hVEGF165及hBMP-7共表达重组腺相关病毒载体对兔激素性股骨头坏死的修复作用研究
hVEGF165在兔骨髓间充质干细胞中的表达
通过流式细胞仪检测表 明培养 的细胞 为兔骨髓 间充质＝ 细胞 ，ｌ 一 Ｃ Ｆ Ｉ ＂ Ｐ Ｒ法 、 ｅ ｅ ｏ法检测结果均表 ｌ Ｗ ｓｒ ｂ ｔ ｔ ｌ ｎ
明 ｈ Ｅ Ｆ 基 因转染兔 骨髓 间充质 细胞后 能任其 中表 达。结 论 成功培 养兔 体外 骨髓 间充 质千 细胞 ， 因转 染后 细胞 能有 效表 达 ＶＧ Ｉ ｒ 基
来基 因组 织工程 研究 的热 点 。血 管 内皮 生长 因子 （ Ｅ Ｆ ＶＧ ） 是一种高特异性 的内皮细胞有 丝分裂 原 ， 能促 进血管 内皮 细胞分裂 、 增殖 ， 形成新血管 。本研究通过体外 培养兔 骨
Ｍ ｅ ｈ ｄｓ Ｒａ ｂｔｍｅｅ ｃ ｙ ｌｓｅ ｃｌｓｗ ｓａｃｅ ｉ ｄ ｅ ｐｅｓｏ ｆａ ｔ ｅ Ｄ２、 ４ Ｃ ４ 、 Ａ — ＤＲ ａｔｒ ｃｌｉａｅ ｎ ｖｔ ｔｏ ｂｉ ｓｎｈ ｍａ ｔｍ ｅｌ ａ ｃｒｄｔ ｘｒｓｉｎ ｏ ｉ ｎ Ｃ ９ ＣＤ４、 Ｄ ５ ＨＬ ｅ ｎ ｇ ｆ ｕｔ ｔｄ ｉ ｉｏ．Ｔ ｅ ｃｎｔ ｃｅ ｅ ｖ ｒ ｈ ｏ ｓ ｔｄ ｕ ｒ
维普资讯
浙 江 临 床 医 学 ２０ 午 １ 第 １ 第 １期 ０８ 月 Ｏ卷
・１ ・ ・ Nhomakorabea基 础 研 究 ・
ｈ Ｅ Ｆ６ Ｖ Ｇ １在兔 骨髓 问充质 干细胞 中的表 达 ５
王 宾 沈来根 朱越 锋 李鲁 滨 郭治 宇 刘振 杰
【 摘要】 目 培 和 定兔 髓 充 于 胞， 因 染 观 ＶＧ 其中 表 。 体 养 骨髓 充 干细 以 的 养 鉴 骨 间 质 细 基 转 后 察ｈＥＦ 在 的 达 方法 外培 兔 间 质 胞，
流 式 细 胞 仪 检 测 其 表 面 抗 原 （ Ｄ９Ｃ ４、 Ｄ５Ｈ１ Ｃ ２、 Ｄ４ Ｃ ４、 Ａ—Ｄ 的 表 达 。 通 过 腺 病 毒 载 体 转 染 ｈ Ｅ Ｆ６后 ， 用 Ｒ Ｒ） ＶＧ Ｉ ５ 采 Ｔ—Ｐ Ｒ、 ｓ ｒ ｂｏ 法 检 测 Ｃ Ｗｅ ｅ ｌ ｔｎ ｔ
VEGF121和BMP2双基因共表达重组腺病毒载体的构建及其在HEK293中的表达
Ｖ Ｇ １ １和 Ｂ ２双基 因共表 达重 组腺 病 毒 Ｅ Ｆ２ ＭＰ 载体 的构 建 及其 在 Ｈ Ｋ ９ Ｅ ２ ３中 的表 达
栗 刚 吴秀成 钟 ， ， 声 王 ， 巍’李 。 媛 刘 丹平 ，
（ 辽宁医学院附属第一 医院 ， １ 辽宁锦州 １１０ ； ２０ ０２辽源市 中心 医院）
摘要 ： 目的
构建人血管内皮生长 因子 １１Ｖ Ｇ １１与人骨形态发生蛋 白２ Ｂ Ｐ ） ２ （ Ｅ Ｆ２ ） （ Ｍ ２ 双基 因共表达腺 病毒载 对 腺病 毒质粒 ｐｈｔ － Ｓｕｌ ｔ ｅ
体 ＡｖＢ Ｐ一 Ｅ —Ｅ Ｆ２ ， ｄ—Ｍ ２Ｉ ＳＶ Ｇ １１并观察其在人胚 肾细 胞株 （ Ｅ ２３ 中 的表 达情 况。方法 Ｒ Ｈ Ｋ９）
Ｃ －Ｍ ２的 目的基因 Ｂ ２ ＭＶ Ｂ Ｐ ＭＰ 进行 Ｐ Ｒ扩增 。腺病毒 质粒 ｐ ｈｔｅｃ ．Ｅ Ｆ２ ． Ｅ ．ｒ Ｆ ． 经 Ｋ ｎＩＸ ａＩ Ｃ Ｓ ｕｔ —Ｍｖ Ｖ Ｇ １１Ｉ ＳｈＧ Ｐ１ ｌ Ｒ ｐ ｂ 酶 ／
切后 ， Ｂ Ｐ 片段定 向导入 ｐｈｔ —Ｍ －Ｅ Ｆ２． Ｅ ， 将 Ｍ２ Ｓｕｌ Ｃ ＶＶ Ｇ １１Ｒ Ｓ构建 ｐｈｔ ．Ｍ ． Ｇ １１ Ｒ ＳＢ Ｐ ， 注入 大肠 ｔ ｅ Ｉ Ｓｕｌ Ｃ ＶＶＥ Ｆ２． ．Ｍ ２并 ｅ ｏ ｉａ ｔｅｐｅ ｓｐａｍｉ ａ ｒｎｆｃｅ ｏ ＨＥＫ ９ ｅｌ． ｅｅ ｐｅ ｓ ｎ ｏ ｕ ｎ ｉｇ Ｔ ｏｒｃ ｃ ｍｂｎ ｘ ｒｓ ｌｓ ｄ ｗ ｓｔ ｓｅ ｔｄ ｔ ｈ ｒ ｎ ａ ２ ３ ｃｌ Ｔ ｘ ｒｓｉ ｆＶＥＧＦ ２ ｓｈ ｏ １ １，Ｂ ２ ＭＰ
Ｖ Ｇ １１ Ｅ Ｆ ２ 表达 阳性 。结论
中共 表 达 阳性 。
hbFGF基因及hBMP-7基因修饰的组织工程化复合物联合应用促进牙槽骨再生动物实验研究
Ｆ ｊ ｎＰｏｉ ｉｌ ｅ ｂｒｔｒ ｔｍ ｔｏ ｙＦ ｆ ｎＭｅｉ ｌ ｎｖｒｔ ｈｏ Ｓｏ ａｏｏｙＦ ｚｏ ５ ０ ２ Ｃ ｉ ｕ ａ ｒｖ ｃａ ＫｙＬ ｏａｏｙｆＳｏ ａｏ ｇ ， ｕ ａ ｄｃ ｉ ｓｙ ｃｏｌ ｔｍ ｔ ｇ ， ｕｈ ｕ３０ ０ ， ｈｎ ｉ ｎ ａ ｏ ｌ ｉ ａＵ ｅｉ Ｓ ｆ ｏ ｌ ａ
ｎ ｅ ｅ ｏ ｏ ｎ ｓ Ｂｏｈ ｔ ｏ ｏ ｎ ｓ ｗ ｒ ｌｃ ｄ ｉ ｔ ｈ ｅ ｉｄ ｎ ａ ｅｅ ｔ ｎ Ｂｅ ｇｅ ｄ ｇ ｏ ｅｈ ｒａ ｄ ｔ ｅｒｅ－ ｅ ｒ ｄ ｃ ｍｐ ｕ ｄ ． ｔ ｗｏ ｃ ｍｐ ｕ ｄ ｅ ｅ ｐ ａ ｅ ｎ ｏ ｔ ｅ ｐ ｒ ｏ ｔ ｌ ｆｃ ｓｉ ａ ｌ ｏ ｓｔ ｇ ｔ ｅ ｎ ｈ ｉ ｆ ｏ ｄ ｆ ｃｓｏ ｌｅ ｌｒｂ ｎ ｅ ｅ ｅ ａ ｉｎ ｗｅ ｅｅ ａ ｕ ｔ ｄ ｈ ｓｏｏ ｉａ ｌ ． ｓ ｌｓ Ｔｈ ｎ ｌ ｓｓｏ ｅ ｙ ｆｒ ｄ ｃ ｍｅ ｔ ｍ ｎ ｅ ｔ ｎ ａｖ ｏ ａ ｏ ｅ ｒ ｇ ｎ ｒ ｔ ｒ ｖ ｌ ａ ｅ ｉｔｌ ｇ ｃ ｌ Ｒｅ ｕ ｔ ｏ ｙ ｅ ａ ａ ｙ ｉ ｆ ｗｌ ｍｅ ｅ ｎ ｕ ａ ｄ ｎ ｏ ａ ｖ ｏａ ｏ ｅ ｂ ｆ ｒ ｎ ｆ ｒ ｈ ｒ ａｍｅ ｔ ｈ ｗｅ ａ ｈ ｏ ｉ ａ ｉｎ ｏ Ｆ ｄｆ ｄ ＧＦ ／ＡＤＭ ｏ ｌｘ ｗｅ ｅ ｌ ｅ ｌｒｂ ｎ ｅ ｏ ｅ ａ ｄ ａｔ ｅ ｔｅ ｔ ｎ ｓｓ ｏ ｄ ｔ ｔ ｅ ｃ ｍｂ ｎ ｔ ｆｂ ＧＦ ｍｏ ｉ ｅ ｓ ｅｔ ｈ ｔ ｏ ｉ ｃ ｍｐ ｅ ｒ
ｏ ｔ ｔ ｃ ｌ ｌｒ ｅｍ ｌ ａｒ （ Ｄ ｔ ｆｒｌｉ ｕ — ｎ ｉｅ ｒｄｃ ｍ ｏ ｎ ｓ Ｓ ｌ ｎ ｏ ｓ ， ｏ ｅ ａ ｏ ｔ ｍ １ ｅｌ ｎｏ ｈ ａ ｅ ｕａ ｒ ａ ｍ ｔ ｘ Ａ Ｍ） ｉ ｔ ｓ ｅ ｅ ｇｎ ｅｅ ｏ ｐ ｕ ｄ ． ｉ ｔ ｅ ｕ ｌ ｂ ｎ ｒ ｗ ｓ ｏ ａ ｃ ｌ ｅ ｌ ｄ ｉ ｏｏｌ ｓ ｍｕ ａ ｙ ｍ ｒ ｓ
纤维蛋白胶复合BMP治疗兔股骨头缺血性坏死的实验研究
Ｓ ｕ ｙ ｏ ｅｔｅ ｔ ｎ ｆａ ａ ｃ ｌｒｎ ｃ ｏ ｉ ｏ ｅｒ ｂ ｉ ｅ ｒ ｌ ｅ ｄ ｗｉ ｏ ｅｍ ｏ － ｔｄ ｎ ｔ ｒａ ｍｅ ｔ ｖ ｕ ａ ｅ ｒ ｓｓ ｆｔ ａ ｂ ｔｓｆｍｏ ａ ａ ｔ ｂ ｎ ｒ ｈ ｏ ｓ ｈ ｈ ｈ
ｐ ｏ ｅ ｅ ｉ ｒ ｔ ｉ ｓｎ ｂ ｉ ｓ ａ ａ ｔａ ａ ｒｅ ｈ ｇ ｎ ｔｃ ｐ ｏ ｅｎ ｕ ｉ ｇ ｆ ｒｎ ｅ ｌ ｎ ｓｃ ｒ ｉｒ ｉ
Ａ ｓ ａｔ Ｏ ｊ ｔｅ ｏ ｘｌｅ ｗｔ ａ ｅｔ ｅ ｏ ｒ ｖｓ ａ ｎｃ ｓ ｍ ｒ ｅ Ａ Ｆ ） ｙ ｏｅ ｏ— ｂ ｒｃ：【 ｂｅ ｉ 】Ｔ ｐ ｒ ａ ｅ ｅｔ ｎ ｍ ｔ ｄ ｏ ａａ ｕ ｒ ｅｒ ｉｏ ｆ ｏ ｌ ａ Ｖ Ｈ ｂ ｎ ｒ ｔ ｃｖ ｅ ｏ ｎ ｒ ｍ ｈ ｆ ｃ ｏｓ ｆｅ ａｈ ｄ（ ｌ ｂ ｍ ｐｏｅｅｃ ｒｔｎ Ｂ Ｐｃｍ ｉ ｄｗｔ ｆ ｒ ａ ｎ（ Ｓ ． Ｍｅ ｏｓ ｎ ａｍ ｄ ｓｆ Ｖ Ｈ ｗ ｒ ｍ ｄ ｊ ｔ ｇ ｈｇｎｔ ｏ ｉ（ Ｍ ） ｈ ｅ ｉ ｂ ｎ ｅａｔ ） 【 ｔ ｄ】Ａ ｉｌ ｏｅ Ｆ ｅ ａｅ ｙｎ ｃ ｎ ｉｐ ｅ ｏ ｎ ｈ ｉｓ ｉ ｌ Ｆ ｈ ｍ ｌｏＡ ｅ ｂ ｉｅ ｉ
维普资讯
第 １ ７卷第 ７期Ｖｏ ． ７ Ｎｏ． １１ ７２０ ０ ８年 ７月
Ｊ ｌ ０ ８ ｕｙ２ ０
武警 医学 院学报
Ａｃａ Ａ ａ ｅ ａ ｄｃｎ ｅＣＰ ｔ ｃ ｄ ｍｉｅＭｅ ｉ ａ ＡＦ ｉ ・５ ３ ・ ５
０论：
【 结论 】Ｂ 在缺血坏死 的股骨头 内可诱导新 骨形 成 ，与 Ｆ 复合后 ，Ｂ 诱导新骨形成 的质量 和数 量均 明显 提 ＭＰ ｓ ＭＰ
高 ，局部植 入 Ｂ ／ Ｓ Ａ Ｈ具 有 良好的修复作用 。 ＭＰ Ｆ 对 ＮＦ 关键词 ：纤维蛋 白胶 ；骨形态发生蛋 白；股骨 头缺血性 坏死
腺相关病毒介导的人血管内皮生长因子体外转染兔骨髓内皮祖细胞
腺相关病毒介导的人血管内皮生长因子体外转染兔骨髓内皮祖细胞陈锋;谭最;董长垣;陈晓;郭淑芳【期刊名称】《武汉大学学报：医学版》【年(卷),期】2007(28)5【摘要】目的:探讨腺相关病毒-2(AAV-2)介导人血管内皮生长因子-165(hVEGF165)转染兔骨髓内皮祖细胞(EPCs)及其对EPCs增殖能力的影响。
方法:构建携带hVEGF165基因的重组腺相关病毒(rAAV)载体pAAV-hVEGF165;制备携带hVEGF165基因的rAAV(rAAV-2-hVEGF165)和携带β-半乳糖苷酶(-βgal)基因的rAAV(rAAV-2-LacZ);体外培养和鉴定兔骨髓EPCs;分别用rAAV-2-hVEGF165和rAAV-2-LacZ体外转染EPCs(AAV/VEGF-EPC和AAV/LacZ-EPC);用RT-PCR、免疫细胞化学、流式细胞术等法检测hVEGF165和-βgal的表达,MTT法检测AAV/VEGF-EPC的增殖能力。
结果:经酶切鉴定和DNA测序,得到了序列正确的重组质粒pAAV-hVEGF165;AAV/VEGF-EPC能够表达hVEGF165蛋白,AAV/LacZ-EPC能够表达-βgal;rAAV-2-hVEGF165对于EPCs的转染率为64.4%;AAV/VEGF-EPC的增殖能力明显强于AAV/LacZ-EPC和EPCs。
结论:EPCs可以被rAAV-2-hVEGF165高效转染,其增殖能力明显增强。
本文为进一步探讨AAV/VEGF-EPC用于缺血性血管疾病治疗的可能性奠定了基础。
【总页数】6页(P556-559)【关键词】腺相关病毒;内皮祖细胞;血管内皮生长因子;β-半乳糖苷酶【作者】陈锋;谭最;董长垣;陈晓;郭淑芳【作者单位】武汉大学中南医院血管外科;武汉大学医学院病毒学国家重点实验室【正文语种】中文【中图分类】Q26【相关文献】1.腺相关病毒介导的血管内皮生长因子基因与内皮祖细胞联合治疗肢体缺血 [J], 陈锋;谭最;董长垣;陈晓;郭淑芳2.腺相关病毒介导β-神经生长因子基因转染内皮祖细胞 [J], 杨中雁;高春正;吴东进;彭长亮;3.腺相关病毒介导β-神经生长因子基因转染内皮祖细胞 [J], 杨中雁;高春正;吴东进;彭长亮4.腺相关病毒介导人血管内皮生长因子165基因转染后人骨髓基质细胞的成骨分化 [J], 李伟;高鸿雁;王建忠;谢祥仁;肖庆方5.慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因转染骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗兔股骨头坏死 [J], 马跃刚; 李强; 陶旋; 周桢杰; 朱伦井; 段江涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
转染hVEGF165基因的骨髓间充质干细胞移植治疗兔心肌梗死
转染hVEGF165基因的骨髓间充质干细胞移植治疗兔心肌梗死作者：盛小刚，宋卉，冯建章，陈秋雄，吴书林【关键词】心肌梗死；,骨髓间充质干细胞；,血管内皮生长因子【关键词】心肌梗死；骨髓间充质干细胞；血管内皮生长因子1 材料和方法1.1材料健康纯种新西兰大白兔48只，雌雄不拘，体质量2.0~2.5 kg，兔龄4~5 mo，由岭南科研动物中心提供. 低糖DMEM（Gibco产品）；Percoll分离液（Pharmacia产品）；VIII因子多克隆抗体及免疫组化检测试剂盒（武汉博士德生物工程有限公司）；BrdU mAb BrdU检测试剂盒（Roche产品）；AdTrackCMVVEGF165真核表达质粒（由广东省人民医院中心实验室惠赠）；LipofectamineTM 2000 reagent(GIBCOL).1.2方法将兔随机分为4组（n=12），心肌梗死2 wk后在梗死区心肌梗死组（MI组）注射生理盐水； MSCs移植组（MSC组）注射107个MSCs； VEGF组注射VEGF基因（100 μg溶于200 μL PBS中）；MSCs+VEGF组（M+V组）注射107个转染VEGF基因的MSCs. 在移植前3 d进行VEGF基因转染.mL，应用Percoll分离液(1.073 kg/L)离心提取MSCs，用含100 g/L胎牛血清的低糖DMEM 进行培养. 在细胞接近汇合时以1∶3的比例传代. 在移植前6 d用BrdU对细胞进行标记.VEGF165的制备及转染MSCs试验参照文献［2］的方法和说明书操作进行.wk进行心功能测定. 经颈动脉插管至左心室，测定心率，左室平均收缩压，舒张未压，心室发展压，及左室压最大上升速率（+dp/dtmax）和最大下降速率（-dp/dtmax）.，计算视野内BrdU阳性染色细胞数作为MSCs数目. 切片染色后计算视野内的阳性细胞数，并取平均值作为该兔血管数目.统计学处理：数据采用SPSS 11.0软件进行处理，计量资料以x±s表示，组间均数比较采用t检验，计数资料以χ2检验进行比较， P<0.05为差异有统计意义. 2 结果2.1各组兔死亡率至实验结束，共死亡兔13只. MI，MSCs，VEGF和M+V组各组死亡兔数分别为5,2,4,2只，各组间死亡率无明显统计差异. 各组兔左心室功能血流动力学变化见表1.表1各组兔左室血流动力学比较（略）2.2梗死区MSCs的鉴定及计数心肌梗死区见BrdU阳性细胞存在. M+V组（61±8个/视野）存活的MSCs明显多于MSCs组(44±8个/视野, P<0.01).2.3梗死区血管的数量比较MI组梗死区(18±4个/视野)明显少于VEGF组（30±8个/视野, P<0.01）；MSCs组（33±6个/视野）明显多于MI组（P<0.01）；M+V组（49±8个/视野）明显多于MSCs 组（P<0.01）, VEGF组（P<0.01）和MI组（P<0.01）.3 讨论本研究结果表明：VEGF基因治疗与MSCs移植结合可改善兔心肌梗死后心功能，其疗效明显优于单纯MSCs移植. 本研究中VEGF 组将VEGF基因裸质粒直接注射入梗死区，发现其梗塞区有新生血管增多，但却对心功能无明显改善，这提示虽有新生血管的增生，但尚不足以改善大面积心梗后的心功能. 我们先前的实验结果表明：VEGF基因能成功转染MSCs中并获得稳定表达，表达的VEGF具有生物活性，田竞等［1］也报道了VEGF基因在兔骨髓基质细胞中的成功表达. 我们在实验中进一步探讨了转染VEGF基因的MSCs移植对心梗后心功能的影响，发现其对心功能的改善明显优于单纯VEGF或MSCs移植组，在梗死区存活的MSCs和新生血管数明显增多. 说明将细胞移植和基因治疗相结合可能是治疗缺血性心脏病更佳方案. 本实验结果还显示：M+V组心功能优于MSCs组，可能的原因是缺血区血供的改善使冬眠心肌功能恢复，从而使心功能得到进一步改善.Kloner等［2］在大鼠左室游离壁4个位点注射125 μg phVEGF165时，未见梗死面积缩小和心功能改善，注射500 μg phVEGF165时则有效. 本研究中我们将100 μg VEGF质粒注射至兔心梗区，也未能见其心功能改善. VEGF基因裸质粒治疗心肌梗死需要多大剂量才能产生疗效，多大剂量出现副作用还有待进一步探讨.【参考文献】［1］田竞，马保安，范清宇，等. 转染逆转录病毒的VEGF 在兔骨髓基质干细胞内的表达［J］. 第四军医大学学报， 2003，24。
hVEGF165基因转染后兔骨髓间充质干细胞蛋白分泌功能及成骨活性的检测
hVEGF165基因转染后兔骨髓间充质干细胞蛋白分泌功能及成骨活性的检测摘要】目的：血管内皮细胞生长因子在血管再生和骨组织再生过程中起着重要的调节作用。
观察hVEGF-165基因转染的兔骨髓间充质干细胞分泌VEGF的功能及转染后细胞的成骨活性。
方法:(1)体外分离、培养兔骨髓间充质干细胞，纯化并鉴定兔骨髓间充质干细胞;免疫荧光法检测细胞表面标志;传代培养后以1μgPcDNA3.1-hVEGF165∶3μL阳离子脂质体Lipofectamine的比例转染，通过ELISA和Western-blot检测转染后细胞中外源性VEGF的表达。
(2)测定在正常条件培养和成骨条件培养下，转染后细胞上清中碱性磷酸酶、骨钙素的水平。
结果：(1)hVEGF165基因转染的骨髓间充质干细胞能成功分泌VEGF蛋白。
(2)成骨条件培养下，基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的分泌量明显高于未转染组（P<005）；而在正常条件培养下，基因转染组细胞碱性磷酸酶和骨钙素的表达分泌量较低。
结论：(1)采用基因转染技术可将hVEGF165基因转染到骨髓间充质干细胞中并可有效表达具有生物活性的VEGF。
(2)在成骨条件培养下，转染hVEGF165基因后骨髓间充质干细胞的成骨能力增强。
【关键词】骨髓间充质干细胞；血管内皮细胞生长因子；基因转染；成骨【中图分类号】R349.2【文献标识码】A【文章编号】1008-6455（2011）02-0073-02股骨头坏死为进展性和致残性疾病,常累及中青年,且多为双侧发病,保存自身股骨头的治疗是临床的一大难题。
最近的研究发现间充质干细胞(mesenchymal stem cells ,MSCs) 和骨细胞的数量减少或活性降低是导致股骨头坏死的重要原因[1,2],然而单纯使用MSCs移植治疗股骨头坏死的效果并不令人满意[3]。
已知骨修复的先决条件是血管再生,血管内皮生长因子( vascular endot helialgrowthfactor ,VEGF) 作为血管内皮细胞的有丝分裂原,不但可以促进血管再生,而且能直接增强成骨细胞的活性,促进成骨细胞趋向位移与分化[4]。
兔激素性股骨头坏死与肝细胞色素P4503A酶活性的相关性研究
６・（ ７６ 总 ２）
中 医正 骨 ２ １ ０ １ 第 ２ １年 ０月 ３卷第 １ ０期
兔 激 素性 股 骨 头坏 死 与肝 细胞 色 素 Ｐ５３ ４ ０ 活 性 的相 关 性研 究 Ａ酶
刘文刚 何伟 许学猛 吴淮 ， ， ，
（ ． 东省 第二 中医院 ， 东 广州 ５０ ９ ；． １广 广 １０ ５ ２ 广州 中医药 大学第一 附属 医院 ， 东 广州 ５０ ０ ） 广 １４ ５
关键 词 股 骨头 坏死
肝 细胞 色素 Ｐ ５ ３ ４ ０ Ａ酶
酶 诱导
动 物实 验
Ａ ｔ ｙ ｏ ｈｅ ｃ ｒ ｅａ ｉ ｎ ｂｅ ｗｅ ｎ ｓｅ ｏｄ — ｎ ｃ ｄ ａ ａ ｃ ａ ｃ ｏｓｓ ｏ ｅ ｏ ａ ａ ｉ ｒ ｂｂ ｔ ｎｄ ａ ｔｖ ｔ ｓｕｄ ｎ ｔ ｏ ｒ ｌｔｏ ｔ ｅ ｔ ｒ ｉ —ｉ ｄｕ ｅ ｖ ｓ ｕｌ ｒ ｎｅ ｒ ｉ ｆｆ ｍ ｒ ｌｈｅ ｄ ｎ ａ ｉｓ ａ ｃ ｉ ｉｙ
组 以伊 曲 康 唑 混 悬 液 灌 胃。 连 续 用 药 ３周后 ， 定 血 清 肝 细 胞 色素 Ｐ ５ ３ 测 ４０ Ａ酶 活性 ， 采 用 肌 注 甲泼 尼 龙 琥 珀 酸钠 方 法造 模 继 并
续用药 ３周后 处死动物 ， 制作并观察病理组 织标本 ， 计算 股骨 头坏 死 面积和坏 死率。结果 ： ①肝 细胞 色素 Ｐ ５ ３ ４ ０ Ａ酶 活性 。空 白
ｔ ｒｇ ｏ ｐ ｗｅ ｅｉ ｔａ ａ ｔｉ ｄ ｉｉｔａｅ ｔ ｔａ ｏ ａ ｏ ｅ ｓ ｓ ｅ ｓｏ Ａｆｅ ｏ ｒ ｕ ｒ ｎ ｒｇ ｓｒｃ ａ ｍ ｎ ｓｒ ｔ ｄ ｗｉｈ ｉｒ ｃ ｎ ｚ ｌ ｕ ｐ ｎ ｉｎ． ｔ ｒ３ ｗｅｅ ｆｃ ｎ ｉｕｏ ｓａ ｋｓｏ ｏ ｔｎ ｕ ｄｍｉ ｓｒ ｔ ｎ，ｈ ｎ ｙ ｃ ｉｉｙ ｏ ｅ — ｎｉｔａｉ ｔ ｅ ｅ ｚ ｍｅ ａ ｔｖ ｔ ｆｓ ｒ ｏ
【国家自然科学基金】_hvegf165_基金支持热词逐年推荐_【万方软件创新助手】_20140801
科研热词 推荐指数 血管内皮生长因子 5 腺相关病毒 4 绿色荧光蛋白 3 骨髓基质干细胞 2 基因表达 2 齿状回 1 转化生长因子β 1 1 质粒表达载体 1 血管内皮细胞生长因子 1 血管内皮生长因子类 1 腺相关病毒载体 1 腺病毒科 1 脑缺血 1 细胞增殖 1 短发卡样rna 1 心肌 1 基因转染 1 内部核糖体进入位点序列 1 内皮祖细胞 1 低氧反应元件 1 ⅰ型胶原 1 vegf 1 rna干扰 1 hvegf165基因 1 bmp 1
科研热词 共表达 hvegf165 hbmp-7 腺相关病毒载体 兔 骨形成 重组腺相关病毒载体 血管形成 生物学活性 基因治疗 bmscs
推荐指数 3 3 3 2 2 1 1 1 1 1 1
2011年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 13 14 15 16 17 18 19 20 21
推荐指数 1 1 1 1 1
2013年 序号 1 2 3 4
科研热词 推荐指数 vascular endothelial growth factor 1 plasmid 1 green fluorescent protein 1 bone marrow mesenchymal stem cells 1
2009年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10
科研热词 诱导分化 血管内皮生长因子 缺氧 心肌细胞 基因调控 基因治疗 低氧反应元件 hvegf165 hbmscs hbmp-2
推荐指数 1 1 1 1 1 1 1 1 1 1
2010年 序号 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11
VEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞治疗兔激素性股骨头坏死的实验研究
观察 、 病 理 学 及 免 疫组 织 化学 检 查 等 方 法 评 价 疗 效 。方 法
性坏死动物模型后分 为 ４组 ， 分圳进行 以下治疗 ： Ａ组（ 不作任何处理） ； Ｂ组 （ 髓心减压 ＋自体骨移植 ） ； Ｃ组 （ 髓 心
结果
Ｄ组在软骨下血管 、 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ阳性面积百分 比、 股骨头 内 Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ的相对浓度均 高于其他 各组 ； 在Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ平均灰
转染 了 Ａ ｄ—Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ １ ６ ５的 骨 髓 问充 质 干 细 胞
度值 、 空骨陷窝率低于其他各组 ， 且 各 组 差 异 有 统 计 学 意 义 。 结 论
ｇ ｒ ａ ｔ ｆ ｔ ｅ ｃ ｈ ｎ ｉ ｑ ｕ ｅ ｔ ｏ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｔ ｈ ｅ ｓ ｔ ｅ ｒ ｏ ｉ ｄ—ｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄ ｏ ｓ ｔ ｅ ｏ ｎ ｅ ｃ ｒ ｏ ｓ ｉ ｓ ｉ ｎ ｒ ａ ｂ ｂ ｉ ｔ ，ａ ｎ ｄ ｔ ｏ ｏ ｂ ｓ ｅ ｒ ｖ ｅ ｔ ｈ ｅ ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｔ ｒ ｅ ａ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ｂ ｙ ｔ ｈ ｅ ｍｅ ｔ ｈ ｏ ｄ ｏ ｆ ｉ ｍａ ｇ ｅ ａ ｎ ｄ ｐ ａ —
Ｂ Ａ １ Ｚ ｈ ｉ ｇ ａ ａ ｇ，ＧＯ ＮＧ Ｆ ａ ｎ，ＭＡ Ｊ ｕ ｎ ，Ｓ Ｕ Ｎ Ｘｉ ｃ ｈ ｕ ｎ，Ｙ ＡＮＧ Ｌ ｖ ｌ ｉ ｎ， Ｓ Ｈ Ａ ＮＧ Ｘｉ ａ ｏ ｋ ｅ ，Ｌ Ｉ Ｌ ｉ ｘ ｉ ｎ， ＨＵ Ａ ＮＧ Ｐ ｅ ｎ ｇ ．Ｏｒ ｔ ｈ ｏ ｐ ｅ ｄ ｉ ｃ ｓ Ｄｅ ｐ ａ ｒ ｔ ｍｅ ｎ ｔ ，
・
论
著 ・
Ｖ Ｅ Ｇ Ｆ １ ６ ５基 因 转 染 兔 骨 髓 间 充 质 干 细 胞 治 疗 兔 激 素 性 股 骨 头 坏 死 的 实 验 研 究
hVEGF165在兔骨髓间充质干细胞中的表达
hVEGF165在兔骨髓间充质干细胞中的表达作者：王宾沈来根朱越锋李鲁滨郭治宇刘振杰【摘要】目的培养和鉴定兔骨髓间充质干细胞,基因转染后观察hVEGF165在其中的表达。
方法体外培养兔骨髓间充质干细胞,以流式细胞仪检测其表面抗原(CD29、CD44、CD45、HLA-DR)的表达。
通过腺病毒载体转染hVEGF165后,采用RT-PCR、Western blot法检测hVEGF165在细胞中的表达。
结果通过流式细胞仪检测表明培养的细胞为兔骨髓间充质干细胞, RT-PCR法、Western blot法检测结果均表明hVEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞后能在其中表达。
结论成功培养兔体外骨髓间充质干细胞, 基因转染后细胞能有效表达hVEGF165。
【关键词】目的培养和鉴定兔骨髓间充质干细胞,基因转染后观察hVEGF165在其中的表达。
方法体外培养兔骨髓间充质干细胞,以流式细胞仪检测其表面抗原(CD29、CD44、CD45、HLA-DR)的表达。
通过腺病毒载体转染hVEGF165后,采用RT-PCR、Western blot法检测hVEGF165在细胞中的表达。
结果通过流式细胞仪检测表明培养的细胞为兔骨髓间充质干细胞, RT-PCR法、Western blot法检测结果均表明hVEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞后能在其中表达。
结论成功培养兔体外骨髓间充质干细胞, 基因转染后细胞能有效表达hVEGF165。
【Abstract】Objective To cultivate and accredit rabbit mesenchymal stem cells ,and to detect the expression of hVEGF165 after gene transfection. Methods Rabbit mesenchymal stem cells was accredited expression of antigen CD29、CD44、CD45、HLA-DR after cultivated in vitro. The constructed plasmids containing right sequence of hVEGF165 were transfected into rabbit mesenchymal stem cells by adenovirus.The expression of hVEGF165 was tested by RT-PCR and western-blot. Results The expression of antigen of cells indicated the cells were rabbit mesenchymal stem cells. The results of RT-PCR and western-blot showed that the transfected cells could express hVEGF165. Conclusion The rabbit mesenchymal stem cells can successfully express hVEGF165 after gene transfection.【Key words】mesenchymal stem cells vascular endothelial growth factor ( VEGF) gene transfection, expression骨髓间充质干细胞（mesenchymal stem cells,MSCs）是一种具有多向分化潜能的细胞，可分化成多种间质细胞，如成骨细胞，软骨细胞，脂肪细胞，也可分化成神经系统的神经元细胞、神经胶质细胞和脉管系统的血管内皮细胞,成为近年来基因组织工程研究的热点。
转染VEGF165基因抑制兔动脉损伤后内膜增生
转染VEGF165基因抑制兔动脉损伤后内膜增生吴忠均;时德;郑树森;李德卫【期刊名称】《中国病理生理杂志》【年(卷),期】2005(021)008【摘要】目的:观察局部转染血管内皮生长因子165(VEGF165)基因对损伤动脉内膜增生的影响并探讨可能机制.方法:采用显微外科手术方法,建立兔右髂外动脉损伤模型.将105只新西兰大白兔随机分为3组,每组35只.A组为生理盐水对照组,B组为脂质体介导的pBudCE4.1转染组,C组为脂质体介导的pBudCE4.1/VEGF165转染组.用微注射器将各种转染液注入损伤的血管壁,每组按实验终点(术后2、3、7、14和28 d)分为5个亚组,每个亚组7只兔.于术后各实验终点,取损伤段的血管用于病理组织学检查、电镜观察、RT-PCR和免疫组化染色检查.结果:术后各时点C组血管内膜厚度和内膜面积均显著小于A组和B组(P＜0.01),术后28 d时C组管腔狭窄率平均比A组和B组低51.6%和49.8%.术后各时点C组血管壁的VEGF165基因的mRNA表达量和血管壁VEGF165阳性细胞率明显高于A组和B 组(P＜0.01).C组血管壁血管内皮细胞(VEC)修复和生长增殖速度明显快于A组和B组.A组和B组间无明显差异.结论:局部转染VEGF165基因可抑制血管新生内膜增生及血管再狭窄,为将来血管内膜增生的基因治疗奠定基础.【总页数】5页(P1457-1461)【作者】吴忠均;时德;郑树森;李德卫【作者单位】浙江大学医学院附属第一医院普通外科,浙江,杭州,310003;重庆医科大学附属第一医院血管外科,重庆,400016;浙江大学医学院附属第一医院普通外科,浙江,杭州,310003;重庆医科大学附属第一医院血管外科,重庆,400016【正文语种】中文【中图分类】R973+.2【相关文献】1.腺病毒介导的人p27kip1基因转染对球囊损伤后兔颈动脉新生内膜增生的抑制作用 [J], 潘晓明;吴宗贵;章卫平;金海;曹雪涛2.组织因子途径抑制物基因局部转染对兔颈总动脉损伤后内膜增生及P53表达的影响 [J], 朱铁兵;王君;范乐明;李勇;王林林;曹克将;黄峻;马文珠3.VEGF165基因转染兔骨髓间充质干细胞治疗兔激素性股骨头坏死的实验研究 [J], 白志刚;巩凡;马军;孙玺淳;杨绿林;尚小可;李立新;黄朋4.宽叶缬草对兔动脉损伤后内膜增生的抑制作用研究 [J], 陈柏华;李晓华;张群林5.TGFα-PE40对兔颈总动脉损伤后内膜增生的抑制作用 [J], 王兵;李玉莉;关战军;张国元;吴宗贵;何金;徐永华因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
激素性股骨头坏死病程中股骨头局部vegfmrna表达的变化及意义
·实验研究·激素性股骨头坏死病程中股骨头局部V EGF mRNA 表达的变化及意义△樊粤光 徐传毅 何 伟 方 斌 李 雄 刘少军 曾意荣 袁 浩 摘 要 目的:探讨激素性股骨头坏死病程中股骨头局部血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor ,V EGF )mRNA 表达的变化及意义。
方法:新西兰大白兔36只,随机均分成正常对照组和模型组,每组18只。
模型组用内毒素加激素注射造成股骨头坏死。
两组动物分别于造模后6、10、14周各处死6只行股骨头组织学检查和V EGFmR 2NA 原位杂交观察。
结果:光镜观察示模型组股骨头骨小梁变细、空骨陷窝增加,成骨细胞数量减少,这些表现随着时间的推移逐渐加重;软骨下血窦计数减少,各时段均低于正常组,差异有显著性意义(P <0.05,或P <0.01)。
原位杂交显示,模型组兔的股骨头6周时血管周围有V EGFmRNA 阳性表达,10周时血管、成骨细胞的表达逐渐减少,14周时稍有所增加。
结论:股骨头坏死后血管修复能力下降,血管内皮细胞的功能受到破坏影响,增加股骨头局部V EGF 可能有助于股骨头坏死的修复。
关键词 股骨头坏死; 血管内皮生长因子; 原位杂交中图分类号 R681 文献标识码 A 文章编号 1005-8478(2002)08-0784-03Change and Its Signif icance of the Expression of VEGF Messenger RNA of the Femoral H ead in the Steroid 2induced Avascular N ecrosis of Femoral H ead ∥FA N Y ue 2guang ,XU Chuan 2yi ,HE Wei ,et al.The f irst A f f iliated Hospital of Guangz hou U niversity of T raditional Chinese Medicine ,Guangz hou 510405Abstract Objective :To explore the change and its significance of the expression of vascular endothelial growth factor (V EGF )messenger RNA of the femoral head in the steroid 2induced avascular necrosis of femoral head (ANFH ).Method :36New Zealand rabbits were randomly and equally divided into normal control group and model group.18rabbits in model group were injected endotoxin and methylprednisolone.6rabbits were killed at the time of the sixth week ,tenth week ,fourteenth week in each group respectively.Femoral head s pecimens were studied by histological examination and in situ hybridization.Results :By light microscopy ,empty lacunae increased and numbers of osteoblasts and subchondral sinosoids decreased in model group.By in situ hybridization ,expression of V EGF mRNA showed decrease in the osteoblasts and vascular endothelial cells in the femoral head of model group in the sixth week.Expression decased in the tenth week and increased slightly in the fourteenth week.Con 2clusior :The ability of blood vessel reparation dereases during avascular necrosis of the femoral head.Function of endothelial cells suffers the interruption as well.Increasing local V EGF in the femoral head may be beneficial to the reparative process of necrosis of the femoral head.K ey w ords Avascular necrosis of the femoral head ; Vascular endothelial growth factor ; In situ hybridization△广东省自然科学基金项目(990367) 教育部高校骨干教师重点资助项目(200055)作者单位:广州中医药大学第一附属医院髋中心,广州510405作者简介:樊粤光(19542),男,山西籍,教授,主任医师。
重组腺病毒相关病毒携带人血管内皮生长因子165诱导家兔缺血心肌血管生成的研究
重组腺病毒相关病毒携带人血管内皮生长因子165诱导家兔缺血心肌血管生成的研究于雪;龚艳君;蒋捷;周爱儒;高炜【期刊名称】《中华老年心脑血管病杂志》【年(卷),期】2003(005)006【摘要】目的将携带人血管内皮生长因子165(hVEGF 165)cDNA的重组腺病毒相关病毒(rAAV)载体注入家兔缺血心肌,观察血管内皮生长因子(VEGF)的血管生成效应.方法制作家兔急性心肌梗死模型,将rAAV-hVEGF165注入缺血心肌.4周后取注射部位心肌,用逆转录聚合酶链式反应(RT-PCR)和免疫组织化学、Western blot 方法检测目的基因的表达,并计数注射部位心肌毛细血管数目,评价外源VEGF的生物学活性.结果注射rAAV-VEGF部位心肌VEGF mRNA及其蛋白的表达可持续8周,而且比对照组增加.远隔脏器未见外源VEGF的播散和表达.注射rAAV-VEGF部位毛细血管密度比对照组增加.结论rAAV-hVEGF 165可以有效地转染成年家兔心肌组织,外源基因稳定长期表达,同时能够刺激新血管生成,并具有良好的安全性.【总页数】3页(P403-405)【作者】于雪;龚艳君;蒋捷;周爱儒;高炜【作者单位】北京大学第一医院心内科,北京,100034;北京大学第一医院心内科,北京,100034;北京大学第一医院心内科,北京,100034;北京大学医学部生物化学与分子生物学系,北京,100083;北京大学第一医院心内科,北京,100034【正文语种】中文【中图分类】R543【相关文献】1.重组人血管内皮生长因子121的腺相关病毒载体构建及诱导体内血管生成的实验研究 [J], 杨民;王强;王剑2.携带人血管内皮生长因子165基因的复制缺陷型腺病毒载体的构建和鉴定 [J], 周炜;冯进波;王旭平;刘春喜;姜虹;王荣;丁士芳3.人血管生成素1和血管内皮生长因子165重组腺病毒载体构建及目的基因表达[J], 刘铁连;谢宇锋;盛伟华;缪竞成;单云波;胡志清;井莹莹;杨吉成4.重组腺相关病毒载体介导人血管内皮生长因子165基因对缺血心肌血管新生的影响 [J], 黄志军;袁洪;曾钧发;吴小兵;彭建强;易斌;阳国平5.人血管生成素-1和血管内皮生长因子VEGF_(165)腺病毒载体构建 [J], 周磊;张馥敏;杨志建;马文珠;陆丽;丁兆丰;丁必森;高翔;哈团柱;李传富因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
血管内皮生长因子基因在兔骨髓间充质干细胞中的转染和表达
血管内皮生长因子基因在兔骨髓间充质干细胞中的转染和表达徐松柏;赵刚;许侃;候宜;于洪泉;崔阳【期刊名称】《吉林大学学报（医学版）》【年(卷),期】2007(033)003【摘要】目的:探讨应用人血管内皮生长因子165(hVEGF165)进行基因修饰的可行性,为血管化组织工程组织的构建及缺血性疾病的治疗奠定实验基础.方法:构建pcDNA3.0-VEGF165真核表达载体,利用脂质体介导转染兔骨髓间充质干细胞(MSCs),ELISA方法检测转基因MSCs的hVEGF蛋白表达情况,MTT法检测转基因MSCs表达物对血管内皮细胞增殖活性的影响,设单纯培养MSCs及pcDNA3.0转染MSCs组为对照组.结果:成功构建hVEGF真核表达载体,并成功地将其转入MSCs中;MSCs细胞在转染pcDNA3.0-VEGF165质粒24、48和72 h后,其培养上清中hVEGF蛋白表达量均较对照组显著升高(P＜0.05),至G418筛选后12代,转基因MSCs培养上清中仍有hVEGF蛋白的表达,含2%、4%、8%、16%和32%转基因细胞培养上清的培养液均明显增加血管内皮细胞的增殖率,与对照组比较,差异均具有显著性(P＜0.05).结论:hVEGF165基因成功地转染至MSCs中,并可进行有效地表达.【总页数】4页(P445-448)【作者】徐松柏;赵刚;许侃;候宜;于洪泉;崔阳【作者单位】吉林大学第一医院神经外科,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院神经外科,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院神经外科,吉林,长春,130021;吉林大学再生医学科学研究所生物化学教研室,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院神经外科,吉林,长春,130021;吉林大学第一医院骨科,吉林,长春,130021【正文语种】中文【中图分类】Q786;R-332【相关文献】1.血管内皮生长因子复合骨形态发生蛋白-2转染骨髓间充质干细胞修复兔股骨头坏死模型 [J], 张雁儒;张辉;卡卡;马辉;李军伟;黄文华2.人血管内皮生长因子165基因转染兔骨髓间充质干细胞的蛋白表达 [J], 田力;梁晓鹏;田晓晔;于鑫琛;田晶3.慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因转染骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗兔股骨头坏死 [J], 马跃刚; 李强; 陶旋; 周桢杰; 朱伦井; 段江涛4.慢病毒介导骨形态发生蛋白2和血管内皮生长因子165双基因转染骨髓间充质干细胞复合脱钙松质骨治疗兔股骨头坏死 [J], 马跃刚; 李强; 陶旋; 周桢杰; 朱伦井; 段江涛5.转染人血管内皮生长因子165基因的骨髓间充质干细胞移植改善兔心肌梗死后心功能 [J], 盛小刚;宋卉;冯建章;陈秋雄;吴书林因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
构建外源性重组pcDNA3.1-hBMP-7真核表达载体转染兔骨髓基质干细胞
构建外源性重组pcDNA3.1-hBMP-7真核表达载体转染兔骨髓基质干细胞薛震;吕松岑;牛丽媛;赵金东;郭亚山;安刚;吴莹【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2009(013)040【摘要】背景:在细胞获取、培养、移植等体外环境体系下,骨髓基质干细胞能否有效的应用于局部基因治疗尚不清楚.目的:课题创新性提出构建外源性hBMP-7基因真核表达载体,并期望可提高被转染的兔骨髓基质干细胞诱导成骨能力.设计、时间及地点:细胞-基因学体外观察,于2006-07/2007-07在哈尔滨医科大学附属第二医院科研实验中心完成.材料:人健康新鲜胎盘组织由哈尔滨医科大学附属二院妇产科提供,产妇知情同意.健康雄性新西兰大耳白兔1只,由哈尔滨医科大学动物中心提供.方法:从人胎盘组织中克隆出hBMP-7基因,与真核表达载体pcDNA3.1连接,构建重组pcDNA3.1-hBMP-7真核表达载体.从兔骨髓中分离培养骨髓基质干细胞,分为3组:pcDNA3.1-hBMP-7转染组、空载体pcDNA3.1转染组、未转染组.转染前1 d取第2代骨髓基质干细胞5×106个,接种到60 mm3含无抗生素培养基的培养皿中进行转染.主要观察指标:使用RT-PCR、免疫组织化学等方法检测hBMP-7在骨髓基质干细胞中的表达,检测各组细胞碱性磷酸酶、胶原、骨钙蛋白的合成情况.结果:转染72 h后,pcDNA3.1-hBMP-7转染组于1.3 kb处出现特异性条带,细胞胞浆有棕色的颗粒出现,另2组均呈阴性.pcDNA3.1-hBMP-7转染组骨髓基质干细胞碱性磷酸酶活性于转染后第2天显著增高,第8天达峰值,各时间点pcDNA3.1-hBMP-7转染组骨髓基质干细胞碱性磷酸酶活性、羟脯氨酸合成量、骨钙蛋白含量均明显高于其他2组(P<0.05或0.01).结论:实验成功构建了pcDNA3.1-hBMP-7真核表达载体.结局证明了外源性hBMP-7基因可在兔骨髓基质干细胞中充分、高效表达,并且这种外源性hBMP-7基因具备促进兔骨髓基质干细胞向成骨细胞转化的能力.%BACKGROUND:Under the in vitro conditions of cell harvesting, culture, and transplantation, whether bone marrow stromal cells (BMSCs) can be effectively applied in local gene therapy remains unclear.OBJECTIVE: To construct a recombinant eukaryotic expression plasmid carrying human bone morphogenetic protein-7 (hBMP-7) gene, and to expect to enhance osteoinductive properties of rabbit BMSCs transfected.DESIGN, TIME AND SETTING: A cell-genomics in vitro observation was performed at the Laboratory of Scientific Research, Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University between July 2006 and July 2007.MATERIALS: Human healthy fresh placental tissue was provided by the Department of Gynaecology and Obstetrics, Second Affiliated Hospital of Harbin Medical University. Written informed consent was obtained from the women. One healthy male New Zealand rabbit was provided by the Laboratory Animal Center, Harbin Medical University.METHODS: hBMP-7 gene was cloned from human placental tissue to construct a recombinant eukaryotic expression plasmid carrying hBMP-7 gene by conjugating with eukaryotic expression vector pcDNA3.1. BMSCs were isolated from rabbit bone marrow and cultured in vitro. Then they were divided into 3 groups: pcDNA3.1-hBMP-7-transfected,pcDNA3.1 -transfected, and untransfected. 5×106 BMSCs were inoculated into a 60 mm3 flask containing antibiotic-free medium 1 day prior to transfection.MAIN OUTCOME MEASURES: RT-PCR andimmunohistochemistry were employed to detect hBMP-7 expression in BMSCs, alkaline phosphatase activity, hydroxypreline content, and osteocalcin production in each group. RESULTS: After 72-hour transfection, a 1.3 kb fragment was seen in the pcDNA3.1-hBMP-7-transfected group, showing brown granules in the endochylema, but not seen in thepcDNA3.14ransfected and untransfected groups. ALP activity in the pcDNA3.1-hBMP-7-transfected group significantly increased at 2 days after transfection, peeked at 8 days, and still increased at 10 days. At each time point, alkaline phosphatase activity, hydroxyproline content, and osteocalcin production were significantly higher in the pcDNA3.1-hBMP-7-transfected group than in the pcDNA3.1 -transfected and untransfected groups (P<0.05 or P<0.01).CONCLUSION: Recombinant eukaryotic expression vector pcDNA3.1- BMP-7 was constructed successfully. Results indicated that hBMP-7 was expressed in BMSCs sufficiently and was involved in inducing differentiation of BMSCs into osteoblasts. The method would provide substantial basement for hBMP-7 gene therapy.【总页数】6页(P7985-7990)【作者】薛震;吕松岑;牛丽媛;赵金东;郭亚山;安刚;吴莹【作者单位】哈尔滨医科大学附属第二医院骨二科,黑龙江省哈尔滨市,150086;哈尔滨医科大学附属第二医院骨二科,黑龙江省哈尔滨市,150086;哈尔滨工业大学物理诊断科,黑龙江省哈尔滨市,150001;首都医科大学附属友谊医院骨科,北京市,100050;哈尔滨医科大学附属第二医院骨二科,黑龙江省哈尔滨市,150086;哈尔滨医科大学附属第二医院骨二科,黑龙江省哈尔滨市,150086;哈尔滨医科大学附属第二医院骨二科,黑龙江省哈尔滨市,150086【正文语种】中文【中图分类】R394.2【相关文献】1.PcDNA3.1-BMP-2真核表达载体构建及转染兔骨髓基质细胞的实验研究 [J], 付春江;毕郑钢;张军;杨成林;曹杨;田方;陶天遵2.hBMP-2真核表达载体的构建及转染兔骨髓间充质干细胞的表达 [J], 黄旋平;周诺;廖妮;韦山良;梁飞新;麦华明3.重组pcDNA3.1-hBMP-7真核表达载体的构建及转染兔骨髓基质干细胞的实验研究 [J], 薛震;吕松岑;赵金东;田坤4.TGF-β3真核表达载体转染骨髓基质干细胞促进其向软骨分化的实验研究 [J], 郑东;杨述华;袁晓梅;李进;冯勇;徐亮;梅荣成5.重组真核表达载体pEGFP-N1/PDGF-A的构建及真皮干细胞的转染 [J], 闫国和;粟永萍;王军平;汪代杰;艾国平;王锋超;冉新泽;程天民因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
人骨形态发生蛋白7基因转染对兔髓核细胞增殖和细胞外基质合成的影响
人骨形态发生蛋白7基因转染对兔髓核细胞增殖和细胞外基质合成的影响石健;赵新刚;侯铁胜;汤逊;徐永清【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2009(013)007【摘要】背景:以往的研究表明人骨形态发生蛋白7(hBMP·7)能够有效促进细胞外基质合成,修复受损的椎间盘基质,恢复椎间盘高度.因此有希望用于控制和逆转椎间盘退变.然而重组蛋白半衰期短,生物学活性低,退变椎M盘中很难保持骨形态发生蛋白7浓度.基因治疗能够宵效预防这些缺陷.目的:观察人骨形态发生蛋白7基因转染对原代培养的兔髓核细胞牛物学活性的影响,为人骨形态发生蛋白7基因治疗椎间盘退变的体内实验研究奠定基础.设计、时间及地点:随机对照,细胞学体外实验.于2005-12,2006-09在解放军第二军医大学长海医院全军胸心外科研究所实验室完成.材料:4周龄新西兰大耳白兔6只,体质量约500 g.Ad-hBMP7由长海医院胸心外科研究所构建.方法:麻醉后处死白兔,提取髓核,依次经过链霉蛋白酶、Ⅱ型胶原酶和儿型DNA酶在37℃条件下消化4 h,细胞接种于培养皿内,孵箱内培养,7 d后每周更换培养液2次.将细胞随机分为3组,用整合有人骨形态发生蛋白7基因的腺病毒感染髓核细胞,整合有Lac-Z基因的腺病毒感染的髓核细胞以及末转染的髓核细胞作为对照组.主要观察指标:以反转录-聚合酶链反应和Western-blot的方法在不同水平检测其表达情况,以四甲基偶氮唑盐的方法观察其对细胞增殖能力的影响,以改进的二甲基亚甲蓝色比色法和ELISA法观测人骨形态发牛蛋白7基因转染对细胞合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原能力的影响.结果:鉴定确定入骨形态发牛蛋白7基因为正向插入腺病毒载体,无突变.原代培养的兔髓核细胞形态与文献报道一致.腺病毒载体介导的人骨形态发生蛋白7基因能够高效转染髓核细胞,并表达人骨形态发生蛋白7,同时促进了髓核细胞增殖以及合成蛋白多糖和Ⅱ型胶原,较对照组有显著性差异(P<0.05).结论:腺病毒介导的人骨形态发生蛋白7基因具有逆转兔椎间盘退变的能力.%BACKGROUND: Previous studies demonstrated that recombinant human bone morphogenetic pretein-7 (hBMP-7) can effectively promote the synthesis of extracellular matrix, repair of damaged disc matrix, restore of degenerative disc height. It is hoped that BMP-7 can be used to control and reverse the intervertebral disc degeneration. However, because of the short half-life of recombinant protein and low biological activity, it is difficult to maintain BMP-7 high concentrations on degenerative disc. Gene therapy can prevent these defects effectively.OBJECTIVE: To study the effect of hBMP-7 gene transfeotion on biological activity of primary cultured rabbit nucleus pulposus cells in vitro, to determine the feasibility of hBMP-7 gene which will on gene therapy research of intervertebral disc degeneration,and to provide basis for further study.DESIGN, TIME AND SETTING: A randomized and controlled observation was performed at the Institute of Cardiothoracic Surgery of Changhai Hospital from December 2005 to September 2006.MATERIALS: Six healthy New Zealand white rabbits of either gender, averaging 4 weeks old and weighing 500 g, were used in this study, and Ad-hBMP7 was constructed by the Cardiothoracic Surgery Institute of Changhai Hospital.METHODS: After rabbits sacrifice under aseptic condition, the nucleus pulposus was got. After digested with Pronase, type Ⅱcollagenase and type Ⅱ DNAase (4 hours, 37 "(2), the cells were seeded in the Petri dishes and were kept in the incubator. After 7days and then twice a week, the media were refreshed. The nucleus pulposus cells were infected by adenovirus integrated with hBMP7 gene. The cells which were transfected by adenovirus vector for Lac-Z gene and which were not transfected were adopted as control.MAIN OUTCOME MEASURES: The expression of hBMP-7 was determined by RTopCR and Western blot. The effect of hBMP-7 on cell proliferation was surveyed by MTT. Furthermore, the effect of hBMP-7 gene on synthesis of proteoglycan and type Ⅱcollagen was detected by modified dimethylm ethylene blue method and ELISA, respectively.RESULTS: Gene sequencing and PCR showed that hBMP-7 gene was inserted correctly and no mutation happened. The pdmary cultured rabbit nucleus pulposus cells were identical with those reported in literature. After Ad-hBMP7 transduct into the nucleus pulposus cells, high level of hBMP-7 expression was observed and lasted over 3 weeks. Also hBMP-7 gene can promote cell proliferation and synthesis of proteoglycan and type II collagen with significant difference compared with control groups (P < 0.05).CONCLUSION: hBMP-7 gene mediated by adenovirus can be the target gene for the further study on gene therapy of intervertebral disc degeneration.【总页数】4页(P1389-1392)【作者】石健;赵新刚;侯铁胜;汤逊;徐永清【作者单位】解放军成都军区昆明总医院全军骨科中心,云南省昆明市,650032;解放军济南军区第八十八医院全军骨科中心,山东省泰安市,271000;解放军第二军医大学长海医院骨科,上海市,200433;解放军成都军区昆明总医院全军骨科中心,云南省昆明市,650032;解放军成都军区昆明总医院全军骨科中心,云南省昆明市,650032【正文语种】中文【中图分类】R681【相关文献】1.hBMP7基因转染对兔骨髓间充质干细胞增殖及胶原合成的影响 [J], 金丹;裴国献;齐凤菊;胡罢生;魏宽海;王珂;陈滨2.反义CD44基因转染对人眼小梁细胞合成细胞外基质的影响 [J], 李中国;王青;梅红英;罗一青;陈永娟;张宇宏;余萍;云亚歌;史强3.人骨形态发生蛋白7基因转染对骨髓间充质干细胞增殖及成骨分化性能的影响[J], 金丹;裴国献;王珂;魏宽海;陈滨4.人转化生长因子β_1重组腺病毒转染传代髓核细胞对细胞外基质合成的影响 [J], 李旭;侯筱魁;汤亭亭;李惠武;郭刚;裴国献5.Ad-BMP-2和Ad-TGF-β_1共转染人退变椎间盘髓核细胞对细胞外基质代谢的影响 [J], 顾海伦;刘莉;王欢;段景柱;李建军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
VEGF治疗激素诱发兔股骨头缺血性坏死的实验研究的开题报告
VEGF治疗激素诱发兔股骨头缺血性坏死的实验研究的开
题报告
1.研究背景
股骨头缺血性坏死是一种常见病症，患病率高，严重影响患者的生活质量。
虽然当前已有多种治疗方法，但坏死部位缺氧导致的再生障碍一直是难以解决的问题。
最近，一些研究表明，血管内皮生长因子（VEGF）对于促进成骨细胞和基质细胞的增殖和分化以及协调angiogenesis和骨组织再生至关重要。
因此，本研究旨在探讨VEGF在治疗激素诱发兔股骨头缺血性坏死中的应用效果。
2.研究目的
本研究旨在探究VEGF在治疗激素诱发兔股骨头缺血性坏死中的应用效果，为寻找新的治疗方法提供参考。
3.研究内容和方法
（1）实验动物的选取：选用健康雄性成年新西兰白兔共32只。
（2）实验组的建立：将实验兔随机分为两组，实验组16只，对照组16只。
实验组兔子注射激素制剂4周后注射VEGF。
两组兔子均于注入VEGF 8周后处死并取其股骨头组织作为实验处理的样本。
（3）实验方法：采用光镜、电镜、RT-PCR等多种实验方法对实验组与对照组进行比较。
（4）实验指标：主要观察股骨头缺血部位的修复情况、骨形态形成、细胞因子VEGF 表达及内皮细胞的形态学改变等。
4.研究意义
本研究探讨VEGF在激素诱导的兔股骨头缺血性坏死治疗中的应用效果，可为寻找新的治疗方法提供参考。
研究结果有望为临床治疗股骨头缺血性坏死提供新的思路和方法。
5.研究预期成果
预计本研究可以验证VEGF在激素诱导的兔股骨头缺血性坏死治疗中的应用效果，并有望为新的治疗方法提供指导。
- 1、下载文档前请自行甄别文档内容的完整性，平台不提供额外的编辑、内容补充、找答案等附加服务。
- 2、"仅部分预览"的文档,不可在线预览部分如存在完整性等问题,可反馈申请退款(可完整预览的文档不适用该条件!)。
- 3、如文档侵犯您的权益，请联系客服反馈,我们会尽快为您处理(人工客服工作时间：9:00-18:30)。
比股骨头坏死表现明显 减轻 ， Ｅ Ｆ及 Ｂ ＶＧ ＭＰ表达增 强 ， 腔组织 代谢 旺盛 ， 髓 组问差别 有统 计学 意义
（ ００ ）结论 Ｐ＜ ．５ 。 重 组 腺相 关 病 毒 载 体 ｒ Ａ —Ｖ Ｇ １５ＩＥ —Ｂ － 过 增 加 髓 腔 组 织 的 血 运 、 Ａ Ｖ ｈ Ｅ Ｆ ６ 一 Ｓｈ ＭＰ７通 Ｒ
张晨 王坤 正 党晓谦 王春 生 杨佩 樊 立宏
【 摘要】 目的 探讨 ｈ Ｅ Ｆ６ 及 ｈ Ｍ －双基 因共表达重组腺相关病毒载体对兔激素性股 骨 Ｖ Ｇ Ｉ５ ＢＰ ７
头 坏 死 的修 复 作 用 。 方 法 应 用 细 菌 脂 多糖 联 合 甲 基 强 地 松 龙 制 备 兔 激 素 性 股 骨 头 坏 死 模 型 。３ ０
增 强股 骨头 区骨组织质量提高激素性股骨头坏死 区骨修复能力 。
【 关键词 】 股骨头坏死 ； 腺相关病毒 ； 血管 内皮生长因子 ； 骨形态发生蛋 白； 兔
Ｔｈ ｆ ｃ ｓ ｏ ｅ ｏ ｉ ａ ｔ ａ ｅ ｏ ａ ｓ ｃ ａ ｅ ｉ ｕ ｅ ｔ ｒ Ｃ － ｘ ｒ ｓ ｉ ｇ ｈ ｅ ｅ ｅ ｔ ｆ ｒ ｃ ｍｂ ｎ ｎ ｄ ｎ － ｓ ｏ ｉ ｔ ｄ ｖ ｒ ｓ ｖ ｃ ｏ Ｏ ｅ ｐ ｅ ｓｎ ＶＥＧＦ１ ５ ｎ ＢＭ Ｐ ７ ６ ａ ｄ ｈ －
【 ｂｔ ｃ】 Ｏ ｊ ｆ ｅ ｏ ｎｅ ｉ ｔ ｔ ｆｃ ｆｅｏｂ ａｔ ｄｎ。 ｓ ｉｅ ｖｕ ｖｃ ｒ Ｏ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｂｅｉ Ｔ ｖｓｇ ｅ ｈ ｅｅｔｏ ｒ ｍ ｉ ｎ ａｅｏ ｓ ｃ ｔ ｉ ｓ ｅ ｏ Ｃ— ｃｖ ｉ ｔａ ｅ ｆ ｓ ｃ ｎ ａ ｏａ ｄ ｒ ｔ
Ａ ｌ ｔ ｏ ｉ ｌｆＸ ’ ｎＪ ｏ ｎ ｎ ｅ ｉ ， ｉ ｎ７ ００ ， ｈｎ ｉ ａ ｄ ｐａ ｏ ｆ ｉ ｅ Ｈ ｓ ｔ ｉａ ｉ ｔ ｇ Ｕ ｉ ｒ ｔ Ｘ ＇ １０ ４ Ｃ ｉ ａｏ ｖ ｓｙ ａ ａ
Ｃ ｒｅ ｏ ｄｎ ｕｈ ｒ ｏ ｒｓ ｎ ｉｇ ａ ｔ ｏ ：ＷＡ ｎ ｚ ｅ ｇ．Ｅ— ｉ ：ｗ ｎ ｋ ｎ ｈ ｎ ＠ ｙ ｈ ｏ ｃ ｐ ＮＧ Ｋｕ —ｈ ｎ ｍａ ｌ ａ ｇ ｕ ｚ ｅ ｇ ａ ｏ．ｎ
ｇｅ ｅ ｎ ｔ ｒ ｄｓ ｉ ｎ ｓ ｉ ｓ ｅ ｏｉ －ｎｄｕｃ ｄ ｖａ ｃ ｌ ｒ ｅ ａ ｓ ｕ ａ ｎｅ ｒ ｓｓ ｆ ｆ ｍ ｏｒ ｌ ｃ ｏ ｉ ｏ ｅ ａ ｈｅ ｄ ａ ＺＨＡＮ Ｇ Ｃｈ ｎ， ＷＡＮＧ Ｋｕｎ ｚ ｅ ｇ， ｅ ～ｈ ｎ
Ｄ Ｎ ｉ —ｉｎ Ｗ Ｎ ｈ ｎｓｅｇ Ａ Ｇ Ｐ ｉ Ａ ｉ ｏｇ Ｄｐ ｒ ｅｔｏ ｒ ｏｅｉ ，Ｓｃｎ Ａ Ｇ Ｘａ ｑａ ， Ａ Ｇ Ｃ ｕ — ｎ ，Ｙ Ｎ ｅ，Ｆ Ｎ Ｌ— ｎ ． ｅａｔ ｎ ｆ Ｏ ｔ ｐｄｃ ｏ ｈ ｈ ｍ ｈ ｓ ｅ ｄ ｏ
只经 ＭＲ 筛选造模成功动物随机分为模 型组 、 Ｉ 髓芯减压组和病毒治疗组 。病毒治疗组动物于髓芯减
压术后将 ｒ Ａ —Ｖ Ｇ １５Ｉ Ｅ —Ｂ － Ａ Ｖ ｈ Ｅ Ｆ ６ 一 Ｓｈ ＭＰ７病毒载体注入减压区内。选取病毒注射后 １ 时间点分别 Ｒ ２周
行 核 素 骨 扫 描 ， 骨 头 大 体 观 察 、 Ｅ 染 色 、 Ｅ Ｆ和 Ｂ Ｐ免 疫组 化染 色检 测 。结 果 股 Ｈ ＶＧ Ｍ ＭＲ 检 测 、 体 Ｉ 大 观察以及 Ｈ Ｅ染 色发 现 早 期 股 骨 头 坏死 动 物模 型 建 立 成 功 ， 病 毒 治疗 组 较 髓 芯 减 压 组 及 模 型 组 相 且
中华关 节外 科杂 志 （ 电子 版 ）０ ２年 ４月第 ６卷第 ２期 ２１
Ｃ ｉ Ｊ ｏｎ Ｓｒ（ ｌ ｔ ｎ ｄｉｎ ，ｐｉ２１ ， ｏ． ， ｏ２ ｈｎ ｉ ｕｇＥｅ ｒ ｉ Ｅ ｉｏ ）Ａ ｒ ０ ２ Ｖ １ Ｎ Ｊ ｔ ｃｏｃ ｔ ｌ ６
・Байду номын сангаас
５ｌ ・
基 础 论 著
・
ｈ Ｅ Ｆ６ Ｖ Ｇ １５及 ｈ ＭＰ７共 表 达 重 组 腺 相 关 Ｂ 一 病 毒 载 体对 兔 激 素 性股 骨 头 坏死 的修 复 作 用 研 究
ｅ ｐｅ ｓ ｇｈ ｘ ｒ ｓ ｉ ＶＥＧ ６ ｎ ＢＭＰ ７ ｇ ｎ ｓｉ ｔｒ ｉ ｓ ｉｄ ｃ ｄ ａ ａ ｃ ｌ ｒｎ ｃ ｏ ｉ ｏ ｍｏａ ｅ ｄ ｎ Ｆ１ ５ ａ ｄ ｈ － ｅ ｅ ｎ ｓ ｏ ｄ — ｕ ｅ ｖ ｓ ｕ ａ ｅ ｒ ｓｓ ｆ ｅ ｒ ｌｈ ａ ．Ｍ ｅｈ ｄ ｅ ｎ ｆ ｔｏ ｓ Ｔ ｅ ｒ ｂ ｉ ｍｏ ｅ ｆｆ ｍｏ ａ ｅ ｄ ｎ ｃ ｏ ｉ ａ ｏ ｓｒ ｃｅ ｙ ｃ ｍｂ ｎ ｔ ｎ ｕ ｅ ｏ ｉ ｏ ｏｙ ａ ｃ ａ ｉｅ ａ ｄ ｈ ａ ｂｔ ｄ ｌｏ ｅ ｒ ｌｈ ａ ｅ ｒ ｓｓ ｗ ｓ ｃ ｎ ｔ ｔｄ ｂ ｏ ｉ ａｉ ｓ ｆ ｌ ｐ １ ｓ ｃ ｈ ｒ ｎ ｕ ｏ ｐ ｄ ｍｅｈ ｌ ｒ ｄ ｉｏｏ ｅ ０ ａ ｕ ｔｒ ｂ ｉ ｔ ｅ ｒ ｌ ｈ ａ ｅ ｒ ｓｓ ｓ ｌｃｅ ｙ ＭＲ ｅ ｅ ｒ ｎ ｏ ｙ ｄ ｖｄ ｄ ｔ ｙｐ ｅ ｎ ｓ ｌｎ ．３ ｄ ｌ ａ ｂ ｔ ｗｉ ｆｍｏ ａ ｅ ｄ ｎ ｃ ｏ ｉ ｅｅ ｔｄ ｂ ｓ ｈ １ ｗ ｒ ａ ｄ ｍｌ ｉ ｉ ｅ ｉｔ ｈ ｅ ｒ ｕ ｓ ａ ｏ ｌｗｓ ｎ ｏ ｔ ｒ ｅ ｇ ｏ ｐ ｓ ｆｌ ｏ ：ｍｏ ｅ ｒ ｕ ｄ ｌｇ ｏ ｐ，ｃ ｒ ｅ ｏ ｒ ｓｉ ｎ ｇ ｏ ｐ ａ ｄ ｖｒ ｓ ｔ ａ ｍｅ ｔｇ ｏ ｐ ｒ ｏ ｅ ｄ ｃ ｍｐ ｅ ｓ ｕ ｎ ｉ ｒ ｔ ｎ ｒ ｕ ． ＡＡＶ— ｏ ｒ ｕ ｅ