自身抗体的检测及临床应用
间接免疫荧光法检测自身抗体
(二)实验操作的标准化滴定平板技术
实验标准化流程为滴加样品、标记抗体至加样板，然后将生物薄片载片盖在加样板表面的凹槽里，这时，载片上的所有生物薄片均与液滴接触，反应同时开始。因为液体被局限在一封闭的空间，不再需要传统“湿盒”，可同时在一致的反应条件孵育大量的标本。下面以间接免疫荧光法为例，介绍滴定平板技术的操作过程：
间接免疫荧光法保留了原基质的完整抗原谱，因而可同时检测大量抗体．获得较高的检测效率。当抗几种不同抗原的抗体需要在一种生物基质上同时检测时(如抗细胞核抗原抗体)，或为每一种实验逐一准备抗原很困难或相当复杂时，就应该选择免疫荧光法。另外，应用免疫荧光法还可检测到一些至今未知的抗体。
在没有荧光显微镜时，可尝试用酶标记的第二抗体代替荧光标记的抗体，但是检测的质量会明显下降。因为在免疫荧光法中，指示剂染色是通过抗体直接结合在细胞抗原上产生的，而免疫酶法，染色则是弥散地围绕在抗原周围的区域。因此免疫酶法并不总是像免疫荧光法那样能区分抗原分布的细小差别。而且应用酶染色时，会导致许多自身抗体不能被区分或根本测不到。仅应用细胞核制备物免疫酶染色的纯光度法评价也是不可取的，因为这不可避免地导致一些自身抗体被漏检。
9．封片加甘油／PBS至盖玻片，每一反应区约10ul。从pBS-Tween缓冲液取出一张载片，用纸擦干背面和四边，注意不要擦拭反应区间鲸。将盖玻片轻轻盖在载片上。
10．结果判断 荧光显微镜下观察荧光。
(三)抗体检测的质量控制及注意事项
l．质量控制 自身抗体检测的质量控制是用多种手段对自身抗体存在与否、浓度的多少进行控制和评价，有利于实验室内部、实验室之间对同一标本获取相同具有可比性的结果，是衡量实验室检测水平的一个重要指标。然而．自身抗体检测的质量控制，并不是一件容易的工作。因为不同实验室所用的抗原基质存在差异、抗原的固定方法有差异或不同，血清的稀释方法不同以及操作者对不同荧光模式的识别能力不同等，均可影响到自身抗体的检酒质量。实验室在进行临床检测时，应同时检测阳性对照、阴性对照，以监测结果的准确性。国内急需成立专门的学术机构，参照国际标准，与国际接轨，建立自己当地的标准，开展自身抗体检测的质量控制。
自身免疫性肝病(AILD)相关自身抗体的检测及临床应用
四、AILD相关自身抗体的检测
1、间接免疫荧光法（IIF）
③抗LKM-1抗体：肝组织可见肝细胞胞质细颗粒型至均质型 的强荧光染色；肾组织仅在近端肾小管上皮细胞胞质荧光染 色；胃组织缺乏特征性的荧光染色。
④抗LC-1抗体：肝组织可见肝细胞胞质颗粒型荧光染色，啮 齿类动物肝组织中央静脉周围的荧光染色明显减弱，但若同 时存在抗LKM-1抗体阳性，此荧光特征通常难以呈现。肾、 胃组织缺乏特征性的荧光染色。
三、AILD相关自身抗体检测的临床应用
在PBC患者一级亲属中，母女、姐妹间AMA的共同阳性率为 10%~20%，远高于普通人群。因此，在PBC患者的亲属中检 测AMA等自身抗体，有利于疾病的早期发现。AMA阳性但 不能明确诊断PBC者，需定期行胆汁淤积相关生化指标的随 访。
总之，检测自身抗体可用于AILD的预测，对肝脏生化指标正 常且AILD相关自身抗体（如ASMA、AMA等）阳性者，应 定期随访，以及进行相关学会指南推荐的其他评估肝脏功能 的新标志物检测，如可预测肝功能正常或轻度异常者的肝硬 化、肝纤维化程度的血清壳多糖酶3样蛋白1（CHI3L1）等， 以早期评价肝胆功能，或采取其他临床干预措施。
1、间接免疫荧光法（IIF）
（2）标本、荧光标记二抗：IIF检测血清标本的ANA、 ASMA、抗LKM-1抗体、AMA通常采用1∶40起始的倍比稀 释系统。由于使用不同的检测试剂，可根据试剂说明书，采 用倍比稀释系统或 稀释系统。所用二抗应使用荧光素标记的 抗人IgG抗体。
四、AILD相关自身抗体的检测
四、AILD相关自身抗体的检测
2、其他免疫学方法
由于IIF检测AILD相关自身抗体的实验操作、结果判断等存 在难以标准化，阳性滴度判断依赖于不同的实验基质。因此， IIF检测AILD相关自身抗体需要经过专业培训的实验室人员 和高质量的实验基质。
自身抗体的检测及其临床意义
自身抗体的检测及其临床意义
一、什么是自身抗体
自身抗体是指一种在人体正常状态下就存在的、自身特异性的抗体，它们是由B细胞合成的抗体、免疫球蛋白或其他细胞因子来反应本身的抗原性构件。
自身抗体是由变异的胞质因子和抗原特异性的表位因子细胞共同分泌而产生的。
二、自身抗体的检测
自身抗体检测主要分为两种方法，即免疫细胞免疫吸附试验（ICFA）和免疫比色法。
免疫细胞免疫吸附试验，也称为分子免疫吸附试验，是一种用于检测血清中抗原特异性的免疫诊断方法。
通过分离出血清中的特异性抗体，以鉴定其是否为自身抗体。
免疫比色法是指测定血清中特定抗原的血清抗体是否存在自身抗体的方法，该技术是通过测定抗体的特殊性，以及抗体含量和抗原特异性来确定是否为自身抗体。
三、自身抗体的临床意义
自身抗体是系统性自身免疫疾病的特异性抗体，因此有良好的临床应用价值。
1.它可以用来评估患者患病的可能性，用于诊断，以及分子免疫学研究。
2.它可以用于诊断系统性自身免疫疾病，从而指导临床治疗。
3.它可以用于鉴定抗体依赖性疾病，如血小板凝集症、红细胞凝集症和白细胞凝集症等，为抗体的诊断和治疗提供参考。
ANA、ANCA检测及临床应用
ANA、ANCA检测及临床应用1、检测原理及方法1.1 ANA检测原理ANA（自身抗体）是机体免疫系统产生的抗体，针对自身组织中的核糖核酸和核蛋白进行作用。
ANA检测是通过间接免疫荧光抗体（IFA）技术，观察患者血液标本中的自身抗体与细胞核内抗原结合的荧光反应，以判断患者是否存在ANA阳性。
1.2 ANCA检测原理ANCA（抗中性粒细胞胞浆抗体）是机体免疫系统产生的抗体，针对中性粒细胞胞浆成分进行作用。
ANCA检测是通过酶联免疫吸附试验（ELISA）或免疫荧光抗体（IFA）技术，观察患者血液标本中的ANCA与中性粒细胞胞浆成分结合的反应，以判断患者是否存在ANCA阳性。
2、ANA检测及临床应用2.1 检测适应症ANA检测广泛应用于自身免疫性疾病的诊断和鉴别诊断，包括系统性红斑狼疮、干燥综合征、结核性脓毒症、类风湿关节炎等。
2.2 临床意义ANA阳性表明免疫系统对自身抗原产生异常反应，但并不代表特定疾病的存在。
ANA阳性结果应结合患者的病史、临床表现和其他辅助检查结果进行综合分析和判断。
2.3 结果解读ANA检测结果通过荧光显微镜或荧光显微镜图片解读。
阳性结果表示患者血清中存在与细胞核内抗原结合的自身抗体。
阴性结果表示未检测到自身抗体。
3、ANCA检测及临床应用3.1 检测适应症ANCA检测主要应用于自身免疫性疾病，如无器官限定型小血管炎、肾小球肾炎、全身性血管炎等。
3.2 临床意义ANCA阳性结果提示存在抗中性粒细胞胞浆抗体，但并不一定与特定疾病相关。
阳性结果应结合患者的病史、临床表现和其他辅助检查结果进行综合分析和判断。
3.3 结果解读ANCA检测结果通常通过ELISA或免疫荧光染色解读，阳性结果表示患者血清中存在与中性粒细胞胞浆成分结合的自身抗体。
阴性结果表示未检测到自身抗体。
4、附件相关文献和研究报告等附件详见附件部分。
5、法律名词及注释5.1 ANA：自身抗体（Anti-Nuclear Antibody）5.2 ANCA：抗中性粒细胞胞浆抗体（Anti-Neutrophil Cytoplasmic Antibodies）5.3 IFA：间接免疫荧光抗体（Indirect Immunofluorescence Assay）5.4 ELISA：酶联免疫吸附试验（Enzyme-Linked Immunosorbent Assay）6、结束语感谢您阅读本文档，如有任何问题或需进一步了解，请随时与我们联系。
自身抗体的检测方法
自身抗体的检测方法引言：自身抗体的检测是一种关键的实验技术，广泛应用于医学研究、临床诊断和药物开发等领域。
本文将介绍几种常见的自身抗体检测方法，包括免疫荧光法、酶联免疫吸附试验（ELISA）和免疫印迹法（Western blot）。
一、免疫荧光法免疫荧光法是一种基于荧光标记的自身抗体检测方法。
首先，将待测样品涂在载玻片上，然后加入特异性荧光标记的抗人免疫球蛋白G（IgG）抗体。
通过荧光显微镜观察，如果样品中存在自身抗体，荧光信号将在细胞或组织中显示出来。
这种方法对于检测自身抗体具有高度特异性和灵敏度，可以用于早期疾病的诊断和监测治疗效果。
二、酶联免疫吸附试验（ELISA）酶联免疫吸附试验是一种常用的自身抗体检测方法。
该方法基于酶标记的二抗与自身抗体的特异性结合。
首先，在固相载体上吸附抗原，然后加入待测样品。
如果样品中存在特异性的自身抗体，它们将与固相载体上的抗原结合。
随后，加入酶标记的二抗，该二抗能够与自身抗体结合。
通过加入底物，酶催化底物发生显色反应，可通过光密度测定来定量分析自身抗体的含量。
ELISA方法操作简单，结果可靠，被广泛应用于自身抗体的检测和定量。
三、免疫印迹法（Western blot）免疫印迹法是一种用于检测自身抗体的高灵敏度分析方法。
该方法通过将待测蛋白样品经电泳分离后转移到膜上，并与特异性的一抗和二抗反应，来检测目标蛋白的存在。
首先，将蛋白样品经SDS-PAGE电泳分离，然后将蛋白转移到膜上。
随后，将膜与特异性的一抗反应，一抗与目标蛋白结合。
最后，加入酶标记的二抗，二抗与一抗结合形成复合物，并通过酶催化底物发生显色反应，从而显示目标蛋白的存在。
免疫印迹法具有高度特异性和灵敏度，可用于检测自身抗体的存在以及研究蛋白的表达和修饰等。
四、其他自身抗体检测方法除了上述常见的自身抗体检测方法外，还有许多其他方法可供选择。
例如，荧光素酶免疫吸附试验（LIA）、放射免疫沉淀法（RIA）和流式细胞术等。
自身抗体的实验室检测及临床意义PPT课件
预后判断
某些自身抗体的存在可能 预示疾病的预后，有助于 医生预测患者的康复情况 和生存率。
自身免疫性疾病的预防
高危人群筛查
通过自身抗体检测，可以对高危 人群进行筛查，提前发现潜在的 免疫系统异常，采取相应的预防
措施。
预防性治疗
根据自身抗体检测结果，医生可以 为患者制定个性化的预防性治疗计 划，降低疾病发生的风险。
异性强，但操作较为复杂且需要专业人员进行操作。
03 自身抗体的临床意义
自身免疫性疾病的诊断
诊断依据
自身抗体检测结果可作为自身免疫性 疾病诊断的依据，当体内出现异常抗 体时，可能提示某种免疫系统疾病的 发生。
确诊价值
指导治疗
通过自身抗体检测，医生可以了解疾 病的严重程度和活动性，从而制定合 适的治疗方案。
详细描述
间接免疫荧光法是一种灵敏度高、特异性强的检测方法，可用于检测多种自身抗体，如抗核抗体、抗线粒体抗体 等。该方法将待测抗体与荧光标记的抗抗体结合，形成免疫复合物，在荧光显微镜下观察荧光信号，根据荧光信 号的强弱和分布情况，判断是否存在相应的自身抗体。
酶联免疫吸附法
总结词
一种常用的自身抗体检测方法，通过酶标记 的抗体与待测抗体结合，再加入底物显色， 根据颜色的深浅判断是否存在相应的自身抗 体。
自身抗体的存在和变化可以反映疾病的进展和预后，有助 于医生对患者的病情状况进行评估。
辅助科研和药物研发
自身抗体检测在科研和药物研发中也有重要作用，通过对 不同疾病的自身抗体进行研究，有助于深入了解疾病发病 机制和寻找新的治疗靶点。
对未来研究的展望
探索新的检测技术和方法
随着科学技术的发展，未来可以探索更加快速、准确、自动化的检测技术和方法，提高 自身抗体检测的效率和准确性。
自身抗体检测项目及临床意义
一、抗核抗体抗核抗体（antinuclearantibodies，ANA）泛指抗各种核成分的抗体，是一种广泛存在的自身抗体。
ANA的性质主要是IgG，也有IgM和IgA，甚至IgD和IgE。
ANA可以与不同来源的细胞核起反应，无器官特异性和种属特异性。
ANA主要存在于血清中，也可存在于其他体液如滑膜液、胸水和尿液中。
ANA在SIE患者的滴度较高，但也出现在其他许多自身免疫病中，在许多研究报告中，都将检出ANA作为自身免疫甚至自身免疫病存在的依据。
这种现象的机制尚未明了，有待于进一步研究。
（一）ANA的类型及意义由于细胞核成分的复杂性，不同成分的抗原性也不同；因此就会有多种不同的ANA。
1．抗核蛋白抗体核蛋白抗原（DNP）由DNA和组蛋白组成。
由于DNP抗原存在不溶性和可溶性两个部分，可分别产生相应的抗体。
不溶性DNP抗体通常不完全被DNA和组蛋白所吸收，它是形成狼疮细胞的因子；可溶性抗原存在于各种关节炎病人的滑膜液中，其相应抗体也出现于RA病人的滑膜液中。
2．抗DNA抗体可以分为两大类：①抗天然DNA（nDNA）抗体，或称抗双链DNA （dsDNA）抗体；②抗变性DNA抗体，或称抗单链DNA（ssDNA）抗体。
抗dsDNA抗体对SLE 有较高的特异性，70％～90％的活动期SLE病人该抗体阳性，效价较高，并与病情有关。
抗ssDNA抗体可见于多种疾病中，特异性较差。
3．抗ENA抗体可提取性核抗原（ENA）多从动物的胸腺中提取。
先将胸腺匀浆并破碎细胞，分离出细胞核；再经盐水或磷酸盐缓冲液处理后，很容易从胞核中提取出来。
ENA不含DNA，对核糖核酸酶敏感。
近年来的研究表明，ENA可分为十几种，现仅介绍几种主要的ENA及其相应抗体。
（1）抗PNP抗体：PNA即核糖核蛋白，对核糖核酸酶和胰蛋白酶敏感，加热561h 变性。
抗PNP抗体多见于混合性结缔组织病。
高效价的抗PNP抗体对混合性结缔组织病有诊断意义，而低效价的抗PNP抗体可在SIE患者中发现。
自身抗体的检测
5.抗乙酰胆碱受体抗体
对重症肌无力的诊断有特异性。 可用ELISA检测。
是重症肌无力的标志性自身抗体，
6.抗骨骼肌抗体
与成年型重症肌无力有关。
7.抗胰岛细胞抗体
与I型糖尿病有关。
三、临床应用
1、检测项目的选择
2、检测方法的选择
3、自身抗体检测的质量控制
又称抗U1RNP抗体。 抗U1RNP抗体是诊断混合性结缔 组织病（ MCTD）的重要血清学 依据，是MCTD的诊断标准之一。
（3）抗SSA/Ro和抗SSB/La
这两种抗体是干燥综合症 （SS）患者最常见的两种自身抗 体
（4）抗J0
-1抗体 最常见于多发性肌炎（PM） 患者。
（5）抗Scl-70抗体
（四）其他自身抗体
1.抗中性粒细胞胞质抗体 （anineutrophil cytoplasmic antibodies，ANCA）
以人中性粒细胞胞质为靶抗原， 与临床多种小血管炎性疾病有关。 分胞质型（cANCA）和核周型 （pANCA）。可用ELISA或间接免 疫荧光法测定。
2.抗心磷脂抗体（antiphospholipid antibody，APLA）
还可用核质丰富的培养细胞如Hep-2，作 为抗原。 用荧光显微镜观察ANA荧光着染强度和免 疫荧光图形。 稀释待检血清可检测ANA效价。
3.常见的ANA图形及临床意义
均质型 （homogen eous，H）
斑点型
（speckled， S）
核膜型
（membrano us，M）
核仁型
靶抗原是血浆中的磷脂结合蛋白。
APLA包括一组自身抗体，如抗心 磷脂抗体（ACLA），抗磷脂酸抗 体（APAA）和抗磷脂酰丝氨酸抗 体等。
自身抗体检测在自身免疫性疾病中的临床应用专家建议
自身抗体检测在自身免疫性疾病中的临床应用专家建议自身抗体检测是自身免疫性疾病诊治中的重要工具，随着早期诊断、规化治疗的开展，自身抗体检测在疾病诊断、监测及预后评估中发挥的作用也日益受到重视。
但是，由于目前自身抗体检测缺乏统一的标准化检验方法，加上工作条件、传统诊疗习惯、结果判读以及医疗保险限制等方面的因素影响，导致自身抗体检测在临床应用上存在着不统一、不规现象。
因此，制定适合我国国情的自身抗体临床应用建议十分必要，可为广大临床医生和检验医师提供参考。
《自身抗体检测在自身免疫性疾病中的临床应用专家建议》（以下简称为《建议》）形成分3步进行。
首先由来自全国大型教学医院风湿免疫科医师通过检索国外文献并结合中国实际情况起草《建议》草案，然后将该草案提交由风湿免疫科、检验科、消化科、血液科、神经科等组成的专家组讨论，补充和提出修改意见，修改后的草案再次由起草成员讨论，形成初步建议，并对每项建议条目进行解读。
最后提交由中国免疫学会临床免疫分会专家进行投票评分（Delphi评分，分值从0分到10分，0分表示完全不赞同，10分表示完全赞同），计算所有专家打分的（平均值±标准差）作为每条建议的专家认可度。
《建议》包括13条，每一条都附有基于GRADE 法[1]的证据分级、证据质量和专家认可度及其95%的可信区间。
一、自身免疫性疾病概述自身免疫性疾病是由于免疫功能紊乱，机体产生针对自身抗原的病理性免疫应答反应而引起器官或系统损伤的一类疾病。
根据临床表现和病变累及的围，自身免疫性疾病可以分为系统性和器官特异性，前者以系统性红斑狼疮（SLE）、系统性硬化症（SSc）、类风湿关节炎（RA）、抗磷脂综合征（APS）等为代表；后者包括自身免疫性肝炎（AIH）、原发性胆汁性肝硬化（PBC）、自身免疫性甲状腺炎（AIT）、胰岛素依赖性糖尿病（IDDM）等。
自身免疫性疾病的发病机制尚不完全清楚，目前认为是遗传易感个体在环境因素如感染、紫外线及肿瘤、药物等多种因素共同作用下发生。
《自身抗体检测在自身免疫性疾病中的临床应用专家建议》解读
1964
2010 RA新诊断标准( ACR/EULAR)
RA相关的自自身身抗体
名 称
类⻛风湿因子子 RA33/36抗体 Sa抗体 抗角角蛋白白抗体 抗核周因子子 抗CCP抗体 抗CB10抗体 抗BiP抗体
敏感性(%)
50--70
特异性(%)
86 93.6 78-97 87-92 70-90 96 70-88 92
特发性血血小小板减少性紫癜 干燥综合征 特发性粒细胞减少症 绝经过早（少数病例） 类⻛风湿关节炎 硬皮皮病
男性不育（少数病例） 多发性肌炎/皮皮肌炎 交感性眼炎 晶状体源性葡萄膜炎 抗磷脂综合征 混合性结缔组织病 系统性血血管炎
寻常型天疱疮
自自身身免疫性肾小小球肾炎 肺肾出血血综合征
已明确40多种，高度相关20多；可能相关100多种
《自身抗体临床应用专家共识》
n
中华风湿病学杂志,2014,18(7):437-443
n n n n n n
1.怀疑自身免疫疾病检测自身抗体 2.公认方法、定量/半定量/滴度 3.检验与临床结合 4.诊断标准中的项目应开展 5.ANA、dsDNA抗体规定 6.不同疾病推荐:RA、SLE等
n
n n n
6、ANA–IIFA依赖于试剂、设备和其他因素，因而筛查 稀释度可因地而异。 一个ANA的异常结果应是在正常 对照人群第95百分位以上的滴度。通常而言， 以 Hep-2细胞为底物检测ANA评价成人人群SARD时，所 用的稀释度为1:160； 7、 ANA阳性时，推荐同时报告荧光图型和最高稀释度； 8 、ANA–IIFA荧光图型的报告应采用标准化术语； 9、可能时，除了细胞核荧光图型外，其他的细胞浆和 有丝分裂荧光图型也应一并报告；
《自身抗体检测在自身免疫性疾病中的临床应用专家建议》解读
n 9、可能时，除了细胞核荧光图型外，其他的细胞浆和 有丝分裂荧光图型也应一并报告；
anti-dsDNA检测
n 1、临床怀疑SLE时，如ANA阳性，则还需检测antidsDNA抗体；
n 2、检测anti-dsDNA时，Farr试验和CLIFT（短膜虫免 疫荧光检测）具有高临床特异性。其他方法的特异性 较低，因而推荐这些方法检测阳性时再用Farr试验和 CLIFT加以确认，并分别报告结果；
n 3、在报告anti-dsDNA结果时应包括检测方法； n 4、anti-dsDNA结果的报告应是定量的（或CLIFT半定
量）； n 5、应以相同方法用于anti-dsDNA的定量检测和SLE病
情活动监测；
anti-ENA检测
n 1、ANA阳性时，推荐还检测anti-ENA； n 2、检验报告中应注明anti-ENA检测方法。如与IIFA或临床诊断偏
《自身抗体临床应用专家共识》
n
中华风湿病学杂志,2014,18(7):437-443
n 1.怀疑自身免疫疾病检测自身抗体
n 2.公认方法、定量/半定量/滴度
n 3.检验与临床结合
n 4.诊断标准中的项目应开展
n 5.ANA、dsDNA抗体规定
n 6.不同疾病推荐:RA、SLE等
抗核周因子子(APF)靶抗原: ----前聚丝蛋白白部分去磷酸化产物(Simon, 1993)
1979 1964
IFA:以大大鼠鼠食食管上皮皮细胞角角质层为底物的RA特异性的抗体( 抗角角蛋白白抗体,AKA)(Young BJJ.Br Med J.1979,2:97)
IFA:以颊粘膜上皮皮细胞核周围的角角质透明蛋白白颗粒为底物的RA 特异性抗体APF(Nienhuis RLF.Ann Rheum Dis,1964,23:302)
自身抗体检测在自身免疫性疾病中的临床应用专家建议
自身抗体检测在自身免疫性疾病中的临床应用专家建议自身免疫性疾病是一类由机体免疫系统异常激活导致的疾病，包括类风湿性关节炎、系统性红斑狼疮、硬化性胆管炎等多种疾病。
这些疾病往往具有多样性的临床表现，早期诊断和治疗对患者的预后至关重要，因此准确快速地诊断自身免疫性疾病对于临床医生来说具有重要的临床意义。
自身抗体检测可以通过对患者血液或体液中的自身抗体进行定量或定性分析，从而快速准确地确定是否存在自身免疫性疾病。
一般情况下，自身抗体的检测可以通过间接免疫荧光等技术进行，这些技术已经得到了广泛应用并具有较高的准确性和特异性。
在临床实践中，自身抗体检测可以帮助医生明确诊断、评估病情和指导治疗。
首先，自身抗体检测可以帮助临床医生鉴别不同类型的自身免疫性疾病。
例如，在类风湿性关节炎的诊断中，检测类风湿因子（RF）和抗环瓜氨酸肽（anti-CCP）抗体可以明确诊断。
其次，自身抗体检测可以评估疾病的活动性和严重程度。
一些自身抗体的水平与疾病的活动性密切相关，例如系统性红斑狼疮抗核抗体（ANA），通过监测ANA抗体的变化可以评估疾病的活动性和预测疾病的复发。
最后，自身抗体检测还可以指导治疗方案的选择。
例如，在硬化性胆管炎的治疗中，抗胆管细胞抗体（anti-CA）的检测结果可以指导是否使用免疫抑制剂治疗。
然而，自身抗体检测也存在一些限制和局限性。
首先，自身抗体的检测结果并不是绝对可靠的诊断依据，需要结合临床症状、体征和其他实验室检查结果进行综合分析。
其次，自身抗体检测结果的解读需要依赖临床医生的经验和专业知识，因此需要在专科医生的指导下进行。
此外，自身抗体的检测也受到技术的限制，包括方法的准确性、灵敏度和特异性等方面。
因此，为了提高自身抗体检测在自身免疫性疾病中的临床应用价值，专家建议以下几点：首先，加强对自身抗体检测技术和方法的研发，不断提高其准确性和特异性。
其次，建立完善的自身免疫性疾病的自身抗体检测指南，帮助临床医生合理选择检测项目和解读检测结果。
自身免疫病与自身抗体检测及应用PPT课件
自身抗体检测的阳性结果有助于明确诊 断，而阴性结果则有助于排除某些自身 免疫病，为临床医生提供重要的参考依
据。
病情监测与疗效评估
自身抗体检测不仅用于疾病的诊 断，还可用于病情监测和疗效评
估。
通过定期检测自身抗体水平，可 以了解疾病的进展和治疗效果，
为调整治疗方案提供依据。
例如，类风湿关节炎患者治疗过 程中RF水平的下降可以作为病 情缓解和治疗效果良好的指标之
03
自身抗体检测在临床中 的应用
自身免疫病诊断
自身抗体检测是诊断自身免疫病的重要 手段之一，通过检测患者体内是否存在 自身抗体，有助于判断疾病类型和病情
严重程度。
常见的自身抗体检测包括抗核抗体 （ANA）、类风湿因子（RF）、抗中 性粒细胞胞质抗体（ANCA）等，这些 抗体在各自的疾病中具有较高的敏感性
化学发光法是一种高灵敏度的自身抗体检测技术，通过将待测抗体与化学发光标记的二抗结合，在化 学发光检测仪中测定发光信号，从而确定抗体类型和浓度。该方法具有高灵敏度和特异性，但仪器设 备较为昂贵。
免疫印迹法
总结词
一种多指标的自身抗体检测技术
VS
详细描述
免疫印迹法是一种多指标的自身抗体检测 技术，通过将待测抗体与蛋白质印迹膜结 合，再与荧光标记的二抗结合，在荧光成 像仪中测定荧光信号，从而确定多种抗体 类型。该方法可同时检测多种抗体指标， 适合对多种自身免疫病的诊断和鉴别诊断 。
发病机制
自身抗原的暴露或变异
某些情况下，自身抗原可能暴露或发 生变异，引发免疫系统的攻击。
免疫调节异常
遗传因素
研究发现，自身免疫病的发生与遗传 因素有关，某些基因的变异会增加患 病风险。
免疫系统的调节异常可能导致自身免 疫病的发病。
抗体的检测与临床应用
抗体的检测与临床应用抗体是一种能够识别和结合特定抗原的蛋白质分子，它在人体的免疫系统中具有重要的作用。
抗体的检测与临床应用是现代医学领域中至关重要的一环，可以帮助医生诊断疾病、评估疾病的病情和治疗效果。
本文将就抗体的检测方法和在临床应用中的重要性进行探讨。
一、抗体的检测方法1. 免疫层析法免疫层析法是一种简单、快速、灵敏且具有较高特异性的抗体检测方法。
它通过在试验纸条上固定抗体试剂和抗原试剂，利用抗体和抗原之间的特异性结合来检测目标抗体的存在，常用于急性感染病毒抗体的检测。
2. 免疫测定法免疫测定法是一种广泛应用于临床实验室的抗体检测技术，包括酶联免疫吸附试验（ELISA）、放射免疫测定法（RIA）等。
这些方法能够准确、敏感地检测出目标抗体，被广泛用于实验室诊断、疾病筛查和药物监测等领域。
3. 免疫荧光法免疫荧光法是一种高度特异性和敏感性的抗体检测技术。
通过对样本中的抗体进行荧光染色，观察其在荧光显微镜下是否结合到特定抗原上，可以达到检测抗体的目的，被广泛用于自身免疫性疾病和传染病的诊断。
二、抗体的临床应用1. 疾病诊断抗体的检测在疾病诊断中起着不可替代的作用。
临床医生可以通过检测患者体内的特定抗体水平，判断其是否感染某种病原体或患有某种特定疾病，如HIV抗体检测、乙肝抗体检测等，有助于及早发现疾病并采取相应的治疗措施。
2. 疫苗接种疫苗接种是利用抗原引起机体产生抗体，从而形成免疫保护的一种预防性医学措施。
在接种疫苗前，医生通常会先对患者进行抗体检测，以确定其免疫状态，从而确定是否需要接种疫苗以及疫苗的接种剂量。
3. 疗效评估在治疗过程中，医生可以通过定期检测患者体内特定抗体的水平，来评估治疗的疗效和疾病的病情变化。
比如在肿瘤治疗中，通过监测患者血清中肿瘤标志物抗体的水平，来判断肿瘤的生长状态和预后。
4. 输血安全在输血过程中，抗体的检测也扮演着重要的角色。
通过对供血者和受血者的抗体进行检测，可以减少输血后的不良反应，保障输血的安全性。
自身抗体的检测
荧光模式： 大鼠食管，仅限于上皮角质层的较强的线性分层的均质荧光。
STEP1
STEP2
自身抗原：丝聚蛋白（filaggrin）为AKA的靶抗原。
临床意义：见于RA，阳性率36~59%，特异性95~99%。还是一个潜在的预后标志，高抗体滴度可能预示着较严重的RA类型。
抗角蛋白抗体（AKA）
抗肝肾微粒体抗体（LKM）
01
临床意义：高滴度的抗RNP抗体为 混合结缔组织病（MCTD）的特征，发生率为95~100%。也可出现于SLE，但总是与抗Sm抗体同时出现。抗Sm抗体对SLE具有高度特异性，发生率为20~40%。
02
抗RNP/Sm抗体
抗SSA／SSB抗体
荧光模式 Hep-2片：细胞核呈细颗粒荧光，核仁不发光。 肝组织片：细颗粒荧光。
自身抗原：为丝氨酸蛋白酶-蛋白酶3（PR3）。该靶抗原为可溶性蛋白，存在于正常中性粒细胞的嗜苯胺蓝颗粒中。
01
临床意义：cANCA可见于多种系统性血管炎。主要见于Wengener’s肉芽肿，约占ANCA阳性率的80~95%。cANCA被认为是活动性Wengener’s肉芽肿和微多动脉炎的特异和敏感的标志性抗体。还见于Churg-Strauss综合征。
02
抗中性粒细胞胞浆抗体（胞浆型）
抗中性粒细胞胞浆抗体（核周型）pANCA 荧光模式： 乙醇固定的中性粒细胞：细胞核周围平滑的带状荧光，细胞核阴性。 猴肝：肝血窦区粒细胞强荧光，而肝细胞阴性。
自身抗原：主要抗原为髓过氧化物酶（MPO），其他抗原还有白细胞弹性蛋白酶，组织蛋白酶G、溶菌酶及乳铁蛋白等。
分裂期细胞阳性
荧光模式：
抗着丝点抗体(ACA)
Hep-2：细胞核细的、相同大小的颗粒荧光，分裂期颗粒荧光带状位于细胞中间。 肝组织片：分布于细胞核的10~20个颗粒，荧光弱，易被忽略。
自身抗体 化学发光法 说明书
自身抗体化学发光法说明书全文共四篇示例，供读者参考第一篇示例：自身抗体是人体免疫系统产生的一种重要免疫蛋白，对抵抗细菌、病毒、真菌等病原体具有重要作用。
在医学实验室中，检测人体内特定自身抗体水平可以帮助诊断自身免疫性疾病。
化学发光法是目前常用的一种高灵敏度、高特异性的检测技术，能够快速准确地检测自身抗体水平。
一、实验原理化学发光法是一种通过化学反应产生化学发光来检测分子的技术。
该技术利用免疫学原理，将样本中的自身抗体与特定的标记抗体结合，形成免疫复合物。
接着，将化学试剂添加到反应体系中，激发光信号的发射。
通过测量发射的光信号强度，可以准确计算出目标自身抗体水平的含量。
二、试剂及设备准备1. 样本：血清、血浆等体液样本2. 试剂盒：化学发光自身抗体检测试剂盒3. 仪器：化学发光检测仪4. 取样器：用于取样本的吸管或移液器5. 实验用品：试管、离心管等实验室常用耗材三、操作步骤1. 样本处理：将样本离心分离，获取上清液样本。
2. 准备标准曲线：使用标准品制备系列浓度的标准曲线。
3. 试剂配置：按照试剂盒说明书中的要求，配置好实验所需的各类试剂。
4. 取样：使用取样器将样本加入反应试剂中，进行充分混合。
5. 反应：根据试剂盒说明书的要求，进行免疫反应的孵育时间。
6. 检测：将反应混合液加入化学发光仪中进行检测，记录光信号值。
7. 计算结果：根据标准曲线和样本的光信号值，计算出目标自身抗体的含量。
四、注意事项1. 操作过程中应注意无菌操作，避免污染。
2. 每个步骤的操作时间和温度要严格控制，以免影响实验结果。
3. 试剂存储要在规定的温度和条件下保存，避免失效。
4. 严格按照试剂盒说明书的要求进行操作，以确保实验结果的准确性。
5. 实验过程中如有异常情况出现，应及时停止并寻找解决方法。
通过化学发光法检测自身抗体水平，能够帮助医生准确诊断自身免疫性疾病，指导治疗方案的制定。
化学发光法具有操作简便、操作时间快、结果可靠等优点，成为目前常用的一种自身抗体检测技术。
自身抗体检测的临床应用与质量控制_万本愿
自身抗体检测的临床应用与质量控制_万本愿自身免疫性疾病(autoimmune diseases，AID)是指机体对自身抗原发生免疫反应而导致自身组织损害所引起的疾病。
自身抗体的存在与自身免疫性疾病并非两个等同的概念，自身抗体可存在于无自身免疫性疾病的正常人，特别是老年人，如抗甲状腺球蛋白、甲状腺上皮细胞、胃壁细胞、单链-DNA抗体等。
近年来，自身抗体检测在诊断自身免疫性疾病、判断疾病的活动程度、观察治疗效果、指导临床用药等具有重要的作用。
由于不同实验室可能采用不同的抗原基质，即使同样的抗原基质，其抗原固定方法也有差异或不同。
另外，由于不同的血清稀释方法以及操作者对不同荧光模式的识别能力的不同，均可影响到自身抗体的检测质量。
１常见自身抗体检测的临床应用大多数自身免疫性疾病患者的血清中可检测到高效价的自身抗体，虽然有些自身抗体在疾病中的作用尚未被证实，但其与疾病的相关性已获得认可。
特别是有些自身抗体的检测已纳入到某些自身免疫性疾病的诊断标准中，这些自身抗体的检测对自身免疫性疾病的诊断和鉴别诊断及愈后评估具有重要的临床意义。
随着对自身抗体的了解越来越深入，临床应用越来越广泛，免疫学技术进一步的提高，自身抗体检测已是临床免疫检测的一项重要的实验室指标。
在诊断自身免疫性疾病、判断疾病的活动程度、观察治疗效果、指导临床用药等具有重要的临床意义。
笔者简单介绍一下自身抗体的临床应用。
1.1抗核抗体(antinuclearantibody，ANA)是一组针对自身真核细胞的各种细胞核成分为靶抗原的自身抗体的总称。
ANA的性质主要是IgG、也有IgM、IgA和IgD。
其无器官和种属的特异性，故该类抗体可与所有动物的细胞核发生反应[1,2]。
现已证实ANA对很多自身免疫性疾病有诊断价值，在不同疾病中，特别是在风湿性疾病中，其抗体谱有一定的特征性。
此外，在桥本甲状腺炎、重症肌无力、多发性动脉炎等患者中也可能检测出ANA。
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安徽理工大学医学院分配备注第二十章自身抗体检测及应用自身免疫：指机体免疫系统受某些内因、外因或遗传等因素作用,产生针对自身正常或变性的组织、器官、细胞、蛋白质或酶类等自身抗原发生的免疫应答反应，出现自身抗体或自身致敏淋巴细胞的现象。
自身免疫性疾病：自身免疫导致组织器官损伤或功能障碍所致疾病。
自身抗体：自身免疫性疾病患者血循环中针对自身组织器官、细胞及细胞内成分的抗体，称为自身抗体。
第一节自身抗体的特性1．自身免疫性疾病都伴有特征性的自身抗体谱；2．自身抗体是某些自身免疫性疾病标记性抗体或特异性抗体；3．自身抗体与疾病的活动性有相关性；4．自身抗体参与了免疫病理性损伤。
第二节常见自身抗体的检测自身抗体的种类很多，临床检测中最常见的自身抗体有类风湿因子、抗核抗体、抗可提取性核抗原抗体谱、抗各种组织细胞抗体和抗受体抗体等。
一、类风湿因子(一) 定义类风湿因子(RF)是一种抗人或动物IgG分子Fc片段抗原决定簇的抗体，是以变性IgG为靶抗原的自身抗体。
(二)分类常见的RF有IgM型、IgG、IgA型和IgE型，IgM型RF被认为是RF的主要类型。
(三)检测方法1．胶乳颗粒凝集实验:为定性或以滴度半定量2．速率散射比浊法：自动化程度高，能定量分析，测定结果准确性和敏感性均高于胶乳凝集实验。
3. ELISA法ELISA检测法可测定不同Ig类型的RF。
(四)临床应用分配备注1.高滴度RF阳性支持对早期RA的诊断。
2.RA患者RF的滴度与患者的临床表现呈正相关。
3.RF还可在SLE、进行性全身性硬化症等自身免疫性疾病患者和部分老年人中RF的阳性率可达28.9％ --50％。
4.RF对RA患者并不具有严格特异性，RF阳性不能作为诊断RA的唯一标准。
5.在多种疾病中可有RF阳性，滴度均较低(<40IU／mI)，随着RF滴度增加，RF对RA的诊断特异性增高。
IgM型RF：在RA患者血清中IgM型RF效价>80IU／ml并伴有严重关节功能障碍时，通常提示患者预后不良。
IgG型RF：在RA患者血清或滑膜液中IgG型RF的出现与患者的滑膜炎、血管炎和关节的症状密切相关，此RF常伴随高滴度的IgM型RF在同一RA患者血清或滑膜液中出现。
IgA型RF：10％的RA患者血清或滑膜液中可检出IgA型RF，IgA型RF是RA临床活动的一项指标，IgA型RF阳性与患者关节炎症状的严重程度以及骨质破坏有显著的相关性。
IgE型RF：在关节液、胸水中高于同一病人的血清水平。
RF阴性不能排除RA的诊断，有部分RA患者可一直呈血清RF阴性，这类患者关节滑膜炎轻微，很少发展为关节外的类风湿疾病。
二、抗核抗体（一）定义:抗核抗体(ANA)是一组将自身真核细胞的各种细胞核成分作为靶抗原的自身抗体的总称。
ANA的性质主要是IgG，也有IgM、IgA和IgD。
(二)分类:按细胞内分子理化特性与抗原分布部位将ANA分为以下四大类：抗DNA抗体、抗组蛋白抗体、抗非组蛋白抗体、抗核仁抗体。
在临床检测中ANA的命名通常按以下三种方式进行：1．根据抗原的化学名称命名：如抗dsDNA 、抗RNP 、抗DNP 抗体。
2.以第一位检出该抗体的患者命名：如抗Sm 、抗Ro 、抗La 抗体。
分配备注以相关疾病命名：如抗SSA 、抗SSB 抗体。
(三)检测方法间接免疫荧光法又称为荧光抗体法或荧光染色法：(四)常见的ANA荧光图形及临床意义1．均质性(homogeneous，H) 细胞核均匀着染荧光，有些核仁部位不着色，分裂期细胞染色体可被染色出现荧光。
2．斑点型(speckled，S) 细胞核内出现颗粒状荧光，分裂期细胞染色体无荧光显色。
3．核膜型(membranous，M) 又称周边型(rim)，荧光着色主要显示在细胞核的周边形成荧光环，或在均一的荧光背景上核周边荧光增强；分裂期细胞染色体区出现荧光着色。
4．核仁型(nuclear，N) 荧光着色主要在核仁区，分裂期细胞染色体无荧光着色。
相关抗体是抗核仁特异的低分子量RNA，抗RNA聚合酶—1、抗U3RNP、抗PM、Scl。
（五)抗双链DNA抗体的检测方法检测抗dsDNA抗体最特异和最敏感的方法是用马疫锥虫或绿蝇短膜虫作为抗原基质进行间接免疫荧光检测。
三、抗ENA抗体谱(一)定义ENA(extractable nuclear antigens)是可提取核抗原的总称，ENA抗原可用盐水或磷酸盐缓冲液从细胞核中被提取。
ENA属非组蛋白的核蛋白，为酸性蛋白抗原，是由许多小分子RNA(约 100～215个核苷酸)与各自对应的特定蛋白质组成的核糖核蛋白颗粒，该组成使其各自的抗原性得以增强，分子中不含DNA。
ENA抗原中主要包括Sm、RNP、SSA、SSB、Jo—l、Scl-70抗原，这些抗原除有各自的抗原特异性外，尚可因与蛋白质组成后的分子量大小各不相同而在电泳后被分成不同分子量的条带。
不同的自身免疫性疾病可产生不同的抗ENA抗体。
根据ENA 抗原分子量及抗原特性不同，可用不同的免疫方法对这些自身抗体进行检测。
不同特性的抗ENA抗体在各种自身免疫性疾病中的阳性率有明显差异，有些有很高的特异性。
对其进一步检测，在协助诊断和鉴别诊断自身免疫性疾病方面具有重要的临床意义。
（教案续页）基本内容辅助手段和时间分配备注(二)抗ENA抗体的检测1．方法早期常用的方法有双向免疫扩散(ID)、对流免疫电 (CIE)，但敏感度和特异性较低；目前常用的方法有免疫印迹技术(IBT)和斑点酶免疫技术(dot-ELISA)。
2．原理是从小牛或兔胸腺提取的ENA抗原，经 SDS—聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDS-PAGE)，按分子量大小分离成区带，经参照对应分子量标准物质确定每一抗原区带的分子量。
然后将各抗原区带转印至硝酸纤维膜上制成抗原吸附载体膜。
将待检血清加在已切成细条的硝酸纤维膜上，待检血清中存在的抗ENA抗体分别与硝酸纤维膜上的相应抗原区带结合，当再加入酶标记抗人IgG抗体后形成抗原-抗体-酶标记抗体复合物，再加入酶的底物，出现显色反应，凡有抗ENA 抗体与膜上抗原结合的位置，均会因酶促反应而显色。
(三)抗ENA抗体的临床意义1．抗Sm抗体：SLE的标志性抗体，30%--40%SLE患者抗Sm抗体阳性，不与SLE的活动性有关。
抗Sm抗体对早期、不典型的SLE或治疗的回顾性诊断有大的帮助。
2.抗核RNP(nRNP)抗体：MCTD的重要血清学依据，检出率高大95%，活动期或缓解期高低度抗核 RNP抗体可持续存在。
其他自身免疫性疾病也可有低滴度的抗核RNP抗体存在。
3.抗SSA／Ro抗体和抗SSB／La抗体：抗SSA／Ro抗体和抗SSB／La抗体是SS 患者最常见自身抗体。
4．抗Jo—1抗体：抗体最常见于多发性肌炎(polymyositis，PM)，故又称为PM-1抗体。
5．抗Scl-70抗体：抗Scl-70抗体几乎仅在进行性系统性硬皮病(PSS)故该抗体是PSS的特征抗体。
四、抗中性粒细胞胞质抗体(一)定义抗中性粒细胞胞质抗体(ANCA)是一组以人中性粒细胞胞质成分为靶抗原，与临（教案续页）基本内容辅助手段和时间分配备注床多种小血管炎性疾病密切相关的自身抗体。
抗体可表达为IgG、IgM或IgA。
ANCA最早于1982年在坏死性肾小球肾炎患者血清中发现，现已证实该抗体是系统性血管炎的血清标志性抗体，对血管炎的诊断、分类及预后具有较为重要的意义。
(二)分型主要的ANCA有二型：胞质型(cytoplasmic，cANCA)和核周型(perinuclear，pANCA)。
(三)ANCA的检测方法ANCA 的检测可分为总ANCA 和特异性ANCA 检测两种。
总ANCA 检测通常采用IIF ，特异性ANCA 检测最常用的是ELISA 法.(四)ANCA的临床应用1．ANCA被认为是原发性小血管炎的特异性血清标志物。
2．ANCA的检测可大大提高肾血管炎的早期诊断。
3．ANCA阳性相关的疾病还有继发性血管炎、非血管炎性疾病(如肺部炎性疾病)、炎性溃疡(IBD)、RA、SLE、自身免疫性肝脏疾病等。
五、抗心磷脂抗体(一)定义抗磷脂抗体( APLA)是针对一组含有磷脂结构抗原物质的自身抗体。
这些抗体主要包括抗心磷脂抗体( ACLA)，抗磷脂酸抗体(APAA)和抗磷脂酰丝氨酸抗体等。
二)抗心磷脂抗体的检测最常用ELISA法进行检测。
(三)抗心磷脂抗体的临床应用1.ACL抗体阳性或持续升高与患者的动静脉血栓形成、血小板减少、反复自发性流产及神经系统损伤为特征的多系统受累的抗磷脂综合征( APS)密切相关。
2.ACL抗体在SLE患者中阳性检出率很高。
六、抗平滑肌抗体(一)临床意义基本内容辅助手段和时间分配备注抗平滑肌抗体( ASMA)是自身免疫性肝炎的血清学标志抗体。
该抗体的检测有助于自身免疫性肝炎、原发性胆汁性肝硬化的诊断及与其他肝脏疾病的鉴别诊断。
(二)检测方法ASMA的检测主要采用间接免疫荧光分析。
七、抗角蛋白抗体(一)临床意义抗角蛋白抗体( AKA)又称为抗丝集蛋白抗体(AFA)或抗角质层抗体(ASCA)。
AKA 主要见于类风湿性关节炎患者，其阳性率为30％-55％，特异性可达95％～99％。
在非类风湿性关节炎的自身免疫病患者,AKA的阳性检出率极低。
AKA与RF 在诊断RA时具有显著的相关性。
由于AKA的出现常可先于疾病的临床表现，因此AKA对于早期诊断RA具有重要的临床意义。
（二）检测方法AKA的检测常采用间接免疫荧光分析法。
八、抗乙酰胆碱受体抗体(一)临床意义抗乙酰胆碱受体( AchR)是重症肌无力( MG)患者的标志性自身抗体，约90％的MG患者抗AchR抗体阳性。
抗AchR抗体可与患者横纹肌细胞的乙酰胆碱受体结合，引起运动终板的破坏，使神经—肌肉间的信号传导发生障碍，导致患者肌肉运动无力，(二)检测方法抗AchR抗体检测常用ELISA法进行。
九、抗骨骼肌抗体(一)临床意义横纹肌抗体ＳtrAb抗骨骼肌抗体(ASMA)最常见于成年型重症肌无力患者，AMSA与抗AchR抗体的联合检测对MG的诊断及鉴别诊断具有更高的临床价值。
(二)检测方法常用间接免疫荧光分析。
十、抗胰岛细胞抗体基本内容辅助手段和时间分配备注(一)临床意义抗胰岛细胞抗体( APICA)是1型糖尿病( DMl)患者中最常见的自身抗体。
Ⅱ型糖尿病(DM2)患者如出现APICA阳性，提示有可能发生DMl。
健康正常人该抗体阳性检出率约在1.8％--4.1％o.(二)检测方法检测APICA可用IIF和ELISA等方法。
第三节自身抗体检测的临床应用大多数自身免疫病患者血清中可测到高效价的自身抗体，有些自身抗体在疾病中的作用尚未被证实，但其与疾病的相关性已获得认可。