whatman DE-52纤维素详细使用方法
DEAE--52纤维素的处理
DEAE--52纤维素的处理关于DEAE52纤维素的处理只有简单的几步，如下:1.先将干粉的纤维素浸泡在蒸馏水中，一段时间大约3小时左右，我偏爱这个时间，去除杂质，最好抽干一下；2.再用0.5mol/l的HCl溶液浸泡2小时，用去离子水洗净至PH中性，并抽干；3.将抽干的纤维素再浸泡在0.5mol/l的NaOH溶液中2小时，用去离子水洗至中性，抽干。
即可用了对于用过的纤维素，可以重复利用多次，但需要经过再生处理后才可以使用。
再生处理可先用高浓度NaCl (1－2 mol/L)过柱冲洗柱床，以除去DEAE－52阴离子交换纤维所吸附的成份。
然后，再用0.5 mol/L的HCl和NaOH处理，处理方法与预处理完全相同。
DEAE－纤维素的处理及装柱（1）处理本实验采用的是DEAE－纤维素DE 52 是弱酸型阴离子交换剂，具体处理方法为：先将DE52阴离子交换剂干粉浸泡于蒸馏水中，去除杂质；再在0.5N的HCL溶液中浸泡1－2h,再用无离子水或蒸馏水洗至pH值中性或PH4以上，并将其在抽滤漏斗中抽干；将抽干的离子交换剂浸泡在0.5N的NaOH溶液中1－2h，再用无离子水或蒸馏水将其洗至中性。
（2）装柱将层析柱清洗干净垂直固定到层析架上，加1/3体积的无离子水，打开下出液口，水流畅通，即刻将小烧杯中装有适宜浓度的柱材，轻轻倒入层析柱中，凝胶自然慢慢沉降再层析柱底部，凝胶沉积直到离层析柱上端1.5－2cm处，停止装柱。
层析柱上端进液口连接恒流泵，下出口连接蛋白质监测仪，待层析柱的平衡。
（3）平衡在柱层析上样前必须对层析柱进行平衡，所谓平衡就是将层析柱中的溶液用层析过程的缓冲液（洗脱液）置换出来，使层析柱中的缓冲系统与柱层析过程中的系统一致。
其方法是：利用层析柱上端的恒流泵将平衡缓冲液泵入到层析柱内，打开层析柱下端的出口，平衡液流速在0.5-1ml/min，当下出口流出液的PH值与平衡缓冲液的PH值一致时，层析柱达到了平衡。
whatman DE-52纤维素详细使用方法
whatman DE-52纤维素详细使用方法Whatman DE-52纤维素详细使用方法1.引言本文档旨在提供关于Whatman DE-52纤维素的详细使用方法。
DE-52纤维素是一种常用于分离和纯化过程的离子交换纤维素材料。
以下将详细介绍DE-52纤维素的特性、操作步骤以及实验参数的优化建议。
2.DE-52纤维素的特性DE-52纤维素具有以下特性：________●高度可交换的离子交换群：________DE-52纤维素具有一定数量的阴离子交换基团，可与带正电荷的离子相互作用。
●高度交换能力：________DE-52纤维素对多种离子具有可靠的交换性能，适用于多种离子分离和纯化的应用。
3.实验前准备在使用DE-52纤维素之前，需要进行以下实验前准备工作：________3.1 pH调节：________根据实验需要，调节溶液的pH值至所需范围。
3.2 预处理DE-52纤维素：________将DE-52纤维素浸泡在适当的缓冲液中，使其充分湿润。
4.DE-52纤维素的使用步骤详解以下是使用DE-52纤维素进行分离和纯化的详细步骤：________4.1 样品的初步处理●准备待处理的样品溶液，并根据需要进行预处理，如剔除杂质、浓缩等。
4.2 准备DE-52纤维素柱●将经过预处理的DE-52纤维素装填至柱子中。
●使用适当的流速，将缓冲液预冲柱子，以获得平衡的柱子。
4.3 样品的加载●将经过初步处理的样品加载至DE-52纤维素柱子。
●使用适当的流速，逐步洗脱样品。
4.4 洗脱和回收目标物●使用适当的洗脱缓冲液，洗脱并回收目标物。
5.实验参数优化建议为获得最佳效果，可以根据需要进行以下实验参数的优化：________5.1 pH值：________适当调节操作溶液的pH值可改善分离效果。
5.2 柱子尺寸：________选择合适的柱子尺寸以满足样品处理的要求。
5.3 流速：________通过调整流速可影响分离效率和纯化速度。
DEAE纤维素分离猪血清蛋白
摘 要：对ＤＥＡＥ纤维素５２（简称ＤＥ５２）分离猪血清蛋白进行了研究。结果表明：ｐＨ ７．４时，以Ｏ
～０．３ ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ磷酸盐缓冲液梯度洗脱，ＤＥ５２可以将血清蛋白分为７个部分。在梯度洗脱
的基础上，分别以ＮａＣｌ浓度０、０．０５、０．０８、０．１、０．１２、０．１５、０．２ ｍｏｌ／Ｌ的磷酸盐缓冲液进行阶段
２）猪血清蛋白的阶段洗脱：取０．５ ｍＬ离心后 的血清上样，以ｐＨ ７．４并选取合适ＮａＣＩ浓度的 ０．０１ ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐ＮａＣｌ缓冲液进行阶段洗脱，体 积流量１ ｍＬ／ｍｉｎ。 １．２．３ ＤＥ５２色谱柱的再生和平衡用１ ０００ ｍＬ ２０ ｍｏｌ／Ｌ的ＮａＣｌ溶液洗脱再生，用１ ０００ ｍＩ。ｐＨ ７．４的０．０１ ｍｏｌ／Ｌ磷酸盐缓冲液平衡，然后即可再 次上样。 １．２．４ 样品洗脱峰蛋白组成检测 用非变性 ＰＡＧＥ电泳检测，电泳条带扫描后用分析软件分 析［５］。 １．２．５ ＩｇＧ定性检测 用ＥＬＩＳＡ法测定样品蛋白 ＩｇＧ含量，鉴定样品蛋白是否是ＩｇＧ［６］。
ＨＤ－３型紫外检测仪，上海沪西仪器厂制造；ＤＢ－３ 型层析谱数据分析系统，南京新校园生物技术研究 所制造；ＨＬ－１型恒流泵，ＢＳＺ～１００型自动分步收集 器，上海沪西仪器厂制造；ＴＢ２０—１０００型梯度搅拌 器，上海新波无线电厂制造；ＭＫ３型酶标仪，上海雷 勃仪器厂制造；ＤＹＣＺ一２４Ｄ型电泳槽，北京市六一 仪器厂制造。猪血采自无锡市肉联厂，４℃８ ０００ ｒ／ｍｉｎ离心１０ ｍｉｎ，除去血球和纤维蛋白原，得到血 清。猪ＩｇＧ，白蛋白标样自Ｓｉｇｍａ公司购得。 １．２试验方法 １．２．１ ＤＥ５２色谱柱的制备
２结果与分析
２．１猪血清ＤＥ５２梯度洗脱
血清中蛋白质种类很多，组成复杂，为了研究
ＤＥ５２对血清蛋白的分离效果，在保持洗脱液ｐＨ
whatman DE-52纤维素详细使用方法
1． 按上项（1）那样轻轻搅拌离子交换剂到一定容积的缓冲液中。
2． 放置 10min，倾出或滤出上清液。 3． 重复处理直到滤液或上清液确实与缓冲液的 pH 和电导率一样为止。变换缓冲液后必须
核对 pH。当采用低浓度缓冲液时本方法会有所变化，且需要增加处理的时间。 4． 除去细颗粒和装柱的准备工作请按上述（4）（5）和（6）项进行。
2． 为了得到尽可能好的结果，对于干的离子交换纤维素（23 和 32）预处理的每一步必须 按下面即将介绍的流程进行操作。
3． DE51、QA52、SE52 和 SE53 含防腐剂。此类物质会在平衡和装柱时自动随之除去。如 果离子交换剂还进行平衡，则防腐剂可以用蒸馏水或者去离子水进行洗涤。
第一部分 干型离子交换纤维素
装柱
在装柱时必须避免离子交换剂和缓冲液的对流翻动。 为此必须使悬浮液倒入柱中瞬间使离子交换剂形成沉降柱床曾，操作进行得尽可能快，否则 悬液中的对流需很长时间才会停下来。 1． 离子交换用柱应该垂直置于无灰、无直射阳光和不发热等环境中。 2． 假如选液体积大于柱体积时，应该另外接一段延长管。 3． 轻轻搅动下将悬液倒入柱中。 4． 让洗脱液从柱中排出。 5． 全部悬液加完后装上或插入柱顶盖。 6． 缓冲液用泵或流动法通过柱子，流速控制至少 45ml/hr/cm2 柱子内截面积，直到柱床高
处理条件
型号 DE CM
一次处理 0.5NHCl 0.5Nห้องสมุดไป่ตู้aOH
中间 pH 4.0 8.0
二次处理 0.5NNaOH 0.5NHCl
注意：对预溶胀的微粒状产品（51，52 和 53 型）不需进行这一步，因此干型产品用在大规 模柱层析分离更好。
一般操作注意事项 z 离子交换剂可以在室温下储存 z 当不用时可以一直密封保存 z 可以用蒸馏水，更好的是使用去离子水 z 为了避免离子交换剂颗粒变细，不可以激烈窑洞或者搅动交换剂悬液 z 为了延长使用期，离子交换剂不可以采用浓酸、浓碱或强氧化剂处理。为了再生。
离子交换纤维素在实验室中的用法
交换剂悬浮液的准备
一般 QA52 型和 SE52 型全离子化交换剂在用低离子浓度缓冲液中平衡时间比 DE52 和 CM52 型更短。
而且所有介质当采用的缓冲液离子与离子交换剂的相一致时，所需的平衡液体积最小， 例如采用三（羟甲基）氨基甲烷盐酸缓冲液（Tris HCl Buffer）对 DE 或 QA 型离子交换剂 平衡所需时间和体积都要比用醋酸盐类缓冲盐少。
Whatman 离子交换纤维素在实验室中的用法
有关如何使得介质获得最佳结果
达到最佳分离结果
Whatman 公司已为蛋白质、酶和核酸片断等生物多聚物的有效分离特别开发了一系列 Whatman 离子交换纤维素。在使用时只有确切的按注意事项操作才能得到最佳分离效果。
介质种类 类型 干品
预溶胀
阴离子交换 DE23 DE32 DE51 DE52 DE53 QA52
灭菌和去热源，可以采用 0.5N-2.0NNaOH 处理 48 小时。 z 不添加防腐剂情况下，离子交换剂在缓冲液和多聚电解质溶液中不要超过一周。阳
离子交换剂（CM 和 SE 类）采用 0.1%（W/V）叠氮钠、0.1%（W/V）2,2’-二硫双 （氧化吡啶）或 0.02%（W/V）乙基汞硫化水杨酸钠。阴离子交换剂（DE 和 QA 类） 用 0.2%（W/V）烷基-二甲基-苄基氯化铵。
后停止真空。较合适的是在抽滤瓶中带磁力搅拌器搅拌下进行，抽滤瓶与吸气器相连。 4． 加碱性缓冲液使得所希望的 pH。对要求更高的分离，所用缓冲液必须用除 CO2 的水配
制以保证无 CO2。
采用含醇缓冲液
对 SE53 型介质需要含醇缓冲液，平衡时先用水缓冲液处理，然后再用含醇缓冲液系统 完成平衡。
纤维素溶解步骤
纤维素的溶解分两步进行：首先是溶剂分子在高速揽拌的机械力作用下快速
进入纤维素非晶区和晶区实现初步的滴胀效应。
随着溶剂分子进入纤维素分子链 空隙的量逐渐累积，纤维素分子链内和链间的氨键被打破断裂。
溶剂分子和纤维 素分子链上游离的居基结合形成新的氨键，直到实现新的稳定平衡体系。
纤维素 在溶剂中润胀程度逐渐扩大，达到无限溶胀时即出现纤维素溶解。
由于在溶解的 过程中没有发生化学反应也没有产生新的物质，且纤维素大分子链能在溶液中长 时间稳定存在，和小分子溶液一样也是热力学稳定体系。
故纤维素溶液可称么为 真溶液，而不是胶体溶液。
但是，由于纤维素是大分子聚合物，且其分子链又具 有一定的柔初性，使得纤维素的溶解过程较小分子化合物较为缓慢。
下面我们将 介绍几种纤维素常用的溶解方法。
DEAE52 说明书
DEAE-纤维素(52)使用说明书一简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50µm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，它在高流水下保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
三、应用的注意事项：1) 色谱柱装填1、所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可.2、在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
3、此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
4、在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
2) 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
3) 蛋白的洗脱这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。
whatman DE-52纤维素详细使用方法
whatman DE-52纤维素详细使用方法Whatman DE-52纤维素使用方法1.简介Whatman DE-52纤维素是一种常用的离子交换纤维素，用于分离和净化蛋白质和其他生物大分子。
本文档将详细介绍其详细使用方法。
2.材料准备●Whatman DE-52纤维素●缓冲液：根据实验需要选择适当的缓冲液。
●清洁的实验室仪器和设备：如瓶子、离心机、pH计等。
●实验用具：如滤纸、滤芯、吸引器等。
3.DE-52纤维素的制备过程●首先，在一个干燥的容器中称取适量的DE-52纤维素。
●将DE-52纤维素与缓冲液混合，并用搅拌棒搅拌均匀。
●观察混合物的颜色和质地，确保DE-52纤维素完全悬浮在缓冲液中。
●将混合物从容器中过滤出来，以除去任何残留颗粒。
●检查过滤的液体，确保没有任何不溶性物质。
4.样品预处理●检查待处理样品的pH值，确保其适合使用DE-52纤维素进行离子交换。
●如果需要，可以调整样品的pH值，以最大限度地提高DE-52纤维素的效果。
5.离子交换过程●将DE-52纤维素的适量加入到预处理样品中，并充分混合。
●让样品与DE-52纤维素充分反应，并保持一定的时间来完成离子交换作用。
●过滤样品，以除去DE-52纤维素和已经发生离子交换的物质。
●收集过滤液，这样您就可以分析或进一步处理纯净的样品了。
6.清洗和保存DE-52纤维素●每次使用后，将DE-52纤维素用适当的溶剂进行清洗，以去除任何残留的样品或杂质。
●定期检查DE-52纤维素的质量，并根据需要进行更换。
●储存DE-52纤维素在干燥、阴凉的地方，远离阳光和高温环境。
附件：●本文档没有附带任何附件。
法律名词及注释：●无。
whatman DE-52纤维素详细使用方法
whatman DE-52纤维素详细使用方法whatman DE-52纤维素详细使用方法1. 简介whatman DE-52纤维素是一种常用的离子交换纤维素，广泛应用于生物化学、分子生物学等领域。
本文将详细介绍whatman DE-52纤维素的使用方法，帮助您更好地利用这一工具进行实验和研究。
2. 理论基础whatman DE-52纤维素是一种离子交换纤维素，其主要作用是实现离子的吸附与洗脱。
其原理是通过静电作用，将具有相反电荷的离子吸附在纤维素上，从而实现分离和纯化的效果。
3. 实验准备在使用whatman DE-52纤维素前，需要进行实验准备工作，包括准备实验材料和设备，以及准备相应的缓冲液、洗脱液等。
3.1 实验材料和设备- whatman DE-52纤维素- 离心管- 移液器- 离心机3.2 缓冲液和洗脱液的准备根据实验需要，准备相应的缓冲液和洗脱液。
缓冲液的pH值和离子浓度应根据要纯化或分离的离子种类和特性进行调整。
4. whatman DE-52纤维素的使用步骤4.1 制备样品将待处理的样品制备好，可以是酶、蛋白质、核酸等。
根据样品的性质，选择适当的缓冲液，将样品溶解在缓冲液中。
4.2 预处理whatman DE-52纤维素将whatman DE-52纤维素用适当的缓冲液进行预处理，可以去除可能的杂质和残留物，提高吸附效果。
方法是将whatman DE-52纤维素放入离心管中，加入适量的缓冲液，轻轻摇晃，然后离心，将上清液倒掉，重复此步骤2-3次。
4.3 样品吸附将处理好的样品加入离心管中，加入预处理好的whatman DE-52纤维素，并轻轻摇晃离心管，使样品和纤维素充分接触和混合。
可以根据需要调整吸附时间和温度。
4.4 洗脱根据实验要求和需要，选择适当的洗脱液进行洗脱。
将洗脱液加入含有样品和纤维素的离心管中，轻轻摇晃，然后进行离心，将上清液收集起来。
4.5 分析与保存将洗脱液收集起来，可以进行进一步的分析实验。
DEAE-纤维素DE-52使用说明
DEAE-纤维素DE-52使用说明DEAE-纤维素(52)使用说明书一简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50µm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，它在高流水下保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
三、应用的注意事项：1) 色谱柱装填1、所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可.2、在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
3、此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
4、在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
2) 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
3) 蛋白的洗脱这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。
DEAE纤维素使用说明
D E A E纤维素使用说明集团文件版本号：（M928-T898-M248-WU2669-I2896-DQ586-M1988）DEAE-纤维素1 简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50μm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
2 填料特征：3 应用的注意事项：3.1 色谱柱装填（1）所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可。
（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
（3）此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
（4）在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
3.2 蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
whatman DE-52纤维素详细使用方法
whatman DE-52纤维素详细使用方法正文：一、概述Whatman DE-52纤维素是一种常用的离子交换剂，广泛应用于生物化学和分析化学领域。
本文将详细介绍Whatman DE-52纤维素的使用方法。
二、实验所需材料1： Whatman DE-52纤维素2：磨砂瓶3：蒸馏水4：试剂5：离心管6：离心机7：显微镜8：高压釜9：透析袋10： pH计三、实验步骤1：准备工作：(1) 清洗实验用具：将磨砂瓶和离心管用蒸馏水彻底清洗。
(2) 准备试剂：根据实验需求准备相应的试剂。
2： DE-52纤维素制备：(1) 将适量的Whatman DE-52纤维素加入磨砂瓶中。
(2) 加入足够的蒸馏水，使纤维素湿润，并轻轻摇晃磨砂瓶使其均匀混合。
(3) 放置一段时间，让纤维素充分膨胀。
3：样品处理：(1) 取适量的要处理的样品，溶解于适量的缓冲液中。
(2) 将处理后的样品倒入含有Whatman DE-52纤维素的磨砂瓶中。
(3) 轻轻摇晃磨砂瓶，使样品与纤维素充分接触。
4：进行离心操作：(1) 将含有样品和纤维素的磨砂瓶放入离心机中。
(2) 将离心机设定至合适的转速和时间进行离心操作。
(3) 离心后，观察离心管中的沉淀情况，并记录。
5：分离和收集：(1) 将离心管倒置，待液体慢慢流出，并将沉淀留在离心管中。
(2) 使用透析袋将离心管中的沉淀取出，并用蒸馏水进行洗涤。
(3) 使用显微镜检查并记录样品的纯度和形态。
6：进一步处理：根据实验需求，可以对样品进行进一步的处理，可使用高压釜等设备进行。
四、附件本文档无附件。
五、法律名词及注释1：离子交换剂：一种可以与离子发生交换作用的物质，用于分离和纯化溶液中的离子。
2：缓冲液：一种溶液，用于稀释或调节样品的pH值，以维持溶液的稳定性。
3：转速和时间：离心机设定的旋转速度和离心时间，可以根据实验需求进行调节。
DEAE纤维素使用说明
DEAE-纤维素1 简介DEAE-纤维素，它采用平均粒径为50μm的颗粒型亲水高分子聚合物，表面又用大分子糖链接枝，使它有更高的比表面积和更好的生物兼容性，保持更高载量，同时又具有更好的分辨率。
由于比表面积大，平衡和洗脱的时间也更短。
它经过接枝即使是纯化病毒，质粒等超大分子的物质，载量基本保持不变。
本产品物理和化学稳定性好，使用寿命长，操作方便。
2 填料特征：3 应用的注意事项：色谱柱装填（1）所需要用到的材料的温度要与色谱操作的温度一样，液体最好做脱气处理。
填料可直接称量需要的量用缓冲液溶涨一小时装柱即可。
（2）在柱子下端加入20%乙醇，以除去柱子中的空气，关闭柱子出口，在柱内保留少量的20%乙醇。
20%乙醇容易产生气泡，可以在里面加1%吐温避免气泡产生。
也可以换成纯水装柱子，但是需要把填料中的20%乙醇也换成纯水，具体的方法取需要体积的填料在抽滤漏斗上进行，也可以小心倾去填料上的20%乙醇，再换成5倍体积的纯水，反复沉淀去上清，5次左右就可以用于装柱子。
（3）此填料颗粒比较细，所以一定要注意柱子要选择合适的筛网，不能漏，也可以取点填料加到筛网上试试，如果没有问题再将填料连续倒入柱子时，要用玻璃棒的紧靠柱子内壁引流，以减少气泡的产生，让填料先自然沉降到填料体积不再变化，而填料和上面的液体很好分层，上层溶液完全澄清，就可以开泵用适当的流速压柱子，填料体积不再变化后，再把转换头紧顶在填料上就可以平衡柱子使用。
使用的流速要小于装柱子的流速。
（4）在装柱子前，填料从冰箱中取出至少要室温放置2-3个小时，这样避免装柱子时由于温度变化而使柱子中产生气泡。
蛋白的结合样品的盐浓度和pH要尽量和平衡柱子的缓冲液一致，盐浓度过高或者pH带低也许挂不上，所以要根据自己的样品做适当调整。
蛋白的洗脱这个填料如果采用线性梯度洗脱，柱子的直径和高度比最好是大于10，数值越大越有利于分离，而且样品最好别上太多，可以按约10mg/ml上样，如果采用阶段洗脱的方法，装短粗柱子就可以，上样量也没有限制。
whatman DE-52纤维素详细使用方法
whatman DE-52纤维素详细使用方法whatman DE-52纤维素详细使用方法介绍whatman DE-52纤维素是一种常用于色素分离和蛋白质纯化的吸附剂。
它具有高吸附能力和较低的非特异性吸附性能，适用于许多不同类型的生物分子的分离和纯化。
原理whatman DE-52纤维素基于纤维素的磷酸基团，可以通过离子交换的原理与带有相反电荷的生物分子结合。
纤维素本身的多孔性结构提供了较大的表面积，可以增加吸附的效率。
使用方法以下是whatman DE-52纤维素的详细使用方法：1. 准备工作：准备所需的实验材料，包括DE-52纤维素、洗涤缓冲液、样品等。
提前将DE-52纤维素活化，在使用前用洗涤缓冲液进行悬浮和混匀。
调整样品的pH值和离子浓度以适应DE-52纤维素的吸附条件。
2. 准备柱子：将合适尺寸的柱子准备好，可以使用预装的柱子或自制柱子。
在柱子中加入纤维素，根据需要的纯化程度和产量确定纤维素的用量。
3. 样品处理：将样品加入洗涤缓冲液中，使样品与纤维素充分混合。
在混合样品和纤维素的过程中，避免剧烈搅拌，以防止样品的分解和降解。
4. 样品加载：将样品缓慢地加载到纤维素柱中，以避免产生气泡和杂质。
根据纤维素的吸附能力和样品的特性，确定样品与纤维素的接触时间。
5. 洗涤：使用洗涤缓冲液将未结合的杂质从柱子中洗脱。
可以根据需要重复洗涤步骤，直到样品基本纯净。
6. Elution（洗脱）：使用适当的洗脱缓冲液将目标分子从纤维素柱中洗脱。
根据样品和纤维素的亲和性，确定最佳的洗脱缓冲液和条件。
7. 收集：将洗脱的目标分子收集到收集管中。
根据需要，可以使用不同的收集管来收集不同洗脱峰的物质。
8. 分析：对收集的目标分子进行分析，例如测定其浓度、纯度等。
注意事项操作过程中要保持洗涤缓冲液和洗脱缓冲液的卫生和纯净。
严格控制样品的pH值和离子浓度，以避免对吸附和洗脱步骤的影响。
确保所使用的仪器和设备的清洁和维护，以保证实验的准确性和可重复性。
蛋白纯化经验
1) 硫酸铵沉淀后直接过疏水柱，应该用多大浓度的硫酸铵平衡柱子啊看你蛋白情况了,一般也就2M左右吧.挂不住就提高浓度,挂太牢就适当降低盐浓度,一般要根据实验决定.我一般就用苯基琼脂糖凝胶,一般纯化IgG用0.7M硫酸铵就可以挂住.你有个贴子中说在纯化过程中上样的样品中pH和盐浓度,以及种类等组分一定要平衡缓冲液完全相同至少相当。
我想试试你说的硫酸铵沉淀后直接过疏水柱，那我是不是要先确定复溶后样品的盐浓度再确定平衡缓冲液的盐浓度啊，如果是我怎么检测样品的盐浓度啊其实差不多就可以,也不一定特别严格,例如疏水盐浓度你的样品的盐高于平衡的也可以,但是别相差太多,尤其不能样品的盐浓度小于平衡缓冲液,这样也许挂不住,或者会产生沉淀.而缓冲液和盐浓度不同混合也许会产生沉淀,所以要小心,而一样的缓冲液体系和盐浓度可以避免这样的问题.硫酸铵沉淀后的样品,如果是上清按盐浓度稀释到你缓冲液盐浓度就可以,如果是沉淀,直接用缓冲液去溶解,沉淀里的盐可以忽略.最好的办法你可以用电导的方法去检测,只要样品的电导和你的平衡缓冲液一样就可以了.2)我在用镍柱亲和纯化后，蛋白已经比较纯了，仅在银染时能看见微弱的杂带（目的蛋白约25KD，杂蛋白约40KD)。
但我还想试试能不能完全去除杂带。
此前试过分子筛没效果，所以想试试离子交换。
想请教一下，在变性条件下可以做离子交换吗？和复性后再做比起来哪个效果好呢？非常感谢！！浓度太低一些杂带是很难出现的,所以这样的纯度很难说,我觉得得浓度高到25mg/ml左右,这样做电泳才能看得清楚些到底纯不纯.如果你是变性条件下做凝胶过滤没有意义,因为这时候蛋白是链状分子或者是不蜷曲的,不是球型,所以在这样的柱子中没有办法使他们分离,你最好的方法是优化你的亲和纯化条件,也可以在纯化前做好预处理,如果是包涵体,可以用分级沉淀的方法来初纯,亲和柱子的缓冲液中加点土温或者用pH洗脱和咪唑洗脱的方法配合,同时用阶段洗脱的方法,一般都能做得很好,用试剂盒的方法或者线性洗脱的方法有时候很难得到好的效果,你也许可以参考我们的方法,你留下邮箱我给你发一份做参考吧.我觉得离子交换也不一定好,在脲这样的变性剂下可以做离子交换,但是效果也不一定好,我觉得还是优化亲和条件更有意义.此外浓度太低很难纯化.3)重组蛋白A琼脂糖凝胶FF能一次纯化大量血清IgG吗？如几十毫升。
酶解法制备壳寡糖的工艺探索
壳寡糖（COS）来源广泛、安全无毒、水溶性好，具有降低血脂、抗氧化、抑菌、抗癌肿瘤、提高免疫力等多种生物活性［1-2］。
由甲壳素脱乙酰基制得的壳聚糖分子量大，其应用受到很大限制，而酶法降解壳聚糖反应条件温和且易控制、安全性高、环境污染少［3-5］。
因此，在前人研究基础之上，本研究采用纤维素酶代替成本昂贵的专一性酶降解壳聚糖，通过正交实验，得最佳降解工艺条件，为壳寡糖的制备提供新思路。
1材料与方法1.1实验材料壳聚糖（批号：181211A，脱乙酰度> 95％），某生物科技有限公司；纤维素酶DE-52（产品编号：C8350-100，From Whatman4057-200），北京索莱宝科技有限公司；D-氨基葡萄糖盐酸盐（批号：HL180930Y），山东莱州市海力生物制品有限公司；再生纤维素透析膜（货号：QABO-SP132592-1m截留分子量1000），上海安谱实验科技股份有限公司；冰乙酸，无水乙酸钠，氢氧化钠，无水乙醇，3，5-二硝基水杨酸，焦亚硫酸钠，酒石酸钾钠，苯酚。
1.2仪器设备电子天平，电热恒温鼓风干燥箱，紫外分光光度计，pH计，旋转粘度计。
1.3实验方法溶液的配制。
0.2mol/L醋酸配制：吸取11.3mL冰醋酸溶液于1L容量瓶中，加蒸馏水定容，配制成0.2mol/L的醋酸溶液。
0.2mol/L的醋酸钠的配制：准确称量16.2g无水醋酸钠溶于蒸馏水中，移液至1L的容量瓶中定容，配成0.2mol/L的醋酸钠溶液。
pH5.2醋酸-醋酸钠缓冲溶液配制：吸取0.2mol/L的醋酸溶液和0.2mol/L的醋酸钠溶液混合配制缓冲溶液，用pH计测量pH在5.2。
壳聚糖溶液的配制：准确称取1.0g壳聚糖原料溶于100mL醋酸-醋酸钠缓冲溶液中，配制成pH5.2的1.0%的壳聚糖溶液。
酶液的配制：准确称取0.4g纤维素酶溶于100mL 的醋酸-醋酸钠缓冲溶液中，配制成pH5.2的4g/L的酶液。
DNS试剂的配制：准确称取7.5g 3，5-二硝基水杨酸（DNS试剂）和14.0g氢氧化钠充分溶解于1000mL水中，加入216.0g酒石酸钾钠、5.6mL预先在50℃水中溶化的苯酚和6.0g焦亚硫酸钠，充分溶解后，盛于棕色瓶中，放置5d稳定后，即可使用。
纤维素胶水的使用方法
纤维素胶水的使用方法下载温馨提示：该文档是我店铺精心编制而成，希望大家下载以后，能够帮助大家解决实际的问题。
文档下载后可定制随意修改，请根据实际需要进行相应的调整和使用，谢谢!并且，本店铺为大家提供各种各样类型的实用资料，如教育随笔、日记赏析、句子摘抄、古诗大全、经典美文、话题作文、工作总结、词语解析、文案摘录、其他资料等等，如想了解不同资料格式和写法，敬请关注!Download tips: This document is carefully compiled by the editor. I hope that after you download them, they can help yousolve practical problems. The document can be customized and modified after downloading, please adjust and use it according to actual needs, thank you!In addition, our shop provides you with various types of practical materials, such as educational essays, diary appreciation, sentence excerpts, ancient poems, classic articles, topic composition, work summary, word parsing, copy excerpts,other materials and so on, want to know different data formats and writing methods, please pay attention!纤维素胶水是一种常见的胶水类型，在许多领域都被广泛使用。
纤维素安全操作及保养规程
纤维素安全操作及保养规程前言纤维素是一种天然的纤维素质，有着广泛的应用领域。
在使用过程中需要注意安全操作并保养好设备。
以下是纤维素安全操作及保养规程。
安全操作1. 呼吸保护在操作纤维素设备时，应佩戴适当的口罩以防止吸入纤维素微粒。
同时，应确保操作场所通风良好，以保证空气流通。
若纤维素已进入呼吸道，应及时就医。
2. 身体保护操作人员应穿戴防护服或工作服，使皮肤与纤维素隔离开来，以防止皮肤接触到纤维素。
若皮肤接触到纤维素，应立即用肥皂和水清洗，并遵医嘱就医处理。
3. 火源防范纤维素易受热和静电影响，应避免在易燃和易爆物品附近或者有静电积累的场所操作。
若不慎引发火灾或爆炸，应立即远离现场，通知相关人员扑灭火源或寻求帮助。
4. 操作安全在操作过程中，应遵守规定的安全操作程序和操作步骤。
对于操作设备不熟悉的人员，应进行培训和指导，并与能够提供帮助的人员保持联系。
5. 存储和运输注意事项在存储和运输过程中，应加强安全措施，确保纤维素不受损害。
应避免与其他危险化学品混合存放或运输，以免造成不必要的危害。
保养规程1. 维护设备运行设备必须有专人负责，正确操作、安装和维护设备，保持设备的正常运行和功能完整。
同时，应定期检查设备，并进行必要的维修和更换。
2. 设备安全在使用设备时，应检查设备的安全性，以确保设备处于正确、安全的位置，一旦设备出现问题，应立即停机进行维修。
3. 清洗设备在使用前后应对设备进行清洗并保持设备清洁卫生，以保证产品质量。
若使用设备时遗留有污渍和杂物，容易对设备造成损害并降低生产效率。
4. 保养与维修设备使用过程中需要定期检查，及时修理，以保持设备功能的正常和安全。
保养工作包括清洁设备、润滑设备、更换零部件等。
维修应由专业人员进行。
总结在使用纤维素设备时，操作人员应遵守安全操作程序，并按要求配备防护用具，同时加强设备维护工作，并定期检查和维修设备，以确保设备设施处于安全和完好的状态。
纤维素的酶解过程及其应用
纤维素的酶解过程及其应用纤维素是地球上最丰富的有机化合物之一，广泛存在于植物细胞壁中。
然而，由于其复杂的结构，直接利用纤维素存在一定的困难。
酶解作为一种温和、高效且环保的方法，在将纤维素转化为有用产物方面发挥着重要作用。
一、纤维素的结构要理解纤维素的酶解过程，首先需要了解纤维素的结构。
纤维素是由βD葡萄糖通过β-1,4-糖苷键连接而成的线性大分子。
这些链相互平行排列，形成了微纤维，再进一步组成了纤维素纤维。
这种高度有序的结构使得纤维素具有很强的稳定性和抗降解性。
二、纤维素酶的种类实现纤维素的酶解，离不开纤维素酶的参与。
纤维素酶是一类能够水解纤维素的酶的总称，通常包括以下三种主要类型：1、内切葡聚糖酶（Endoglucanase，EG）：这类酶随机作用于纤维素内部的无定形区，切断β-1,4-糖苷键，产生不同长度的纤维素链片段。
2、外切葡聚糖酶（Exoglucanase，CBH）：又分为 CBHⅠ和CBHⅡ两种。
CBHⅠ从纤维素链的非还原端依次切下纤维二糖；CBHⅡ则从纤维素链的还原端进行切割。
3、β葡萄糖苷酶（βGlucosidase，BG）：将纤维二糖和短链的纤维寡糖水解为葡萄糖。
这三种酶协同作用，共同完成纤维素的酶解过程。
三、纤维素的酶解过程纤维素的酶解是一个多步骤的复杂过程：首先，内切葡聚糖酶作用于纤维素的无定形区，打破纤维素的长链结构，增加纤维素的可及性。
然后，外切葡聚糖酶从纤维素链的两端进行切割，产生纤维二糖和短链的纤维寡糖。
最后，β葡萄糖苷酶将纤维二糖和短链的纤维寡糖水解为葡萄糖。
在这个过程中，酶与底物的结合、酶的催化活性以及酶之间的协同作用都对酶解效率产生重要影响。
四、影响纤维素酶解的因素1、底物特性：包括纤维素的结晶度、聚合度、木质素含量等。
结晶度高、聚合度大以及木质素含量高的纤维素，酶解难度较大。
2、酶的性质：酶的活性、稳定性、最适反应条件（如温度、pH 值等）都会影响酶解效果。
纤维素测定仪操作规程
文件制修订记录一、原理：用固定数量的酸和碱在特定条件下消煮样品，可以去除样品中的淀粉、果胶、蛋白质等物质，再用乙醚去除醚溶物，此时样品中剩下粗纤维（以纤维素为主，还有半纤维素和木质素等）和灰分，然后高温灼烧可使粗纤维挥发，只剩下灰分，根据质量差可以算出粗纤维的含量。
二、操作方法：1、样品处理：1.1将需要测定的样品进行粉碎处理，即将样品磨至40-60目，过筛。
1.2将样品烘干至恒重。
1.3如果样品必须在新鲜状态下测量（即在含水量的情况下），则必须同条件测量一个不含水的干样，以确定里面的水含量。
1.4如果样品脂肪含量超过5-10%，则以25mL每克样品的量用石油醚（蒸发残留物不超过1g/100mL）进行脱脂处理。
2、仪器操作：2.1先将坩埚烘干至恒重，准确称量其重量，精确到小数点后四位，记录其重量。
2.2将烘干至恒重的样品放入坩埚，准确称量其重量，精确到小数点后四位，记录其重量。
2.3计算样品重量。
2.4将仪器下方的三通阀旋至CLOSED档，即成水平状态。
2.5将手柄抬起，将装有样品的坩埚水平准确放入仪器内。
2.6缓慢按下手柄，使消解管压紧坩埚。
2.7接通电源，打开冷凝水。
2.8通过时间按钮设置酸解（或碱解）时间。
2.9将配好的酸液（或碱液）从仪器顶部加入消解管内。
2.10设定加热档位，一般选择加热至液体沸腾即可。
2.11酸解（或碱解）完成后，即时间用完后，关闭红外加热。
2.12等液体冷至不再沸腾，将三通阀旋至VACUUM档，打开蠕动泵，进行排液。
2.13如果液体排空非常缓慢，关闭蠕动泵，将三通阀旋至PRESSURE档，打开反吹泵，进行反吹，而后关闭反吹泵，打开蠕动泵，进行排液，如此反复，直至液体排空。
2.14液体排空后，将三通阀旋至CLOSED档，此时按实验方案加入已经预热好的水溶液进行清洗，而后排空，直至PH为中性。
2.15液体排空后，按实验方案加入已经预热好的碱液（或酸液）进行碱解（或酸碱），重复步骤2.8-2.14.2.16按实验方案进行后续处理，最后清洗仪器（热水清洗一次，温水清洗一次，凉水清洗二次，丙酮清洗三次），清洗完成后，关好冷却水，关闭电源，最后按实验方案处理数据，计算结果。
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连续地或分段地改变缓冲液的组分用于有效分离。缓冲液的组分变化可以是提高一种离 子浓度或改变适当的 pH，或者两者都改变。缓冲液本身是达到分离目的的主要因素，离子 交换剂的量需要按离子交换剂对目的化合物的交换容量而定。万一混合物含层析相近似的组 分时，为了获得好的分辨力需要稍增加些柱长度。
特殊技术
度恒定。 7． 停止缓冲液流进或流出柱子。 8． 取下延长管（若装着）并换上柱顶盖。
平衡
需要强调的是必须正确读取 pH 和电导率。 对真正的平衡而言平衡后的溶液应该与起始缓冲液一致，必须做到不仅连续两次平衡溶 液的读数相同，而且要去起始缓冲液相同。不正确的平衡是产生无重现性结果的原因。 起始缓冲液流过柱子直到流出液的电导率和 pH 精确地与起始缓冲液相同。此方法适用于开 始时用低浓度缓冲液的柱分离。
第二部分 预溶胀型离子交换纤维素和预处理后的干型离子交换纤维素
交换剂悬浮液的准备
一般 QA52 型和 SE52 型全离子化交换剂在用低离子浓度缓冲液中平衡时间比 DE52 和 CM52 型更短。
而且所有介质当采用的缓冲液离子与离子交换剂的相一致时，所需的平衡液体积最小， 例如采用三（羟甲基）氨基甲烷盐酸缓冲液（Tris HCl Buffer）对 DE 或 QA 型离子交换剂 平衡所需时间和体积都要比用醋酸盐类缓冲盐少。
1． 将一定量的已预处理并平衡过无细粒的离子交换剂加到原溶液中。 2． 按原溶液中所含成分的容量搅动一定时间进行吸附分离。 3． 用过滤法或者离心法将离子交换剂和缓冲液分开。 4． 用平衡时所用缓冲液洗涤离子交换剂。 5． 在搅动流化床下或离心下解吸，也可以将纤维素装柱后用上述洗脱技术进行解吸。
有关 Whatman 离子交换纤维素介质大规模分离的应用请与 Whatman 国际公司联系，公 司联络地址：Springfield Mill, Maidstone, Kent. ME 142LE, England.
同而定。柱床高度在这种方式操作中并不重要。 2． 目的物分子是结合状态的。层析时混合物是由相类似的成分组成的，为了获得最佳分离
应选用相对长的柱子。可取的是只用了柱总容量的很小一部分（如 5%）。 应避免离子交换剂平衡和柱中层析分离两者选用不同的缓冲液，除非系统已经明确显出 会得到错误的结果时才考虑。
灭菌和去热源，可以采用 0.5N-2.0NNaOH 处理 48 小时。 z 不添加防腐剂情况下，离子交换剂在缓冲液和多聚电解质溶液中不要超过一周。阳
离子交换剂（CM 和 SE 类）采用 0.1%（W/V）叠氮钠、0.1%（W/V）2,2’-二硫双 （氧化吡啶）或 0.02%（W/V）乙基汞硫化水杨酸钠。阴离子交换剂（DE 和 QA 类） 用 0.2%（W/V）烷基-二甲基-苄基氯化铵。
脱气（对阴离子交换剂）
对大多数灵敏的分离，为了获得重现性好的结果，DE 和 QA 纤维素交换剂需除去吸附 的二氧化碳。假如悬液预先按上述推荐的方法处理过后一般就不必进行这一步。 1． 将纤维素加到酸性缓冲液中。 2． 调整 pH 在 4.5。有时甚至要用更高浓度的酸溶液来调节 pH。 3． 在搅拌下抽真空（压力降至 10cmHg 以下）直到没有更多的气泡产生，在不产生沸腾之
的地方，沉降时间可按 t = nh 式计算。式中：t = 时间（min），h = 量筒中悬液总高度 （cm），n = 系数可取 1.3~2.4。 6． 注意“湿沉降体积”是离子交换剂在规定条件下沉降后所占的体积。除去上清液中所含 细粒后留在量筒中的最终体积是“湿沉降体积”加 20%。 7． 填装短柱或长柱时悬液可以选用上述密度，但是纤维状产品的长柱床的密度需用“湿沉 降体积”加 50%。
变换缓冲液可用的方法
1． 按上项（1）那样轻轻搅拌离子交换剂到一定容积的缓冲液中。
2． 放置 10min，倾出或滤出上清液。 3． 重复处理直到滤液或上清液确实与缓冲液的 pH 和电导率一样为止。变换缓冲液后必须
核对 pH。当采用低浓度缓冲液时本方法会有所变化，且需要增加处理的时间。 4． 除去细颗粒和装柱的准备工作请按上述（4）（5）和（6）项进行。
所有情况下实际采用的起始缓冲液浓度比需要的起始缓冲液浓度高，（典型的高 10 倍）， 这样有利于交换剂的预平衡。下面介绍的是更可取的平衡方法。
离子交换剂装柱后在进样品前必须用低离子浓度的缓冲液进行平衡，通常将 2-4 倍柱床 容积的低浓度缓冲液通过填充柱就可以完成平衡。
推荐的方法
1． 在使用之前用缓冲液（0.2-1.0M）轻轻摇动搅拌离子交换剂 2-3min。最初取干型纤维素 时每克干品约用 15-30mL 缓冲液，湿离子交换剂约用 6mL/g。
2． 为了得到尽可能好的结果，对于干的离子交换纤维素（23 和 32）预处理的51、QA52、SE52 和 SE53 含防腐剂。此类物质会在平衡和装柱时自动随之除去。如 果离子交换剂还进行平衡，则防腐剂可以用蒸馏水或者去离子水进行洗涤。
第一部分 干型离子交换纤维素
处理条件
型号 DE CM
一次处理 0.5NHCl 0.5NNaOH
中间 pH 4.0 8.0
二次处理 0.5NNaOH 0.5NHCl
注意：对预溶胀的微粒状产品（51，52 和 53 型）不需进行这一步，因此干型产品用在大规 模柱层析分离更好。
一般操作注意事项 z 离子交换剂可以在室温下储存 z 当不用时可以一直密封保存 z 可以用蒸馏水，更好的是使用去离子水 z 为了避免离子交换剂颗粒变细，不可以激烈窑洞或者搅动交换剂悬液 z 为了延长使用期，离子交换剂不可以采用浓酸、浓碱或强氧化剂处理。为了再生。
装柱
在装柱时必须避免离子交换剂和缓冲液的对流翻动。 为此必须使悬浮液倒入柱中瞬间使离子交换剂形成沉降柱床曾，操作进行得尽可能快，否则 悬液中的对流需很长时间才会停下来。 1． 离子交换用柱应该垂直置于无灰、无直射阳光和不发热等环境中。 2． 假如选液体积大于柱体积时，应该另外接一段延长管。 3． 轻轻搅动下将悬液倒入柱中。 4． 让洗脱液从柱中排出。 5． 全部悬液加完后装上或插入柱顶盖。 6． 缓冲液用泵或流动法通过柱子，流速控制至少 45ml/hr/cm2 柱子内截面积，直到柱床高
灭菌
所有 whatman 离子交换介质除 P11 型之外为了灭菌都可以高压灭菌。最好是离子交换 剂用 PH6.5~7.5 的非挥发性缓冲液配成的悬液中进行。
建议的灭菌条件是 10psi/15min；或者 15psi/10min；。另外除 P11 型之外所有的产品也可 以用化学灭菌法，将介质分散在 0.5MNaOH 中，然后用灭菌水洗涤。所有产品也可用含 20~25%体积百分比的乙醇水溶液处理。
后停止真空。较合适的是在抽滤瓶中带磁力搅拌器搅拌下进行，抽滤瓶与吸气器相连。 4． 加碱性缓冲液使得所希望的 pH。对要求更高的分离，所用缓冲液必须用除 CO2 的水配
制以保证无 CO2。
采用含醇缓冲液
对 SE53 型介质需要含醇缓冲液，平衡时先用水缓冲液处理，然后再用含醇缓冲液系统 完成平衡。
分批法离子交换
阳离子交换 CM23 CM32 CM52
SE52 SE53
物理形态 纤维状 微粒状
比 52 型结合力较弱的微粒状 微粒状
比 52 型结合力较弱的微粒状 全离子化微粒
比 52 型结合力强的全离子化微粒
交换剂的预处理
1． 预溶胀（51，52 和 53）型离子交换剂不用预先反复处理就可使用。但必须用缓冲盐充 分平衡。预溶胀的离子交换剂在每次预处理或再生后使用不要用任何方法使它变干。
样品准备和加样
样品溶于起始缓冲液中并调整溶液的 pH。细胞提取物和硫酸铵沉淀物要用层析柱起始 缓冲液透析。这一步不注意就有可能得到无法重现的结果。被分离物通常在低流速时加样。
洗脱
加样品后立刻开始洗脱或在规定时间内开始。 层析分离通常采用三种方法。有分步洗脱、连续梯度洗脱和分段梯度洗脱。
分步洗脱
离子交换剂平衡和样品混合物准备时所有缓冲液也可在洗脱时用，洗脱可以有两种方式 完成： 1． 目的物分子是游离状态的。所需离子交换剂量要根据混合物污染程度、结合力和成分不
Whatman 离子交换纤维素在实验室中的用法
有关如何使得介质获得最佳结果
达到最佳分离结果
Whatman 公司已为蛋白质、酶和核酸片断等生物多聚物的有效分离特别开发了一系列 Whatman 离子交换纤维素。在使用时只有确切的按注意事项操作才能得到最佳分离效果。
介质种类 类型 干品
预溶胀
阴离子交换 DE23 DE32 DE51 DE52 DE53 QA52
2． 在搅拌时缓冲液的酸或碱成分使缓冲液/离子交换剂悬液的 pH 调到所希望的值。 3． 让悬液沉降并倾出上清液中的细小颗粒。 4． 再次使用缓冲液使离子交换剂松散。干型离子交换剂悬液的总容积按 30mL/g 计，湿离
子交换剂约为 6mL/g。 5． 离子交换剂和缓冲液的悬液在合适的量筒中沉降，并置于无灰尘、无直射阳光和不发热
预处理
1． 称量好的的离子交换剂添加到 15 倍容积（W/V）酸或碱溶液中轻轻搅动，进行第一次 处理。
2． 微粒产品至少浸泡 30min，纤维状产品至少浸泡 60min。 3． 滤出上清液，用水洗至下列“中间 pH”。 4． 再用 15 倍容积的酸或碱溶液浸泡进行二次处理，放置 30min，滤出上清液。 5． 重复上述“4”二次处理，然后用水洗至洗液呈中性。