花青素的分离提纯测定实验具体方案
花青素提取(借鉴材料)
桑椹酒渣中花青素提取1材料与方法1.1材料桑椹果酒酒渣。
1.2试剂药品试验所用95%乙醇、浓盐酸、30%过氧化氢、Na2SO3等试剂均为分析纯。
1.3主要仪器电子分析天平、分光光度计、旋转蒸发仪、酸度计、高速冷冻离心机、电热恒温水浴锅等。
1.4方法（稀HCl+95%乙醇提取）样品称量，用提取剂提取，过滤（减压过滤/板框过滤），所得的提取液按一定比例稀释（pH1.0氯化钾缓冲液和pH4.5醋酸钠缓冲液稀）释后在分光光度计上测出OD值，以OD值代表桑椹红色素的含量。
1.4.1不同溶剂的吸光光谱及提取效果比较分别以75%乙醇、85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）作为提取剂，以物料与提取剂之比1：10提取桑椹色素，提取液经3倍稀释后用分光光度计测定各提取液吸收光谱。
1.4.2不同物料与提取剂之比对花青素提取的影响（此时用提取效果最好的提取剂）。
1.4.3温度对提取效果的影响以最佳结果作为桑椹提取剂，分别于60、50、40、30、20℃下提取1h。
1.4.4提取时间对提取效果的影响每隔20分钟取样测得OD值。
1.4.5正交实验1.4.6得率试验称取一定量样品，经提取后。
提取液经旋转蒸发仪蒸发，真空干燥，求得率。
方法一稀HCl+95%乙醇提取1不同溶剂的吸光光谱及提取效果比较固定浸提温度、提取时间、液料比，分别85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）、0.15%稀HCl +95%乙醇（1：1）为提取剂进行浸提试验，色素提取液分别采用pH1.0氯化钾缓冲液和pH4.5醋酸钠缓冲液稀释一定倍数(吸光值在0.2~0.8之间)，将稀释液静置15min，分别测定两种样品稀释液ODλmax和700nm处的吸光值A。
按公式计算桑椹花色苷含量，分析提取溶剂对花色苷提取量的影响。
注：ODλmax的确定分别以85%乙醇、95%乙醇、0.05%稀HCl+95%乙醇（1：1）、0.10%稀HCl +95%乙醇（1：1）、0.15%稀HCl +95%乙醇（1：1）作为提取剂，以物料与提取剂之比1：10提取桑椹色素，提取液经3倍稀释后用分光光度计测定各提取液吸收光谱。
花青素提取实验报告
花青素提取实验报告花青素提取实验报告植物中的花青素是一类具有丰富颜色的天然色素，广泛存在于花朵、果实、叶子等植物组织中。
花青素不仅为植物赋予了吸引力的色彩，还具有很多生物活性，如抗氧化、抗炎、抗癌等。
因此，对花青素的提取和研究具有重要意义。
本实验旨在探究不同溶剂对花青素提取效果的影响，并比较不同植物材料中花青素的含量差异。
实验选取了红花、紫苏和紫甘蓝三种常见的植物材料作为研究对象。
实验步骤如下：1. 材料准备：准备红花、紫苏和紫甘蓝三种植物材料，并将其分别洗净、切碎备用。
2. 提取溶剂选择：选取乙醇、醋酸乙酯和水三种常用溶剂作为提取试剂，分别标注为A、B和C。
3. 提取过程：将每种植物材料分别加入三个烧杯中，每个烧杯中加入适量的提取溶剂，浸泡一段时间后，用搅拌棒搅拌均匀。
4. 过滤：将提取液用滤纸过滤，去除固体颗粒。
5. 浓缩：将过滤后的提取液分别倒入烧杯中，放在加热板上进行浓缩，直至溶剂蒸发完全。
6. 称量：将浓缩后的花青素溶液称量并记录。
7. 分光光度计测定：将每个烧杯中的花青素溶液分别转移到试管中，使用分光光度计测定吸光度。
8. 计算花青素含量：根据吸光度值，利用标准曲线计算出花青素的含量。
实验结果如下：在本实验中，我们选取了红花、紫苏和紫甘蓝三种植物材料进行花青素提取实验。
通过比较不同溶剂对花青素提取效果的影响，我们发现乙醇溶剂（A）对三种植物材料中花青素的提取效果最好。
在红花提取实验中，乙醇溶剂（A）的吸光度值最高，表明乙醇溶剂对红花中花青素的提取效果最佳。
紫苏和紫甘蓝的提取实验结果也是如此。
这可能是因为乙醇具有较好的溶解性，能够更好地溶解植物组织中的花青素。
此外，我们还发现不同植物材料中花青素的含量存在差异。
红花中花青素含量最高，紫苏次之，紫甘蓝最低。
这可能与不同植物材料的生长环境、基因差异等因素有关。
通过本实验，我们深入了解了花青素的提取过程以及不同溶剂对提取效果的影响。
同时，我们也发现了不同植物材料中花青素含量的差异。
紫甘蓝中花青素提取实验报告
紫甘蓝中花青素的提取（安徽农业大学 12青年农场主班）花青素具有很强的抗氧化作用，具有清除体内自由基、过敏、保护胃粘膜等多种功能，引起了国内外学者广泛关注。
目前抗变异、抗肿瘤、抗，对花青素的研究主要集中于花青素的提取、分离纯化、热稳定性、抗氧化性及其生理功能等方面。
1、实验原理紫甘蓝花青素或花色素属于黄酮类化合物，极性较高，可溶于水或甲醇乙醇等有机溶剂中。
根据相似相溶的原则，本实验选用乙醇作为紫甘蓝花色素的浸提剂，采用大孔吸附树脂法分离提纯。
大孔吸附树脂具有吸附性能和分子筛的作用，使相对分子质量和吸附能力不同的混合物的不同成分得到分离。
紫甘蓝叶片与60%乙醇混合在组织捣碎机中破坏紫甘蓝细胞，使花色素尽可能多的溶解。
为了防止花色素的降解以提高其溶出率，可在其中加入1%盐酸。
八层纱布过滤后，留一小烧杯备用，剩余的用大孔树脂除杂，加入200ml 15%的乙醇溶液除去其他可溶性杂质，让树脂吸附花色素，再用60%乙醇洗脱，解析得到乙醇和花色素的混合液。
将过柱的溶液以HCl：混合液=1:4的比例混合至烧杯中，在90。
C的水浴锅中水解一小时，以破坏花色素的糖苷键，使花色素均以花青素的形式存在。
此时，用20ml纯水除杂，用无水乙醇洗脱，得到较为单一的花青素与乙醇混合液。
在旋转蒸发仪上蒸干。
2、材料、药品与仪器新鲜紫甘蓝15%乙醇、60%乙醇+1%HCl混合液、弄HCl、无水乙醇、AB-8打孔吸附树脂电子天平、组织捣碎机、交换柱、玻璃棒、50ml量筒漏斗、烧杯、圆底烧瓶、纱布、比色皿、分光光度计、旋转蒸发仪3、实验步骤●配制60%+1%HCl混合液与15%乙醇溶液备用●称取100.0g新鲜紫甘蓝叶片，量取60%+1%HCl混合液300ml（浸提剂），同时放入组织捣碎机中捣碎，浸提●所得固液混合物用8层纱布过滤，取一点滤液备用，剩余滤液1：5加水稀释得色素原液●将备用滤液再用滤纸过滤，用浸提剂做空白，测定其对520nm光的吸光度，并作标准曲线。
花青素的提取_分离以及纯化方法研究进展
2008年第34卷第8期(总第248期)111 花青素的提取、分离以及纯化方法研究进展3孙建霞,张 燕,胡小松,吴继红,廖小军(中国农业大学,教育部果蔬加工工程研究中心,北京,100083)摘 要 花青素是一种存在于自然界的水溶性多酚类化合物,现已发现其具有多种功能。
有关花青素的提取、分离和纯化研究报道很多,文中就近年来国内外相关方面的研究进展进行了分析。
关键词 花青素,提取,分离,纯化 花青素(ant hocyanins )又称花色素,存在于植物中的水溶性天然色素,多以糖苷的形式存在,也称花色苷。
最早而最丰富的花青素是从红葡萄渣中提取的葡萄皮红,它于1879年在意大利上市。
花青素的结构母核是22苯基苯并吡喃阳离子,属于类黄酮化合物。
自然界已知的花青素有22大类,食品中重要的有6类,即矢车菊色素(cyanindin ,Cy )、天竺葵色素(pelargonidin ,Pg )、飞燕草色素(delp hin 2(peonidin ,Pn )、牵牛色素(pet u 2,Pt )和锦葵色素(malvidin ,Mv )[1],其结构如图1所示。
它们在植物可食部分的分布比例分别为50%、12%、12%、12%、7%和7%。
花青素广泛存在于开花植物(被子植物)的花、果实、茎、叶、根器官的细胞液中,分布于27个科,72个属的植物中[2]。
其中尤以葡萄皮、阿龙尼亚苦味果、黑醋栗、草莓、树莓、越橘等含量最为丰富。
图1 食品中几种重要的花青素结构 第一作者:博士研究生(廖小军教授为通讯作者)。
3国家自然科学基金项目(30771511),国家“十一五”支撑计划(2006BAD27B03),国家863计划(2007AA100405)资助 收稿日期:2008-04-24,改回日期:2008-06-13 自然条件下游离的花青素极少见,常与一个或多个葡萄糖(gluco se )、鼠李糖(rhamnose )、半乳糖(ga 2lactose )、木糖(xylo se )、阿拉伯糖(arabinose )等通过糖苷键连接形成花青素,花青素中的糖苷基和羟基还可以与一个或几个分子的香豆酸、阿魏酸、咖啡酸、对羟基苯甲酸等芳香酸和脂肪酸通过酯键形成酰基化的花青素[1]。
花青素测定
花青素的测定目的花青素是类黄酮类色素中最重要的一种，广泛存在于植物花、果实、茎叶中，对这些器官的观赏价值和商品形状有重要价值。
本实验学习花青素的提取及测定方法。
一、实验原理花青素在酸性溶液中呈红色，其颜色的深浅与花青素的浓度成正比。
花青素酸性溶液的吸收高峰波长是530nm，摩尔消光系数为4.62×104，故可用分光光度法测定其含量。
但是一些提取液中常有叶绿素存在，干扰测定。
因此，需同时测定提取液在620nm（可溶性糖）和650nm（叶绿素的吸收值）波长下的光密度值，并用Greey公式准确计算出花青素的光密度值，才能计算花青素的含量。
二、材料、设备及试剂1.材料茶叶2.2. 设备分光光度计、电子天平、水果刀、50ml具塞三角瓶、25ml容量瓶。
3. 试剂0.1 mol·L-1的盐酸乙醇溶液（8.3ml浓盐酸用95%乙醇稀释成1L）。
三、操作方法1. 花青素的提取取0.100g一串红和0.116g红花继木分别放在编号为1、2的三角瓶中，加10ml盐酸乙醇溶液，在60℃水浴中加10ml提取液浸提30min，把溶液倒入25ml容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml容量瓶中，再加5ml提取液浸提15min, 把溶液倒入25ml容量瓶中，共浸提1h，最后定溶到25ml。
2. 测定以0.1mol·L-1的盐酸乙醇溶液做参比液，在分光光度计测定提取液在530nm、620nm、650nm波长下的光密度值。
四、实验结果实验结果如下表依据公式1．计算花青素的光密度值ODλ=(OD530-OD620)-0.1(OD650-OD620)2.计算花青素含量=ODλε×V×1000000m花青素含量（nmol/g）ODλ:花青素在530nm波长下的光密度ε：花青素摩尔消光系数4.62×106v:提取液总体积（ml）m:取样质量（g）1000000: 计算结果换算成nmol的倍数由一串红测得结果则有：ODλ=(1.360-0.024)-0.1(0.043-0.024)=1.3341所以，花青素含量（nmol/g）=1.3341/4.62/104×25/0.100×106=7219.156 由红花继木测得结果则有：ODλ=(0.370-0.062)-0.1(0.183-0.062)=0.2959 所以，花青素含量（nmol/g）=0.2959/4.62/104×25/0.116×106=1380.337五、结果分析与讨论从实验实验可以看出，一串红的花青素含量比红花继木的花青素含量高很多。
花青素的分离提纯测定实验具体方案.
花青素的提取、测定仪器材料试剂：仪器：旋转蒸发仪，真空泵，分光光度计，真空干燥箱，水浴锅，天平材料：新鲜的紫葡萄和青葡萄试剂：无水乙醇，盐酸，铁氰化钾，三氯乙酸，硫酸亚铁实验步骤一、花青素的提取：1、挑选新鲜的紫葡萄薄洗净晾干，分离出果肉、果皮、籽粒2、将分离晾干的紫色葡萄果皮，80℃下干燥1h。
3、称取2g磨成粉末4、用含有1%盐酸的乙醇溶液浸提2次，合并提取液5、讲合并提取液进行抽滤6、60℃减压浓缩7、真空干燥8、得粗提取液2、提取条件的优化：p 水平A提取温度 /℃B乙醇浓度/%C提取时间/minD料液比/（g/ml）p 1 50 50 60 1:10 p 2 60 60 90 1:20 p 3 70 70 120 1:30A B C D 结果实验序号1 1 1 1 12 1 2 2 23 1 3 3 34 2 1 2 35 2 2 3 16 2 3 1 27 3 1 3 28 3 2 1 39 3 3 2 1K1K2K3Q确定最佳提取方案然后对果皮、果肉、籽粒进行提取，测定最佳提取部位。
3、纯化纸层析法提纯1.取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。
2．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。
3．在大试管中加入常用的展开剂有V(丁醇∶V(乙酸∶V(水=4∶1∶5,V(正丁醇∶V(2mol/LHCl=1∶1,V(乙酸∶V(浓HCl∶V(水=15∶3∶82,1%盐酸,V(浓HCl∶V(水=3∶97等（即层析液）。
然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。
4.展开后剪下色斑,以酸化甲(乙醇洗涤、浓缩,即可得到样品。
花青素提纯方案--树脂吸附法
让花青素提取纯化更合理、更高效、更可靠花青素(anthocyan)，又称花色素，是自然界一类广泛存在于植物中的水溶性天然色素，其颜色随pH 值的变化而变化，pH =7时呈红色，pH在7 ～8之间时呈紫色，pH > 11 时呈蓝色。
花青素因其在清除自由基抗氧化、延缓衰老、保护视力、抗过敏、预防心血管疾病等方面的保健功能而被大众所熟悉与关注，被越来越多的应用于保健食品、化妆品等行业。
花青素提取是植物提取行业中一个非常重要的品种领域，提取纯化方法也较多，但受保健食品与化妆品行业对原料溶剂残留的严格限制要求，目前行业使用较为普遍的是水提+大孔吸附树脂吸附的工艺，即将植物原料在常压或高压下用水浸提，经必要的过滤预处理后，提取清液采用非极性大孔吸附树脂吸附富集，再用乙醇解析。
花青素提取植物原料来源主要包括浆果类（越橘、蓝莓、黑加仑、黑枸杞、桑葚、黑果花楸等）、蔬菜类（紫薯、紫甘蓝、黑萝卜等）、杂粮类（黑米、黑豆）、花卉类（玫瑰茄）。
不同植物原料来源的花青素类物质因其分子结构、提取料液组分等的不同，为了达到更好的分离纯化效果，需要选择不同类型的吸附树脂进行富集纯化，蓝晓科技在多年的花青素树脂分离纯化研究与工业实践过程中，开发出了适用不同原料进行花青素提取的树脂产品与应用工艺，可满足不同原料提取的花青素纯化。
例如：浆果、花卉类植物来源花青素，可使用蓝晓Seplite® XDA-6大孔吸附树脂，该树脂具有吸附量大，花青素选择性高，吸附、洗脱效率高等特点；蔬菜类植物来源花青素，可使用蓝晓Seplite® LX-68M、Seplite® LX-32大孔吸附树脂，该类树脂吸附容量大，成品含量与溶解度大幅提高，便于后端应用开发。
蓝晓科技作为国内最具实力的树脂研发生产企业与分离纯化整体解决方案提供商，植物提取行业深耕近20年，积累了宝贵的技术经验，并拥有了品系完善的树脂库，同时，蓝晓科技结合自身系统装备集成优势能力，整合国内优势植提工艺技术资源，可为用户定制化设计建设花青素提取纯化完整工艺生产线，最大程度的保证客户工艺与系统装备的科学合理性、先进性、经济性。
花青素层析纯化方法综述
两种主要花青素分离纯化方法1.组合柱层析色谱法、HPLC分析Li Rui[1]等X-5树脂和Sephadex LH-20结合的方法从V. uliginosum berry里分离纯化得到11种花青素和两种多酚。
具体操作方法：25 mL提取液过X-5树脂（乙醇，0.5%TFA处理），然后用0.5 % TFA (v/v)去离子水冲洗2次去除多糖，有机酸等水溶性杂质；接着多酚由乙酸乙酯洗脱回收，0.5% TFA (v/v)乙醇洗脱4次回收得到花青素。
浓缩得到的花青素采用Sephadex LH-20色谱柱进一步纯化，采用含有0.5% TFA的30%乙醇水溶液为洗脱溶剂。
洗脱下来的片段采用分光光度法在525nm处检测。
每部分洗脱液在35 o C真空下旋转蒸发（RE-52AA, Yarong, Shanghai, China) 至干燥，然后再用0.5% TFA (v/v) 溶液溶解，分析前-20 o C下保存。
分析方法为HPLC–DAD-ESI-MS 和MS/MS王二雷[2]等也分别采用组合层析和半制备型高效液相色谱的方法从野生蓝莓中分离得到高纯度的花青素混合物和单体。
利用UV-vis 和高效液相色谱对花青素含量进行检测，利用HPLC 和HPLC-DAD-ESI-MS/MS 对纯化样品中的花青素进行种类鉴定。
首先，将野生蓝莓粗提液用乙酸乙酯萃取4次，将萃取之后的水相上Amberlite XAD-7HP (20–60目，Sigma-Aldrich)阳离子交换柱（2.6 cm 50 cm）。
然后用2 L含0.01% HCl 的去离子水以1 mL/min的流速冲洗柱子，以去大部分的除多糖，有机酸，蛋白和离子。
用1 L 35%的酸化乙醇溶液（0.01% HCl）做为洗脱液，流速为1.5 mL/min进行洗脱。
根据柱中颜色边界层以及在520 nm处的UV-vis检测结果进行洗脱液的收集，再浓缩（不超过40 o C），冷冻干燥制得花青素粗提物。
原花青素的分离纯化实验方案(修改)
原花青素的分离纯化一、实验目的对上一步提取的原花青素进行分离纯化，熟悉实验相关仪器设备及过程二、仪器、材料及试剂原花青素提取液、原花青素标准品、大孔树脂、75%乙醇、60%乙醇（作解吸剂）、50%乙醇（作洗脱剂）、盐酸（磷酸或乙酸）、分析天平、带筛板的玻璃柱（可无筛板，但是要脱脂棉或者用酸式滴定管改装（尝试性），同样需要脱脂棉）、紫外分光光度计（286nm）（可用可见光分光光度计（536nm）代替）、真空干燥箱（用真空泵+密封的抽滤瓶（尝试）代替）、PH计、铁架台、漏斗（小号）、小试管若干（不少于5支）、试管架、烧杯若干（不少于3个）、玻璃棒、滴管、锥形瓶三、实验步骤大孔树脂的预处理：新购树脂含有未聚合单体、致孔剂、分散剂等残留的杂质成分，使用前必须加以处理。
将新购大孔树脂用乙醇浸泡24h，充分溶胀，取一定量湿法装柱，先用适当浓度的乙醇清洗至洗出液加等量蒸馏水无白色浑浊为止，再用蒸馏水洗至无醇味且水液澄清，备用。
通过乙醇(或甲醇)与水交替反复洗脱，可除去树脂中的残留物，一般洗脱溶剂用量为树脂体积的2～3倍，交替洗脱2～3次，最终以水洗脱后即可使用。
大孔树脂动态饱和吸附曲线图的绘制：1、将试验中需要用到的50%乙醇、60%乙醇的PH用盐酸调至5，在波长为286nm（如果采用可见光分光光度计则为536nm）测定原花青素提取液的吸光值（以75%的乙醇溶液为对照）2、取一定量的大孔树脂于烧杯中缓慢倒入50%的乙醇溶液（同时搅拌），搅拌至可流动的糊状，取一支干净的带筛板的玻璃柱，将糊状大孔树脂加入玻璃柱，用手指轻轻敲打玻璃柱，使大孔树脂均匀铺在玻璃柱底部（用烧杯接住此时流出的液体），用50%的乙醇在柱上流动清洗，不时检查流出液，直至与水混合不呈白色浑浊为止（乙醇：水一1：5）。
然后以大量蒸馏水洗去乙醇（必须洗净乙醇，否则将影响吸附效果），待用。
将样品液直接或拌入树脂中加到已处理好的大孔吸附树脂柱柱顶，拌样时样液和树脂的比例为1：（2～3）。
花青素的提取方法和步骤
花青素的提取方法和步骤花青素是一类广泛存在于植物中的天然色素，具有重要的生物学和营养学价值。
提取花青素的方法有很多种，下面将介绍其中几种常用的方法和步骤。
一、酸碱法提取花青素1. 材料准备：将需要提取花青素的植物材料（如紫苏叶、蓝莓等）洗净，晾干备用。
2. 粉碎植物材料：将晾干的植物材料用粉碎机或者研磨器研磨成细粉末。
3. 提取溶剂的准备：准备酸性和碱性的溶剂，如乙酸、盐酸和氢氧化钠等。
4. 酸性提取：将粉碎的植物材料与酸性溶剂混合，加热搅拌一段时间，使花青素溶解在溶剂中。
5. 碱性提取：将酸性溶剂中的混合物与碱性溶剂混合，再次加热搅拌一段时间，使花青素从酸性溶剂中转移到碱性溶剂中。
6. 分离花青素：用分液漏斗将混合溶液分离，花青素会被碱性溶剂提取出来。
7. 萃取花青素：将碱性溶剂中的花青素进行浓缩和纯化，可用醇类溶剂进行萃取。
8. 干燥花青素：将提取到的花青素溶液经过过滤和浓缩后，用低温真空干燥仪将溶剂去除，得到干燥的花青素。
二、醇法提取花青素1. 材料准备：将需要提取花青素的植物材料（如紫薯、葡萄皮等）洗净，晾干备用。
2. 粉碎植物材料：将晾干的植物材料用粉碎机或者研磨器研磨成细粉末。
3. 提取溶剂的准备：准备醇类溶剂，如乙醇、丙酮等。
4. 醇提：将粉碎的植物材料与醇类溶剂混合，加热搅拌一段时间，使花青素溶解在溶剂中。
5. 过滤：将醇提液进行过滤，去除固体杂质。
6. 浓缩：将过滤后的溶液进行浓缩，可用旋转蒸发仪等设备进行浓缩。
7. 纯化：对浓缩后的花青素溶液进行纯化处理，如用硅胶柱层析等方法进行纯化。
8. 干燥花青素：将纯化后的花青素溶液进行低温真空干燥，得到干燥的花青素。
三、超声波法提取花青素1. 材料准备：将需要提取花青素的植物材料（如紫甘蓝、蓝莓等）洗净，晾干备用。
2. 粉碎植物材料：将晾干的植物材料用粉碎机或者研磨器研磨成细粉末。
3. 提取溶剂的准备：准备酸性和醇类溶剂，如盐酸和乙醇等。
提取花青素
1.一种从皇帝菊中提取花青素的方法，通过以下步骤实现：
1）取皇帝菊，将其粉碎成粉末；
2）取步骤1）粉碎后的皇帝菊粉末按照每克皇帝菊粉末加入8毫升体积比为60%~70%的乙醇水溶液的比例，将粉碎后的皇帝菊与体积比为60%~70%的乙醇水溶液混合；
3）将步骤2）中皇帝菊粉末与体积比为60~70%的乙醇水溶液的混合液回流提取3~5次，每次60~120分钟，温度控制在60℃~64℃，得含有花青素、皇帝菊提取后剩余物和乙醇水溶液的提取液，过滤掉提取液中的杂质，得含有花青素的乙醇提取液；
4）合并步骤3）中每次回流提取并过滤杂质后的含有花青素的乙醇提取液，使用真空浓缩仪对合并后的乙醇提取液真空浓缩，真空浓缩仪的温度控制在60℃~64℃，除去乙醇，得花青素水溶液；
5）将真空浓缩后的花青素水溶液过吸附树脂柱进行层析，吸附饱和后，用水做洗脱液，控制树脂柱流速为0.5毫升/分钟，水洗至紫环反应呈阴性不显色为止，此时吸附树脂柱中的树脂为吸附花青素树脂；
6）将步骤5）中的吸附花青素的树脂用体积比为65~75%丙酮水溶液洗脱，洗脱至树脂柱流出物无色为止，得丙酮洗脱液；
7）将丙酮洗脱液真空浓缩，除去丙酮，温度控制在60℃~64℃，然后将所得溶液快速冻结后，再在高真空条件下将其中的冰升华为水蒸气而去除进行干燥，得花青素纯化物。
2.取干燥的菊花，切碎，将切碎后的菊花与水按质量比为1:30~200混合，在20~90℃浸泡
30到120min，过滤除去残渣，得到菊花色素原液。
将原液常温旋转蒸发浓缩至原液体积的10~99%，将浓缩后的原液放入冻干机的预冻室中于-80~-86℃预冻1~2h，当完全结冻后，再放入冻干机真空干燥15~18h，得到菊花粉末燃料。
花青素的提取
生化实验报告———————————————————————————山楂原花色素的提取一实验目的1.了解并掌握从山楂中制备原花色素的方法。
二实验原理原花色素（也称原花青素）（proanthocyanidins）是一类从植物中分离得到的在热酸条件下能产生花色素的多酚化合物。
它既存在于多种水果的皮、核和果肉中，如葡萄、苹果、山楂等。
也存在于如黒荆树、马尾松、思茅松、落叶松等的皮和叶中。
原花色素属于生物类黄酮（flavonoids），它们是由不同数量的儿茶素或表儿茶素聚合而成，最简单的原花色素是儿茶素的二聚体，此外还有三聚体，四聚体等。
依据聚合度的大小，通常将二至四聚体称为低聚体，而五聚体以上的称为高聚体。
从植物中提取原花色素的方法一般有两种，分别是用水抽提或用乙醇抽提。
其抽提物为低聚物，称之为低聚原花色素（oligometic proanthocyanidins，简称OPC）。
生理功用：1.最好的心脏保护剂，抵御引发心血管疾病的诱变因素的冲击。
2.强化血管，有消肿化瘀的功效。
减少毛细血管的阻力和改善渗透性，使细胞更容易吸收养分与排除废物。
3.高效抗氧化能力。
清除氧自由基的能力比其他天然抗氧化剂如胡萝卜素、维生素C和E、儿茶素等强很多。
4.产生组胺的抑制剂，减轻炎症。
抗过敏皮肤保健、抗衰老。
利用低聚原花青素溶于水的特点，用热水煮沸抽提原花青素，再用大孔吸附树脂吸附、洗脱得到原花青素。
D-101树脂是一种球状、苯乙烯型、非极性交联聚合物吸附剂，具有相当大的比表面积和适当的孔径，对皂苷类、黄酮类、生物碱等物质有特殊的选择性，适用于从水溶液中提取类似性质的有机物质。
三实验器材1. 新鲜山楂（或山楂片），市售。
2. 烧杯。
3. 高速组织粉碎机。
4. 玻璃层析柱1.5cm*20cm。
5. 大孔吸附树脂D-101。
6.电磁炉。
7. 不锈钢锅。
8.双层纱布。
四实验试剂1、95%乙醇（实验室提供）。
2、60%乙醇：取95%乙醇60ml，加入蒸馏水，使体积达到95ml。
花青素提取
2.7290 2.7134 2.6787 0.9097 0.9045 0.8929 0.0168
0.9023（X）
方差分析表
变异来源 乙醇浓度 （A） SS 0.0251 df 2 MS 0.01255 F 83.667* Fa
料液比（B） 0.0023
提取时间 （C） 0.0106
2
2
0.00115
乙醇浓度(%) 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 1 2 2 2 3 3 3 料液比（V/V） 1 2 3 1 2 3 1 2 3 提取时间(s) 1 2 3 2 3 1 3 1 2 空列 1 2 3 3 1 2 2 3 1 A525 0.9109 0.9764 1.0048 0.8716 0.9753 0.8770 0.8600 0.8023 0.8428 8.1211（T）
料液比的确定
1
0.9 0.8
0.7 0.6
吸光值A
0.5
0.4 0.3
0.2 0.1
0
1:10
1:15
1:20 料液比(v/v)
1:25
1:30
盐酸浓度的确定
1 0.9 0.8 0.7
吸光值A
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0
0.03
0.05
0.1 盐酸浓度(%)
0.5
1
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ
正交试验结果
提取时间的确定
1 0.9 0.8 0.7
吸光值A
0.6 0.5 0.4 0.3 0.2 0.1 0 10 20 30 提取时间(s) 40 50
微波功率对提取效果的影响
0.88 0.86 0.84 0.82
吸光值A
花青素含量的测定
花青素是一类具有重要生物活性的天然色素，广泛存在于植物中，并对人体健康有益。
测定花青素含量的方法有多种，以下是其中一种常用的方法：
试剂和仪器：甲醇、乙酸、五氯酚酞溶液、高压液相色谱仪（HPLC）等。
步骤：
1.将待检测的样品（如花瓣、果实等）取适量，冷藏保存。
2.取少量样品，用甲醇将其加以浸泡，使其充分均匀地溶解，形成混合液。
该混合液可放于水浴中加热加速搅拌。
3.通过滤纸将混合液过滤，使其中的杂质分离并去除。
4.将滤过的液体放入离心管并进行离心分离，将上清液取出。
5.将上述上清液加入乙酸及五氯酚酞溶液中，混匀后置于常温下反应15-20
分钟，即可形成浅红色溶液。
6.将步骤5中得到的溶液进行过滤，然后放入样品瓶中，即为待测样品溶
液。
7.通过高压液相色谱仪（HPLC）对待测样品溶液中的花青素成分进行分析
和检测，得到花青素的含量。
注意事项：
1.在操作前应严格遵守操作规程，保持实验环境清洁卫生。
2.在每个步骤中加入足量的试剂以确保精准的测定结果。
3.操作时应小心谨慎，防止操作过程中出现意外。
4.为了得到较为准确的测试结果，最好采用与国家标准接近的检测方法，并
在实验条件允许的情况下重复测试。
花青素提取工艺试验的
花青素提取工艺试验实验仪器材料：仪器：打浆机、干燥箱、粉碎机、超声波震荡器、培养箱、低温超速离心机、旋转蒸发仪、真空干燥箱、水浴锅试剂：80%乙醇、山芋粉、蔗糖、硝酸铵、磷酸二氢钾、硫酸镁、滤纸、石油醚、0.1%稀盐酸材料：枸杞、黑曲霉1.1称取枸杞加入去PH=2离子水中（按比例为1：120g/L），在60℃水浴中浸泡4h，分离样液和样品，（重复2次），样液待用1.2【脱脂处理】将1.1中的样品和样液与石油醚（30-60℃）按1:10g/L混合，浸泡1h后，于旋转蒸发仪中50℃加热回流2h，所得样品溶液，放在打浆机打碎1.3加入微生物培养液中【固液1:5】(培养液配比: 山芋粉3. 7 5%、蔗糖1 5% 、硝酸铵0. 2%、磷酸二氢钾0. 1%和硫酸镁0. 025% ) , 120 ℃条件下灭菌20min,在超净工作台内接种。
黑曲霉与培养液比例为1∶1 000。
接种后放入培养箱中培养。
温度30℃，pH4.5，培养时间72h1.4培养后，在培养液中加入40倍pH3.0的80%乙醇，在超声波水浴中50℃提取3h（过滤后重复1-2次）1.5粗过滤后，低温离心40℃，4000r/min，10min，去沉淀，取离心液1.6 50℃旋转蒸发仪真空浓缩，减压浓缩0.076Mpa1.7 放入真空干燥箱干燥，得粗品1.8上述浓缩液再次离心，加入0.1mol/LHcl溶液调pH=4-4.5，离心分离，再次浓缩烘干精提12.1上述粗品，加入温水中溶解2.2常温下，在微滤机下0.12MPa，进行微滤收集液体2.3所得滤液再次放入超滤机中过滤，0.1MPa，膜流速1500L/h2.4取0.5g活化湿AB- 8 树脂和20ml液体常温吸附24h，离心2.5滤液加入60%乙醇洗脱，1-3h左右，后60℃，减压真空88kpa下蒸馏回收乙醇2.6所得液体加入一定量石油醚精致萃取，35℃减压浓缩回收，2.7真空干燥称重方案二1.1称取样品和样液与石油醚（30-60℃）按1:10g/L混合，浸泡1h后，于旋转蒸发仪中50℃加热回流2h，所得样品溶液，干燥滤渣用于色素提取1.2以料液比为1：40的PH=1的酸性水在80℃下浸泡1.5h，混匀1.2以料液比为1：40的PH=3的80%乙醇在超声波为20kHZ下，200W,50℃下震荡浸泡3h，过滤去沉淀，重复1-2次1.3粗过滤后，低温离心40℃，4000r/min，10min，去沉淀，取离心液1.450℃旋转蒸发仪真空浓缩，减压浓缩0.076Mpa1.5 放入真空干燥箱干燥，得粗品1.6上述浓缩液再次离心，加入0.1mol/LHcl溶液调pH=4-4.5，离心分离，再次浓缩烘干精品提取1、称取粗品50g左右加入170ml的pH3.5-4.0的浓盐酸化的95%乙醇，在40-50℃中搅拌提取4h，抽滤2、滤渣用100ml酸性乙醇在同样条件下进行第二次提取3h，抽滤（也可进行重复多次）3、合并滤液，边搅拌边加入浓氨水，并调溶液ph为7.2-7.5，室温静置0.5h，使之完全沉淀，抽滤，在沉淀未干燥前，用适量冰醋酸使之分解成稀糊状，可微微加热，静置1h，抽滤。
(原花青素提取分离)
定量分析
标准曲线
配制0.05—0.5mg/mL的原花青素对照品水溶液，于试 管中依次加入0.5mL丌同浓度对照水溶液，加入 2.5mL30g/L香草醛的甲醇溶液及2.5mL30%硫酸的甲 醇溶液，混匀后于30℃水浴保温20min后在波长为 500mn下测定绘制标准曲线。 2 线性方程为：Y=2.0669X-0.0196， R =0.9994
工艺流程
粉碎葡萄籽
称量
浸提
浓缩
合并上清液
过滤并离心
上柱洗脱
浓缩含量较高的洗脱液
喷雾干燥
实验步骤
提取
取粉碎后的葡萄籽20g 按料液比1:7加入 70%乙醇，在50℃下回流提取30min，浸 提3次，分别过滤，冷却后在4 000 r/min 转速离心10min，合并上清液，蒸发浓缩 回收乙醇。
实验步骤 分离
原花青素的用途 由于原花青素属于黄酮类化合物，具有多种生理功能 及药理作用。 随着研究人员对原花青素的研究一步一步深入，发现 原花青素的功效甚好，用途及其广泛。 原花青素的主要作用: 抗氧化剂 由于opc分子结构中有多个酚羟基B环上具有相邻 二酚羟基，且分子中有几个不氧原子相邻的二羟酚基， 有利于分子不金属离子及蛋白结合，阻止了催化自由 基反应金的属离子的活性。所以是一种很强的抗氧化 剂。
大孔树脂柱层析:将浓缩液上样已经处理好的大孔 树脂层析柱上,分别用水和20%、40%、60%、 80%的2BV的乙醇洗脱，分别收集洗脱液，检测 含量，合并含量较高的洗脱液，蒸发浓缩。
干燥
将浓缩好的样液进行喷雾干燥。
定性分析
盐酸镁粉反应 将样品 溶于1ml 乙醇 加入少 许镁粉 振摇 滴加几 滴浓盐 酸
实验试剂和仪器
原花青素提取 分离纯化方法的研究进展
3、微波辅助提取法
微波辅助提取法也是一种高效的提取方法。该方法利用微波的加热作用，使 植物材料内部的分子振动，从而破碎细胞，释放出其中的花青素。微波辅助提取 法的优点是加热均匀，且提取时间短。
二、花青素的分离方法
1、柱层析法
柱层析法是一种常用的分离方法，可用于花青素的分离。该方法利用不同物 质在固定相和流动相之间的分配系数不同，从而实现分离。常用的柱层析法包括 硅胶柱层析、聚酰胺柱层析等。
参考内容二
花青素是一种广泛存在于植物中的天然色素，具有许多重要的生物学和化学 特性。它们赋予植物丰富多彩的颜色，帮助植物在自然环境中生存和繁衍。近年 来，随着科技的不断进步，花青素的提取、分离和纯化方法也在不断改进和完善。 本次演示将综述花青素提取、分离与纯化方法的研究进展。
一、花青素的提取方法
高速逆流色谱法是一种新型的分离技术，其原理是利用不同物质在两相溶剂 中的分配系数不同来进行分离。该方法具有分离效率高、纯度高、操作简便等优 点，但需要使用大量的有机溶剂，且设备成本较高。
毛细管电泳法则是一种利用电泳原理来进行分离的方法。该方法具有分离效 率高、分析速度快、样品用量少等优点，但难以用于大规模生产。
沉淀法则是利用某些物质在一定条件下能够与原花青素形成共沉淀来进行分 离的方法。该方法具有操作简便、成本低等优点，但难以获得高纯度的产品。
三、展望
随着科学技术的不断发展，相信未来还会有更多新的技术和方法被应用于原 花青素的提取、分离和纯化。例如，超临界流体萃取技术、分子印迹技术等都有 望为原花青素的提取和分离带来新的突破。随着人们对原花青素的药理作用和生 物合成途径等方面的深入研究，也将为原花青素的开发和应用提供更为广阔的前 景。
2、膜分离法
膜分离法是一种高效的纯化方法。该方法利用膜的孔径大小不同，截留不同 分子量的物质，从而实现纯化。常用的膜分离法包括超滤、纳滤等。膜分离法的 优点是纯化效果好、能耗低，但膜的孔径大小难以控制。
紫甘薯中花青素的提取及含量的测定
紫甘薯中花青素的提取及含量的测定山东农业大学化学学院09级材化2班赵林静152********山东农业大学化学学院09级材化2班李新152********摘要用乙醇酸溶液从紫甘薯中提取花青素。
用PH示差法对提取液中花青素含量进行测定。
关键字：紫甘薯花青素PH示差法1前言：花青素又称花色素，是一种广泛存在于植物中的水溶性天然色素。
属黄酮类化合物，多以糖苷的形式存在，也称花色苷。
花色苷是一种以黄酮核为基础的一类糖苷，天然花色苷配糖体的基本结构为3、5、7-三羟基-2-苯基并呋喃。
最早且最丰富的花青素的花青素是从后葡萄渣中提取的葡萄皮红，花青素作为一种天然食用色素，安全，无毒，资源丰富，而且具有一定的营养和药用价值，在视屏、化妆、医药等方面有着巨大的应用潜力。
有实验证明，花青素是迄今为止所发展的最强效的自由基清除剂。
目前对花青素的定量没有较好的方法，常用的方法是以色价或吸光度表示其相对含量，也有用花青素纯品配置不同浓度梯度制作标准曲线测定色素的含量但由于花青素的标准品很不稳定，限制了这种方法的使用。
本实验用PH示差法对紫甘薯中花青素的提取液中花青素的含量进行测定。
2 实验目的2.1掌握花青素的提取方法及其PH示差法测量花青素含量的原理2.2熟练掌握分离提纯操作方法步骤。
3 实验原理紫甘薯中含有花青素，用乙醇的酸溶液作为提取液在离心机的作用下即可得到粗的花青素提取液。
PH示差法的原理为花青素的色调和色度随PH值的不同而发生改变。
PH为1.0时，花青素以红色的2-苯基并呋喃的形式存在。
结合朗伯比尔定律可得出在两个不同PH值下，花青素溶液的吸光度差值与花青素含量成正比。
4实验仪器及试剂仪器：电子天平；钥匙；精密PH试纸；PH计；表面皿、玻璃棒；烧杯；干燥的带塞子的锥形瓶250ml(4支)；100ml容量瓶（4支）；胶头滴管；500ml试剂瓶（3支）；高速离心机、离心管（6支）；分光光度计；10ml小量筒（3支）；摇床；烧杯3支试剂：粉末状紫甘薯30g(自备)；分析纯的乙醇试剂500 ml 氯化钾20g 醋酸钠30g 去离子水1000ml 分析纯的盐酸50ml5 实验步骤5.1乙醇的酸溶液按85：15的比例将分析纯的乙醇溶液与去离子水混合，再用浓盐酸调节PH至1.0左右。
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花青素的提取、测定
仪器材料试剂：
仪器：旋转蒸发仪，真空泵，分光光度计，真空干燥箱，水浴锅，天平材料：新鲜的紫葡萄和青葡萄
试剂：无水乙醇，盐酸，铁氰化钾，三氯乙酸，硫酸亚铁
实验步骤
一、花青素的提取：
1、挑选新鲜的紫葡萄薄洗净晾干，分离出果肉、果皮、籽粒
2、将分离晾干的紫色葡萄果皮，80℃下干燥1h。
3、称取2g磨成粉末
4、用含有1%盐酸的乙醇溶液浸提2次，合并提取液
5、讲合并提取液进行抽滤
6、60℃减压浓缩
7、真空干燥
8、得粗提取液
二、提取条件的优化：
水平A提取温度
/℃
B乙醇浓度
/%
C提取时间
/min
D料液比/
（g/ml）
1 50 50 60 1:10
2 60 60 90 1:20
3 70 70 120 1:30
实验序号 A B C D 结果1 1 1 1 1
2 1 2 2 2
3 1 3 3 3
4 2 1 2 3
5 2 2 3 1
6 2 3 1 2
7 3 1 3 2
8 3 2 1 3
9 3 3 2 1
K1
K2
K3
Q
确定最佳提取方案然后对果皮、果肉、籽粒进行提取，测定最佳提取部位。
三、纯化
纸层析法提纯
1.取准备好的滤纸条（2×20cm），将其一端剪去两侧，中间留一长约1.5cm，宽约0.5cm的窄条，并在滤纸剪口上方折叠出一条直线，作为画滤液细线的基准线。
2．用毛细吸管沾少许滤液在折线上描绘4~5次，注意要画得匀、直、细，每次画完细线要等其自然变干后再画第二根线。
3．在大试管中加入常用的展开剂有V(丁醇)∶V(乙酸)∶V(水)=4∶1∶5,V(正丁醇)∶V(2mol/LHCl)=1∶1,V(乙酸)∶V(浓HCl)∶V(水)=15∶3∶82,1%盐酸,V(浓HCl)∶V(水)=3∶97等（即层析液）。
然后将滤纸条固定于软木塞上，插入试管内，使窄端浸入溶剂中（色素点要略高于液面，滤纸条边缘不可碰到试管壁），盖紧软木塞，直立于阴暗处进行层析。
4.展开后剪下色斑,以酸化甲(乙)醇洗涤、浓缩,即可得到样品。
四、花青素的测定
1.采用普鲁士蓝法测定花青素的还原能力。
取一定浓度的样品溶液1 mL，加入磷酸盐缓冲液和1%K3Fe（CN）6各2.5 mL，混合均匀，混合液50 ℃保温20 min，快速冷却，加入10 %的三氯乙酸溶液2.5 mL，离心10 min。
取上清液2.5 mL，加入等量蒸馏水和0.1%的FeCl3 1mL，摇匀，10min 后700nm下测定吸光值A700，以抗坏血酸为对照。
2青素清除体外自由基能力测定。
利用Fenton 反应产生羟自由基[6]。
取2 mL PBS（磷酸盐缓冲液pH=7.4），依次加入20mmol/L EDTA和12mmol/L FeSO4混合溶液0.1mL，一定浓度的花青素溶液1 mL、100mmol/L H2O2 0.1mL，用磷酸盐缓冲液定容至5 mL，迅速混匀，置于37 ℃水浴15 min。
测定510nm 下光吸收值，计算清除率。
清除率=（对照吸光度-样品吸光度）/对照吸光度×100%。