产胞外多糖的乳酸菌的简便筛选与鉴定
产胞外多糖菌株的筛选及胞外多糖性质和结构分析
产胞外多糖菌株的筛选及胞外多糖性质和结构分析首先，产胞外多糖的菌株筛选是一个关键步骤。
通过对自然、环境中的微生物进行采样和分离培养，可以得到大量的微生物菌株。
然后，通过培养基中添加特定诱导剂，有利于胞外多糖的产生，将菌株进行筛选，选择具有高产胞外多糖能力的菌株。
接下来，对筛选出的菌株进行胞外多糖的性质和结构分析。
首先，可以通过测定胞外多糖的宏观性质，如溶解性、稳定性、抗酶性等，评估其在工业生产中的应用潜力。
此外，利用一系列生化方法，可以对胞外多糖进行形态学和物化性质的分析，如分子量的测定、糖含量的测定、紫外光谱的测定等，以揭示其基本特征。
进一步，对胞外多糖的结构进行分析，有助于深入了解其组成和空间构型，从而为其功能性的应用提供理论依据。
常见的结构分析方法包括红外光谱、核磁共振、质谱等。
红外光谱可以通过检测样品在不同波长下对入射光的吸收情况，得到胞外多糖中特定官能团的存在和它们之间的相互作用；核磁共振可以通过检测样品中核素的共振频率，得到胞外多糖的碳、氢原子的位置信息；质谱可以通过检测样品中离子的质量，得到胞外多糖的草图和主要成分。
最后，在对胞外多糖性质和结构进行分析的基础上，可以通过体外实验验证其在不同领域中的应用价值。
例如，在食品工业中，可以评估胞外多糖作为乳化剂、稳定剂等的效果；在医药工业中，可以评估胞外多糖作为药物微粒的包裹材料的效果；在环境工程中，可以评估胞外多糖对重金属离子等有害物质的吸附效果等。
综上所述，产胞外多糖的菌株筛选以及胞外多糖性质和结构分析是一项复杂而综合性的工作。
通过这一过程，可以找到具有高产胞外多糖能力的菌株，并进一步了解其胞外多糖的性质和结构，为其在工业生产中的应用提供理论基础。
乳酸菌胞外多糖制备与结构鉴定及应用研究
乳酸菌胞外多糖制备与结构鉴定及应用研究乳酸菌(Lactic acid bacteria,LAB)是益生菌的主要来源,可附着在粘膜表面,具有调节肠道菌群平衡、降低胆固醇、抗氧化等益生特性。
胞外多糖(Extracellular polysaccharide,EPS)是乳酸菌生长代谢过程中分泌的一种碳水化合物,具有独特的流变特性,可作为稳定剂、凝胶剂、增稠剂用于发酵乳制品等食品中。
EPS还具有清除氧自由基、提高抗氧化酶活性及降低脂质过氧化反应等功能。
本研究筛选产EPS及抗氧化能力强的乳酸菌菌株,对其菌种鉴定,主因素筛选及响应面优化确定筛选菌株产EPS的最佳条件,离子交换层析纯化粗多糖,凝胶渗透色谱、红外光谱及液相色谱等对多糖分子量及单糖组成表征,最后将产EPS菌株和EPS用于羊乳发酵,考察发酵羊乳的质构,得到以下结论。
1.以产胞外多糖的量为指标,经对66株乳酸菌初筛结果表明,试验选用的菌株均能产EPS,产糖能力因菌而异,产EPS量的范围为13.47~237.14mg/L,产多糖量低于50mg/L的菌株23株,50~100mg/L之间23株,100~130mg/L之间9株,产多糖量高于130mg/L的11株菌株用于后期复筛。
2.以胞外多糖的抗氧化活性为指标,对11株乳酸菌复筛,结果表明,EPS的DPPH清除率范围为26%~38%,亚铁离子螯合率范围为14%~40%。
5株乳酸菌的EPS产量高且抗氧化性较强,采用16S rDNA鉴定5株菌的结果表明,菌株B55和B62均为发酵乳杆菌,菌株7830、B30和K2分别为植物乳杆菌、乳酸片球菌和瑞士乳杆菌。
产EPS量最大的菌株为B62,其DPPH自由基清除率为33.22%,亚铁离子螯合率为29.36%。
3.运用主因素筛选及响应面试验优化发酵乳杆菌B62的产糖培养基,软件分析确定产胞外多糖的最佳培养基为:蔗糖5.0%,蛋白胨3.5%,磷酸二氢钾0.45%,根据最佳培养条件验证得到响应值结果,EPS产量为217.98mg/L,DPPH自由基清除率65.12%,亚铁离子螯合率41.20%,较优化前分别提高了49.8%,96.0%和40.3%。
产胞外多糖乳酸菌的筛选及鉴定
基金项目：湖南省自然科学青年基金项目（编号：２０２１ＪＪ４０２４２）作者简介：陈靖，男，湖南农业大学在读硕士研究生。
通信作者：周辉（１９８０—），男，湖南农业大学副教授，博士。
Ｅ ｍａｉｌ：ｐａｒａｄｉｓｅ９１７＠１６３．ｃｏｍ收稿日期：２０２２ １１ ２３ 改回日期：２０２３ ０３ ２２犇犗犐：１０．１３６５２／犼．狊狆犼狓．１００３．５７８８．２０２２．８１０９１［文章编号］１００３ ５７８８（２０２３）０４ ００２６ ０６产胞外多糖乳酸菌的筛选及鉴定Ｓｃｒｅｅｎｉｎｇａｎｄｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎｏｆｅｘｔｒａｃｅｌｌｕｌａｒｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａ陈 靖１犆犎犈犖犑犻狀犵１ 周佳豪１犣犎犗犝犑犻犪 犺犪狅１ 毛琪琪１犕犃犗犙犻 狇犻１ 唐 霞２犜犃犖犌犡犻犪２ 刘成国１，３犔犐犝犆犺犲狀犵 犵狌狅１，３ 周 辉１，３犣犎犗犝犎狌犻１，３（１．湖南农业大学食品科学技术学院，湖南长沙 ４１０１２８；２．皇氏集团湖南优氏乳业有限公司，湖南长沙 ４１０００８；３．湖南农业大学长沙现代食品创新研究院，湖南长沙 ４１０１２８）（１．犆狅犾犾犲犵犲狅犳犉狅狅犱犛犮犻犲狀犮犲犪狀犱犜犲犮犺狀狅犾狅犵狔，犎狌狀犪狀犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犆犺犪狀犵狊犺犪，犎狌狀犪狀４１０１２８，犆犺犻狀犪；２．犎狌犪狀犵狊犺犻犌狉狅狌狆犎狌狀犪狀犢狅狌狊犺犻犇犪犻狉狔犆狅．，犔狋犱．，犆犺犪狀犵狊犺犪，犎狌狀犪狀４１０００８，犆犺犻狀犪；３．犆犺犪狀犵狊犺犪犐狀狀狅狏犪狋犻狅狀犐狀狊狋犻狋狌狋犲犳狅狉犉狅狅犱狅犳犎狌狀犪狀犃犵狉犻犮狌犾狋狌狉犪犾犝狀犻狏犲狉狊犻狋狔，犆犺犪狀犵狊犺犪，犎狌狀犪狀４１０１２８，犆犺犻狀犪）摘要：目的：筛选出产胞外多糖能力强的乳酸菌菌株。
方法：从实验室分离保藏的乳酸菌中挑选４０株乳酸菌，以商业菌株鼠李糖乳杆菌（犔．狉犺犪犿狀狅狊狌狊ＧＧ，ＬＧＧ）为阳性对照菌株，采用菌落拉丝法和苯酚—硫酸法筛选出胞外多糖产量高的菌株，对其进行体外抗逆性、安全性和抗生素敏感性试验，并对最终得到的菌株进行表型特征分析和种属鉴定。
乳酸菌胞外多糖制备与结构鉴定及应用研究
乳酸菌胞外多糖制备与结构鉴定及应用探究乳酸菌胞外多糖制备是指通过发酵乳酸菌，利用其代谢产物中的多糖类物质进行提取和分离纯化的过程。
多糖类物质是乳酸菌胞外分泌的主要产物之一，具有多种生物活性，包括抗肿瘤、抗氧化、抗炎、调整免疫功能等。
因此，提取纯化乳酸菌胞外多糖具有重要意义。
乳酸菌胞外多糖的结构鉴定是探究的重要内容之一。
目前，常用的结构鉴定方法主要包括红外光谱（IR）、核磁共振（NMR）和色谱质谱联用（LC-MS）等。
通过这些方法，可以确定乳酸菌胞外多糖的糖基组成、毗连方式、分子量等结构特征。
乳酸菌胞外多糖在食品工业中具有广泛应用前景。
起首，多糖在食品加工过程中可作为胶粘剂、稳定剂和乳化剂，提高食品的质地和口感。
其次，多糖还具有调整肠道菌群、增强免疫力、降低胆固醇等功能，被广泛应用于功能食品和保健品中。
此外，乳酸菌胞外多糖还具有抗氧化、抗菌和抗肿瘤等生物活性，广泛应用于医疗健康领域。
然而，乳酸菌胞外多糖的制备和应用探究仍存在一些挑战。
起首，目前多糖的提取纯化方法尚不够高效和经济。
其次，乳酸菌胞外多糖的结构多样性较大，导致结构鉴定工作相对复杂。
在应用方面，乳酸菌胞外多糖的功能机制仍需进一步探究明确，并解决多糖的稳定性和生物利用率等问题。
综上所述，乳酸菌胞外多糖制备与结构鉴定及应用的探究具有重要意义。
通过深度探究乳酸菌胞外多糖的制备工艺、结构特征和功能机制，将有助于进一步开发和应用乳酸菌胞外多糖在食品工业、医疗健康等领域。
信任随着科学技术的不息进步，乳酸菌胞外多糖必将在将来发挥更加重要和广泛的作用综合探究表明，乳酸菌胞外多糖在食品工业和医疗健康领域具有宽广的应用前景。
通过各种分析方法可以确定其结构特征，这对于制备工艺和应用探究至关重要。
然而，在提取纯化方法、结构鉴定和功能机制等方面仍存在一些挑战，需要进一步探究和解决。
信任随着科学技术的进步，乳酸菌胞外多糖将在将来发挥更加重要和广泛的作用。
新疆酸马奶中高产胞外多糖乳酸菌筛选鉴定及培养条件优化研究
养条件 的优化试验中 ， 采用单次单 因子法 ， 探索初始 ｐ Ｈ值 、 培养时间 、 碳源及氮源等 对乳酸菌 产胞外多糖 量 的影 响。【 结论 】 鉴定 出产胞外多糖量高的乳酸菌为干酪乳 杆菌 ， 并且 确定干酪乳杆 菌产胞外 多糖 的最佳 合
成 条 件 为 葡 萄 糖 ２ ， 白胨 １５ ， 酵 时 间 ２ ， 始 ｐ ％ 蛋 ．％ 发 ８ｈ初 Ｈ值 ６５ 此条 件 下 所 合 成胞 外 多 糖 量 为 １ １６ｍ ／ ．， ２ ． ｇ
Ａ ｓ ａｔ【 ｂｅｔ ｅ Ａ ｌ ｔ ｃ ａ ｅａ ｉ ｉ Ｐ ｐ ｄｃ ｇ ａａｉ ａ ｓ ｅｎｄｆ ｍ ｋｕ ｂｔ ｃ：Ｏ ｊｃｖ 】 ｃｃ ｉ ｂｃ ｒ ｔ ｈ ｈＥ Ｓ— ｒ ｕｉ ｐｃｙ ｓ ｃ ｅｅ ｏ ｏ— ｒ ｉ ａ ｉａ ｄ ｔｉｗ ｈ ｇ ｏ ｎｃ ｔｗ ｒ ｒ
传统奶豆腐中产胞外多糖乳酸菌的分离筛选及其潜在益生菌特性
进 行 测序 ， 将 测 序 结 果 与 ＮＣ ＢＩ 数 据 库 中 的 核 酸 序 列 进 行 比对 。 将所测 菌株的 １ ６ Ｓ ｒ ＤＮＡ 序 列 用 Ｂ ｌ ａ ｓ ｔ 软 件 在 Ｇｅ ｎ Ｂ ａ ｎ ｋ 数 据 库 中进 行 相 似性 比较 ， 选 取 同源 性 较高 的相 关 菌 株 的 １ ６ Ｓ ｒ ＤＮＡ区 域 序 列 作 为 参 比 对 象 ， 采 用 ＭＥＧＡ５ ． ０ 软 件构 建 系统 发育树 。 １ ． ４ ． ２ 产 胞 外 多糖 乳 酸 茵 的 筛选 （ １ ） 胞 外 多 糖 标 准 曲 线 的绘 制 。 葡 萄 糖 标 准 曲 线
式 中 ：Ａ。 为 菌 液 与 吸 附剂 混 匀 前 的吸光 度 ； Ａ为 菌液 与 吸附剂 混匀 后 的吸光 度 。 １ ． ４ ． ６ 菌株 的 体 外 降 胆 固 醇 能 力 测 定 将待 测 菌 株 依 次传 代 活 化 ３ 代后 使 其 恢 复活 力 ， 按体积分数为 ３ ％接 种 于 含 有 质 量 浓 度 约 １ ０ ０￣ ｇ ／ ｍＬ 胆 固 醇 的 ＭＲＳ － ＴＨＩ Ｏ 培养 基 中 ， ３ ７℃ 恒 温 培 养 ２ ４ ｈ 后， 采 用 邻 苯 二 甲醛 比色 法 测 定 培 养 基 中 残 留 胆 固
酶 冷却 的发 酵 液 中加 入 质量 浓度 为 ８ ０ ０ ｇ ／ Ｌ的 三 氯 乙
将培养 后 的菌液离 心（ ６ ０ ０ ０ ｇ， ４ ｏ Ｃ， １ ０ ａｉ ｒ ｎ ） ， 取上 清液 ０ ． ５ ｍＬ于 １ ８ ｍｍｘ １ ８ ｃ ｍ试 管 中 ， 依 次加 入 ３ ｍＥ 体积分 数为 ９ ５ ％的 乙醇 和 ２ ｍＬ质 量 浓 度 为 ０ ． ５ ｇ ／ ｍＬ的 氢 氧化钾 溶液 ， 漩涡 震荡 混匀后 置 于 ６ ０℃ 水 浴 中皂 化 １ ０ ｍｉ ｎ， 迅 速冷却 后 加入 ５ ｍＬ正 己 烷 ， 漩 涡震荡 １ ｍｉ ｎ 进行 萃取 ， 静置 １ ０ ａｉ ｒ ｎ后 加 入 ３ ｎ １ Ｌ水 ， 重复震 荡 １ ｍｉ ｎ 后 在室 温下 静 置 １ ０ ｍｉ ｎ， 待分 层 后 取 ２ ． ５ ｍＬ正 己 烷 层 于 １ ５ ｍｍｘ１ ５ ｃ ｍ试 管 中 ， 置于 ６ ０℃ 水 浴 中 用 氮 气 吹 干溶 剂 ， 加入 ４ ｎ Ｌ邻 苯 二 甲醛 显 色 剂 ， 漩 涡震 荡 １ ｍｉ ｎ
产葡聚糖乳酸菌的筛选及其在酸豆乳中的应用
产葡聚糖乳酸菌的筛选及其在酸豆乳中的应用乳酸菌胞外多糖(LAB EPS)具有良好的流变学特性,能改善发酵乳的粘度、质构和口感。
由于乳酸菌属于益生菌,将乳酸菌胞外多糖直接应用于食品当中,有着广泛的研究和应用价值。
本文对产胞外多糖的乳酸菌进行筛选和鉴定、多糖的分离纯化及结构鉴定。
利用筛选出的乳酸菌发酵豆乳,并对发酵豆乳的抗氧化性和后熟稳定性进行研究。
具体研究内容及结果如下:1.从市售蔬菜表面筛选出120株菌株,其中4株产EPS较高的菌株,命名为F4、H9、H11和H12,在10mL含10%蔗糖-MRS培养液中培养24h产糖量均在40g/L以上。
通过对这四种菌株生理生化特性及测序分析,鉴定出F4、H9及H12为同一种菌株,为 Weissella confuse,H1为 Weissella cibaria。
2.以多糖产量为指标,蔗糖添加量、转速及培养时间为变量对H9和H11合成EPS进行条件优化,结果表明蔗糖添加量20%,转速为80 r/min,培养12 h为最优。
通过乙醇沉淀对合成的EPS进行分离,经透析袋纯化后冻干得到多糖并进行结构分析。
红外光谱显示2个多糖样品的红外光谱均在1200～1000 cm-1范围内呈现多糖的特征吸收峰。
核磁共振光谱显示2个多糖的13CNMR谱图中异头碳化学位移分别97.69和97.15ppm,说明其含有α型吡喃糖残基。
δ65.53、δ69.51ppm是C-6的碳信号,说明该糖是一条以(1 →6)-α-D-Glup为主链的结构的多糖。
3.利用H9和H11发酵豆乳,确定菌株H9发酵豆乳具有更好的粘度及抗氧化性。
同时对菌株H9发酵豆乳的贮藏稳定性进行研究,分别置于25℃和4℃条件下贮藏,通过测定活菌数、pH、酸度,粘度及保水性等对酸豆乳的稳定性进行研究。
研究表明该酸豆乳具有低酸度、高粘度和高保水性的特点,无论在4℃还是25℃下贮藏都能保持较好的稳定性。
乳酸菌胞外多糖的分离筛选方法研究进展
１引言
２产胞外多糖乳酸菌的筛选方法 ２ ． １ ＭＲｓ 一 溴 甲酚 紫平 板 筛选 法 乳酸 菌 ， 是 一类无芽孢 、 革兰 氏染 色为 阳性 的异养
厌 氧型原 核细菌 ， 能够 发酵糖类 ， 产物 主要为乳 酸（ 辨 别的主要 标志） ， 其形态 多样主要 以链状 和杆状 存在 。 乳 酸菌对 人体有 诸多 益处 ， 比如乳 酸菌在生 长过程 中 消耗乳 酸对 预 防和治疗 乳糖 不耐症有 良好 的作用 ； 同 时发 酵 的产 物可 以促 进钙 、 镁离 子 及蛋 白质 、 单糖 等 营 养物质 的 吸收 ； 还可 以产生 Ｂ族维 生素 等大 量有 益 物质； 另外 ， 乳酸菌 的生 长可 以增加 肠道 的益生菌群 ， 进 一步 改善人体 胃肠道 功能 ， 保持人 体肠道 内菌群 平 衡， 维护人 体健康 ； 也可 以抑 制腐败菌 的繁殖 ； 同时消 解腐败 菌产生的毒素 ， 清 除肠道垃圾 ； 代谢产物还 可以 抑 制胆 固醇吸 收 ， 有降血 脂 、 降 血压作 用 ； 亦可 以提高 Ｓ ＯＤ酶活力 ， 消除人 体 自由基 ， 具有 抗衰老 、 延年益 寿 作用。 此外， 还 有一 些报 道认 为 乳酸 菌能有 效 的预 防 女 性泌尿 生殖系统 细 菌感 染 ， 还能控 制人体 内毒素水 平， 保护 肝脏 并有 助于增 强肝 脏的解 毒 、 排 毒功能 。 总 之， 乳 酸菌现在 是备 受瞩 目， 前景广 阔 。 胞外多糖（ ｅ ｘ ｏ ｌ ｍｌ ｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ， Ｅ Ｐ Ｓ ） 是 由细菌及少数 酵母 菌和 丝状真 菌在生 长 的过程 中产生 的 。 微 生物产 生 的Ｅ Ｐ Ｓ 可 以在 自然环境 中起 到保护微生 物细胞的作 用， 比如 使 细胞避 免 因干 燥而 引起 脱水 、 防止 被噬 菌 体侵 染 ， 同时还 可维持 细 胞 的渗 透压 ， 并且 参 与到细 胞 的信息 传递和 细胞 的构成 等作用 。 自从通过 肠膜 明 串珠菌肠 膜亚种（ Ｌ ｅ ｕ ｃ ｏ ｎ ｏ ｓ ｔ ｃ ｍｅ ｓ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｉ ｄ ｅ ｓ ｓ ｕ ｂ ｓ ｐ ． ｍｅ ｓ ｅ ｎ ｔ ｅ ｒ ｏ ｉ ｄ ｅ ｓ ） 的发酵生 产 出右旋糖酐 以来 ， 乳酸菌胞 外多糖 的 开发与 应用便 引起 了诸多研 究人 员 的关注 ， 已变成 了一个 重大 的研究 热点［ 】 ｌ 。 乳 酸菌Ｅ Ｐ Ｓ 是乳 杆菌诸多 菌属 中多种乳 酸细菌在 特 定 环 境 下 分 泌 到 细 胞 壁 外 的 黏 液 或 荚 膜 多 糖 （ ｃ ａ ｐ ｓ ｕ ｌ ａ ｒ ｐ ｏ ｌ ｙ ｓ ａ ｃ ｃ ｈ ａ ｒ ｉ ｄ ｅ ） 。 乳酸菌Ｅ Ｐ Ｓ 的作用很多 ， 在酸 乳形成方面 ， 对其质构与 风味 ， 产 生特有的营养价值方 面有极为重要 的作用 与影响 ， 它可 以增加酸奶 的黏度 ， 提高酸奶稳定性 和保 水性 ， 使产 品具有 良好 的 口感 、 质 地和风味 。 又因为乳酸菌Ｅ Ｐ Ｓ 具有安全无 毒的特性 ， 所 以在食 品工 业 中作 为增稠 剂 、 稳定剂 、 乳化剂 、 胶 凝剂 及保湿剂 而被广 泛的应用 。 通过研 究 ， 部分乳酸 菌Ｅ Ｐ Ｓ 还具有抗肿瘤 、 抗病 毒 、 抗衰老 、 降低血糖 、 增 强人体免 疫力 、 调 节 胃肠功 能 、 降血 清胆 固醇 等多种生 理功 能 ， 因此将 其开发为 功能性 食 品具有 广 阔的推广 前景 。 本文综合 阐述拉近几 年有 关乳酸 菌Ｅ ＰＳ 分 离纯化 实验 的研 究报道 ， 总结 分析一 些分离 纯化 的手段并说
产胞外多糖(EPS)乳酸菌菌株的分离、筛选
产胞外多糖(EPS)乳酸菌菌株的分离、筛选1.目的要求(1)熟悉产胞外多糖乳酸菌菌株的筛选方法(2)了解乳酸菌产胞外多糖的基本原理2.基本原理微生物胞外多糖(exopolysaccharides, EPS)是一些特殊微生物在生长代谢过程中分泌到细胞壁外、易与菌体分离的荚膜多糖或黏液多糖，属于微生物的次级代谢产物。
微生物EPS是一种长链、高分子质量的聚合物，甚独特的物理学和流变学特性以及使用安全性使它在食品和非食品工业备受青睐，尤其是它在医药领域所具有的巨大应用潜能正日愈引起人们的广泛关注。
自然界中能产生多糖的微生物种类很多，涉及细菌、酵母和丝状真菌。
长久以来，乳酸菌用于发酵乳的生产，通常认为乳酸菌EPS安全性更为可靠，而且乳酸菌作为生理功能调节剂，利用益生菌制成活菌制剂，省去常规发酵、提取等繁琐工艺。
因此，开发乳酸菌EPS较其他微生物EPS来说，更具有理论意义与实际价值。
多糖难溶于乙醇，因此如果乙醇溶液中有絮状沉淀出现，通常可认为样品中含有多糖。
本实验就是利用多糖的这种性质来沉淀分离微生物EPS以供下一步的多糖检测。
目前用于多糖检测的方法较多，主要有干燥称重法、硫酸一蒽酮法、DNS(3, 5一二硝基水杨酸）法、苯酚一硫酸法、相对黏度法和Imshenetskii等报道的浊度法等。
由于苯酚一硫酸法具有简单方便、显色稳定、灵敏度高、重现性好、不受蛋白质干扰等优点而深受欢迎。
其原理是根据苯酚一硫酸试剂与游离的寡糖和多糖中的己糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）发生的显色反应。
己糖在490nm处（戊糖及糖醛酸在480nm处）有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。
具体操作见实验步骤。
本实验利用多糖难溶于乙醇的性质来沉淀分离微生物EPS。
本实验以乳制品和肉制品为初始原料，分离产EPS的乳酸菌菌株并筛选高产EPS的优良菌株。
3实验材料3.1原料从市场上购买的乳制品、肉制品。
3.2培养基MRS液体培养基、固体培养基（1.5％琼脂）。
内蒙古奶豆腐中产胞外多糖乳酸菌的分离筛选
内蒙古奶豆腐中产胞外多糖乳酸菌的分离筛选1.3乳酸菌分离方法取少量样品接入11%脱脂乳(m/V)中，37℃培养，凝乳后取样逐级稀释，选3个适宜的稀释度，每个稀释度取0.1mL涂布于MRS琼脂平板[7]，37℃培养48h。
选取合适的平板，挑取典型菌落进行革兰氏染色和过氧化氢酶实验，其中革兰氏染色阳性和过氧化氢酶实验阴性的菌株初步鉴定为乳酸菌，继续划线培养分离纯化，直至得到纯菌，纯化后的菌株接种到MRS液体培养基培养后，加入20%甘油，－80℃冰箱保存备用。
1.4乳酸菌属的鉴定根据凌代文等[8]和杨洁彬等[9]介绍，乳杆菌属的生化特征是形态为单个、成对或链状排列的短或长杆菌，通常不运动，革兰氏染色阳性，微好氧。
极少见硝酸盐还原反应，不液化明胶，不分解酪素，不产生吲哚和H2S，过氧化氢酶阴性，无细胞色素，联苯胺反应阴性。
最适生长温度是30～40℃，耐酸，最适pH值通常为5.5～6.2。
乳杆菌种的划分主要依据碳水化合物发酵实验。
1.5 API鉴定乳酸杆菌的碳水化合物发酵曲线采用API50CH试条测定，按Snart[10]的方法操作，稍有改动。
乳酸菌于MRS琼脂平板上37℃厌氧培养2d，用无菌牙签挑起部分菌落加入悬液基物(2mL无菌生理盐水)的试管中，制成浓的菌悬液(S)；打开悬液基物(5mL无菌生理盐水)的试管，加入少量上述浓菌(S)制得相当于2 McFarland浊度(OD 600nm≈0.3 5)的菌悬液，记录体积(V)；打开API50CHL培养基的安瓿，加2倍(2V)该菌液接种。
用已接种的API50CHL 培养基加入反应管中，并用灭菌的液体石蜡油覆盖所有的测定管，于37℃厌氧培养48h后读取结果。
发酵结果提交到生物梅里埃公司(北京)，根据API数据库现存的数据判定实验结果。
1.6乳酸菌荚膜显微镜观察M R S培养液中生长的新鲜菌体，采用墨汁负染法，于Olympus BX51显微镜油镜下观察，DP71照相。
产胞外多糖乳杆菌的筛选及其多糖的分离、结构和生物活性研究
产胞外多糖乳杆菌的筛选及其多糖的分离、结构和生物活性研究乳酸菌胞外多糖（LAB EPS）是乳酸菌在其生长、代谢过程中分泌到细胞外的粘液或荚膜多糖。
LAB EPS不仅具有重要的物理化学特性，如良好的流变学特性，能改善发酵乳的粘度、质构和口感，防止缩水和乳清析出，使产品增稠、稳定，质地细腻均匀，口感润滑。
而且LAB EPS还具有良好的生理活性，如抗肿瘤、免疫调节、抗病毒、抗溃疡、抗氧化、降胆固醇、降血压等，还可作为益生元促进肠道内其他益生菌的生长，调节肠道菌群。
近年来关于乳酸菌和乳酸菌胞外多糖的研究成为热点。
本文对产胞外多糖的乳杆菌的筛选和鉴定、多糖的分离纯化、多糖的生物活性、分子特性以及结构进行了研究。
主要研究结果如下：采用菌落拉丝法与多糖产量相结合的方法，从健康人体粪便中筛选到一株产EPS较高的Lactobacillus rhamnosus KF5。
该菌株在脱脂乳中培养产230mg/L的EPS。
研究了菌株KF5的生物学特性，该菌株在MRS培养基中生长良好，最适生长温度37℃，最适生长pH6.0，能够在含7%NaCl的MRS中生长。
菌株KF5在胆盐浓度0.2%以下，生长良好，能够耐受0.3%的胆盐。
菌株KF5耐酸性能好，在pH3.0的环境下，保持3h活菌数几乎不下降。
菌株KF5具有很强的粘附能力（23个bacteria/Caco-2细胞），优于对照菌株LGG（9个bacteria/Caco-2细胞）。
抑菌实验表明，菌株产酸抑制S. aureus、E. coli和B. subtilis的生长。
KF5的发酵乳经煮沸、离心、乙醇沉淀、除蛋白、透析、冷冻干燥得到粗多糖。
粗多糖经DEAE-Sepharose Fast Flow离子交换层析分离得到中性糖组分EPS1和酸性糖组分EPS2，再分别经Sephacryl HR S200和Sepharose Cl-6B凝胶柱分离，获得均一组分S1和S2。
结合HPSEC分析、紫外分析，两组分均不含蛋白。
产胞外多糖植物乳杆菌的分离筛选、分子表征及其应用研究
产胞外多糖植物乳杆菌的分离筛选、分子表征及其应用研究乳酸菌（Lactic acid bacteria，LAB）胞外多糖（Exopolysaccharides，EPSs）是LAB在生长代谢过程中分泌到细胞壁外的黏液多糖或荚膜多糖。
LABEPS 具有独特的理化及流变学特性，可作为增稠剂、乳化剂、胶凝剂和稳定剂广泛应用于发酵食品生产中，改善食品的流变学特性、质构和口感等。
大量研究表明，LABEPSs还具有促进人体健康和预防疾病的生理活性，如抗肿瘤、抗氧化、抗病毒、抑制有害菌、抑制菌膜形成、免疫调节、降胆固醇以及降血压等。
此外，LABEPSs还可作为益生元促进肠道内其他益生菌的生长，调节肠道菌群。
由于LAB被公认为是安全的（GRAS）食品级微生物，因此其代谢产生的EPS 也是安全可靠的，可直接应用于发酵食品中。
本文对产EPS乳杆菌的筛选、鉴定、益生特性、EPS的分离纯化、理化特性、生物活性（体外和体内）以及产EPS乳杆菌在发酵乳制品中的应用进行了系统研究。
主要研究结果如下：采用菌落拉丝法与EPS定量测定相结合的方法，从西藏灵菇中分离筛选到3株产EPS较高的乳杆菌SKT109、YW11和YW32。
通过表型、生理生化、API50CH和16S rDNA方法对菌株进行了鉴定，最终判定3株菌均为植物乳杆菌（Lactobacillusplantarum）。
以商业菌株鼠李糖乳杆菌GG（L.rhamnosusGG）为对照，研究了3株产EPS 植物乳杆菌的体外益生特性。
3株菌均对模拟人工胃液（pH3.0，处理3h）、低浓度胆盐（0.3和0.6g/mL，处理3h）和低浓度过氧化氢（0.4mmol/L，处理8h）有较好的耐受性，并具有潜在的肠道表皮细胞黏附能力。
菌株YW11对胆固醇、羟自由基、DPPH自由基和超氧阴离子的清除率最高，其次为菌株YW32和SKT109。
3株植物乳杆菌发酵液经煮沸、离心、乙醇沉淀、除蛋白、透析、冷冻干燥得到粗多糖，粗多糖先后经DEAE-Sepharose Fast Flow 离子交换层析柱和Sepharose CL-6B凝胶层析柱进行分离纯化。
《乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究》范文
《乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究》篇一一、引言乳酸菌作为益生菌的一种，在维护人体健康方面具有重要作用。
其中，乳酸菌胞外多糖（Exopolysaccharides，EPS）是乳酸菌分泌到细胞外的复杂糖类物质，具有诸多生物活性，如免疫调节、抗肿瘤、抗氧化等。
因此，对乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究具有重要意义。
本文旨在探讨乳酸菌胞外多糖的筛选方法、纯化过程及其免疫活性的研究。
二、材料与方法1. 材料（1）菌种：从不同来源筛选的乳酸菌菌株。
（2）培养基：营养丰富的液体培养基。
（3）试剂：包括各类化学试剂、酶等。
2. 方法（1）乳酸菌胞外多糖的筛选：从不同来源的乳酸菌中筛选出产EPS的菌株。
（2）乳酸菌的培养及EPS的提取：将筛选出的菌株进行培养，并提取其EPS。
（3）EPS的纯化：采用透析、离心、柱层析等方法对EPS 进行纯化。
（4）免疫活性研究：通过体外实验和动物实验研究EPS的免疫活性。
三、实验结果1. 乳酸菌胞外多糖的筛选结果通过对比不同来源的乳酸菌产EPS的能力，成功筛选出若干高产EPS的菌株。
这些菌株具有较高的产EPS能力和稳定性。
2. EPS的提取与纯化结果通过培养这些高产EPS的乳酸菌，成功提取出EPS。
经过透析、离心、柱层析等纯化步骤，得到较为纯净的EPS。
3. 免疫活性研究结果（1）体外实验：通过细胞增殖实验、细胞因子分泌实验等手段，发现EPS具有刺激免疫细胞增殖、分泌细胞因子等免疫活性。
（2）动物实验：通过建立动物模型，观察EPS对动物免疫系统的影响。
结果表明，EPS能够显著提高动物的免疫力，增强抗病能力。
四、讨论本实验成功筛选出高产EPS的乳酸菌菌株，并对其EPS进行了提取与纯化。
通过体外实验和动物实验，证实了EPS具有显著的免疫活性。
这为进一步开发EPS作为免疫调节剂提供了理论依据。
此外，我们还需进一步研究EPS的结构与功能关系，以及其在人体内的生物利用度和安全性。
《乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究》范文
《乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究》篇一一、引言乳酸菌是一类重要的微生物，其产生的胞外多糖（Exopolysaccharides, EPS）具有多种生物活性，包括增强免疫力、抗肿瘤、抗氧化等作用。
因此，对乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究具有重要的科学意义和应用价值。
本文旨在探讨乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化方法及其免疫活性的研究进展。
二、乳酸菌胞外多糖的筛选1. 菌种筛选首先，从各种乳酸菌中筛选出能够产生胞外多糖的菌种。
通过观察菌株在培养基上的生长情况、产糖量的多少以及产糖速度的快慢等因素，初步筛选出具有产糖潜力的菌种。
2. 发酵条件优化对初步筛选出的菌种进行发酵条件的优化，包括温度、pH值、接种量、培养时间等因素的调整，以提高胞外多糖的产量和质量。
三、乳酸菌胞外多糖的纯化1. 初步纯化采用离心、沉淀、超滤等方法对发酵液中的胞外多糖进行初步纯化，去除杂质和未完全分解的物质。
2. 高级纯化通过凝胶过滤、离子交换、高效液相色谱等方法对初步纯化后的胞外多糖进行进一步纯化，得到较为纯净的胞外多糖样品。
四、免疫活性研究1. 细胞免疫实验通过细胞免疫实验，观察乳酸菌胞外多糖对免疫细胞的影响，包括刺激淋巴细胞增殖、促进细胞因子分泌等作用。
2. 动物实验通过动物实验，观察乳酸菌胞外多糖对动物免疫功能的影响，包括增强体液免疫、细胞免疫等作用，以及其对肿瘤的抑制作用等。
五、结果与讨论经过筛选、纯化后的乳酸菌胞外多糖具有较高的纯度和生物活性。
在细胞免疫实验和动物实验中，均表现出较强的免疫增强作用，能够刺激免疫细胞增殖、促进细胞因子分泌，增强体液免疫和细胞免疫等作用。
此外，乳酸菌胞外多糖还具有抗肿瘤、抗氧化等作用，具有广泛的应用前景。
在研究过程中，我们还发现乳酸菌胞外多糖的产量和纯度受发酵条件、菌种类型等多种因素的影响。
因此，在今后的研究中，需要进一步探讨不同因素对乳酸菌胞外多糖产量和纯度的影响，以及不同来源的乳酸菌胞外多糖的生物活性差异等方面的内容。
《乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究》范文
《乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究》篇一一、引言乳酸菌作为一种益生菌，因其能够调节肠道微生态平衡，促进肠道健康而备受关注。
近年来，研究发现乳酸菌的胞外多糖（Exopolysaccharides, EPS）在保持益生菌的生理功能中发挥着重要作用。
乳酸菌EPS具有提高机体免疫力、抗氧化、降血脂等多种生物活性。
因此，筛选出具有优良性能的乳酸菌EPS并研究其纯化及免疫活性具有重要意义。
二、乳酸菌胞外多糖的筛选1. 菌种来源本研究所用菌种来源于多种乳酸菌菌株，通过初步筛选，选择具有高产EPS特性的菌株进行深入研究。
2. EPS提取采用适宜的提取方法，如热水浸提法、有机溶剂浸提法等，从筛选出的乳酸菌中提取EPS。
提取过程中需注意温度、时间等条件对EPS产量的影响。
3. EPS纯化将提取得到的EPS进行纯化处理，包括脱盐、浓缩、透析等步骤。
在纯化过程中，可采用色谱法、超滤法等方法进一步纯化EPS。
三、乳酸菌胞外多糖的纯化1. 纯化方法本部分主要介绍采用高效液相色谱法（HPLC）和超滤法对EPS进行纯化的方法。
HPLC法可有效分离不同分子量的EPS组分，超滤法则可去除EPS中的杂质和低分子量组分。
2. 纯化效果评价通过对比纯化前后EPS的物理化学性质、分子量分布、结构特点等，评价纯化效果。
同时，采用高效液相色谱-质谱联用技术（HPLC-MS）对纯化后的EPS进行结构分析。
四、乳酸菌胞外多糖的免疫活性研究1. 动物实验采用动物实验研究EPS的免疫活性。
将EPS以适当剂量喂食实验动物，观察其对动物免疫系统的影响，如对免疫器官发育、免疫细胞数量和功能的影响等。
2. 细胞实验通过细胞实验研究EPS对免疫细胞的刺激作用及信号传导机制。
采用流式细胞术、荧光定量PCR等技术检测EPS对免疫细胞表面标志物、细胞因子分泌等的影响。
3. 结果分析根据实验结果，分析EPS的免疫活性及其作用机制。
同时，结合文献报道的其他乳酸菌EPS的免疫活性研究结果，进行综合分析。
《乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究》范文
《乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究》篇一一、引言乳酸菌作为益生菌的一种，具有调节肠道菌群平衡、增强免疫力等重要功能。
其中，乳酸菌胞外多糖（Exopolysaccharides，EPS）作为乳酸菌的重要代谢产物，具有多种生物活性，如抗肿瘤、抗氧化、免疫调节等。
因此，对乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究具有重要的理论和实践意义。
本文旨在通过实验研究，探讨乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化方法及其免疫活性的作用机制。
二、材料与方法1. 材料（1）菌种：选择不同种属的乳酸菌进行实验。
（2）培养基：根据实验需要，配置不同的培养基。
（3）试剂：如乙醇、丙酮、硫酸铵等。
2. 方法（1）筛选方法：采用薄层层析法、紫外-可见光谱法等手段，对乳酸菌产生的EPS进行筛选。
（2）纯化方法：通过醇沉法、硫酸铵沉淀法等方法对EPS 进行纯化。
（3）免疫活性研究：采用体外实验和动物实验相结合的方法，观察EPS对免疫细胞的刺激作用，评估其免疫活性。
三、实验结果1. EPS的筛选结果通过薄层层析法、紫外-可见光谱法等手段，成功筛选出具有较高EPS产量的乳酸菌菌株。
经过对比分析，发现不同菌株产生的EPS在化学组成和分子量等方面存在差异。
2. EPS的纯化结果采用醇沉法、硫酸铵沉淀法等方法对EPS进行纯化。
经过纯化后的EPS，其纯度得到显著提高，为后续研究提供了可靠的实验材料。
3. 免疫活性研究结果（1）体外实验：通过观察EPS对免疫细胞的刺激作用，发现EPS能够显著提高免疫细胞的活性，促进细胞因子的分泌。
（2）动物实验：通过观察EPS对动物免疫功能的影响，发现EPS能够显著提高动物的免疫力，增强机体的抗病能力。
此外，EPS还具有抗肿瘤作用，能够显著抑制肿瘤细胞的生长。
四、讨论通过对乳酸菌胞外多糖的筛选、纯化及免疫活性研究，我们得出以下结论：1. 不同菌株产生的EPS在化学组成和分子量等方面存在差异，这可能与菌株的遗传特性、培养条件等因素有关。
产胞外多糖乳酸菌的筛选及其多糖的结构研究
产胞外多糖乳酸菌的筛选及其多糖的结构研究乳酸菌胞外多糖(exopolysaccharide,EPS)是乳酸菌在菌体生长、代谢过程中产生并分泌到细胞外、常常渗透到培养基中的荚膜多糖或粘液多糖。
乳酸菌EPS不仅具有良好的流变学特性,还具有重要的生理活性,如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节、益生作用等。
我国拥有丰富的乳酸菌发酵食品,包括产胞外多糖在内的乳酸菌资源尚未得到有效开发。
本文对酸菜中产胞外多糖的乳酸菌进行高效快速地筛选,纯化胞外多糖,对其结构和理化特性进行研究。
以家庭自制东北酸菜为样品,采用产粘菌落法与多糖产量相结合的方法,筛选到两株产EPS较高的菌株NM105和2-19,经过形态学观察、生理生化和16S rDNA 手段对这两株菌进行了系统鉴定,判定这两株菌均属于明串珠菌属,分别命名为Leuconosto citreum NM105和L.mesenteroides subsp.dextranicum 2-19。
将两株菌分别接种至含5%蔗糖的MRS培养基中,25℃培养48 h,得到产EPS的发酵液,经离心、除蛋白、醇沉、透析得到粗多糖的水溶液。
粗多糖再经凝胶过滤层析纯化得到均一的多糖组分,冷冻干燥得到纯多糖,产量分别为23.5g/L和11.4 g/L。
结合紫外分析、高效体积排阻色谱分析,两株菌所产多糖均不含核酸和蛋白,重均分子量Mw分别为1.01×108 Da和8.79×107 Da。
采用气相色谱和薄层色谱分析单糖组成,结果表明两株菌所产EPS均只含葡萄糖。
结合单糖组成分析、红外光谱分析、核磁共振光谱分析,L.citreum NM105所产EPS含有三种糖单元,分别为[→6)-α-D-Glcp-(1→]、[α-D-Glcp-(1→]和[→2,6)-α-D-Glcp-(1→],摩尔比接近1:1:1,是一种带有高含量的α-(1→2)糖苷键的支链多糖。
而L.mesenteroides subsp.dextranicum 2-19所产EPS是一种由α-(1→6)糖苷键连接的高度线性葡聚糖。
水牛乳中高产胞外多糖乳酸菌的筛选与鉴定
水牛乳中高产胞外多糖乳酸菌的筛选与鉴定唐艳;谢芳;杨承剑;农皓如;冯玲;曾庆坤【摘要】从生水牛乳中筛选出两株高产胞外多糖(EPS)的乳酸菌株LB2、LB7,经MRS肉汤培养基发酵后,菌液中的胞外多糖(EPS)产量分别达135 mg/L、148mg/L,通过形态学、生理生化特征、API细菌鉴定系统、16S rRNA序列分析,鉴定出菌株LB2为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),LB7为类肠膜魏斯氏菌(Weissella paramesenteroides).将其应用到水牛乳酸奶的发酵中,结果表明,植物乳杆菌LB2和类肠膜魏斯氏菌LB7均可用来发酵水牛乳酸奶,且能有效增加酸奶的黏度和胞外多糖产量,其黏度和EPS产量分别为4 050mPa·s和149mg/L.【期刊名称】《中国酿造》【年(卷),期】2016(035)002【总页数】4页(P70-73)【关键词】乳酸菌;胞外多糖;筛选;菌种鉴定【作者】唐艳;谢芳;杨承剑;农皓如;冯玲;曾庆坤【作者单位】中国农业科学院广西水牛研究所,广西南宁530001;中国农业科学院广西水牛研究所,广西南宁530001;中国农业科学院广西水牛研究所,广西南宁530001;中国农业科学院广西水牛研究所,广西南宁530001;中国农业科学院广西水牛研究所,广西南宁530001;中国农业科学院广西水牛研究所,广西南宁530001【正文语种】中文【中图分类】Q939乳酸菌胞外多糖（extracellular polysaccharides，EPS）是乳酸菌在生长代谢过程中形成的位于细胞壁外的黏液多糖或荚膜多糖，属于微生物胞外多糖的一种［1］。
酸奶是以鲜奶或乳制品为原料，经均质（或不均质）、杀菌、冷却后加入特定微生物发酵剂、保温发酵而制成的产品。
酸乳在生产过程中乳酸菌会产生一种多糖类物质，即乳酸菌胞外多糖［2］。
乳酸菌胞外多糖可赋予酸乳特殊的质构和风味，如增加酸乳的黏性和流变性、提高酸乳的持水性防止乳清析出、增强凝乳强度、增加酸乳的口感等［3］。
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取１ｍＬ稀释样品，分别浇注于ＭＲＳ培养基、Ｅｌｌｉｋｅｒ培养基和Ｍ１７培养基，在适宜条件下培养，用于样品中乳酸菌的分离［１１．２．２分离菌株的分离和保存将１．２．１得到的菌落在相应的平板培养基上划线纯化得到纯培养物，进行革兰氏染色，接触酶实验。
纯化菌株在ＭＲＳ斜面上４℃短期保存，置于３０％（Ｗ／Ｗ）无菌甘油中在一７０℃超低温冰箱中长期保存‘１１．２．３利用茵落拉丝法初步筛选产胞外多糖的乳酸菌将分离纯化菌株在ＭＲｓ筛选培养基上进行划线分离，在２５℃厌氧培养４８ｈ，观察并记录菌落特征。
用无菌牙签接触菌落，轻轻地向外拉，然后在２ｓ内垂直离开以在培养基表面形成连续的拉丝，重复操作５—６个菌落，每个菌落平行做２次，测量菌落拉丝的最大长度（伽ｎ），结果以“平均值士标准方差”表示。
１．２．４乳酸茵胞外多糖的提取将１．２．３得到的菌株接种于筛选ＭＲＳ液体培养基中，３０℃发酵２４ｈ，取１０ｍＬ培养物，沸水浴１０ｍｉｎ，冷却至室温，加质量分数为８０％的三氯乙酸至终浓度为４％，４℃静置过夜，１２ｏｏｏｇ离心２０ｍｉｎ，轻倾上清液于透析袋中，对流水透析２４ｈ，再对双蒸水透析３６ｈ，４次换水，定容，待用。
１．２．５硫酸－苯酚法测定乳酸茵胞外多糖（ＥＰＳ）的含量将１．２．４得到的胞外多糖样品用Ｄｕｂｏｉｓ推荐的硫酸一苯酚法［１５］测定，用葡萄糖做标准曲线（如图１），从曲线上求得ＥＰＳ的含量。
以空白培养基为对照，扣除背景干扰。
’１．２。
６·显微镜观察产胞外多糖乳酸茵细茵形态对分离菌株进行革兰氏染色，用ＭｏｔｉｃＰＭＢ５—２２３２—５摄影显微镜观察细胞形态。
１．２．７产胞外多糖乳酸茵的鉴定产胞外多糖乳酸菌的鉴定采用法国梅里埃公司鲁奎、蠢棺益图１硫酸一苯酚法测定胞外多糖含量的标准曲线的ＡＰＩ细菌鉴定系统进行，将纯菌株在ＭＲＳ琼脂培养基上３７℃微厌氧培养４８ｈ，用无菌棉拭子收集细菌，在ＡＰＩ５０ＣＨ试剂条凹槽中加ＡＰＩ５０ＣＨＬ培养基并接种，用石蜡油封好，３７℃培养２４～２８ｈ，记录菌株对碳水化合物的发酵结果，将其输入梅里埃公司的鉴定软件ＡＰＩＬＡＢＰｌｕｓ进行鉴定。
２结果与讨论２．１乳酸菌的初步分离从酸乳和泡菜样品中，利用ＭＲＳ固体培养基、Ｅ１１ｉｋｅｒ固体培养基和Ｍ１７固体培养基分离得到了２４４个分离株。
经过菌落形态、革兰氏染色、接触酶实验排除了３株革兰氏阴性细菌，２株接触酶阳性细菌和４株酵母，得到２３５株乳酸菌分离株。
２．２利用平板菌落拉丝初步筛选产胞外多糖的乳酸菌将２３５株乳酸菌在ＭＲＳ筛选培养基上进行划线分离，观察菌落特征。
乳酸菌在ＭＲＳ筛选培养基上有３种不同的菌落表型，分别为粘丝菌落（如图２Ａ和图２Ｂ）、粘液菌落（如图２Ｃ）和非粘菌落（图略）。
作为生物高分子，胞外多糖能够使菌落具有较大的粘度，在外力作用下呈现出拉丝状，因此可以根据这一特性来对产胞外多糖乳酸菌进行初筛。
在２３５株乳酸菌中有２８％表现出粘丝状的特征。
图２ＭＲＳ筛选培养基上的粘丝状茵落（Ａ和Ｂ）和粘液状菌落（Ｃ）１６Ｉ至Ｑ塑∑鱼！：丝型Ｑ：Ｑ！鱼！！璺曼２相关性，这表明菌落拉丝法是一种简便而有效的产胞水平都比较高。
将分离菌株ＹＨＯＣｌ３７接种于无菌外多糖乳酸菌的筛选方法，可以用于产胞外多糖乳酸脱脂奶（质量分数为１２％），如图４，ＹＨＯＣｌ３７能够菌的广泛筛选。
结合表１和表２可以看出，当菌落拉赋予发酵乳良好的高粘度，也证明了菌落拉丝法作为丝长度在４０ｍｍ以上时，分离菌株的产胞外多糖的初筛方法的可行性。
２．５筛选菌种的微生物学鉴定分离株ＢＴ０８９８、ＮＹＣ３０和ＹＨＯＣｌ３７的细胞形态如图５所示，３株产胞外多糖菌株均为短杆菌。
利用法国梅里埃公司的ＡＰＩ细菌鉴定系统对３株产胞外多糖的乳酸菌进行鉴定（碳水化合物发酵情况略），分别鉴定为短乳杆菌（Ｌ口以。
沈ｃ删“ｓ６化讲ｓ）ＢＴ０８９８、植物乳杆菌（Ｌ口ｃ￡ｏ沈ｃⅢ“ｓｐ如ｎ￡口似ｍ）ＮＹＣ３０和鼠李糖乳杆菌（Ｌ口ｃｆＤ６口以Ｚｚ“ｓｒ．｝ｌ口ｍ加５“５）ＹＨＯＣｌ３７。
图４ＹＨｏＣｌ３７菌株使发酵牛乳形成良好的粘度Ａ—Ｌ．６卵们５ＢＴ０８９８；Ｂ—Ｌ．户Ｚ口ｔｌ缸九‘ｍＮＹＣ３０ｌＣ—Ｌ．ｒ＾ｎ枷ｏ，口ｓＹＨｏＣｌ３７图５三株产脆外多糖菌株的细胞形态（１０００×）３结论根据产胞外多糖乳酸菌的性质，开发了一种产胞外多糖的乳酸茵的简便初筛方法——菌落拉丝法。
该方法简便有效，不需要复杂的仪器设备和特殊的化学试剂，适合进行广泛的菌种初筛。
从自然发酵酸乳和发酵蔬菜中分离得到了３株产胞外多糖较高的乳酸菌，利用ＡＰＩ细菌鉴定系统分别被鉴定为短乳杆菌、植物乳杆菌和鼠李糖乳杆菌，为功能性产胞外多糖乳酸菌发酵剂的开发和应用奠定了良好的基础。
参考文献１ＢｏｌｌｚａｒＦ，ＣｅｒｎｉｎｇＪ，Ｄｅｓｍ配ｅａｕｄＭ．Ｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎａｎｄｔｅｘｔｕｒｅ－ｐｒｏｍｏｔｉｎｇａｂｉｌｉｔｉｅｓｏｆｍｉｘｅｄ＿ｓｔｒａｉｎｓｔａｒｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅｓｉｎｙｏｇｕｒｔｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ［Ｊ］．ＪＤａｉｒｙｓｃｉ，１９９７，８０（１０）：２３１０～２３１７２ＤｅＶｕｙｓｔＬ，ＺａｍｆｉｒＭ，ＭｏｚｚｉＦ，ｅｔａ１．Ｅ】【ｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａ—ｒｉｄｅ－ｐｒｏｄｕｃｉｎｇＳ￡心户￡Ｄ∞ｃｃ“ｓ珈ＰｒｍＤ户＾ｉＺ“５ｓｔｒａｉｌｌｓ觞ｆｕｎｃ—ｔｉｏｎａｌｓｔａｒｔｅｒｃｕｌｔｕｒｅｓｉｎｔｈｅＤｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｆｅｒｍｅｎｔｅｄｍｉｌｋｓ［Ｊ］．ＩｎｔＤａｉｒｙＪ，２００３，１３（８）：７０７～７１７３ＤｕｂｏｃＰ，ＭｏｌｌｅｔＢ．ＡｐｐｌｉｃａｔｉｏｎｓｏｆｅｘｏｐｏＩｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｔｈｅｄａｉｒｙｉｎｄｕｓｔｒｙ［Ｊ］。
ＩｎｔＤａｉｒｙＪ，２００１，１１（９）：７５９～７６８４０ｄａＭ，ＮａｋａｍｕｒａＳ，ＫｏｍａｔｓｕＳ，ｅｔａ１．Ｐｈｙｓｉｏｌｏｇｉｃａｌ１８ｌ—ｔｉｖｉｔｉｅ８ｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙＬ＿口ｃｔ０６口ｃｉＺＺ“ｓｓｐ．［Ｊ］．ＪｐｎＪＡｎｔｉｂｉｏｔ，１９８２，３５（１２）：２７４８～２７５４５ＯｄａＭ，ＨａｓｅｇａｗａＨ，ＫｏｍａｔｓｕＳ，ｅｔａ１．Ａｎｔｉ－ｔｕｍｏｒｐｏｌ—ｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｆｒｏｍＬ口ｃ￡Ｄ６咀ｃｉｚｚ乱ｓｓｐ．［Ｊ］．ＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌａｎｄＢｉｏｌｏｇｉｃａｌＣｈｅｍｉｓｔｒｙ，１９８３，４７（７）：１６２３～１６２５６ＲｉｃｃｉａｒｄｉＡ，ＰａｒｅｎｔｅＥ，ＣｌｅｍｅｎｔｉＦ．Ａｓｉｍｐｌｅｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇｏｆｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｆｏｒｔｈｅｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎｏｆｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｌｉｑｕｉｄｍｅｄｉａ．［Ｊ］．ＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌＴｅｃｈ，１９９７，１１（５）：２７１～２７５７ＲｉｍａｄａＰＳ，ＡｂｒａｈａｍＡＧ．Ｃｏｍｐａｒａｔｉｖｅｓｔｕｄｙｏｆｄｉｆｆｅｒ—ｅｎｔｍｅｔｈｏｄｏｌｏｇｉｅｓｔｏｄｅｔｅｍｉｎｅｔｈｅｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｐｒｏ—ｄｕｃｅｄｂｙｋｅｆｉｒｇｒａｉｎｓｉｎｍｉｌｋａｎｄｗｈｅｙ［Ｊ］．Ｌａｉｔ，２００３，８３（１）：７９～８７８Ｒｕａｓ＿ＭａｄｉｅｄｏＰ，ｄｅｌｏｓＲｅｙｅｓ—ＧａｖｉｌａｎＣＧ．ＩＩｌｖｉｔｅｄｖｉｅｗ：ｌ讧ｅｔｈｏｄｓｆｏｒｔｈｅｓｃｒｅｅｎｉｎｇ，ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ａｎｄｃｈａｒａｃｔｅｒ—ｉｚａｔｉｏｎｏｆｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｐｒｏｄｕｃｅｄｂｙｌａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅ—ｒｉａ［Ｊ］．ＪＤａｉｒｙＳｃｉ，２００５，８８（３）：８４３～８５６９ＳｍｉｔｉｎｏｎｔＴ，ＴａｎｓａｋｕｌＣ，ＴａｎａｓｕｐａｗａｔＳ，ｅｔａｌＥｘｏｐｏ—ｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｐｒｏｄｕｃｉｎｇＩａｃｔｉｃａｃｉｄｂａｃｔｅｒｉａｓｔｒａｉ∞ｆｒｏｍｔｒａ—ｄｉｔｉｏｎａｌｔｈａｉｆｅｒｍｅｎｔｅｄｆｏｏｄｓ：ｉｓｏｌａｔｉｏｎ，ｉｄｅｎｔｉｆｉｃａｔｉｏｎａｎｄｅｘｏｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｈａｒａｃｔｅｒｉｚａｔｉｏｎ［Ｊ］．ＩｎｔＪＦｏｏｄＭｉｃｒｏｂｉ—ｏｌ，１９９９，５１（２～３）：１０５～１１１１０刘丽波，李春，孟祥晨．１株高产ＥＰＳ嗜热链球菌的筛选及培养条件优化［Ｊ］．中国食品学报２００７，７（３）：６４～６８１１潘道东，吴玲．高产胞外多糖（ＥＰＳ）乳酸菌菌株的筛选与鉴定［Ｊ］．食品科学，２００７，２８（０３）。
１７１～１７４产胞外多糖的乳酸菌的简便筛选与鉴定作者：田丰伟， 丁虎生， 丁纳， 赵建新， 张灏， 陈卫， Tian Fengwei， Ding Husheng，Ding Na， Zhao Jianxin， Zhang Hao， Chen Wei作者单位：田丰伟,丁虎生,丁纳,赵建新,陈卫,Tian Fengwei,Ding Husheng,Ding Na,ZhaoJianxin,Chen Wei(江南大学食品学院,江苏无锡,214122)， 张灏,Zhang Hao(江南大学食品学院,江苏无锡,214122;江南大学食品科学与技术国家重点实验室,江苏无锡,214122)刊名：食品与发酵工业英文刊名：FOOD AND FERMENTATION INDUSTRIES年，卷(期)：2008，34(3)被引用次数：2次1.Bouzar F.Cerning J.Desmazeaud M Exopolysaccharide production and texture-promoting abilities of mixed-strain starter cultures in yogurt production 1997(10)2.De Vuyst L.Zamfir M.Mozzi F Exopolysaccharide-producing Streptococcus thermophilus strains as functional starter cultures in the production of fermented milks 2003(08)3.Duboc P.Mollet B Applications of exopolysaccharides in the dairy industry 2001(09)4.Oda M.Nakamura S.Komatsu S Physiological activities of polysaccharide produced by Lactobacillus sp 1982(12)5.Oda M.Hasegawa H.Komatsu S Anti-tumor polysaccharide from Lactobacillus sp 1983(07)6.Ricciardi A.Parente E.Clementi F A simplemet hod for the screening of lactic acid bacteria for the production of exopolysaccharides in liquid media 1997(05)7.Rimada P S.Abraham A G Comparative study of different methodologies to determine the exopolysaccharide produced by kefir grains in milk and whey 2003(01)8.Ruas-Madiedo P.de los Reyes-Gavilan C G Invited review:Methods for the screening,isolation,and characterization of exopolysaccharides produced by lactic acid bacteria 2005(03)9.Smitinont T.Tansakul C.Tanasupawat S Exopolysaccharide producing laerie acid bacteria strains from traditional thai fermented foods:isolation,identification and exopolysaccharide characterization 1999(2-3)10.刘丽波.李春.孟祥晨1株高产EPS嗜热链球菌的筛选及培养条件优化[期刊论文]-中国食品学报 2007(03)11.潘道东.吴玲高产胞外多糖(EPS)乳酸菌菌株的筛选与鉴定[期刊论文]-食品科学 2007(03)12.de Man J C.Rogosa M.Sharpe M E A medium for the cultivation of lactobacilli 196013.BD Diagnostic Systems Difco Mannal:Manual of Microbiological Culture Media 200314.凌代文.东秀珠乳酸细菌分类鉴定及实验方法 199915.DuBois M.Gilles K A.Hamilton J K Colorimetric method for determination of sugars and related substances 1956(03)1.期刊论文王迎华.曹郁生.陈燕.高丹丹.Wang Yinghua.Cao Yusheng.Chen Yan.Gao Dandan产胞外多糖乳酸菌筛选及胞外多糖提取方法-乳业科学与技术2007,30(4)从实验室保存及市售泡菜和发酵乳中分离的乳酸菌中进行筛选,通过黏度和EPS产量的测定,筛选出一株高产EPS的乳酸菌,为实验室保存菌株干酪乳杆菌,黏度为354.04 mPa·s,产量为731.58 mg/L.EPS提取过程中,比较了Sevag法和三氯乙酸法两种除蛋白方法,8%三氯乙酸除蛋白的方法效果最好.2.期刊论文杨贞耐.张雪.YANG Zhen-nai.ZHANG Xue乳酸菌胞外多糖的流变学特性和分子结构修饰-食品科学2007,28(12)乳酸菌胞外多糖在乳品加工中具有重要作用.在发酵过程中,胞外多糖的形成有利于改善产品的流变学特性,并赋予产品优良的感官特性和营养保健性能.不同的乳酸菌在胞外多糖的产量、化学组成、分子量、带电情况和侧链分支等方面具有很大差异.通过对胞外多糖进行分子结构修饰,可以优化其功能特性,并获得具有特定用途的食品改良剂.有些乳酸菌胞外多糖具有抗肿瘤和免疫调节活性,有益于人类健康;或者可能用作益生元,有益于胃肠道菌群微生态平衡.本文着重讨论乳酸菌胞外多糖的流变学特性和多糖的分子结构修饰,探讨胞外多糖结构与功能的关系.3.学位论文马静乳酸菌产生的胞外多糖及其在乳品中的应用研究2004该项研究旨在探索乳酸菌产胞外多糖的机理,优化其胞外多糖的发酵条件,初步应用乳酸菌产胞外多糖菌株到不同固体物含量的发酵乳生产中,为乳酸菌胞外多糖的研究和开发工作提供参考依据.研究了嗜热链球菌ST、MY800、MYE和保加利亚乳杆菌Y-5四株乳酸菌随时间产胞外多糖的情况,结果表明,37℃培养24h时,四株乳酸菌胞外多糖的产量最高.碳源是影响乳酸菌胞外多糖产量的显著因素,嗜热链球菌ST、MY-800、MYE和保加利亚乳杆菌Y-5分别以葡萄糖、乳糖、半乳糖、蔗糖和果糖作为碳源时,ST、MYE和Y-5菌株的最佳碳源为果糖,MY-800菌株的最佳碳源为蔗糖;在同一碳源条件下不同乳酸菌菌株其胞外多糖的产量相差较大.氮源试验表明,嗜热链球菌ST、MY-800、MYE和保加利亚乳杆菌Y-5分别以胰蛋白胨和鱼蛋白胨作为氮源时,ST、MY-800、MYE菌株的最佳氮源是胰蛋白胨,Y-5菌株在以鱼蛋白胨作为氮源时胞外多糖的产量较高.碳氮比试验表明,嗜热链球菌ST、MY-800、MYE和保加利亚乳杆菌Y-5在碳氮比分别为1:1、1:2、2:1、2:3的情况下,ST和MY-800菌株的最适碳氮比为1:2,MYE菌株的最适碳氮比为2:3,而Y-5菌株在碳氮比2:1时胞外多糖的产量最高.应用正交试验确定了四株乳酸菌产胞外多糖的最佳条件.ST菌株胞外多糖产量的最佳条件为:培养温度为40℃,发酵时间为24h,初始pH值为7.0,葡萄糖添加量为2％;MY-800菌株胞外多糖产量的最佳条件为:培养温度为40℃,发酵时间为16h,初始pH值为6.0,葡萄糖添加量为6%;MYE菌株胞外多糖产量的最佳条件为:培养时间为24h,培养温度为40℃,初始pH值为6.0,葡萄糖添加量为2%;Y-5菌株胞外多糖产量的最佳条件为:培养温度为40℃,发酵时间为16h,初始pH值为6.0,葡萄糖添加量为2%.金属离子对乳酸菌胞外多糖水解酶的影响试验表明,K<'+>和Mg<'2+>对胞外多糖水解酶的活性有促进作用,可以降低乳酸菌胞外多糖的产量;而Cu<'2+>和Mn<'2+>这两种金属离子对胞外多糖水解酶的活性有强烈的抑制作用,可以提高乳酸菌胞外多糖的产量.研究表明,乳酸菌胞外多糖具有较好的持水能力,以6%固体物含量的乳进行发酵,仍能生产出质地状态较好的酸奶,并长时间维持发酵乳高的活菌数和有效抑制后酸化.4.期刊论文李清春.张景强.贺稚非乳酸菌胞外多糖的研究-电子科技大学学报2003,32(6)分析了产胞外多糖乳酸菌的种类,同型胞外多糖和异型胞外多糖的生物合成途径与遗传调控,以及影响发酵生产的因素.总结了乳酸菌胞外多糖的分离、纯化、纯度鉴定的方法及乳酸菌胞外多糖的重要结构单元与功能之间的相互关系.揭示出乳酸菌胞外多糖在食品、医药领域巨大的潜在应用价值.5.期刊论文张筠.刘宁.孟祥晨乳酸菌胞外多糖的生物学活性-国外医学(卫生学分册)2004,31(4)乳酸菌胞外多糖在现代生活的许多领域发挥着重要的作用.据报道产胞外多糖的乳酸菌对人体的保健作用与其产生的胞外多糖的生物学活性密切相关.本文主要综述了乳酸菌胞外多糖的抗肿瘤活性、免疫调节活性及调节胃肠道功能等方面的生物学活性,并介绍了其应用及展望.6.学位论文白丽娟马奶酒乳酸菌胞外多糖生物合成条件的研究2006本项研究主要以内蒙古锡林郭勒牧区马奶酒为样品，进行了马奶酒发酵菌的活化、分离、纯化，共分离到乳酸菌41株。