实验三 伪狂犬病的诊断

实验三伪狂犬病的诊断
一．实验目的：
⒈熟悉伪狂犬病的临诊特点。

⒉熟悉伪狂犬病的诊断方法。

二．实验原理：
利用分离的伪狂犬病毒注射实验兔，病毒在动物机体繁殖一段时间后，会影响实验动物的神经系统，实验兔会出现强烈的痒觉，根据这些症状来判断是否含有伪狂犬病毒。

三．内容及方法
1. 伪狂犬病的临床特点
本病发生于牛、绵羊，犬、猫、鼠及猪。

野生动物亦可发生。

牛、绵羊、犬及猫感染本病后症状很特殊而明显。

主要表现为某部皮肤的强烈痒觉。

常使劲地于墙柱上摩擦，直到皮肤撕碎，仍不断摩擦，病畜像疯狂一样，用力制止亦无效果。

体温可达40℃以上。

常发病后48小时内死亡。

成猪一般为隐性感染，怀孕母猪可发生流产、死胎、木乃伊胎儿。

仔猪，尤于新生仔猪病情极严重，常可发生大批死亡。

主要侵害神经系统，表现为神经症状。

2. 实验室诊断
2.1 病料的采集与处理
分离病毒的材料于发热期最好采取中脑、桥脑及延脑，或采取病总部之水肿液、侵入部神经干及脊髓。

病料用培养液制成1:10组织悬浮液。

2.2 兔体接种试验上述悬液经2000r/min离心1Omin，取上清液1~2ml经腹侧皮下或肌肉接种家兔，通常在36-48h后注射部位出现剧痒，病兔啃咬注射部位皮肤，皮肤脱毛、破皮和出血，继之四肢麻痹，体温下降，卧地不起，最后角弓反张，抽搐死亡。

但这种症状只维持几小时，一般常于夜间死亡，可见死兔口内有接种部位咬下的被毛。

亦可脑内接种小鼠，症状可维持12小时，但其敏感性不如兔。

亦可用细胞培养来分离病毒。

许多种哺乳动物细胞均能繁殖本病毒，但最常用的是猪肾传代细胞。

2.3 兔、猪及牛肾原代细胞培养。

病料接种细胞后最早经18小时出现病变(病毒量大)，一般经48小时，病毒量很低时要到96小时。

其典型的病变是出现巨细
胞圆形。

部分病变细胞胞浆内颗粒增多，细胞肿大变圆形，而不相互融合，渐渐萎缩坏死。

当细胞全面出现病变后渐自瓶壁脱落。

自出现病变到整个细胞层破坏约经24–48小时。

3．特异性免疫荧光诊断：对可疑病畜或接种动物的中枢神经系统如中脑、桥脑、延脑或脊髓可作冰冻切片或压片，用免疫荧光直接法检查，阳性病例可见神经节细胞胞浆及核内均有荧光。

感染的组织细胞亦可用此法来确定感染的病毒。

4．病毒中和试验；用一株标准伪狂犬病细胞适应毒，以每0.1ml病毒溶液中含有100TCID50的稀释病毒与连续作2倍稀释的被检血清0.1ml混合，57 培养1.5小时，再接种于细胞培养物上。

每个血清稀释度至少要接种4个细胞培养物，每个培养物接种0.2ml。

恢复猪的血清常有1:8到1:64的中和能力。

复习题与作业
1．伪狂犬病的临诊表现，猪与其他动物有什么不同?
2．伪狂犬病的诊断方法那种最简便而可靠?。