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实验原理
核酸分子杂交技术是分子生物学领域中最 常用的具体方法之一。其基本原理是：具有一 定同源性的两条核酸单链在一定的条件下，可 按碱基互补的原则形成双链，此杂交过程是高 度特异的。由于核酸分子的高度特异性及检测 方法的灵敏性，综合凝胶电泳和核酸内切限制 酶分析的结果，便可绘制出DNA分子的限制图 谱。但为了进一步构建出DNA分子的遗传图， 或进行目的基因序列的测定以满足基因克隆的 特殊要求，还必须掌握DNA分子中基因编码区 的大小和位置。有关这类数据资料可应用 Southern印迹杂交技术获得。
Southern印迹杂交技术包括两个主要过程：一是 将待测定核酸分子通过一定的方法转移并结合到一定 的固相支持物（硝酸纤维素膜或尼龙膜）上，即印迹 （blotting）;二是固定于膜上的核酸同位素标记的探针 在一定的温度和离子强度下退火，即分子杂交过程。 该技术是1975年英国爱丁堡大学的E.M.Southern首创的， Southern印迹杂交故因此而得名。
（二） 步骤 1.将标记的DNA探针置沸水 浴10min，迅速置冰上冷却1-2min，使DNA变 性。 2.从水浴中取出含有滤膜和预杂交液 的塑料袋，剪开一角，将变性的DNA探针加到 预杂交液中。 3.尽可能除取袋中的空气， 封住袋口，滞留在袋中的气泡要尽可能地少， 为避免同位素污染水浴，将封好的杂交袋再封 入另一个未污染的塑料袋内。 4.置42℃水 浴温育过夜（至少18h）。
早期的Southern印迹是将凝胶中的DNA变性后， 经毛细管的虹吸作用，转移到硝酸纤维膜上。近年来 印迹方法和固定支持滤膜都有了很大的改进，印迹方 法如电转法、真空转移法；滤膜则发展了尼龙膜、化 学活化膜（如APT、ABM纤维素膜）等。利用Southern 印迹法可进行克隆基因的酶切、图谱分析、基因组中 某一基因的定性及定量分析、基因突变分析及限制性 片断长度多态性分析（RFLP）等。
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实验步骤
一、 待测核酸样品的制备 二、 琼脂糖凝胶电泳分离待测DNA样品 三、电泳凝胶预处理 四、转膜 五、探针标记 六、预杂交（prehybridizafion） 七、Southern杂交 八、洗膜 九、放射性自显影检测
（一）原理 转印后的滤膜在预杂交液中温 育4-6h，即可加入标记的探针DNA（探针DNA 预先经加热变性成为单链DAN分子），即可进 行杂交反应。杂交是在相对高离子强度的缓冲 盐溶液中进行。杂交过夜，然后在较高温度下 用盐溶液洗膜。离子强度越低，温度越高，杂 交的严格程度越高，也就是说，只有探针和待 测顺序之间有非常高的同源性时，才能在低盐 高温的杂交条件下结合。
Southern印迹杂交
Southern印迹杂交是进行基因组DNA特定 序列定位的通用方法。一般利用琼脂糖 凝胶电泳分离经限制性内切酶消化的 DNA片段，将胶上的DNA变性并在原位 将单链DNA片段转移至尼龙膜或其他固 相支持物上，经干烤或者紫外线照射固 定，再与相对应结构的标记探针进行杂 交，用放射自显影或酶反应显色，从而 检测特定DNA分子的含量
主要应用
1.遗传病诊断 2.DNA图谱分析 3.PCR产物分析
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