工业微生物筛选
微生物出发菌株的分离与筛选
培养基内的药物浓度呈线 性梯度，一端浓度高，另一端 浓度低。若在梯度平板上涂布 经过诱变的菌悬液，经培养后， 某些突变的菌株就可以在适当 药物浓度的培养基表面生长， 然后选择在较高药物浓度下生 长的菌株，分离培养即可得到 抗药性突变株。
琼脂平板 活性圈法：
•打孔+发酵液
•滤纸片
流式细胞仪
通过测量细胞及其他生物颗粒 的散射光和标记荧光强度，来快速 分析颗粒的物理或化学性质，并可 以对细胞进行分类收集，可以高速 分析上万个细胞，并能同时从一个 细胞中测得多个细胞特征参数，进 行定性或定量分析，具有速度快、 精度高、准确性好等特点。
热带雨林
生产废水中微生物降解菌的分离与 筛选
样品采集： 受污染水样的采集 准备：灭菌盛水容器，水下10-15cm采样， 保存备用 水底污泥的采集（如污水处理车间曝气池）
样品的处理
水样的过滤 污泥悬液的制备
培养基的配制及灭菌
①富集培养基（牛肉膏蛋白胨培养基，高氏 一号培养基） ②选择培养基（以污染物为唯一碳源）
工业微生物出发菌株 的分离与筛选
工业微生物最初都来源于自然界，如土壤， 水混杂有各种微生物 的样品，需进行目的微生物的分离筛选。
育种出发菌株的选择
首先从自然界获得所需要的菌株 把分离的到的野生型菌株进行纯化和代谢 产物鉴定
具备生产潜力
育种出发菌株的来源
从菌种保藏机构购买（经历多次育种处理 的菌株） 从传统产品中分离历经生产考验的菌株 从相关科研机构索取 从自然界直接分离到的野生型菌株
微生物样品的采集
从自然界分离出发菌株
含微生物样品的采集 含微生物样品的富集培养 目标微生物的分离 鉴定和分类 一般过程 采集微生物样品→预处理→培养→单菌落分离→ 选择单菌落→产物鉴定→菌种鉴定
工业菌株的筛选及其应用
工业菌株的筛选及其应用随着生物技术的发展，微生物在工业领域的应用日益广泛。
而对于工业菌株的筛选，早已成为了微生物学研究的重要领域。
工业菌株的筛选能够为生产提供高效率和低成本的微生物资源，因此备受工业界的关注。
本文旨在探讨工业菌株的筛选以及它们在工业领域的应用。
一、工业菌株的筛选1. 抗生素生产菌株的筛选抗生素是细菌产生的代谢产物，而这些产物的生产是受许多环境因素的影响。
因此，对于抗生素生产菌株的筛选可以通过组织微生物菌株库或样品筛选出合适的菌株进行研究。
而深入探索抗生素生产菌株的代谢途径，则可通过遗传学和分子生物学的手段来实现。
2. 酶类生产菌株的筛选相信大家都做过菌落PCR，相较于传统需分离纯化工艺进行酶活度测定，菌落PCR可以更快速、可靠地测定酶类的活性。
因此采用菌落PCR在筛选酶生产菌株上具有极高的效率。
同时，借助现代生物技术手段可更深入了解菌株中产酶相关基因的分布情况以及途径，有助于优化交叉反应影响生产效率的酶类工业制程。
3. 代谢物生产菌株的筛选微生物代谢途径的不同，可能导致产生不同的代谢产物。
在代谢物生产菌株的筛选中，可以通过利用高通量筛选、基因电转化、表达筛选等多种方法来筛选出最佳的代谢物生产菌株。
这些菌株在医药、健康食品等领域中有着广泛的应用。
二、工业菌株的应用1. 医药工业微生物的发展极大地推动了医药领域的进展。
许多药物，包括抗生素、酵素药、胰岛素、肝素等均是通过微生物发酵得到的。
同时，利用误差拼接和遗传修饰等技术对微生物进行改造，还可开发出新型抗生素等药物。
2. 能源工业微生物在生物燃料和生物氢领域中有着广泛的应用。
利用微生物代谢子或藻类光合作用，可将光能转化为生物质或能量。
通过利用微生物这一天然的能源转化系统，可以实现包括生物柴油、生物气体等在内的多种生物燃料的制备。
3. 食品微生物在食品加工、保鲜等方面也有着广泛的应用。
如利用酵母菌发酵食材，可以制备出各种口感独特、品质稳定的面包、酸奶等食品。
工业生产菌的筛选步骤
工业生产菌的筛选步骤
工业生产菌的筛选步骤一般包括以下几个环节：
标本采集：这是第一步，需要从各种可能的环境或样本中收集微生物。
采集标本的原则是，样品来源越广，获得新菌种的可能性越大。
同时，需要了解目标产物的性质和可能产目标产物的微生物种类及其生理特征，以便更好地选择采样地点和方式。
标本材料预处理：收集到的样本需要进行适当的处理，以便于后续的微生物分离和纯化。
这一步通常包括样本的破碎、稀释、过滤等操作。
富集培养：为了提高目标微生物的浓度，通常需要进行富集培养。
这一步通过提供有利于目标微生物生长的环境条件，使其数量增加，便于后续的分离和筛选。
菌种初筛：在富集培养后，需要对微生物进行初步的筛选。
这一步通常基于微生物的某些特定生理特征或代谢产物进行，如抗菌活性、酶活性等。
性能鉴定：初筛得到的菌种需要进一步进行性能鉴定，以确定其是否满足工业生产的要求。
这一步通常包括对微生物的生长速度、产物产量、稳定性等方面的评估。
菌种保藏：最后，对于筛选得到的优良菌种，需要进行妥善的保藏，以便于后续的研究和生产使用。
这些步骤可能需要反复进行和优化，以获得最适合工业生产
的菌种。
工程微生物菌种的筛选与应用
工程微生物菌种的筛选与应用随着人类对环境保护意识的增强和工业的发展，污染问题越来越严重。
在这样的背景下，工程微生物的应用得到了广泛的关注和探究。
微生物菌群作为一种可持续的生命体系，能够应对环境中多种物质的降解和去除，具有很高的应用价值。
本文将重点探讨工程微生物的菌种筛选和应用。
一、工程微生物菌种筛选的目的和方法工程微生物菌种筛选是指从大量微生物株中筛选出具有特定代谢能力或功能的微生物菌种的过程。
其目的是为了应对特定的污染状况，提高菌株的降解能力和适应性。
该过程是一个繁琐且复杂的工作，涉及到微生物学、分子生物学、化学、生态学等多个学科领域。
一般可以分为以下几个步骤:1.采集样品。
样品可以来自自然界的水、土壤、沉积物等，也可以是工业废水、污泥等。
采集样品时需要将其保存在低温条件下，以保证样品的活性和纯度。
2.初步筛选。
通过对样品的处理和培养，筛选出能够生长和代谢的微生物并进行初步鉴定。
这一步是该过程中非常重要的一步，其目的是为了缩小菌群的范围，快速筛选出高效菌株。
3.筛选检测。
通过对筛选得到的微生物菌株进行实验，测定其代谢产物和降解效果，以确定其适用范围和生命周期。
4.优化培养。
通过优化菌株的培养温度、pH值、培养基等条件，提高其生长速度和降解效率。
二、工程微生物菌种的应用工程微生物菌种的应用非常广泛，尤其是在环境治理和工业污染治理方面。
以下是工程微生物的应用实例：1. 生物治理：通过采用便携式微生物处理系统，将工业废水中的有机污染物转化成生态有机肥料。
当这种有机肥料被施用到耕种土地上后，又可以循环利用这些营养物质，并且将剩余的污染物转换成无害的土壤物质，缓解了土壤和环境的压力。
这种生物治理可以在单一的应用中降低污染物浓度，减少对土壤和水体的影响，同时还能促进微生物生长和微生物群落的氮过程。
2. 生物降解：通过研究新的微生物降解菌种，可以在工业废水软化方面得到极好的应用。
在废水软化过程中，微生物群落可以将废水中的某些离子进行降解和转换，从而降低废水的污染程度，减轻有害物质对环境的影响。
第五章 工业微生物产生菌的分离与筛选
第二节 含微生物样品的采集
一、从土壤中采样
1. 土壤有机质含量和通气状况
5-25cm土层，适合微生物生长，每克土中含菌数约几 十万到几十亿个。酵母菌分布土层最浅，约5—10cm，霉菌 和好氧芽孢杆菌也分布在浅土层。
2.
土壤酸碱度和植被状况
偏碱土壤环境，适合于细菌、放线菌生长。偏酸的土 壤环境下，霉菌、酵母菌生长旺盛。 植物根部的分泌物有所不同，即植被对微生物分布也
采样时需要注意的地方: 用取样铲，将表层5cm左右的浮土除去，取5—25cm处的
土样10—25g，装入事先准备好的塑料袋内扎好。北方土壤
干燥，可在10—30cm处取样。给塑料袋编号并记录地点、土 壤质地、植被名称、时间及其他环境条件。
一般样品取回后应马上分离，以免微生物死亡。如果样
品较多，或到外地取样，路途遥远，难以做到及时分离，则
2.极端环境条件的影响 高温、低温、高酸、高碱、高盐或高辐射强度的环境 下，也有少数微生物存在，这类微生物被称为极端微生物。 生活所处的特殊环境，导致它们具有不同于一般微生物的 遗传特性、特殊结构和生理机能，因而在冶金、采矿及生 产特殊酶制剂方面有着巨大的应用价值。
第三节 含微生物样品的富集培养
（1） 纸片培养显色
将饱浸含某种指示剂的固体培养基的 滤纸片搁于培养皿中，用牛津杯架空， 下放小团浸有3%甘油的脱脂棉以保湿， 将待筛选的菌悬液稀释后接种到滤纸 上，保温培养形成分散的单菌落，菌 落周围将会产生对应的颜色变化。
（2） 变色圈法 将指示剂直接掺入固体培养基中，进行待筛选菌悬液的单 菌落培养，或喷洒在已培养成分散单菌落的固体培养基表 面，在菌落周围形成变色圈。 a. 在含淀粉的平皿中涂布一定浓度的产淀粉酶菌株的菌悬液， 使其呈单菌落，然后喷上稀碘液，发生显色反应。变色圈 越大，说明菌落产酶的能力越强。而从变色圈的颜色又可 粗略判断水解产物的情况。 b. 筛选果胶酶产生菌时，用含０.2％果胶为唯一碳源的培养基 平板，对含微生物样品进行分离，待菌落长成后，加入0.2 ％刚果红溶液染色４h，具有分解果胶能力的菌落周围便会 出现绛红色水解圈。 c. 分离内肽酶产生菌时，除了用酪蛋白外，还可以用吲羟乙 酸脂为底物加到分离培养基内，产生蛋白酶的菌落由于水 解吲羟乙酸脂为3-吲羟吲哚，后者能氧化生成蓝色产物，根 据呈色圈便可选出平板上产蛋白酶的菌落。
第六章 工业微生物产生菌的分离筛选
第二节 含微生物样品的富集培养
富集培养：是在目的微生物含量较少时，根据微生物 的生理特性设计一种选择性培养基，创造有利的生长条件， 使目的微生物在最适环境下迅速生长繁殖，数量增加，由 自然条件下的劣势种变成人工环境下的优势种以利分离到 所需要的菌株。
富集培养主要根据微生物的碳、氮源、pH、温度、 需氧等生理因素加以控制。一般可从以下几个方面来进 行富集。
一、土壤中采样
土壤是人类最丰富的菌种资源库。
一般情况下，土壤中含细菌数量最多，且每克土壤的 含菌量大体有如下的递减规律：细菌（108）>放线菌 （107）>霉菌（106）>酵母菌（105）>藻类（104）>原 生动物（103），
（一）根据土壤特点
1、土壤有机质含量和通气状况
耕作土、菜园土、津郊土壤；森林土，采土样最好 的土层是5～25cm。一般每克土中含菌数约几十万到几 十亿个，并且各种类型的细菌和放线菌几乎都能分离 到。
1. 根据微生物营养类型
森林土 纤维素酶产生菌 ； 蛋白酶和脂肪酶 蛋白 肉类加工厂附近和饭店排水沟 的产生菌；
面粉加工厂、糕点厂、酒厂及淀粉加工厂 酶、糖化酶的菌株 ；
蜂蜜、蜜饯、甜果
酵母；
２. 根据微生物的生理特性
高温酶产生菌时，通常到温度较高的南方，或温泉、 火山爆发处及北方的堆肥中采集样品； 分离低温酶产生菌时可到寒冷的地方，如南北极地区、 冰窖、深海中采样； 分离耐压菌则通常到海洋底部采样。
产生电子脱色，形成淡白色晕圈。
3、生长圈法
用于分离筛选氨基酸、核苷酸和维生素的产生菌。
利用某些具有特殊营养要求的微生物（营养缺陷型菌 株）作为工具菌，要分离的微生物能在一般培养条件下 生长而合成该营养物而使工具菌能生长，形成生长圈 。 如嘌呤营养缺陷型大肠杆菌与不含嘌呤的琼脂混合 倒平板，在其上涂布含菌样品保温培养，周围出现生长 圈的菌落即为嘌呤产生菌。
微生物的筛选
根据采样计划，选择合适的采样点和采样方法进行采样，记录采样点的环境信息和样品采集情况。
采样过程
样本采集
样品富集
对采集的样品进行初步的富集和稀释，增加微生物细胞的浓度，提高筛选的效率。
样品处理
对富集后的样品进行破碎、匀浆、离心等处理，使微生物细胞裂解、分离出所需的微生物。Fra bibliotek样本预处理
选择培养基
实验步骤
实验结果分析
对分离得到的菌落进行统计和计数
对菌株进行分子生物学鉴定，如16S rDNA测序等
对筛选到的菌株进行形态学、生理生化等分析
分析实验结果，得出结论
根据实验结果得出目标菌株的数量和分布情况
分析目标菌株的生物学特征和遗传特性
探讨目标菌株在环境中的作用和意义
实验结论
微生物筛选的注意事项
食品领域
环保领域
化工领域
微生物筛选在食品领域中主要应用于食品防腐剂的研究和开发，以及食品中致病菌的检测和鉴定。
微生物筛选在环保领域中主要应用于污染物的生物降解研究，以及环境监测和评估。
微生物筛选在化工领域中主要应用于生物催化、生物修复以及生物制浆等研究。
微生物筛选的基本步骤
02
根据研究目的和要求，制定采样计划，准备采样工具、容器、试剂等。
微生物筛选在其他领域的应用发展趋势
THANKS
感谢观看
纯化方法
微生物的纯化
传统鉴定方法
采用形态学、生理学、遗传学等方法对纯化的微生物进行鉴定，确定其种属和分类地位。
现代鉴定方法
利用现代生物技术手段，如16S rRNA基因测序、宏基因组测序等，对微生物进行快速准确的鉴定。
微生物的鉴定
微生物筛选的实验设计
工业微生物产生菌的分离筛选
根据微生物对环境因子旳耐受范围具有可塑性旳 特点，可经过连续富集培养旳措施分离降解高浓 度污染物旳环境保护菌。例如：降解高浓度苯胺 旳微生物分离；环己烷降解菌旳分离
2、控制培养条件：pH、温度及通气
富集培养基旳pH值调整到被分离微生物旳要求 范围不但有利于本身生长，也可排除一部分不需要 旳菌类。
搜集和筛选 旳途径：
➢向菌种保藏机构索取有关旳菌株，从中筛选所需 菌株
➢由自然界采集样品，如土壤、水、动植物体等， 从中进行分离筛选
➢从某些发酵制品中分离目旳菌株，如从酱油中分 离蛋白酶产生菌，从酒醪中分离淀粉酶或糖化酶旳 产生菌等
本章内容
一、 含微生物样品旳采集 二、 富集培养 三、 好氧微生物旳分离 四、厌氧微生物旳分离
3）、生长圈法
一般用于分离筛选氨基酸、核 苷酸和维生素旳产生菌 工具菌（指示菌）是某些相相应旳营养缺陷型菌株
将待检菌涂布于高浓度工具菌并缺乏所需营养物旳平板 上进行培养，若某菌株能合成平板所需旳营养物，在该 菌株旳菌落周围便会形成一种混浊旳生长圈
如 嘌呤营养缺陷型大肠杆菌与不含嘌呤旳琼脂混 合倒平板，在其上涂布含菌样品保温培养，周围 出现生长圈旳菌落即为嘌呤产生菌
筛选霉菌时，可在培养基中加入四环素等抗生素克 制细菌，使霉菌在样品旳百分比提升，从中便于分离到 所需旳菌株
三、好气微生物旳分离
经富集培养后来旳样品，目旳微生物得到增殖， 占了优势，其他种类旳微生物在数量上相对降低，但 并未死亡。所以，经过富集培养后旳样品，也需要进 一步经过分离纯化，把最需要旳菌株直接从样品中分 离出来。
➢ 移植时间是关键，应在所需菌种确已占优势 旳情况下进行。
工业微生物菌株的筛选和优化
工业微生物菌株的筛选和优化随着科技的发展和产业的进步，微生物技术在各个领域有着广泛的应用，特别是在食品、医药、化工和能源等行业中，微生物发酵技术已成为一种十分重要的生产手段。
而工业微生物菌株的筛选和优化则是微生物技术的核心内容之一，对于提高生产效率和生产品质具有至关重要的意义。
一、工业微生物菌株的筛选微生物菌株的选择是微生物发酵工程成功的重要保障。
筛选过程一般包括以下几个方面：（一）来源选择：优秀工业菌株的来源有广泛性、经济性、实用性和安全性四个关键因素。
因此，在工业菌株的来源选择时，应考虑菌种的稳定性、生产的可行性和成本，保证菌株来源的安全性。
（二）物理诱变选择：物理诱变是一种经济实用的菌株改造方法。
常用的物理诱变方法有辐射、超声波、电场、激光、磁场等。
诱变方法的选择要考虑影响因素和目标菌株发酵特性，使其易于操作和管理。
（三）化学诱变选择：化学诱变是微生物菌株改造的另一种方法。
化学诱变包括化学药剂、自然化合物和代谢产物诱变等。
化学诱变可选择产物质量好、糖利用率高、菌液颜色明亮等具体特性的工业菌株。
（四）分子手段筛选：PCR技术、DNA微阵列技术、蛋白质组学等分子生物学手段可以使菌株筛选具有更高的速度和精度，为合适的工业菌株寻找合适的培养条件。
二、工业微生物菌株的优化菌株选型和参数优化是工业微生物发酵成功的关键。
针对具体企业及其工艺要求，对筛选出的菌种进行优化设计，能够提高微生物菌株产量和产品质量，降低生产成本。
针对菌株优化，可以从以下三个方面着手：（一）发酵条件优化：针对具体的菌株，合理调整发酵产物的pH值、温度、气体组成和培养基组分等条件，会使菌株发酵速度更快，产出的产物品质更好。
（二）营养物质优化：灭菌处理后加入的微生物营养成分显著影响微生物的生长和代谢，应根据需求提供营养物质，满足微生物各个生长阶段的需求。
（三）菌株调控优化：菌株调控优化可通过构建对菌株生长有一定抑制作用的遗传工程菌株、抗拒逆境菌株等，从而达到优化和提高微生物菌株产量和质量的目的。
工业微生物菌种
工业微生物菌种工业微生物菌种对于工业生产具有重要的意义。
微生物菌种是指一类具有特定功能的微生物种类，经过筛选和培养得到的。
在工业生产中，微生物菌种主要用于发酵过程，通过微生物的代谢活动产生有价值的化学物质，如酶、抗生素、有机酸等。
微生物菌种在工业生产中应用广泛，以提高产品质量和增加产量，促进工业发展。
工业微生物菌种的筛选和培养是一个重要的过程。
首先，需要从自然界中筛选出具有特定功能的微生物，这些微生物可以产生工业所需的化学物质。
筛选的方法包括采集样品，如土壤、水体等，然后通过培养方法将菌落分离并筛选出有特殊功能的微生物。
在筛选过程中，需要进行对微生物进行鉴定，确定其属于哪种微生物，并进一步进行培养。
微生物菌种的培养是将筛选出的微生物在实验室中进行培养的过程。
培养的目的是为了增加菌种数量，以便后续工业生产中的使用。
培养需要提供适当的培养基和培养条件，以保证微生物在培养过程中获得最佳的生长环境。
培养基是一种提供营养物质和能量的物质，可以通过调整培养基的成分和浓度来满足微生物的生长需求。
培养条件包括温度、pH值、气体和液体状态等，需要根据不同微生物的特性进行调控。
工业微生物菌种的应用广泛。
以酶制剂为例，酶是一类能够催化化学反应的生物催化剂，可以在不同工业过程中起到加速反应速度和提高产品质量的作用。
酶制剂是通过微生物发酵过程得到的，微生物菌种的选取和培养对于酶制剂的产量和活性具有重要影响。
此外，微生物菌种还用于生产抗生素、有机酸等。
抗生素是一种可以抑制或杀灭细菌的药物，是常见的临床用药物质。
有机酸是一类广泛应用于食品工业和化工工业中的物质，具有调味、抗菌、保鲜等功能。
工业微生物菌种的研究和应用为工业生产带来了许多好处。
首先，微生物菌种可以代替传统化学合成方法，从而减少对化石能源的消耗和环境的污染。
微生物发酵过程相对环保，产生的废物可以进行资源化利用，减少对环境的负担。
其次，微生物菌种可以提高产品的质量和产量。
菌种的筛选和分离
工业微生物菌种的分离与筛选来源：青岛海博一、微生物工业对菌种的要求（一)、微生物工业的生产水平由三个要素决定:生产菌种的性能、发酵及提纯工艺条件、生产设备。
其中生产菌种的性能是最重要的因素。
（二）、微生物工业对菌种的要求是：(1)菌株高产,在较短的时间内发酵产生大量发酵产物的能力；（2）在发酵过程中不产生或少产生与目标产品相近的副产品及其他产物；（3）生长繁殖能力强，较强的生长速率，产孢子的菌种应该具有较强的产孢子能力；（4)能够高效地将原理转化为产品;（5）能利用广泛的原材料,并对发酵原料成分的波动敏感性小；（6)对需要添加的前体物质有耐受能力，并且不能将这些前体物质作为一般碳源利用；（7）在发酵过程中产生的泡沫要少;（8)具有抗噬菌体的能力；（9）遗传稳定性,二、工业用微生物菌种的来源及选育（一）微生物菌种的来源一般通过以下几个途径收集菌种、采集样品和分离筛选：（1）是根据资料直接向有科研单位、高等院校、工厂或菌种保藏部门索取或购买；（2)从大自然中采集样品分离；（3）从一些发酵制品中分离筛选目的菌株。
当前发酵工业所用菌种总趋势是从野生菌转向变异菌，自然选用转向代谢育种,从诱发基因突变转向基因重组的定向育种。
(二)微生物工业菌种的分离1、野生菌株的分离、筛选过程（1)新菌种分离与筛选的步骤菌种分离的流程如下:标本采集→标本材料的预处理→富集培养→菌种初筛→菌种复筛→性能鉴定→菌种保藏①采样采样季节：以温度适中,雨量不多的秋初为好.采土方式：在选好适当地点后,用小铲子除去表土，取离地面5—15cm处的土约10g，盛入清洁的牛皮纸袋或塑料袋中，扎好，标记，记录采样时间、地点、环境条件等，以备查考。
为了使土样中微生物的数量和类型尽少变化，宜将样品逐步分批寄回，以便及时分离。
②标本预处理④纯种分离：采用划线分离法、稀释分离法等纯化方法获取单菌落。
⑤高产菌株的筛选：这一步是采用与生产相近的培养基和培养条件,通过三角瓶的容量进行小型发酵试验,获得适合于工业生产用菌种.还要对菌种进行发酵性能测定，⑥毒性试验:据有的国家规定，微生物中除啤酒酵母、脆壁酵母、黑曲霉、米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性试验外，其他微生物作为食用，均需通过两年以上的毒性试验。
微生物菌株的筛选及其在环境治理中的应用
微生物菌株的筛选及其在环境治理中的应用微生物是一类非常特殊的生命体。
它们常常起着十分重要的作用，可以影响人类的健康、动植物的生长、土壤的肥沃等方面。
然而，在环境治理中，微生物却可以发挥更加巨大的作用。
微生物的菌株筛选是环境治理的重要手段之一，多年来受到了广泛关注。
本文将从微生物菌株的筛选方法、筛选后的应用以及现代微生物治理方法等方面进行探讨。
一、微生物菌株的筛选方法微生物菌株的筛选是指通过研究和阅读文献资料，从原始的微生物种群中筛选出有用的生物菌株，然后对其进行试验研究，确认其功能和应用价值。
1. 传统微生物菌株筛选法传统菌株筛选法是最为常用的一种方法。
它包括了以下几个步骤：（1）微生物样品的来源微生物样品可以来自土壤、河流、海洋、肠道、病毒等多种渠道。
（2）微生物的富集和筛选在这个阶段，常常采用的是培养和分离的方法。
通过在营养富集基质上培养微生物，然后再分离其单体，筛选出目标物种。
（3）菌株的特性和功能研究在筛选出目标物种的基础上，对其特性和功能进行深入的研究，例如：酶的稳定性、生长条件等。
（4）评价对菌株的应用价值进行评价，包括其对环境的影响、经济价值、安全性等。
2. 现代微生物筛选法传统微生物筛选法虽然简单易行，但是存在着一些缺点，比如筛选效率低，评价标准不够明确等问题。
在这种情况下，现代微生物筛选法应运而生。
它将分子生物学、基因工程、生物统计和高通量筛选等科技手段相结合，从而提高了微生物筛选的效率和准确性。
二、微生物菌株的应用微生物菌株的应用可以分为生产应用和环境应用两种类型。
1. 生产应用（1）工业微生物微生物工业可以生产很多实用的物品，例如乳酸、酵母、酒精、细菌和酶等。
（2）医药微生物微生物有很强的生殖力和代谢活力，因此它可以作为重要的医药材料。
2. 环境应用（1）环境修复由于化工行业和工程建筑的发展，环境污染问题日趋严重，微生物的生化特性被广泛利用于环境修复中，比如：清洁污水、修复地下水污染等。
微生物菌株的筛选和开发
微生物菌株的筛选和开发微生物菌株是一类生活在我们周围的小型生物体，它们在生物学和工程学领域中都有着重要的应用。
微生物菌株有着多样的来源，例如土壤、水源、动物肠道等等。
对菌株的筛选和开发对于研究人员来说是一项非常重要的任务。
一、微生物菌株的筛选微生物菌株的筛选是一个相当繁琐且复杂的过程。
常见的菌株筛选方法包括采用传统的分离鉴定法和基于高通量技术的筛选法，随着技术的发展，不同的菌株筛选方法相继呈现出来。
传统的分离鉴定法主要是将分离出的微生物菌株按照形态、生理生化特性等进行鉴定，但其筛选效率低，时间成本高。
而高通量技术则是运用现代技术手段来对微生物菌株进行筛选，如利用PCR 扩增、全基因组测序等。
此种方法能够在较短时间内进行多维度筛选，同时能够分析到分子水平的信息，充分挖掘微生物菌株的潜力。
二、微生物菌株的开发对于筛选出来的微生物菌株而言，如何进行开发变得至关重要。
常见的微生物菌株开发方式主要有两类，分别是生产有用物质和环境治理。
生产有用物质方面，微生物菌株具有一定的有用物质生产能力，如抗生素、代谢产物等。
其开发方式可以通过优化培养条件、引入外源基因等手段来实现产量的提高。
环境治理方面，微生物菌株可以利用其各种生理特性来植入环境中，降解污染物、调节环境等。
典型的如利用微生物菌株来处理废水、有机废料等。
三、微生物菌株的应用微生物菌株的应用范围非常广泛，如食品、医药、工业等。
食品方面，微生物菌株可以用来制作乳制品、调味品等，例如酸奶、豆酱等。
医药方面，微生物菌株常被用来提取疫苗、抗菌素、代谢物等，例如云芝、链霉菌等。
工业方面，微生物菌株可以用来生产发酵工业品，如酿酒、乳酸等。
此外也可以利用微生物菌株来提取能源，例如利用微生物发酵生产生物柴油、生产生物气等。
总之，微生物菌株的筛选和开发在现代科学中扮演着越来越重要的角色。
研究人员们需要通过创新的手段来发掘和开发微生物菌株的潜力，从而更好地服务于人类的生产生活。
微生物菌种筛选方法
微生物菌种筛选方法工业微生物菌种筛选方法1. 菌种筛选方案在实际工作中，为了提高筛选效率，往往将筛选工作分为初筛和复筛两步进行。
初筛的目的是删去明确不符合要求的大部分菌株，把生产性状类似的菌株尽量保留下来，使优良菌种不致于漏网。
因此，初筛工作以量为主，测定的精确性还在其次。
初筛的手段应尽可能快速、简单。
复筛的目的是确认符合生产要求的菌株，所以，复筛步骤以质为主，应精确测定每个菌株的生产指标。
2. 菌种筛选的手段筛选的手段必需配合不同筛选阶段的要求，对于初筛，要力求快速、简便，对于复筛，应该做到精确，测得的数据要能够反映将来的生产水平。
2.1 从菌体形态变异分析有时，有些菌体的形态变异与产量的变异存在着一定的相关性，这就能很容易地将变异菌株筛选出来。
尽管相当多的突变菌株并不存在这种相关性，但是在筛选工作中应尽可能捕捉、利用这些直接的形态特征性变化。
当然，这种鉴别方法只能用于初筛。
有人曾统计过3,484个产维生素B2的阿舒假囊酵母(Eremothecium ashbyii)的变异菌落，发现高产菌株的菌落形态有以下特点：菌落直径呈中等大小（8-10毫米），凡过大或过小者均为低产菌株；色泽深黄色，凡浅黄或白色者皆属低产菌株。
又如，在灰黄霉素产生菌荨麻青霉(Penicillium urticae)的育种中，曾发现菌落的棕红色变深者往往产量有所提高，而在赤霉素生产菌藤仓赤霉（Gibberella fujikuroi）中，却发现菌落的紫色加深者产量反而下降。
2.2 平皿快速检测法平皿快速检测法是利用菌体在特定固体培养基平板上的生理生化反应，将肉眼观察不到的产量性状转化成可见的"形态"变化。
具体的有纸片培养显色法、变色圈法、透明圈法、生长圈法和抑制圈法等，见图5.6.1。
这些方法较粗放，一般只能定性或半定量用，常只用于初筛，但它们可以大大提高筛选的效率。
它的缺点是由于培养平皿上种种条件与摇瓶培养，尤其是发酵罐深层液体培养时的条件有很大的差别，有时会造成两者的结果不一致。
菌种的筛选和分离
工业微生物菌种的分别与筛选起源：青岛海博一.微生物工业对菌种的请求(一).微生物工业的临盆程度由三个要素决议：临盆菌种的机能.发酵及提纯工艺前提.临盆装备.个中临盆菌种的机能是最重要的身分.（二）.微生物工业对菌种的请求是：（1）菌株高产,在较短的时光内发酵产生大量发酵产品的才能;（2）在发酵进程中不产生或少产生与目标产品邻近的副产品及其他产品;（3）发展滋生才能强,较强的发展速度,产孢子的菌种应当具有较强的产孢子才能;（4）可以或许高效地将道理转化为产品;（5）能应用普遍的原材料,并对发酵原料成分的摇动迟钝性小;（6）对须要添加的前体物质有耐受才能,并且不克不及将这些前体物质作为一般碳源应用; （7）在发酵进程中产生的泡沫要少;（8）具有抗噬菌体的才能;（9）遗传稳固性,二.工业用微生物菌种的起源及选育（一）微生物菌种的起源一般经由过程以下几个门路收集菌种.收集样品和分别筛选：（1）是依据材料直接向有科研单位.高级院校.工场或菌种珍藏部分索取或购置;（2）从大天然中收集样品分别;（3）从一些发酵成品平分别筛选目标菌株.当前发酵工业所用菌种总趋向是从野生菌转向变异菌,天然选用转向代谢育种,从诱发基因突变转向基因重组的定向育种.（二）微生物工业菌种的分别1.野生菌株的分别.筛选进程（1）新菌种分别与筛选的步调菌种分别的流程如下：标本收集→标本材料的预处理→富集造就→菌种初筛→菌种复筛→机能判定→菌种珍藏①采样采样季候：以温度适中,雨量不久不多的秋初为好.采土方法：在选好恰当地点后,用小铲子除去表土,取离地面5-15cm处的土约10g,盛入干净的牛皮纸袋或塑料袋中,扎好,标识表记标帜,记载采样时光.地点.情形前提等,以备查考.为了使土样中微生物的数目和类型尽少变更,宜将样品慢慢分批寄回,以便实时分别.②标本预处理④纯种分别：采取划线分别法.稀释分别法等纯化办法获取单菌落.⑤高产菌株的筛选：这一步是采取与临盆邻近的造就基和造就前提,经由过程三角瓶的容量进行小型发酵实验,获得合适于工业临盆用菌种.还要对菌种进行发酵机能测定,⑥毒性实验：据有的国度划定,微生物中除啤酒酵母.脆壁酵母.黑曲霉.米曲霉和枯草杆菌作为食用无须作毒性实验外,其他微生物作为食用,均需经由过程两年以上的毒性实验.2.菌种的分别办法（1）施加选择性压力分别法主如果应用不合种类的微生物其发展滋生对情形和养分的请求不合,如温度.pH.渗入渗出压.氧气.碳源.氮源等,工资控制这些前提,使之利于某类或某种微生物发展,而晦气于其他种类微生物的生计,以达到使目标菌种占优势．而得以快速分别纯化的目标.如可以控制造就时的氧,可将好氧微生物和厌氧微生物离开;经由过程控制温度,可将嗜热微生物和非嗜热微生物离开;控制pH,可将嗜酸.嗜碱微生物分别等.在分别造就基中也可以参加不合的抗生素或试剂来增长选择性.如在分别放线菌和细菌时,可参加抗真菌抗生素;分别真菌时,可参加抗细菌药物.（2）随机分别办法有些微生物的产品对筛选没有直接的选择性指导感化,是以常采取随机分别办法分别.A.抗生素产生菌的分别抗生素产生菌的分别经常应用抑菌圈法.实验必须用对象菌：采取抗生素的迟钝菌,传统上经常应用金黄色葡萄球菌和枯草杆菌.Ｂ.抗肿瘤药物产生菌的分别抗肿瘤药物产生菌的分别经常应用办法：生化引诱法.SOS生色检测法.DNA修复才能突变株.道理是应用DNA的毁伤,微生物产生突变.B1.生化引诱法：将大肠杆菌的lacZ基因衔接在λ噬菌体的PL启动子下,当DNA毁伤时,诱发λ隔绝物CI分化,PL启动子启动lacZ基因转录,测定表达的ß-半乳糖苷酶活性,来检测药物的消失.B2.SOS生色检测法：应用当DNA毁伤时,可活化yecA蛋白,进而分化噬菌体的隔绝蛋白,再引起sifA基因启动lacZ基因转录,测定表达的ß-半乳糖苷酶活性,来检测药物的消失.Ｃ.发展因子产生菌的分别以氨基酸产生菌为例,介绍筛选办法.起首将待试菌接入加了抗真菌的化合物（如亚胺环己酮）的分别造就基中发展,然后采取影印法,将菌落复印到能支撑氨基酸产生菌发展的造就基中,造就2-3天后,用紫外线杀司长好的菌落,再往此平板上面铺一层响应养分缺点型菌株菌悬液,造就16小时后,被杀逝世的氨基酸产生菌的菌落四周应有一检测菌的发展圈.（3）目标微生物分别A.依据形态筛选突变株B.依据平板菌落生化反响筛选变株透明圈法.呈色圈法.抑菌圈法.污浊圈法等.①透明圈法：在平板造就基中参加消融性较差的底物,使造就基混浊.能分化底物的微生物便会在菌落四周产生透明圈,圈的大小初步反响该菌株应用底物的才能.该法在分别水解酶产生菌时采取较多,如脂肪酶.淀粉酶.蛋白酶.核酸酶产生菌都邑在含有底物的选择性造就基平板上形成肉眼可见的透明圈.在分别某种产生有机酸的菌株时,也平日采取透明圈法进行初筛.在选择性造就基中参加碳酸钙,使平板成混状,将样品悬浮液涂抹到平板长进行造就,因为产生菌可以或许把菌落四周的碳酸钙水解,形成清楚的透明圈,可以随意马虎地辨别出来.分别乳酸产生菌时,因为乳酸是一种较强的有机酸,是以,在造就基中参加的碳酸钙不但有辨别感化,还有酸中和感化.②变色圈法：对于一些不轻易产生透明圈产品的产生菌,可在底物平板中参加指导剂或显色剂,使所需微生物能被快速辨别出来.如筛选果胶酶产生菌时,用含0.2%果胶为惟一碳源的造就基平板,对含微生物样品进行分别,待菌落长成后,参加0.2%刚果红溶液染色4h,具有分化果胶才能的菌落四周便会消失绛红色水解圈.在分别谷氨酸产生菌时,可在造就基中参加溴百里酚蓝,它是一种酸碱指导剂,变色规模在pH6.2～7.6,当pH在6.2以下时为黄色,pH7.6以上为蓝色.若平板上消失产酸菌,其菌落四周会变成黄色,可以从这些产酸菌中筛选谷氨酸产生菌.③发展圈法：发展圈法通经常应用于分别筛选氨基酸.核苷酸和维生素的产生菌.对象菌是一些相对应的养分缺点型菌株.将待检菌涂布于含高浓度的对象菌并缺乏所需养分物的平板长进行造就,若某菌株能合成平板所需的养分物,在该菌株的菌落四周便会形成一个混浊的发展圈.如嘌呤养分缺点型大肠杆菌（如E.coliP264）与不含嘌呤的琼脂混淆倒平板,在其上涂布含菌样品保温造就,四周消失发展圈的菌落即为嘌呤产生菌.④抑菌圈法：经常应用于抗生素产生菌的分别筛选,对象菌采取抗生素的迟钝菌.若被检菌能排泄某些克制菌发展的物质,如抗生素等,便会在该菌落四周形成对象菌不克不及发展的抑菌圈,很轻易被辨别出来.实验十从天然界平分别筛选微生物菌种1 目标（1）进修并控制优秀曲霉菌的分别道理和办法.（2）进修工控制酸乳中乳酸菌的分别道理和办法.2 道理从天然界平分别筛选微生物菌种,是我们获得优秀新菌种最根本.最重要的办法,是以,食物工业菌种的分别筛选是一项重要的.长期而沉重的工作.天然界消失着各类各样的微生物,尤其是泥土中微生物种类齐备,是微生物的大本营.是以可以从泥土平分别到几乎所有微生物.别的,不合的天然界情形中生计的微生物优势菌种也不合.各类食物.农副产品等养分构成不合,从中可以分别出不合的微生物.食物工业菌种经常应用的分别源有被污染的临盆或科研菌种.临盆中长期应用的菌种.发酵食物用菌种.动物肠道菌群.经各类育种办法处理过的微生物质料和天然界菌种样品.天然界的微生物是混淆生计的,要从平分理出一种微生物,不但须要斟酌分别源应含有较多半量的目标菌,还要在分别操纵中使之与其他菌种互相离开.对于样品中含量较低的菌处,要针对其生物学特色合理设计分别办法,如富集造就.选择造就.应用其特别的心理反响产生特定的发展现象等,以便于从大量杂菌中选出目标菌种.从混淆群体平分别特定微生物的经常应用办法有：控制分别造就基的养分成分.控制造就基的pH值.添加克制剂.控制造就温度.控制空气前提.对样品进行特别处理等.经常应用的纯种分别办法有平板划线分别法.简略平板分别法.稀释分别.涂布分别法.毛细管分别法.显微操纵单细胞分别法等.本实验将采取稀释法和涂布法对目标微生物进行分别筛选.优秀曲霉菌的分别采取透明圈法,即先用淀粉琼脂造就基造就样品,因为糖化酶的感化,长出的菌落四周的淀粉被水解,遇碘后呈无色透明圈而平板的其他处呈蓝色.一般来讲,透明圈的直径越大,该菌的糖化力越强.可依据透明圈的大小筛选出糖化力强的菌株.酸乳中乳酸菌的分别采取溴甲酚绿（BCG）牛乳养分琼脂平板分别法.溴甲酚绿指导剂在酸性情形中呈黄色,在碱性情形中呈蓝色.在分别造就基（pH6.8）中加处溴酚绿指导剂后呈蓝绿色,乳酸菌在该造就基中发展并分化乳糖,产生乳酸,使菌落呈黄色,菌落四周的造就基也变成黄色.乳酸可用纸上层析法辨别.3材料3.1 样品黑曲霉种曲.酸奶.3.2 器具及其他用品平皿.三角瓶.涂布器.试管.玻璃珠.纱布.3.3 造就基及试剂2%淀粉察氏造就基.BCG牛乳造就基.0.02mol/L碘液.10%牛乳造就基.无菌心理盐水.4 流程4.1 优秀糖化酶菌株的分别与筛选熔化造就基→倒平板→打散孢子团粒→梯度稀释→涂布平板→造就不雅察→滴加碘液→挑菌落→接种→造就→糖化酶活气测定→菌种保管4.2 酸乳成品中的乳酸菌的分别制造就基→倒平板→梯度稀释→涂布平板→造就不雅察→挑菌落→接牛乳管→造就不雅察→传代造就→遴选凝乳管→乳酸测定→菌种保管5 步调5.1 优秀糖化酶菌株的分别与筛选（1）熔化淀粉察氏造就基,稍冷后倒平板与斜面数个.（2）取种曲少许,参加10mL带玻璃球的无菌心理盐水的三角瓶中,用力振荡打散孢子团粒,使之形成平均的孢子悬浮粒.然后将其用无菌纱布过滤于无菌试管中.（3）将上述滤液以10倍稀释法知释至10-7,取后3个稀释度的稀释液各0.2mL,于淀粉察氏造就基平板上用无菌涂布器分别依次涂布2至3个皿,30℃造就1~2d.（5）机能测定：测定各菌落的糖化酶活气.5.2 酸乳成品中的乳酸菌的分别（1）制备BCG牛乳养分琼脂造就基.①称取脱脂奶粉10g,溶于50mL水中,参加1.6%溴甲酚绿酒精溶液0.07mL,0.075MPa压力下灭菌20min.②另取琼脂2g,溶于50mL水中,加酵母膏1g,消融后调pH值至6.8,0.1MPa压力下灭菌20min.③趁热将上述两液以无菌操纵混淆平均,倒平板6个,待凝固后,置37℃造就24h,若无杂菌发展,即可应用.（2）将样品以10倍稀释法稀释至10-7,取个中10-7.10-6 2个稀释度的稀释液各0.1~0.2mL,分别置于上述各养分平板上,用无菌涂布器依次涂布2至3个皿,置43℃造就48h,如消失圆形稍扁平的黄色菌落及其四周造就基亦为黄色者初步定为乳酸菌.（3）将典范菌落转至脱脂乳发酵管,43℃造就8~24h,若牛乳管凝固,无气泡,呈酸性,镜检细胞杆状或链球状,革兰氏染色呈阳性,则将其持续传代若干次,43℃造就,遴选出在3~4h能凝固的乳管,保管备用.（4）乳酸菌的判定及生物量的测定.6 成果（1）描写黑曲霉分别株的形态特点及其分生孢子头的生态.（2）绘制所分别的乳酸菌形态图,并记载成果.7 思虑题（1）为什么消融样品的瓶内要参加玻璃珠？（2）解释用透明圈直径与菌株淀粉酶产量有何干系？（3）哪些情形可以或许引起凝乳？。
工业微生物菌种的选育——诱变选育（2）
工业微生物菌种的选育——诱变选育（2）工业微生物菌种的选育——诱变选育（2）来源：青岛海博突变菌株分离和筛选方法（1）、随机筛选又称摇瓶筛选，该法主要是随机挑选的平板菌落进行摇瓶筛选，做法是：将诱变处理后的菌体分离在琼脂平板上，培养后随机挑选菌落，一个菌落移入一支斜面，一个斜面的菌体接入一只三角瓶，振荡培养，根据测定产物活性，决定取舍。
优点是发酵过程的生产条件、生理条件与大规模生产条件相近，可以模拟进行。
（2）、平板菌落预筛A、根据形态筛选突变株部分微生物菌株经过诱变处理后，变异菌株的菌落形态与生理特性、生产性能变化有一定的相关性。
B、根据平板菌落生化反应筛选变株透明圈法、呈色圈法、抑菌圈法、浑浊圈法等。
C、采用冷敏感菌筛选抗生素变株主要用来筛选抗生素产生菌株。
冷敏菌：从人的病原菌中经诱变分离出的，在20℃下不能生长。
筛选原理：将冷敏菌和诱变后的放线菌孢子悬浮液混合，分离在同一培养基平板上，置于20℃培养3-4天，抗生素产生菌不受干扰，能正常形成菌落，冷敏菌不生长。
当放线菌菌落成熟，并且抗生素产量达高峰，将培养皿移至37℃培养18-24h,冷敏菌迅速生长，而此时在抗生素产生菌落周围的冷敏菌因生长受到抑制而形成抑菌圈。
根据菌落直径和抑菌圈直径之比的有效值，可以直接筛选出抗生素高产突变株。
D、浓度梯度法主要用来筛选抗生素产生菌株。
原理：菌株产生抗生素水平受到它自身所产抗生素数量的制约，耐受性越高，抗生素产生能力也就越强。
通常采用双层法制浓度梯度平板，用涂布法接种，培养后，挑取高浓度抗生素区域的菌落，易于筛选到抗性变株。
摇瓶液体培养产物活性鉴定摇瓶初筛阶段测定产物的几种简便方法。
（1）、琼脂平板活性圈法该法是在特制的玻璃框琼脂平板上进行的，以检验菌或底物与一定量的琼脂制成平板，用专制的打孔器取出琼脂块，在留下的圆孔中加入发酵液，或用圆滤纸片浸透发酵液直接覆于琼脂平板上，在适合温度下培养一定时间，测量圆孔或滤纸片周围形成的抑菌圈或水解圈，根据活性圈的大小挑选高产菌株。
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抑菌圈
第六章 第四节 代谢产物鉴定
代谢产物鉴定
在菌种分离工作中，有些产物的产生菌可以通过与指示 剂、显色剂或底物等的生化反应在平皿上直接进行定性分离，
这样分离到的菌种基本上具有所需要的生产性能。这种分离
方法实际上已经包含了一部分筛选内容。
第六章 第四节 代谢产物鉴定
但并不是所有产物的产生菌都可以应用平皿定性方法进 行分离。对于这一类不能应用平皿方法进行定性分离的菌种，
第六章 第三节 纯种分离
利用生化反应进行分离：
这是利用特殊的分离培养基对微生物进行初步分离的方
法。 根据目的微生物的特殊生理特性或其代谢产物的生化反 应进行设计。 通过观察微生物在特殊分离培养基上的生长情况或生化 反应进行分离，可显著提高目的微生物分离纯化的效率。
第六章 第三节 纯种分离
常用方法： （1）透明圈法（培养基浑浊）
第六章 第二节 富集培养
富集培养主要根据不同种类微生物对碳氮源、 pH 值、 温度、需氧等生理因素的要求不同进行控制。富集培养又称 为施加选择压力分离法。
富集培养多应用于筛选水解酶产生菌。这类微生物具有 很强的分解有机碳或有机氮的能力，从中取得营养，得到优 先生长繁殖。 如：蛋白酶、淀粉酶、纤维素酶等产生菌种。
b、极端条件
如：高温酶←嗜热菌←热环境←温泉、火山附近
第六章 第二节 富集培养
富集培养 在自然界获得的样品，是很多种类微生物的混杂物，一
般采用平板划线法或稀释法进行纯种分离。 但在大多数采集的样品中，所需微生物不是优势菌种或 数量很少。 为了增加分离成功率，通常通过富集培养增加待分离菌 种的数量。 富集培养：根据待分离菌种的特点，设计的一种选择性 培养基，使目的微生物得到迅速地生长繁殖，在数量上占优 势。
纯种分离
种，必须对富集培养后的样品进行纯化分离。
第六章 第三节 纯种分离
纯种分离的基本方法： 纯种分离通常采用梯度稀释涂布法和划线法。 划线法是用接种针挑取微生物样品在培养基上直接划线 （一般采用梯度划线法），培养后获得单菌落。划线法简便、 快速，但所得到的单菌落不一定是纯种（可采用多次转接划 线加以弥补）。
思考题： 1、工业微生物的来源？ 2、土壤采样方法？ 3、富集培养？
4、纯种分离的方法？
5、生化反应筛选的几种方法？
第六章
工业壤、空气、江、河、湖、海等； （一切可收集的气、液、固状态物质） ②菌种保藏机构； ATCC（美国标准菌种收藏所） ACCC （中国农业微生物菌种保藏管理中心 ）等 ③发酵制品。 （如：从泡菜中筛选乳酸菌，从酒曲中筛选酯化酶产生 菌）
需要进行常规生产性能测定。另外，即使已通过平皿定性分
离的菌种也需要进一步筛选和更加精确的定量测定。
第六章 第四节 代谢产物鉴定
生产性能测定分为初筛和复筛。 初筛要求筛选的菌株尽可能多，筛选的菌株越多，就越 有希望筛选到所需要的菌株。由于初筛时筛选的菌株很多， 工作量很大，所以，为了提高筛选效率，需要设计一种快速、
1、从土壤中采样
d、不同季节 春：较少
夏：较多
秋：最多（气温、营养物质）
冬：最少
第六章 第一节 采样
1、从土壤中采样
e、采样方法 铲除表层5cm以内的浮土
取5-25cm内的土样10-15g
用无菌器皿包装并标记：地点、土质、植被、时间等
取样后应尽量尽快分离，如果时间确实难以满足可以
先“培养”，再分离。
生物数量也较少。 土壤中数量最多的是细菌，其次是放线菌、真菌。
第六章 第一节 采样
1、从土壤中采样
a、土壤有机质和通气状况 有机质营养丰富则微生物数量多；
通气状况好则好氧微生物多，反之则厌氧微生物多；
耕作土一般细菌、放线菌较多；
林间落叶、草丛一般霉菌、酵母菌较多；
采样深度一般在5-25cm内。
第六章 第一节 采样
（2）变色圈法（指示剂或显色剂）
（3）生长圈法（采用营养缺陷菌作为指示） （4）抑菌圈法（抗生素敏感菌作为指示）
第六章 第三节 纯种分离
第六章 第三节 纯种分离
第六章 第三节 纯种分离
第六章 第三节 纯种分离
第六章 第三节 纯种分离
第六章 第三节 纯种分离
药敏试验
第六章 第三节 纯种分离
第六章 第二节 富集培养
富集培养对那些样品中含有的目的微生物数量较少的样 品是必要的。
但如果按通常分离方法，在培养基平板上能出现足够数
量的目的微生物，则不必进行富集培养，直接进行纯化分离 就可以了。
第六章 第三节 纯种分离
富集培养以后的样品中目的微生物虽然已占了优势，但 其他微生物仍然存在。因此，为了获得某一特定的微生物菌
简便的筛选方法。初筛可以采用摇瓶培养法，也可以采用固
体培养法。初筛时产物测定可以采用琼脂平板测定法。
第六章 第四节 代谢产物鉴定
通过初筛得到的较好菌株，需要进一步进行筛选，即复 筛。复筛通常采用摇瓶振荡培养法，而且一个菌株要接种 3-
5 个摇瓶（平行实验，确保数据准确），培养后的产物测定
要采用精确检测法。在复筛过程中，也可以结合多种培养基 和培养条件如培养基、温度、 pH 值、供氧量等进行筛选。
1、从土壤中采样
b、土壤酸碱度和植被情况 偏酸性土壤：霉菌、酵母菌；
偏碱性土壤：细菌、放线菌；
不同植被情况下优势微生物情况不同：
果树下酵母菌较多；
豆科植物下根瘤菌较多；
第六章 第一节 采样
1、从土壤中采样
c、地理条件 南方土壤较北方土壤中微生物数量多；
顺序：热带—亚热带—温带—寒带
第六章 第一节 采样
还可以根据目标微生物对 pH 值、温度及某种营养物质 利用的专一性不同进行控制培养，达到分离纯化的目的。
第六章 第二节 富集培养
在富集培养中，除了控制营养物质外，还可以控制培养 的外部条件，如温度、压力、添加抗生素等“添加物”等方 法减少非目的微生物的数量，达到富集的目的。 如从土壤中分离芽孢杆菌，可采用控制温度的方法。 如分离细菌时，加 50u / mL 制霉菌素或 30u / mL 多 灵菌，抑制霉菌、酵母菌生长。 如分离放线菌时，加几滴 10 ％酚，抑制霉菌和细菌生 长等。
稀释法是先将样品经无菌水或灭菌生理盐水 梯度稀释后，
再涂布到固体培养基上，培养后获得单菌落。稀释法使微生 物样品分散更加均匀，获得纯种的概率更大。
第六章 第三节 纯种分离
划线法1
第六章 第三节 纯种分离
划线法2
第六章 第三节 纯种分离
涂布法
第六章 第三节 纯种分离
通过控制营养和培养条件进行纯种分离： 这一步一般都采用筛选性平板辅以筛选性培养条件。 （1）控制分离培养基中的营养成分（碳氮源） （2）控制培养基的pH值（采用缓冲体系） （3）控制培养温度 （嗜热性、大类特性如细菌35，霉菌27度） （4）供氧条件的控制（厌好氧）
第六章 第一节 采样
2、根据微生物生理特点采样
不同微生物对碳源、氮源、氧等的要求不一样，分布上 就有很大的差异。要根据筛选目的确定如：
纤维素酶产生菌：林间落叶、草丛茂密处等附近；
碳氢化合物分解菌：油田附近；
酵母菌：果园内；
高温菌：温泉、火山、堆肥等附近；
第六章 第一节 采样
3、在特殊环境下采样
a、局部条件 如：白蚁肠道→筛选→木素降解菌
低温（南极-18～-23℃不冻湖 ——冷育微生物 ——蛋 白质合成过程对冷呈稳定性 ）
第六章 第一节 采样
1、从土壤中采样
一克土壤里就有数亿个微生物，即使在荒无人烟的沙漠， 一克砂土中也有十万多个微生物存在。
它们一般都藏在土层１０厘米、２０厘米深处。
土层越深，微生物数量就越少；
但最表层的土壤由于阳光照射，水分又少，所以活的微
第六章
工业微生物筛选
目录
1. 采样 2．富集培养 3．纯种分离 4．代谢产物鉴定
第六章 第一节 采样
采样
采样的材料来源越广泛，越易获得新种。 极端环境是比较重要的采样点。 高温、低温、高压、高盐、耐酸、耐碱等环境。
高温（高温水域——水生栖热菌 ——Taq聚合酶）
耐酸（酸性热泉 ——嗜酸的氧化亚铁硫杆菌 ——pH值 低于1.5的环境 ——氧化硫和铁，并产生硫酸 ）