微生物检验与临床ppt课件
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《微生物检验学》PPT课件
（３）人痘接种法：免疫最早概念。
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Baidu Nhomakorabea
8
2．实验微生物学时期（17世纪始）：
显微镜＋培养基
（１） 微生物的发现：列文虎克、巴斯德（发现微 生物的作用，创立巴氏消毒法）、李斯特、郭霍氏 （固体培养、染色技术）
郭霍氏法则：①、②、③、④。 逐渐被淘汰。
新的病原确定方法：核酸确定法
（２） 免疫学的兴起、分离：
革兰氏阴性菌 较疏松
薄，5～10nm
多，可达50层 少，1～3层
多，可占胞壁干 少，占胞壁干重
重50～80%
10～20%
+
-
-
+
三维空间（立体 二维空间（平面
结构）
结构）
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23
Ｌ型细菌：细胞壁缺陷型细菌。 高渗培养基中：油煎蛋样菌落。 在临床上注意Ｌ型带来的漏诊。
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24
临床微生物学(clinical microbiology)：测重 研究感染性疾病诊断方法，提供诊断依据和指 导用药。
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7
三、医学微生物学发展简史
1、微生物学的经验时期：
（１）酿酒、制醋、腌腊等食品生产、保存； （２）师道南《天愚集》：清乾隆年间，“东死鼠，西
死鼠，人见死鼠如见虎。鼠死未几日，人死如圻堵”； “三人行未十步路， 忽死两人横截路”
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8
2．实验微生物学时期（17世纪始）：
显微镜＋培养基
（１） 微生物的发现：列文虎克、巴斯德（发现微 生物的作用，创立巴氏消毒法）、李斯特、郭霍氏 （固体培养、染色技术）
郭霍氏法则：①、②、③、④。 逐渐被淘汰。
新的病原确定方法：核酸确定法
（２） 免疫学的兴起、分离：
革兰氏阴性菌 较疏松
薄，5～10nm
多，可达50层 少，1～3层
多，可占胞壁干 少，占胞壁干重
重50～80%
10～20%
+
-
-
+
三维空间（立体 二维空间（平面
结构）
结构）
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23
Ｌ型细菌：细胞壁缺陷型细菌。 高渗培养基中：油煎蛋样菌落。 在临床上注意Ｌ型带来的漏诊。
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24
临床微生物学(clinical microbiology)：测重 研究感染性疾病诊断方法，提供诊断依据和指 导用药。
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7
三、医学微生物学发展简史
1、微生物学的经验时期：
（１）酿酒、制醋、腌腊等食品生产、保存； （２）师道南《天愚集》：清乾隆年间，“东死鼠，西
死鼠，人见死鼠如见虎。鼠死未几日，人死如圻堵”； “三人行未十步路， 忽死两人横截路”
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引起水痘、带状疱疹等疾病
真菌类病原微生物
01
02
03
白色念珠菌
引起口腔、阴道等部位的 感染
曲霉菌
导致肺部、皮肤等部位的 感染
毛霉菌
引起鼻脑型、肺型、胃肠 型等感染
其他类型病原微生物
支原体
衣原体
立克次体
螺旋体
引起肺炎、尿道炎等疾 病
导致沙眼、性病淋巴肉 芽肿等疾病
引起斑疹伤寒、恙虫病 等疾病
导致梅毒、钩端螺旋体 病等疾病
生物芯片技术
将大量特异性探针固定在芯片上，通 过与待测微生物DNA杂交来鉴定其种 类和型别。
荧光定量PCR技术
通过荧光染料标记特异性引物，实时 监测PCR扩增过程，实现微生物的快 速定量检测。
免疫学检验技术在微生物检测中应用
酶联免疫吸附试验（ELISA）
01
利用酶标记的抗原或抗体与待测样品中的抗体或抗原结合，通
呼吸道标本中常见病原微生物检测实例分析
1 2 3
咽拭子培养 通过无菌操作采集患者咽部分泌物，接种到适当 的培养基中，观察是否有细菌或真菌生长。
痰培养 将患者咳出的痰液接种到适当的培养基中，观察 是否有细菌或真菌生长，进一步确定病原微生物 的种类。
免疫学检测 利用特异性抗体与病原微生物抗原结合的原理， 通过免疫学方法检测呼吸道分泌物中的病原微生 物。
微生物生长与繁殖
真菌类病原微生物
01
02
03
白色念珠菌
引起口腔、阴道等部位的 感染
曲霉菌
导致肺部、皮肤等部位的 感染
毛霉菌
引起鼻脑型、肺型、胃肠 型等感染
其他类型病原微生物
支原体
衣原体
立克次体
螺旋体
引起肺炎、尿道炎等疾 病
导致沙眼、性病淋巴肉 芽肿等疾病
引起斑疹伤寒、恙虫病 等疾病
导致梅毒、钩端螺旋体 病等疾病
生物芯片技术
将大量特异性探针固定在芯片上，通 过与待测微生物DNA杂交来鉴定其种 类和型别。
荧光定量PCR技术
通过荧光染料标记特异性引物，实时 监测PCR扩增过程，实现微生物的快 速定量检测。
免疫学检验技术在微生物检测中应用
酶联免疫吸附试验（ELISA）
01
利用酶标记的抗原或抗体与待测样品中的抗体或抗原结合，通
呼吸道标本中常见病原微生物检测实例分析
1 2 3
咽拭子培养 通过无菌操作采集患者咽部分泌物，接种到适当 的培养基中，观察是否有细菌或真菌生长。
痰培养 将患者咳出的痰液接种到适当的培养基中，观察 是否有细菌或真菌生长，进一步确定病原微生物 的种类。
免疫学检测 利用特异性抗体与病原微生物抗原结合的原理， 通过免疫学方法检测呼吸道分泌物中的病原微生 物。
微生物生长与繁殖
微生物检验与临床沟通ppt课件
科室现有任务才干
❖ 购买迪尔细菌鉴定及药敏一台，它配套运用 的是迪尔的细菌鉴定加药敏板，药敏含细菌 的最小抑菌浓度，药物种类及药敏结果全是 根据CLSI国际规范制定，同时提示临床选用 A组B组及C组D组药物
抗菌药物临床运用的根本原那么
❖ (一)、应及早确立病原学诊断 ❖ 确立病原学诊断为合理选用抗菌药物的先决条件。
应尽一切努力及早分别出致病菌。在开场用抗菌药 物治疗前，根据患者不同病情对一些体液、渗出液 标本的直接镜检或革兰染色镜检，是寻觅病原菌最 简便和有用的方法。抽血送培育可提高感染性心内 膜炎、败血症的病菌检出率。痰中杂菌较多，送检 前，应清洁口腔、鼓励患者深咳嗽以获得较称心的 标本、并作涂片和培育。败血症患者的皮疹，特别 是淤点的涂片中也有查见病原菌的时机，不可忽视。
谢 谢！
Fra Baidu bibliotek
.明明是一包脓液，结果却是无细菌生 长
❖ 脓液组成物：是坏死的白细胞和溶解的细菌及组织 碎片和组织液
❖ 采集伤口留意：尽量采新颖组织，同时做涂片检查 做对照
❖ 涂片有菌而培育无菌疑心厌氧菌感染
❖ 涂片全为脓细胞而无细菌、培育也无菌，取材能够 不到位
❖ 无菌性炎症
伤口标本采集要求
❖ 1、在伤口切开排脓时留取标本 ❖ 2、不能在伤口清洁消毒后留取标本 ❖ 3、尽量采集伤口深部的浓汁送检
❖ 据了解，郑大一附院每天有300余份标本，每 天的阳性报告也只需100份左右，阳性率40% 左右，我院去年的阳性率是43%,阐明我院细 菌培育阳性率也处在一个正常程度，并不是 我们程度差而导致这几年细菌培育及药敏任 务开展不断不好。
微生物检验PPT课件
• 同一来源的链状菌落 作为一个菌落。
霉菌、酵母菌计数
• 检样-----做成几个适当倍数的稀释液-----选择3个适宜稀释度,各取1ml分别加入灭 菌培养基内------每皿内加入适量培养基----- 25~28ºC下培养5d ------菌落计数-----报告
菌落总数PK霉菌、酵母菌
• 营养琼脂
• 选择菌落数在 30~300之间的平板 进行计数，两个平 板的平均数乘以稀 释倍数报告。
• 平板菌落均数在15以 下:0~4,1~7,2~9,3~10,4~1 2,5~14,6~15,7~17,8~18,9 ~19,10~20.
• 有较大片状菌落生长 的平板不宜采用
• 片状菌落不到平板的 一半而其余一半中菌 落分布均匀，计算半 个平板后乘以2计数。
志贺氏菌检验
• 兼性厌氧的革兰氏阴性，最适生长温度 37 ºC，对营养要求不高,能在普通培养基 上生长.
菌落总数测定
• 在一定条件（如培养成分、培养温度和 时间、PH、需氧性质等）下培养后，所 得1ml（g）检样中所含菌落的总数。所 得结果只包括一群在营养琼脂上生长发 育的嗜中温性需氧的菌落总数。
菌落总数测定
• 检样-----做成几个适当倍数的稀释液-----选择2个或3个适宜稀释度,各取1ml分别加 入灭菌培养基内------每皿内加入适量营 养琼脂培养基------ 36 ±1ºC下培养48 ±2h ------菌落计数------报告
霉菌、酵母菌计数
• 检样-----做成几个适当倍数的稀释液-----选择3个适宜稀释度,各取1ml分别加入灭 菌培养基内------每皿内加入适量培养基----- 25~28ºC下培养5d ------菌落计数-----报告
菌落总数PK霉菌、酵母菌
• 营养琼脂
• 选择菌落数在 30~300之间的平板 进行计数，两个平 板的平均数乘以稀 释倍数报告。
• 平板菌落均数在15以 下:0~4,1~7,2~9,3~10,4~1 2,5~14,6~15,7~17,8~18,9 ~19,10~20.
• 有较大片状菌落生长 的平板不宜采用
• 片状菌落不到平板的 一半而其余一半中菌 落分布均匀，计算半 个平板后乘以2计数。
志贺氏菌检验
• 兼性厌氧的革兰氏阴性，最适生长温度 37 ºC，对营养要求不高,能在普通培养基 上生长.
菌落总数测定
• 在一定条件（如培养成分、培养温度和 时间、PH、需氧性质等）下培养后，所 得1ml（g）检样中所含菌落的总数。所 得结果只包括一群在营养琼脂上生长发 育的嗜中温性需氧的菌落总数。
菌落总数测定
• 检样-----做成几个适当倍数的稀释液-----选择2个或3个适宜稀释度,各取1ml分别加 入灭菌培养基内------每皿内加入适量营 养琼脂培养基------ 36 ±1ºC下培养48 ±2h ------菌落计数------报告
微生物学检验PPT课件
败血症：病原菌侵入血流，生长繁殖，造成明显 损害，出现全身中毒症状。
脓毒血症：化脓性细菌由病灶侵入血流后，在其 中大量繁殖，并随血流向全身扩散，在组织中形 成多发性化脓性病灶。
毒血症：病原菌在机体局部生长繁殖，不入血， 但其释放的毒素可入血，引起特殊临床症状。
机体的抗菌免疫
非特异性免疫 特异性免疫
神经毒素： 细胞毒素 肠毒素
内毒素毒性作用
致热作用 白细胞反应 内毒素血症及内毒素性休克 弥漫性血管内凝血（DIC）
细菌内、外毒素的比较
区别要点 来源
化学成分 稳定性 抗原性
毒性作用
外毒素
内毒素
G+菌和少数G－菌，多分 G－菌细胞壁，菌
泌至菌体外
体裂解后释放
蛋白质
脂多糖
不稳定，
稳定
强，刺激机体产生抗毒素，经甲醛处理不能制 可被甲醛脱毒制成类毒素 成类毒素
体外的毒性物质。 ★内毒素：是革兰阴性菌细胞壁外层的结构，当细
菌死亡后游离出来。
外毒素特性
主要由G+菌和少数G-菌产生 大部分产生之后分泌到菌体细胞外 化学成分是蛋白质，通常不耐热 毒性极强 对组织细胞有高度的选择性 抗原性强，经甲醛脱毒后制成类毒素用 于预防接种
外毒素分类
（根据外毒素对宿主的亲和性、作用机制分类）
革兰阳性菌 染色结果图
革兰阴性菌
脓毒血症：化脓性细菌由病灶侵入血流后，在其 中大量繁殖，并随血流向全身扩散，在组织中形 成多发性化脓性病灶。
毒血症：病原菌在机体局部生长繁殖，不入血， 但其释放的毒素可入血，引起特殊临床症状。
机体的抗菌免疫
非特异性免疫 特异性免疫
神经毒素： 细胞毒素 肠毒素
内毒素毒性作用
致热作用 白细胞反应 内毒素血症及内毒素性休克 弥漫性血管内凝血（DIC）
细菌内、外毒素的比较
区别要点 来源
化学成分 稳定性 抗原性
毒性作用
外毒素
内毒素
G+菌和少数G－菌，多分 G－菌细胞壁，菌
泌至菌体外
体裂解后释放
蛋白质
脂多糖
不稳定，
稳定
强，刺激机体产生抗毒素，经甲醛处理不能制 可被甲醛脱毒制成类毒素 成类毒素
体外的毒性物质。 ★内毒素：是革兰阴性菌细胞壁外层的结构，当细
菌死亡后游离出来。
外毒素特性
主要由G+菌和少数G-菌产生 大部分产生之后分泌到菌体细胞外 化学成分是蛋白质，通常不耐热 毒性极强 对组织细胞有高度的选择性 抗原性强，经甲醛脱毒后制成类毒素用 于预防接种
外毒素分类
（根据外毒素对宿主的亲和性、作用机制分类）
革兰阳性菌 染色结果图
革兰阴性菌
微生物检验技术 PPT课件
七、微生物的菌种保藏
七、微生物菌种保藏
微生物的生长需要一定的水分，适宜 的温度和合适的营养，菌种保藏就是根据 菌种特性及保藏目的的不同，给微生物菌 株以特定的条件，使其存活而得以延续。
七、微生物菌种保藏
（一）菌种保藏的目的和意义 （二）菌种保藏原理 （三）菌种保藏的方法 （四）菌种的衰退与复壮
（一）菌种保藏的目的和意义
（四） 菌种的衰退与复壮
2、菌种衰退的实质
菌种的衰退是发生在细胞群体中的一个由量 变到质变的逐步演变过程。 注意：开始时，在一个大群体中仅个别细胞发生 负变，这时如不及时发现并采取有效措施，而 一味移种传代，则群体中这种负变个体的比例 逐步增大，最后让它们占了优势，从而使整个 群体表现出严重的衰退。 所以，在开始时所谓“纯”的菌株，实际上其中 已包含着一定程度的不纯因素；同样，到了后 来，整个菌种虽已“衰退”了，但也是不纯的， 即其中还有少数尚未衰退的个体存在着。
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现 2、菌种衰退的实质 3、菌种的复壮
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现
（1）生长速度缓慢，产孢子越来越少。 （2）代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力的下 降。 （3）其他原有的典型性状变得不典型，如：最易 觉察到的是菌落和细胞形态的改变。 （4）对产量性状来说，菌种的负变就是衰退。 （5）抗不良环境条件（抗噬菌体、抗低温等）能 力的减弱等。
七、微生物菌种保藏
微生物的生长需要一定的水分，适宜 的温度和合适的营养，菌种保藏就是根据 菌种特性及保藏目的的不同，给微生物菌 株以特定的条件，使其存活而得以延续。
七、微生物菌种保藏
（一）菌种保藏的目的和意义 （二）菌种保藏原理 （三）菌种保藏的方法 （四）菌种的衰退与复壮
（一）菌种保藏的目的和意义
（四） 菌种的衰退与复壮
2、菌种衰退的实质
菌种的衰退是发生在细胞群体中的一个由量 变到质变的逐步演变过程。 注意：开始时，在一个大群体中仅个别细胞发生 负变，这时如不及时发现并采取有效措施，而 一味移种传代，则群体中这种负变个体的比例 逐步增大，最后让它们占了优势，从而使整个 群体表现出严重的衰退。 所以，在开始时所谓“纯”的菌株，实际上其中 已包含着一定程度的不纯因素；同样，到了后 来，整个菌种虽已“衰退”了，但也是不纯的， 即其中还有少数尚未衰退的个体存在着。
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现 2、菌种衰退的实质 3、菌种的复壮
（四） 菌种的衰退与复壮
1、菌种衰退的表现
（1）生长速度缓慢，产孢子越来越少。 （2）代谢产物生产能力或其对宿主寄生能力的下 降。 （3）其他原有的典型性状变得不典型，如：最易 觉察到的是菌落和细胞形态的改变。 （4）对产量性状来说，菌种的负变就是衰退。 （5）抗不良环境条件（抗噬菌体、抗低温等）能 力的减弱等。
临床微生物检验与临床ppt课件
100
0
0 25
0
0
采集1套无法判 断是病原菌还 是污染菌。
2－3套血培养，有助于污染的判断。
Tokars, JI. Clin Infect Dis 2004; 39:333
整理版课件
31
答 案 ：关于血培养套数与采血部位
每位患者每次采血最少2套，3套更好 初发患者，绝不能只采1套标本 多个穿刺部位采血。因多部位同时发
35
菌血症病人血中细菌浓度
成年病人: 链球菌心内膜炎 葡萄球菌心内膜炎 革兰氏阴性菌血症 革兰氏阳性菌血症
1 to 30 organisms/ml 1 to 20 organisms/ml 少于1 to 10 organisms/ml 1 to 300 organisms/ml
幼儿病人:
革兰氏阴性菌血症
30分钟内完成3套血培养的采集，采集后立即进
行抗菌药的经验治疗。如果24小时内报告阴性
，则继续采集2套血培养。
可疑的亚急性心内膜炎患者每间隔30分钟至1h
采集1套，连续采集3套标本。如果24小时内报
告阴性，则继续采集2套整血理版培课件养。
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——— 关于采血量 “每瓶采集多少血液无特殊要求。”
整理版课件
怀疑患者有血流感染的症状有：
不明原因的发烧(＞38℃)或体温过低(＜36℃)
白细胞增多（ ＞10,000/ul），粒细胞减少（ ＜1,000ul）
微生物学检验稿PPT课件
乳和乳制品
3
蛋制品
鲜蛋
鸡全蛋粉、巴氏消毒全蛋粉、鸡蛋黄粉、 鸡蛋白片断
冰鸡全蛋、巴氏消毒的冰鸡全蛋、冰蛋黄、 冰蛋白
（二）液体样品
原包装瓶样品取整瓶，散装样品可用无菌吸管或匙采取。 冷冻液体食品，采取原包装，放入隔热容器内。
（三）罐头
根据厂别、商标、品种来源等分类进行采取原包装样品。
4
（四）注意事项
糖类
名称
戊糖（C5H10O5）
阿拉伯糖（Arabinose）
木糖（xylose）
鼠李糖（rhamnose）
己糖（C6H12O11） 葡萄糖（glucose） 果糖（fructose）
甘露糖（mannose）
半乳糖（galactose）
三糖类（（C8H10O5）3） 棉子糖（raffinose） 落叶松糖（melizitose）
采样时，首先要了解采样食品的来源、生产时间、批 号、加工、贮藏、包装、运输等情况；
采样的器械和容器须灭菌后才可使用。采样时严格进 行无菌操作；
不得加防腐剂； 液体食品需搅拌均匀后采取，固体样品要在不同部位
采取，使样品尽量具有代表性； 取样后，应及时送检，最多不得超过4h。
5
二、处理
（一）固体样品 用无菌刀、剪或镊子称取不同部位样品10g，剪碎，
放入无菌容器内，加定量水，制成1：10混悬液，进 行检验。
临床微生物检验与临床-PPT课件
1947年链霉菌素上市，同年该药耐药菌出现 1952年四环菌素上市，1956年其耐药菌出现 1959年甲氧西林上市，1961年其耐药菌出现
细菌耐药性第一次提到了重要的日程
15
抗生素使用与细菌耐药变化
1964年头孢噻吩上市，1966年其耐药菌出现 1967年庆大霉素上市，1970年其耐药菌出现 1981年头孢噻肟上市，1983年其耐药菌出现 1996年，发现万古霉素耐药菌 2001年利奈唑胺上市，2002年其耐药菌出现
• 不管是采集合适的标本，还是解释培养出的 结果都存在难点。
• 因为繁忙和技术不够熟练或未接受培训的人 员可能会错误的采集和送检唾液到实验室。
• 通常需要反复送检痰培养，来确认真正的致 病株。
30
标本质量
脓痰
粘液样痰
唾液or诱导痰 (?)
带血痰 31
结果分析发现问题，怎么办？
32
阳性率低？
• 采样部位； • 采样操作； • 运送方式及时间； • 培养环境；
抗生素的发现
1944年Waksman自灰链霉菌培养中分离出可拮抗结核杆菌 的链霉素，于1952年荣获诺贝尔医学奖
1947年发明氯霉素 1947年发现多粘菌素 1948年发现金霉素 1949年发现新霉素 1950年发现土霉素 。。。
14
抗生素使用与细菌耐药变化
1943年青霉素大规模使用，1945年院内感染的 20%金黄色葡球菌对其产生抗性
细菌耐药性第一次提到了重要的日程
15
抗生素使用与细菌耐药变化
1964年头孢噻吩上市，1966年其耐药菌出现 1967年庆大霉素上市，1970年其耐药菌出现 1981年头孢噻肟上市，1983年其耐药菌出现 1996年，发现万古霉素耐药菌 2001年利奈唑胺上市，2002年其耐药菌出现
• 不管是采集合适的标本，还是解释培养出的 结果都存在难点。
• 因为繁忙和技术不够熟练或未接受培训的人 员可能会错误的采集和送检唾液到实验室。
• 通常需要反复送检痰培养，来确认真正的致 病株。
30
标本质量
脓痰
粘液样痰
唾液or诱导痰 (?)
带血痰 31
结果分析发现问题，怎么办？
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阳性率低？
• 采样部位； • 采样操作； • 运送方式及时间； • 培养环境；
抗生素的发现
1944年Waksman自灰链霉菌培养中分离出可拮抗结核杆菌 的链霉素，于1952年荣获诺贝尔医学奖
1947年发明氯霉素 1947年发现多粘菌素 1948年发现金霉素 1949年发现新霉素 1950年发现土霉素 。。。
14
抗生素使用与细菌耐药变化
1943年青霉素大规模使用，1945年院内感染的 20%金黄色葡球菌对其产生抗性
临床微生物检验培训课件
真菌
念珠菌、曲霉菌、隐球菌、球孢子菌
厌氧菌 拟杆菌、产气荚膜梭菌
临床微生物检验
4
2.血液标本的病原菌的检验
临床微生物检验
5
3.病原菌的检验程序
1.标本采集 2.标本直接检查
(1)直接显微镜检查; (2)抗原检测; (3)核酸检测; 3.分离培养与鉴定 (1)培养基选择; (2)分离培养与鉴定; 4.抗体检测 常用ELISA、间接免疫荧光技术等方法; 5.药物敏感性试验
临床微生物检验
30
四、肉汤稀释法
将抗菌药物作不同浓度的定量稀释，然后 与被测菌作用，测定抗菌药物对细菌的最小 抑制浓度（MIC）或最小杀菌浓度（MBC)。 抗菌药物最高稀释度仍能抑制细菌生长者， 该管含药浓度即为被测菌株的敏感度。
临床微生物检验
31
五、药物敏感试验结果解释
“敏感”即表示测试菌可被测定药物常规剂 量给药后在体内达到的血药浓度所抑制； “耐药”即表示测试菌不能被在体内感染部 位可能达到的抗菌药物浓度所抑制，临 床治疗无效。 “中介”者提示该细菌对常规用药体液或组 织中的药物浓度的反应率低于敏感株，使 用高于正常给药量有疗效。
5．厌氧菌菌血症 常合并需氧菌感染，症状重而复 杂。
6．真菌血症 常由条件致病性真菌引起，有念珠菌、 曲霉和毛霉等。
7．医院感染菌血症 近年来明显增多，占30％—60 ％。
临床微生物学检验ppt课件
临床微生物检验
意义及任务
细菌分类对临床工作的指导意义
• • • • • 对临床标本中分离出菌株进行鉴定和药敏实验 对感染疾病中感染源的确定和患者血清中抗体的评价 已有固定分类的标准菌株可用于对诊断试剂盒的鉴定 新菌株的发现 细菌分类学促进世界临床医学的交流
微生物室的临床检验任务
一、建立真确、快速的检验方法
参加医院感染管理委员会 及时正确的病原学报告 流行预报 建立医院感染监测的新技术 培训工作
• 定期和不定期的作细菌耐药趋势及病原学报告 • 提高医院感染管理人员和各级医务人员的细菌学基础 理论水平
手工
自动化仪器
发出微生物学临床检验报告
标本的接种
• 标本的种类： 大便、小便、痰、胸腹水、血、胆汁等 • 检验目的： 检查导致感染的病原菌 • 培养基的选择： 血平皿、麦康凯、伊红美兰、中国蓝、SS、TCBS等 • 孵育条件： 温度、湿度、CO2、厌氧等
营养丰富的非选择性平皿 （血平皿与巧克力平皿）
革兰氏阴性菌选择平皿 （伊红美兰与中国蓝）
检查菌痢选来自百度文库性平皿 （SS平皿）
细菌的分类
• • • • 需氧革兰氏阴性杆菌： 需氧革兰氏阳性球菌： 酵母菌： 厌氧菌：杆菌、球菌、梭菌
革兰氏阴性杆菌
革兰氏阳性葡萄球菌
革兰氏阳性链球菌
细菌鉴定及药敏实验
• 手工及半自动微生物检测： MicroScan Panel；API 板条 • 自动微生物仪器检测： AS/4；ATB；AutoReader • 全自动微生物仪器检测： WA/40；VITEK；SENSITITRE； PHOENIX 100 • 智能化全自动微生物仪器检测： WA/SI；VITEK II
微生物限度检验PPT课件
27
不可以接受的标准：
3、样品组：
- 三人三次的试验结果应该与检测限相符。
- 第一次的试验结果要能够被第二次和 第三次的试验证实。
- 任何一次与检测限不符的结果都说明 试验过程有缺陷，验证需重新进行。
28
优化更新步骤：
消除抑菌活性。 稀释样品时，应确认检测限（检验限度）低于
或等于标准。 不同的细菌，一个好的结果可以从不同的稀
铜绿假单胞菌(Staphylococcus aureus) 生孢梭菌(Clostridium sporogenes)
ATCC9027 ATCC11437
枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis) 白色年珠菌(Candida albicans)
ATCC6633 ATCC10231
黑曲霉菌(Candida albicans)
2005版中国药典：各试验菌的回收率 （包括供试品组和稀释剂对照组） 均不低于70%。
26
不可以接受的标准：
1、阴性对照：
阴性对照(包括蛋白胨组和空白样品组) 发生污染事件。 菌落鉴别：- 污染菌是测试菌：检验员无菌操作培训。
- 污染菌不是测试菌：偏差调查。
2、阳性对照：
样品组的试验数据与检测限不符。（微生物的回收率过 高或过低）结论：样品组的试验结果无效。 重新开始细菌的恢复试验直至与检测限相符。
35-37 ℃,18-24h
不可以接受的标准：
3、样品组：
- 三人三次的试验结果应该与检测限相符。
- 第一次的试验结果要能够被第二次和 第三次的试验证实。
- 任何一次与检测限不符的结果都说明 试验过程有缺陷，验证需重新进行。
28
优化更新步骤：
消除抑菌活性。 稀释样品时，应确认检测限（检验限度）低于
或等于标准。 不同的细菌，一个好的结果可以从不同的稀
铜绿假单胞菌(Staphylococcus aureus) 生孢梭菌(Clostridium sporogenes)
ATCC9027 ATCC11437
枯草芽胞杆菌(Bacillus subtilis) 白色年珠菌(Candida albicans)
ATCC6633 ATCC10231
黑曲霉菌(Candida albicans)
2005版中国药典：各试验菌的回收率 （包括供试品组和稀释剂对照组） 均不低于70%。
26
不可以接受的标准：
1、阴性对照：
阴性对照(包括蛋白胨组和空白样品组) 发生污染事件。 菌落鉴别：- 污染菌是测试菌：检验员无菌操作培训。
- 污染菌不是测试菌：偏差调查。
2、阳性对照：
样品组的试验数据与检测限不符。（微生物的回收率过 高或过低）结论：样品组的试验结果无效。 重新开始细菌的恢复试验直至与检测限相符。
35-37 ℃,18-24h
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微生物检验与临床
烟台海港医院
王功军
精品课件
1
主要内容
1.微生物检验的方法、特点 2.标本的正确采集 3.报告单内容解释 4.相关知识：
(1)区分感染、定植与污染 (2)药敏试验药物选用原则及结果解释 (3)常见多重耐药菌的特点及用药原则 (4)常见菌药敏情况
精品课件
2
一、微生物检验的 方法与特点
精品课件
11
眼分泌物中的镰刀菌
精品课件
12
精品课件
13
精品课件
14
精品课件
15
细胞内吞噬的G-双球菌
精品课件
16
肺炎链球菌
精品课件
17
细胞内吞噬的G-杆菌
精品课件
18
精品课件
19
精品课件
20
药敏结果解释
敏感（susceptible）：表示测试菌能被测定药 物常规剂量给药后在感染部位达到的药物浓度 所抑制或杀灭，感染被治愈。
标本留取 1.用酒精清洁导管周围皮肤。 2.无菌手续移动导管，剪取尖端末端5cm，直
接置入无菌容器中。 3.立即运送到细菌室，防止干燥，常规培养
不超过15min，4℃保存不超过2h。
摘自卫生部全国临床检验操作规程
精品第课三件 版
60
血管内导管尖端培养
结果解释
1.只有当做血液培养同时，做血管内导管尖端培 养，确定患者菌血症的来源。或是抽取新鲜脓 性标本培养，确定软组织相关感染，并做在附 近有插入导管的尖端段培养。
精品课件
57
精品课件
58
感染性细菌性心内膜炎患者血培养采集
急性感染性心内膜炎 抗生素治疗前1-2小时，分别从三个不同部位采 集3套血培养标本。
亚急性感染性心内膜炎 1.间隔>=15分钟，采集3套血培养标本。 2.如果这些血培养24小时内均为阴性，需再采 集2套血培养标本。
精品课件
59
血管内导管尖端培养
51
精品课件
52
精品课件
53
精品课件
54
精品课件
55
皮肤不是无菌的;
定植细菌“污染”血培养
精品课件
56
由污染菌引起的假阳性问题
血培养的关键是防止皮肤寄生菌或环境引起的污染， 由污染菌引起的假阳性增加了患者抗生素的使用量， 延长了住院日，延误病情诊断并增加了经济负担等。
在理想的消毒条件下，仍有3%~5%血培养中混有污 染菌，它们来源于皮肤（凝固酶阴性葡萄球菌，痤疮 丙酸杆菌，梭杆菌属，类白喉群，草绿色链球菌，微 球菌）或来源于环境（革兰阳性芽孢杆菌属，不动杆 菌属），这些微生物有时有致病作用.
精品课件
24
药敏试验（体外）耐药,临床（体内）有效
1. 病人相关原因： 免疫防御（白细胞、补体、抗体、细胞因子）； 感染部位（尿液，胆汁） 2.药物相关原因：增加剂量，延长静滴时间 3.微生物相关原因： 病原确立错误（定植耐药菌）； 致病力（全耐药肺克vs全耐药鲍曼） 药敏折点本身原因 实验室药敏试验操作错误
精品课件
3
精品课件
4
精品课件
5
精品课件
6
细菌染色分类
革兰染色：丹麦Christain Gram(1884)
革兰阳性菌
革兰阴性菌
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7
精品课件
8
涂片检菌项目
真菌涂片检查 抗酸杆菌涂片检查 G-双球菌涂片检查 新型隐球菌涂片检查 一般细菌涂片检查
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9
精品课件
10
曲霉菌（KOH法）
2.同次血液标本培养和导管尖端培养结果是同种 细菌，解释该导管是患者菌血症的源头。
摘自卫生部全国临床检验操作规程
精品第课三件 版
61
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补充内容
脓液组成物是坏死的白细胞和溶解的细菌、组 织碎片，自然没有活细菌生长。建议除抽吸脓 液送检外，再送检坏死和新鲜交界处的组织取 基底部或边缘部采样送检. 这里有血供，细菌 营养好，有活力，培养阳性率高。
中介(intermediate) : 指药物在体内生理浓集的 部位或允许加大药物剂量治疗时有效；该范围 还作为一缓冲区，避免由于微小技术误差导致 的结果错误解释。
耐药（resistant）：表示测试菌不能被在体内感 染部位所能达到的抗菌药物浓度所抑制，治疗 无效。
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21
培养结果的局限性
（1）可能造成假阴性结果的原因—— 未能在抗生素使用前采集标本 采集和运输标本不理想(可能控制的) 延误了培养时间； 培养环境错误，如温度和气体 培养基营养不支持微生物的生长 病原菌数量很少，或标本量不够检出(敏感度) 身体免疫因子抑制生长 在当时所有培养方法不能培养的微生物(局限性)
感染部位药物浓度低（盆腔、前列腺、脑脊液）
2.药物原因:
给药剂量与方式不当
3.微生物相关原因:
病原确立错误（定植敏感菌）；
接种效应；5×105/ml vitro vs 109 /ml vivo
毒力（猩红热、吸入性炭疽、EHEC）；
治疗中出现耐药（葡萄球菌-喹诺酮、铜绿、诱导耐药突变）；
产生生物膜（铜绿）
药敏报告结果中若有敏感的药物，不要选择耐药的药物！
精品课件
25
二、标本正确采集
精品课件
26
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27
送检标本种类与临床意义
1.临床意义低的标本 • 痰、咽拭子 • 粪便、肛拭子
2.临床意义中等的标本 •尿 • 脓、伤口分泌物
3.临床意义大的标本 • 血、脑脊液、胸腹水、无菌体液
精品课件
28
精品课件
对两次不同部位血培养生长同一种微生物;不同类无菌 部位标本培养中生长同一种微生物;微生物快速生长 （48h内）,上述情况应考虑是真正的感染。临床实验 室工作人员和医生之间应经常讨论血培养结果，建立 良好的交流关系对各方面都有益处。血培养中凝固酶 阴性葡萄球菌污染率较高。因此，采血前严格执行皮 肤消毒程序非常重要。
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Baidu Nhomakorabea
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（2）可能造成假阳性结果的原因—— 不同患者标本混淆 报告了污染菌(从实验室或标本采集过程中) （3）没有分离到病原菌—— 也不表明实验室不能检测，其他的疾病有可
能象感染性疾病的症状(复杂性)
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23
药敏试验（体外）敏感,临床（体内）无效
1.病人相关原因：
免疫抑制，基础疾病严重
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主要内容
1.微生物检验的方法、特点 2.标本的正确采集 3.报告单内容解释 4.相关知识：
(1)区分感染、定植与污染 (2)药敏试验药物选用原则及结果解释 (3)常见多重耐药菌的特点及用药原则 (4)常见菌药敏情况
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一、微生物检验的 方法与特点
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11
眼分泌物中的镰刀菌
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细胞内吞噬的G-双球菌
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肺炎链球菌
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细胞内吞噬的G-杆菌
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药敏结果解释
敏感（susceptible）：表示测试菌能被测定药 物常规剂量给药后在感染部位达到的药物浓度 所抑制或杀灭，感染被治愈。
标本留取 1.用酒精清洁导管周围皮肤。 2.无菌手续移动导管，剪取尖端末端5cm，直
接置入无菌容器中。 3.立即运送到细菌室，防止干燥，常规培养
不超过15min，4℃保存不超过2h。
摘自卫生部全国临床检验操作规程
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血管内导管尖端培养
结果解释
1.只有当做血液培养同时，做血管内导管尖端培 养，确定患者菌血症的来源。或是抽取新鲜脓 性标本培养，确定软组织相关感染，并做在附 近有插入导管的尖端段培养。
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感染性细菌性心内膜炎患者血培养采集
急性感染性心内膜炎 抗生素治疗前1-2小时，分别从三个不同部位采 集3套血培养标本。
亚急性感染性心内膜炎 1.间隔>=15分钟，采集3套血培养标本。 2.如果这些血培养24小时内均为阴性，需再采 集2套血培养标本。
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血管内导管尖端培养
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皮肤不是无菌的;
定植细菌“污染”血培养
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由污染菌引起的假阳性问题
血培养的关键是防止皮肤寄生菌或环境引起的污染， 由污染菌引起的假阳性增加了患者抗生素的使用量， 延长了住院日，延误病情诊断并增加了经济负担等。
在理想的消毒条件下，仍有3%~5%血培养中混有污 染菌，它们来源于皮肤（凝固酶阴性葡萄球菌，痤疮 丙酸杆菌，梭杆菌属，类白喉群，草绿色链球菌，微 球菌）或来源于环境（革兰阳性芽孢杆菌属，不动杆 菌属），这些微生物有时有致病作用.
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药敏试验（体外）耐药,临床（体内）有效
1. 病人相关原因： 免疫防御（白细胞、补体、抗体、细胞因子）； 感染部位（尿液，胆汁） 2.药物相关原因：增加剂量，延长静滴时间 3.微生物相关原因： 病原确立错误（定植耐药菌）； 致病力（全耐药肺克vs全耐药鲍曼） 药敏折点本身原因 实验室药敏试验操作错误
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细菌染色分类
革兰染色：丹麦Christain Gram(1884)
革兰阳性菌
革兰阴性菌
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涂片检菌项目
真菌涂片检查 抗酸杆菌涂片检查 G-双球菌涂片检查 新型隐球菌涂片检查 一般细菌涂片检查
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曲霉菌（KOH法）
2.同次血液标本培养和导管尖端培养结果是同种 细菌，解释该导管是患者菌血症的源头。
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脓液组成物是坏死的白细胞和溶解的细菌、组 织碎片，自然没有活细菌生长。建议除抽吸脓 液送检外，再送检坏死和新鲜交界处的组织取 基底部或边缘部采样送检. 这里有血供，细菌 营养好，有活力，培养阳性率高。
中介(intermediate) : 指药物在体内生理浓集的 部位或允许加大药物剂量治疗时有效；该范围 还作为一缓冲区，避免由于微小技术误差导致 的结果错误解释。
耐药（resistant）：表示测试菌不能被在体内感 染部位所能达到的抗菌药物浓度所抑制，治疗 无效。
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培养结果的局限性
（1）可能造成假阴性结果的原因—— 未能在抗生素使用前采集标本 采集和运输标本不理想(可能控制的) 延误了培养时间； 培养环境错误，如温度和气体 培养基营养不支持微生物的生长 病原菌数量很少，或标本量不够检出(敏感度) 身体免疫因子抑制生长 在当时所有培养方法不能培养的微生物(局限性)
感染部位药物浓度低（盆腔、前列腺、脑脊液）
2.药物原因:
给药剂量与方式不当
3.微生物相关原因:
病原确立错误（定植敏感菌）；
接种效应；5×105/ml vitro vs 109 /ml vivo
毒力（猩红热、吸入性炭疽、EHEC）；
治疗中出现耐药（葡萄球菌-喹诺酮、铜绿、诱导耐药突变）；
产生生物膜（铜绿）
药敏报告结果中若有敏感的药物，不要选择耐药的药物！
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二、标本正确采集
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送检标本种类与临床意义
1.临床意义低的标本 • 痰、咽拭子 • 粪便、肛拭子
2.临床意义中等的标本 •尿 • 脓、伤口分泌物
3.临床意义大的标本 • 血、脑脊液、胸腹水、无菌体液
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对两次不同部位血培养生长同一种微生物;不同类无菌 部位标本培养中生长同一种微生物;微生物快速生长 （48h内）,上述情况应考虑是真正的感染。临床实验 室工作人员和医生之间应经常讨论血培养结果，建立 良好的交流关系对各方面都有益处。血培养中凝固酶 阴性葡萄球菌污染率较高。因此，采血前严格执行皮 肤消毒程序非常重要。
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（2）可能造成假阳性结果的原因—— 不同患者标本混淆 报告了污染菌(从实验室或标本采集过程中) （3）没有分离到病原菌—— 也不表明实验室不能检测，其他的疾病有可
能象感染性疾病的症状(复杂性)
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药敏试验（体外）敏感,临床（体内）无效
1.病人相关原因：
免疫抑制，基础疾病严重