟后,先在顶端或侧枝顶端形成一个单细胞多核的雄器(antheridium),然后与雄器相连的细胞以单轴方式又生出一个多核细胞,这个细胞就是原始的雌器。雄器和雌器细胞都是多核的长细胞,因从同一营养细胞中长出,又为同一轴向,因此相互靠得很近,一般上面的细胞为雌器。由于雌器的生长和发育,将雄器向下挤压,使雄器与柄把(即与雄器相连的细胞)呈一定角度(40~120度角)。这时雌器在顶部又生一隔膜,将雌器分成两个细胞,顶端的为受精丝,基部细胞为产囊器(ascogonium)。当受精丝尖端与雄器接触后,接触点的细胞壁解体形成一孔,雄器内的核和细胞质经受精丝进入产囊器。此时只进行质配,而细胞核成对排列,并不融合。与此同时,两性器官下面的细胞向上生出许多菌丝将其包围,形成初期的被子器。被子器内产囊器膨大,并分化出许多产囊丝。每个产囊丝内有许多双核细胞,核配于此时发生,经过核配的细胞即子囊母细胞。每个子囊母细胞的核经过减数分裂和一次有丝分裂,形成8个子囊孢子。这时被子器也已发育成熟,其中的子囊逐渐消解,子囊孢子成堆地留在被子器内。被子器外壳破裂后,散出子囊孢子,子囊孢子遇水萌发后又可形成多核营养菌丝(图1)。
红曲霉高产菌株筛选及固态发酵研究
红曲霉高产菌株筛选及固态发酵研究
红曲霉是一种极具生物学意义的微生物资源,在食品和医药行业均有广泛的应用。因此,红曲霉高产菌株的筛选和固态发酵研究具有重要意义。本文针对此问题展开研究,具
体包括以下几个方面:
一、红曲霉的分类和主要应用
红曲霉是一类真菌,由于其代谢产物含有丰富的色素、生物碱等化合物,在食品、化
妆品、医药等行业具有重要应用。目前,红曲霉已经被广泛应用于米酒、露酒、黄酒、味
醂等传统发酵食品的生产和改良,同时也被运用于红曲色素和甘露醇的生产。此外,红曲
霉的代表菌种贺曼氏红曲菌(Monascus purpureus)在中医药、保健品及食品添加剂等领
域也有着广泛的应用。
红曲霉高产菌株筛选主要是选出代谢活跃、产酶能力强、高含色素的优良菌株。在实
验中,可以通过以下两种方法筛选:
1. 制作固定抑制珠:制备液体培养基,培养24小时,静置10min,离心去菌,将沉
淀用无菌水洗净,划在无菌MM渗透压盘上。将盘放置在灯箱中2小时照射,然后分别加入红曲霉菌丝悬浮液和含有抗生素的涂抹剂,带暗处40小时后观察红曲菌的生长状况,选取生长优良的菌株作为高产菌株。
2. 按颜色筛选:将红曲菌涂布培养基后,观察分泌的色素,选择含色素多、颜色鲜
艳的菌株,这些菌株通常具有更高的活性和产酶能力。
红曲霉的固态发酵是指将红曲霉孢子或菌丝接种在含有底物的固体介质中,通过代谢
和生长产生的酶使底物发生酶解反应,最终产生多种化学物质。通过对红曲菌固态发酵过
程的研究,可以有效提高菌株活性和产酶能力。
固态发酵中比较重要的因素为底物种类、密度和初始含水量,同时,菌株、发酵时间、发酵温度等因素也会影响红曲发酵。在实验室中,可以通过变量优化法、响应面分析法等
实验8-1红曲霉的分离纯化
实验8-1 红曲霉的分离纯化
一、实验目的
熟悉红曲霉菌种的分离纯化方法。
二、实验原理
红曲霉广泛分布于自然界,因此可以从自然界中分离纯化得到。鉴于我国劳动人民很早就开始利用红曲,他们将红曲霉制成了各种各样的发酵食品,因此,要得到红曲霉菌种,最简便的办法是直接从这些发酵食品中去分离。
培养红曲霉多用麦芽汁琼脂培养基,红曲霉在该培养基上生长良好,菌落较大,培养初期菌落为白色,老熟后变为淡红色、紫红色、橙红色、烟灰色等,因种而异。菌落有呈绒毡状的,也有呈皮膜状的,呈皮膜状的菌落少褶皱或只有辐射纹。红曲霉在马铃薯培养基(PDA)上呈现局限性生长,而不像在麦芽汁琼脂上那样蔓延。某些种能在PDA培养基上形成疮疤状菌落。红曲霉产生的是水溶性红色色素,能分泌到培养基中,使培养基着色。
三、实验器材与试剂
1. 样品
市售红曲米或红曲酒酒药。
2. 培养基
(1)半合成培养基:葡萄糖30g,NaNO3 3 g,酵母提取物1 g,K2HPO4 1 g,MgSO4·7H2O 0.5g,KCl 0.5 g,FeSO4·7H2O 0.01 g,pH5.6,用蒸馏水定容至1 L。固体培养基添加20 g琼脂;
(2)麦芽汁培养基:5~8。P麦芽汁;
(3)豆芽汁培养基:豆芽200 g,加水1000 mL,煮沸10 min后过滤,滤液加2%葡萄糖即成,固体培养基添加2%琼脂。
3. 器材
水浴锅、培养箱、灭菌锅、培养皿、移液管、试管等。
四、实验步骤
1. 实验准备
配制上述半合成固体培养基(或麦芽汁培养基、豆芽汁培养基),高压蒸汽灭菌;准备无菌水,移液管、培养皿等,灭菌备用;实验前将培养基倒入平皿中,冷却凝固后于30 ℃培养箱中放置5~6 h,以烘去冷凝水。
红曲霉中麦角固醇的培养条件优化——无机盐
红曲霉中麦角固醇的培养条件优化——无机盐
摘要
红曲霉(monascus)是我国最早应用于食品加工的有益真菌之一,主要集中应用在传统酒曲、制醋、着色、防腐等领域,国外红曲霉主要应用于肉品加工及其他食品着色方面。红曲霉可产生淀粉酶、糖化酶、蛋白酶、酯化酶、果胶酯酶、麦芽糖酶等酶类;其药理活性物质可抑制胆固醇活性、降血压物质——麦角固醇。
目前麦角固醇的生产主要采用微生物发酵法,关于碳源、氮源、初始pH值、培养时间、通气量等因素对细胞中麦角固醇的含量研究,有很多人在这方面进行了深入而透彻的研究。而无机盐对红曲霉菌产麦角固醇的影响国内外尚未见过报道(就目前而言;仅有惠丰立等人的《无机盐对酵母菌产麦角固醇的影响》[13]一文的发表。本文在原有工作的基础上,扩大了无机盐对红曲霉菌产麦角固醇的影响筛选范围。
其主要研究了Ca2+、Mg2+、Fe2+ 、K+和Na+ 对红曲霉细胞生长及麦角固醇合成的影响。结果表明:这几种无机盐在一定的浓度范围内均能促进或抑制红曲霉细胞生长。提高或降低生物量,对麦角固醇产量的影响明显的差别。当培养基中分别加入一定量的Ca2+、Mg2+、Fe2+ 、K+和Na+ 时,Ca2+、Mg2+刺激麦角固醇合成作用最强,其中Mg2+对麦角固醇单位产量影响最为显著高到21.75mg/g。又当接种量为10mL的种子液,培养温度30 0C 、转速为200r/min摇床培养120h。在此条件下,ZZ红曲霉菌株产麦角固醇单位含量达24.48mg/g 干菌体.麦角固醇总重46.52mg
关键词:红曲霉,麦角固醇(Ergosterol), 液体发酵,无机源,紫外分光光度法。
红曲霉及红曲色素的研究进展
综述
RPR 实验( 快速血浆反应素实验) 阳性率显著低于比妊娠期未进行抗梅毒治 产的婴儿症状轻。
疗的新生儿。
5小 结
3 妊娠期梅毒筛查
妊娠期梅毒感染能导致流产、早产,甚至死产,严重影响母婴健康,降低
虽然采取措施对妊娠期梅毒感染者进行干预可以减少孕期并发症和避 人口素质。我国已开始普遍在产检时进行妊娠梅毒筛查,对于结果显示阳
制作用。用添加 0. 3% 左右的红曲霉培养物的饲料喂养患有先天性高血压 老鼠,可使其血压由 26. 6KPa( 200mmHg) 降至 24. 0KPa( 180mmHg) 以下,其 有效成分已被鉴定为某种氨基丁酸( γ - aminobutyric acid,GABA) 或者是红 曲细胞壁的某些成分,且 这 种 降 压 活 性 物 质 具 有 极 强 的 热 稳 定 性。 建 模 实 验表明,红曲对低肾素高血压患者有更好的降血压作用,推测红曲主要通过 调节机体的水盐平衡从而 发 挥 其 降 压 作 用,当 然 也 不 排 除 红 曲 降 压 是 多 机 制联合作用的结果[3]。 1. 3 红曲及红曲霉的抗癌活性研究 研究表明,红曲色素类化合物对于许 多重大疾病相关的关键酶如鞘氨醇激酶、脂肪酸合成酶、端粒酶、gp120 - CD4 和 Grh2 - SH2 等具有重要的生物活性作用。红曲色素可以抑制过氧化 烟硝酸盐或紫外线诱导的皮肤癌; Mee Y H 和 Su N - W 等发现红曲提取物 对结肠癌细胞和肝癌细胞 Hep G2 以及人肺癌细胞 A549 有明显抑制作用或 诱导凋亡的作用。郑允权等[4]也证实了红曲色素能够有效抑制人胃癌细胞 AGS 的增殖,且效果优于紫杉醇。但其具体作用机制还需进一步研究。 1. 4 红曲及红曲霉的抗菌活性研究 我国在元代以来就发现了红曲的抗 菌防腐作用,《天工开物》将红曲列为奇药,“世间鱼肉最朽腐物,而此物薄施 涂抹,能固其质于炎暑之中,经历旬月蛆蝇不敢近,色味不离初”。现代研究 表明,红曲对细菌和酵母有抗菌性; 对蜡状芽孢杆菌、霉状杆菌、枯草杆菌、 金黄色葡萄球菌、大肠杆菌、变 形 杆 菌 等 有 抑 制 作 用,尤 其 对 肉 制 品 中 常 见 有毒细菌有显著抑制作用,是香肠等肉类制品防腐剂的天然替代品。
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开题报告
红曲霉培养培养条件的研究
1背景及其研究意义
红曲霉以其产生红曲色素而得名。红曲自古以来在我国一直用于食品的着色,红曲色素具有稳定性很好,蛋白着色力强,色调柔和,酸碱稳定等优点。随着人们对合成色素具有诱发癌症等毒副作用的认识,天然食用色素日益受到重视。
红曲色素是由红曲霉丝状真菌经发酵而合成的天然色素,由黄色及红色等6种色素组成。红曲霉属真菌门,子囊菌纲,真子囊菌亚纲,曲霉科,菌丝体呈紫红色,菌丝体生长过程中会产生大量胞外色素和胞内色素。可用传统的固体发酵法生产,也可用液体发酵的现代技术生产红曲霉素红曲霉主要用于食品添加剂而具有安全保健的功能。
目前,红曲霉的生产工艺已由传统的固体发酵转向液体深层通气发酵,大大提高了色素的产量和纯度。本课题采取液体深层发酵的方式生产红曲霉素,并研究红曲色素的提取及在食品中的应用:同传统工艺相比,具有更适应大规模,自动化生产的特点。
本课题主要开展液体深层发酵条件的研究,找出红曲霉培养的最佳环境条件,包括温度、酸度、装量纱布层数、转速、发酵时间等。
2实验方法
2.1菌种选择
选取易于培养、产色能力强的红曲霉。
2.2培养基
一级培养基:饴糖5%蛋白胨1.5%琼脂3%PH自然
121℃高压灭菌30分钟
二级培养基:麦芽糖5%豆饼粉2%K2HPO4.3H2O0.5%MgSO4.7H2O
0.25%H2O1000ml PH自然121℃灭菌30分钟
2.3工艺流程
菌种→斜面培养→摇瓶培养→发酵罐培养→测量色价
2.4具体方案
选择出最佳培养条件,设计正交实验进行实验
因素温度(℃)发酵时间(h)转速(r/min)酸度纱布层数(层)装量(ml)12048100 5.5230 22360120 6.0440 ******** 6.6650 427841607.0860 530961807.51070
采用上述培养基配方,根据表格设计安排实验。
2.5测定色价
取发酵液离心后,分别对上清液和沉淀进行了处理,测定胞内色素和胞外色素的OD值,然后把OD值转换为色价,则总色价=胞外因素色价+胞内因素色价。
3预期达到的目标
通过实验,比较总色价,找出最价的正交组合,得出红曲霉的适应培养条件。
红曲霉培养条件的研究
万方早
指导老师石鹤
(湖北师范学院生物系湖北黄石435002)
【摘要】本文采用正交实验,通过液体深层发酵的方法,研究了红曲霉产红色素的各种培养的条件,实验结果表明最佳培养条件为:温度28℃,PH:6.0,纱布层数为8层,转速180r/min,装量50ml/250ml,发酵时间为96h.在次培养条件下,发酵液的总色价可达43.6u/ml.
【关键词】红曲霉液体发酵培养条件研究
【中图分类号】TQ925+
红曲霉以其能生产大量红曲色素而得名。自古以来在我国一直用于食品着色,特别是肉类的着色。然而我国传统的固态发酵法存在很多缺点,不适宜大规模生产。红曲色素作为天然色素,消费量逐年增加,进行红曲色素的液体发酵生产已经成为发展趋势。本文通过对红曲霉产色的最佳培养条件的研究,以提高产色率,为工业化大生产提供参数。
1材料和方法
1.1材料
菌种:红曲霉AS3.782
斜面培养基:饴糖5%蛋白胨1.5%琼脂3%PH自然
121℃高压灭菌30分钟
种子培养基:玉米粉5%豆饼粉2%MgSO4.7H2O1.5%
K2HPO4.3H2O0.1%PH自然120℃高压灭菌30分钟
发酵培养基:葡萄糖4%豆饼粉2%K2HPO4.3H2O0.5%
MgSO4.7H2O0.25%PH自然
1.2色价的测定方法
1.2.1酒精法
吸取100目-120目尼龙布过滤后的发酵液2ml,加95%的乙醇5ml摇匀,静置10-15分钟,加蒸馏水3ml,摇匀,过滤(定性滤纸过滤)。以50%的乙醇做对照,在722分光光度计上,用510nm,d=1cm厚的比色皿比色,测定光度OD值,再乘以稀释倍数(N)。即为发酵液的色素量。
1.2.2抽滤法
胞外色素:发酵液→砂芯漏斗→滤液直接稀释比色→测出胞外色素含量胞内色素:发酵液→砂芯漏斗→滤纸上的滤渣→用755乙醇浸提→抽滤得色素再比色→测出胞内色素含量
发酵液总色素量=(胞外色素含量+胞内色素含量)×稀释倍数
1.3实验仪器
无菌操作台722型分光光度计电子天平干燥器恒温培养箱高压灭菌锅摇床电热器自控发酵罐(10L)
1.4工艺流程
1.4.1
菌种→斜面培养(30℃,培养7天)→摇瓶培养→测定色价
1.4.2
菌种→斜面培养(30℃,培养7天)→药瓶种子培养(28℃,48h)→发酵罐培养(28℃,72h)→测定色价
1.5摇瓶培养条件实验
利用摇瓶培养红曲霉时,除最佳培养基外,还必须对温度、酸度、通气量加以研究。培养条件对发酵液的总色价有较大影响,按表1设计实验。
表1最佳培养条件选择实验的因素水平
因素温度(℃)酸度纱布层数(层)转速(r/min)装量(ml)发酵时间(h)122 5.041202560
225 5.561404072
328 6.081805084
430 6.5102006096
5327.01222075108
根据表1安排实验,接入培养7天的红曲霉孢子悬液5ml,按实验要求培养相应时间。测定每毫升发酵液的总色价。
1.6发酵罐实验
在摇床实验的基础上,按表2的设计进行发酵罐培养实验。
表2发酵罐实验方案
培养基罐压(Mpa)PH搅拌速度(r/min)通风量(L/min)温度(℃)玉米粉4%0.05 6.0220128
豆饼粉2%0.05 6.0220128
葡萄糖4%1 6.0250128
豆饼粉2%1 6.0250128根据表2利用0L的发酵罐幢L培养液进行实验,接入培养48h的红曲霉液体种子700ml,培养60h,测定每毫升发酵液的总色价。
2实验结果分析
2.1不同温度对产色素的影响
温度能影响微生物中酶的活性、细胞质膜的流动性及物质的溶解度,根据表1的安排,测得实验结果如表3:
表3温度对色价的影响
温度(℃)2225283032
色价(u/ml)20.429.735.430.227.1