显齿蛇葡萄总黄酮对兔口腔黏膜溃疡的作用

－ １ － １ ４ ， ２ ６ ６和 ８ ４ ０ｍ ｇ ·ｋ ｇ ， 西地碘为１ｍ ｇ ·ｋ ｇ ， 每 为８ ７ ］ 口腔炎症 ［ ， 但关于其抗口腔黏膜溃疡的实验研究
还未见报道。本研究观察了显齿蛇葡萄总黄酮对兔 口腔黏膜溃疡的影响。
１ 材料和方法
１ ． １ 药品与试剂 显齿蛇葡萄总黄酮（ 总黄酮） ， 由湖南省中医药 研 究 院 中 药 研 究 所 制 剂 实 验 室 提 供， 批号为 ２ ０ ０ １ ０ ３ １ ２ 。显齿蛇葡萄购自湖南省张家界市， 由湖 南省中医药研究院中药研究所生药实验室鉴定。自 显齿蛇葡萄中水提、 浓缩， 收集沉淀， 乙醇回流提取，
Ｕ ｌ ｃ ｅ ｒ ｄ ｉ ａ ｍ ｅ ｔ ｅ ｒ ／ ｍ ｍ Ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ Ｂ ｅ ｆ ｏ ｒ ｅｄ ｒ ｕ ｇ Ｍ ｏ ｄ ｅ ｌ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ Ｆ ｌ ａ ｖ ｏ ｎ ｅ ｓ ８ ４ ２ ６ ６ ８ ４ ０ Ｃ ｙ ｄ ｉ ｏ ｄ ｉ ｎ ｅ １ ４ ． ９± ０ ． ６ ４ ． ８± ０ ． ４ ５ ． ０± ０ ． ４ ５ ． ０± ０ ． ４ ５ ． １± ０ ． ５ Ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｄ ｒ ｕ ｇ ３ ． ５± ０ ． ３ ３ ． １± ０ ． ４
［ ９ ］
次数（ 在同一时间不同部位或者同一部位溃疡愈合 后再发生的溃疡均分别记为 １次） ； 末次给药后 ｄ ２ ， 耳缘静脉取血， 分离血清， 采用孔间吸光度值 ＜ ０ ． ０ ０ ３ 的９ ６孔酶标板， 以 ８倍稀释的口腔黏膜匀浆 为抗原， 磷酸缓冲液为对照， 用Ｍ Ｋ ３型酶标仪 ４ ９ ０ ｎ ｍ处测定与不同稀释度血清反应后的吸光度值， 以 ０ ． ０ ０ ５的血清稀释度作为抗 比相应对照孔吸光度 ＞ 口腔黏膜抗体滴度。然后耳缘静脉注入空气处死动 物， 取口腔黏膜发生溃疡部位的组织， 用４ ％ 甲醛溶 液固定做病理学检查。 １ ． ６ 炎症指数的判断 炎症指数按溃疡周围红肿程度即红晕大小记
２ ０ ０ ７年 ２月； ２ １ （ １ ） ： ４ ９－ ５ ４ 中国药理学与毒理学杂志 Ｃ ｈ ｉ ｎＪＰ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｏ ｌ Ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｏ ｌ ２ ０ ０ ７ Ｆ ｅ ｂ ； ２ １ （ １ ） ： ４ ９－ ５ ４
·４ ９ ·
显齿蛇葡萄总黄酮对兔口腔黏膜溃疡的作用
２ ． ４± ０ ． ６ ２ ． ３± ０ ． ５ ２ ． ４± ０ ． ４
Ｒ ｅ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄｒ ａ ｔ ｅｏ ｆ ｕ ｌ ｃ ｅ ｒ ｄ ｉ ａ ｍ ｅ ｔ ｅ ｒ ／ ％ ２ ８± １ １ ３ ６± ８
５ １± １ ０ ５ ４± ９ ５ ３± １ ０
１ ］ 葡萄中 黄 酮 类 化 合 物 含 量 高 达 ４ ５ ． ５ ２ ％［ 。近 年
为８ ３ ． ２ ％。西地碘片为北京四环制药厂产品， 批号 ０ １ １ ０ ８ ２ ５ ６ 。实验时将药物置研钵中研细， 用蒸 为０ 馏水配成所需浓度， 摇匀使用。冰乙酸、 羊毛脂、 液 体石蜡、 磷酸氢二钠（ Ｎ ａ Ｈ Ｐ Ｏ · １ ２ Ｈ Ｏ ） 和磷酸二氢 ２ ４ ２ 钠（ Ｎ ａ Ｈ Ｐ Ｏ · ２ Ｈ Ｏ ） 均为市售 Ａ Ｒ试剂。 ２ ４ ２ １ ． ２ 实验动物与菌种 新西兰兔， 由湖南农业大学动物科技学院实验动 物养殖场提供〔 Ｓ Ｃ Ｘ Ｋ （ 湘） ２ ０ ０ ３ ０ ０ ０ ３ 〕 。表皮葡萄球 菌（ Ｓ ｔ ａ ｐ ｈ ｙ ｌ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ｕ ｓｅ ｐ ｉ ｄ ｅ ｒ ｍ ｉ ｄ ｉ ｓ ）标 准 菌 株， 编号为 ２ ８ ２ ７ ３ ， 由湖南中医学院微生物教研室提供。卡介苗 干粉， 由湖南九芝堂斯奇生物制药有限公司提供。 １ ． ３ 表皮葡萄球菌性口腔黏膜溃疡模型制备与药 物处理 新西兰兔 ５ ０只， 体重 １ ． ６ ５～ ２ ． １ ０ｋ ｇ ， ♀♂ 兼
－ １
Ｔ ａ ｂ１ ． Ｅ ｆ ｆ ｅ ｃ ｔ ｏ ｆ ｆ ｌ ａ ｖ ｏ ｎ ｅ ｓ ｆ ｒ ｏ ｍＡ ｍ ｐ ｅ ｌ ｏ ｐ ｓ ｉ ｓ ｇ ｒ ｏ ｓ ｓ ｅ ｄ ｅ ｎ ｔ ａｏ ｎｕ ｌ ｃ ｅ ｒｄ ｉ ａ ｍｅ ｔ ｅ ｒ ｓ ａ ｎ ｄｉ ｎ ｆ ｌ ａ ｍｍａ ｔ ｉ ｏ ｎｉ ｎ ｄ ｅ ｘｏ ｆ ｏ ｒ ａ ｌ ｕ ｌ ｃ ｅ ｒｉ ｎ ｄ ｕ ｃ ｅ ｄｂ ｙＳ ｔ ａ ｐ ｈ ｙ ｌ ｏ ｃ ｏ ｃ ｃ ｕ ｓ ｅ ｐ ｉ ｄ ｅ ｒ ｍ ｉ ｄ ｉ ｓ ｉ ｎｒ ａ ｂ ｂ ｉ ｔ ｓ
１ ． １ ５± ０ ． ４ ７ ０ ． ９ ５± ０ ． １ ６ １ ． ０ ０± ０ ． ４ ０
４ ． ８± ０ ． ５
４ ． ０± ０ ． ９ ３ ． ８± ０ ． ７ ３ ． ４± ０ ． ８ ３ ． ８± ０ ． ８
１ ２ － １ Ｔ ｈ ｅｒ ａ ｂ ｂ ｉ ｔ ｓ ｗ ｅ ｒ ｅｉ ｎ ｊ ｅ ｃ ｔ ｅ ｄｗ ｉ ｔ ｈ０ ． ０ ３ｍ Ｌｏ ｆ Ｓ ．ｅ ｐ ｉ ｄ ｅ ｒ ｍ ｉ ｄ ｉ ｓ （ １ ． ５× １ ０ Ｃ Ｆ Ｕ · Ｌ ）ｉ ｎ ｔ ｏｂ ｕ ｃ ｃ ａ ｌ ｍ ｕ ｃ ｏ ｓ ａｏ ｆ ｒ ａ ｂ ｂ ｉ ｔ ｓ ．Ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ２ ４ｈ ，ｆ ｌ ａ ｖ ｏ ｎ ｅ ｓ － １ － １ （ ８ ４ ， ２ ６ ６ａ ｎ ｄ８ ４ ０ｍ ｇ · ｋ ｇ ）ａ ｎ ｄｃ ｙ ｄ ｉ ｏ ｄ ｉ ｎ ｅ （ １ｍ ｇ · ｋ ｇ ）ｗ ｅ ｒ ｅ ｄ ａ ｕ ｂ ｅ ｄｏ ｖ ｅ ｒ ａ ｎ ｄａ ｒ ｏ ｕ ｎ ｄｂ ｕ ｃ ｃ ａ ｌ ｍ ｕ ｃ ｏ ｓ ａ ｕ ｌ ｃ ｅ ｒ ｗ ｉ ｔ ｈｓ ｙ ｒ ｉ ｎ ｇ ｅ ｔ ｈ ｒ ｏ ｕ ｇ ｈｂ ｌ ｕ ｎ ｔ ＃ ［ ９ ］ ｎ ｅ ｅ ｄ ｌ ｅ （ １ ６ ）ｆ ｏ ｒ ３ｄ ，ｒ ｅ ｓ ｐ ｅ ｃ ｔ ｉ ｖ ｅ ｌ ｙ ．Ｗａ ｔ ｅ ｒ ｗ ａ ｓ ｕ ｓ ｅ ｄｉ ｎ ｓ ｔ ｅ ａ ｄｏ ｆ ｄ ｒ ｕ ｇ ｓ ｉ ｎｍ ｏ ｄ ｅ ｌ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ．Ｕ ｌ ｃ ｅ ｒ ｄ ｉ ａ ｍ ｅ ｔ ｅ ｒ ａ ｎ ｄｉ ｎ ｆ ｌ ａ ｍ ｍ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｉ ｎ ｄ ｅ ｘ ｗ ｅ ｒ ｅｍ ｅ ａ ｓ ｕ ｒ ｅ ｄｂ ｅ ｆ ｏ ｒ ｅａ ｎ ｄ２ｈａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｔ ｈ ｅｌ ａ ｓ ｔ ｄ ｏ ｓ ｅｏ ｆ ｔ ｈ ｅｄ ｒ ｕ ｇ ．ｘ ±ｓ ，ｎ＝ １ ０ ． Ｐ＜ ０ ． ０ ５ ， Ｐ＜ ０ ． ０ １ ，ｃ ｏ ｍ ｐ ａ ｒ ｅ ｄｗ ｉ ｔ ｈｍ ｏ ｄ ｅ ｌ ｃ ｏ ｎ ｔ ｒ ｏ ｌ 珋 ｇ ｒ ｏ ｕ ｐ ．
－ １ － １ － １
２ 结果
２ ． １ 总黄酮对表皮葡萄球菌性口腔黏膜溃疡的影 响 与模型对照组比较， 总黄酮 ８ ４ ， ２ ６ ６和 ８ ４ ０ｍ ｇ · ｋ ｇ 给药 ３ｄ 使兔表皮葡萄球菌性口腔黏膜溃疡直 径明显缩小， 炎症指数明显减轻， 溃疡愈合时间明显 缩短， 并随剂量增加其作用增强（ 表１ ） 。
２ ０ ０ ６ ０ ６ ２ ７ 接受日期： ２ ０ ０ ６ ０ ８ ２ ５ 收稿日期： 作者简介：陈立峰（ １ ９ ５ ０－） ， 男， 湖南省华容人， 研究 员， 主要从事药理学与毒理学研究。 联 系 作 者 Ｅ ｍ ａ ｉ ｌ ：ｃ ｈ ｅ ｎ ｌ ｉ ｆ ｇ ＠１ ６ ３ ． ｃ ｏ ｍＴ ｅ ｌ （ Ｆ ａ ｘ ） ： ０ ７ ３ １ ） ８ ９ ０ ５ ４ ２ ２ （
前和末次给药后 ２ｈ ， 分别用分规和游标卡尺小心 测量溃疡直径和溃 疡 周 围 红 晕 大 小， 判断炎症指 数； 以后每天观察 ２次， 间隔 １ ２ｈ ， 记录溃疡愈合时 间。 １ ． ４ 乙酸性口腔黏膜溃疡模型的制备与药物处理 新西兰兔 ５ ０只， 体重 １ ． ６ ０～ ２ ． １ ０ｋ ｇ ， ♀♂ 兼 参照文献方法 用， 按体重分层随机分为 ５组，
９ ］ 。红晕直径在 ６ｍ ｍ 以上者为 ２分， ２～ ６ｍ ｍ 分［
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分别
按每只 ０ ． ０ ２ｍ Ｌ将 １ ０ ％ 乙酸溶液注射到兔口腔颊 黏膜下形成小丘， ２ ４ｈ后形成溃疡。自溃疡形成开 始， 同上述方法分组、 给药并检测指标。 １ ． ５ 免疫性口腔黏膜溃疡模型的制备与药物处理 取家兔， 处死， 口腔用灭菌生理盐水冲洗 ３次， 无菌操作下于口腔黏膜下注射生理盐水， 剥离黏膜，
Ｉ ｎ ｆ ｌ ａ ｍ ｍ ａ ｔ ｉ ｏ ｎｉ ｎ ｄ ｅ ｘ Ｈ ｅ ａ ｌ ｉ ｎ ｇｔ ｉ ｍ ｅ ／ ｄ Ｂ ｅ ｆ ｏ ｒ ｅｄ ｒ ｕ ｇ １ ． ９± ０ ． ３ １ ． ８± ０ ． ４ １ ． ８± ０ ． ４ １ ． ９± ０ ． ３ １ ． ８± ０ ． ４ Ａ ｆ ｔ ｅ ｒ ｄ ｒ ｕ ｇ ． ８ ０± ０ ． ４ ２ １ １ ． ３ ０± ０ ． ４ ８
－ １ 用生理盐水冲洗 ３次， 称重， 加入 ０ ． １ｍ ｏ ｌ ·Ｌ 磷酸
为 １分， 小于 ２ｍ ｍ 或有红晕但不甚清晰者为 ０ ． ５ 分，红晕完全消退为 ０分。 １ ． ７ 统计学处理 计量资料用 ｘ ± ｓ 表示， 用单因素方差分析和 ｑ 珋 检验判断组间差异显著性； 计数资料用直接概率法 双侧检验比较组间差异显著性。抗体滴度表示为血 清稀释倍数的对数（ ｌ ｇＴ ） 。
陈立峰 ，陈莉萍，徐琳本，王晓洪 （ 湖南省中医药研究院中药研究所，湖南 长沙 ４ １ ０ ０ １ ３ ） 摘要：目的 研究显齿蛇葡萄总黄酮抗口腔黏膜溃 疡的作用。方法 分别采用表皮葡萄球菌或 １ ０ ％ 乙酸注射到新西兰兔颊黏膜， 或用同种异体口腔黏 膜匀浆上清液作为免疫抗原注射于兔背部皮下， 制 备 ３种口腔黏膜溃疡模型。显齿蛇葡萄总黄酮剂量
８ ］ ， 以二氢杨梅素计纯度 低温析出粗晶， 得总黄酮 ［
天分 ４次口腔局部涂布给药 ３ ～４ｄ 。观察溃疡发 生情况和溃疡愈合时间， 检查溃疡直径和局部炎症 指数， 检测抗口腔黏膜抗体滴度和局部病理改变。 结果 显齿蛇葡萄总黄酮能使表皮葡萄球菌性、 乙 酸性口腔黏膜溃疡模型的溃疡直径明显缩小， 炎症 指数降低， 愈合时间缩短， 并随药物剂量增加作用增 强； 对免疫性口腔黏膜溃疡， 可使溃疡发生率明显降 低， 抗体滴度下降， 局部病理变化明显减轻。 结论 显齿蛇葡萄总黄酮有减轻口腔黏膜溃疡炎症、 促进 溃疡愈合的作用。 关键词：显齿蛇葡萄；黄酮类；口腔黏膜；口腔溃 疡 中图分类号：Ｒ ２ ８ ５ ，Ｒ ９ ８ ８ ． ２ 文献标识码：Ａ 文 章 编 号：： １ ０ ０ ０ ３ ０ ０ ２ （ ２ ０ ０ ７ ） ０ １ ０ ０ ４ ９ ０ ６ 显齿蛇葡萄总黄酮来自葡萄科植物显齿蛇葡萄 〔 Ａ ｍ ｐ ｅ ｌ ｏ ｐ ｓ ｉ ｓ ｇ ｒ ｏ ｓ ｓ ｅ ｄ ｅ ｎ ｔ ａ ｔ ａ （ Ｈ ａ ｎ ｄ Ｍ ａ ｚ ｚ ． ） Ｗ． Ｔ ． Ｗａ ｎ ｇ 〕 ， 为异黄酮、 黄酮及苷类化学成分的复合物， 在显齿蛇
ｐ Ｈ７ ． ４ ） 制成 １ ０ ％匀浆。取口腔黏膜匀浆， 缓冲液（ 加等量弗氏完全佐剂 （ 羊毛脂 ８ ０ｇ ， 液体石蜡 １ ２ ０ ， 卡介苗 １ｇ ） ， 用两个注射器对抽乳化得口腔黏 ｍ Ｌ 膜液作为免疫抗原。 取家兔 ６ ０只， 体重 １ ． ６ ０～ ２ ． ０ ９ｋ ｇ ， ♀♂ 兼用， 按性别、 体重分层随机分为 ６组， 参照文献 ［ １ ０－ ］ ， 分别背部脊柱两侧脱毛， 乙醇消毒， 每只动物 １ １ 于脱毛处取 ２ ０个点， 第 １组注射弗氏完全佐剂作为 每点 ０ ． ０ ５ 正常对 照 组， 其 他 ５组 注 射 免 疫 抗 原， ｍ Ｌ ， 每 ２周 １次， 共 ５次。于末次免疫后 ｄ ７ ， 第１ 、 ２ 组给蒸馏水， 其他组分别给总黄酮 ８ ４ ， ２ ６ ６ ， ８ ４ ０ｍ ｇ · ｋ ｇ 和西地碘１ｍ ｇ ·ｋ ｇ ， 体积为２ ． ０ｍ Ｌ ·ｋ ｇ ， １ｄ 内分 ４次给予， 间隔 ３ｈ ， 按方法 １ ． ３所述， 于口腔两 侧颊黏膜、 上下唇黏膜涂布给药 ４ｄ 。实验期间每天 观察动物口腔黏膜发生溃疡的情况， 记录溃疡发生
间隔 ３ｈ ， 溃疡局部给药 ３ｄ 。药物用 １ 分 ４次给予， ｍ Ｌ注射器抽取， 经Ｇ Ｊ ８ ３ ０ １ Ａ型大鼠灌胃针头， 缓慢 涂布于溃疡部位和溃疡周围 １～ ２ｃ ｍ范围内。给药
·５ ０ ·
Ｃ ｈ ｉ ｎＪＰ ｈ ａ ｒ ｍ ａ ｃ ｏ ｌ Ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｏ ｌ ２ ０ ０ ７ Ｆ ｅ ｂ ； ２ １ （ １ ）
９ ］ 用， 按体重分层随机分为 ５组， 参照文献方法 ［ 分别 １ ２ 按每只 ０ ． ０ ３ｍ Ｌ将表皮葡萄球菌菌液 （ １ ． ５×１ ０ － １ Ｃ Ｆ Ｕ · Ｌ ） 注射到新西兰兔口腔颊黏膜下， ２ ４ｈ 后形
来， 国内、 外学者对显齿蛇葡萄总黄酮的生物活性进 行了大量研究， 发现其有抑菌 抗氧化
［ ４ ］ ［ ２ ］ ［ ６ ］
、 抗炎
［ ３ ］
、 镇痛
［ ３ ］
、
、 保肝
［ ５ ］
和免疫调节
等多种生物活性，
无 明显毒副作用。 民间常用显齿蛇葡萄当茶饮防治
成脓疮且自行破溃成溃疡。自溃疡形成开始， 分别
－ １ ４ ， ２ ６ ６ ， ８ ４ ０ｍ ｇ · ｋ ｇ 给蒸馏水（ 模型对照） 、 总黄酮 ８ － １ － １ 和西地碘１ｍ ｇ · ｋ ｇ ， 体积均为２ ． ０ｍ Ｌ ·ｋ ｇ ， １ｄ内