当归多糖的提取纯化工艺研究
正交实验法优选当归多糖的提取工艺
正交实验法优选当归多糖的提取工艺摘要目的：优选并确立当归多糖的最佳提取工艺。
方法：以当归多糖得率为指标，采用正交实验法对提取过程中水用量(A)，提取时间(B)，提取次数(C)及醇沉浓度(D)4因素进行优选研究。
结果：对多糖得率有影响的因素是提取时间与提取次数。
结论：以多糖得率为考察指标的最优提取工艺为A2B3C2D1。
关键词当归多糖提取工艺正交实验法中药研究当归为伞形科植物当归[Angelica sinensis(Oliv.)Diels]的干燥根，味甘、辛，性温。
归肝、心、脾经。
为中医传统常用补血药，具有补血活血、调经止痛、润肠通便等功效。
当归中含有内酯类、生物碱类、有机酸类、中性油类、多糖等多种成分。
现代研究表明当归多糖对机体免疫系统、血液系统有明显作用，可以促进小鼠淋巴细胞增殖，提高荷瘤小鼠巨噬细胞细胞吞噬能力，增加外周血细胞、白细胞、血红蛋白及骨髓有核细胞数，并且有抗肿瘤、抗辐射损伤及镇痛的良好功效。
本文以当归粗多糖得率为考察指标，采用L9(34)正交实验法对提取过程中水用量，提取时间，提取次数，醇沉浓度4因素进行了优选研究。
1、仪器与试剂材料1.1仪器：AG285电子天平(瑞典METTLER公司)；V800旋转蒸发仪(瑞士BUCHI公司)；TU-1800S紫外可见分光光度计(北京普析通用仪器有假公司)。
1.2 材料：葡萄糖(上海化学试剂公司，批号030318)；苯酚(重蒸)；其余试剂均为国产分析纯。
当归药材购于北京同仁堂杭州药店有限公司，经鉴定为当归[Angelica sinensis(Oliv.)Diels]的干燥根。
2、实验方法2.1 影响提取效果主要因素的选择：选取水用量，提取时间，提取次数，醇沉浓度，作为考察因素，每个因素拟定3个水平(见表1)，选用L9(34)正交表。
2.2 正交实验设计：取当归饮片9份，每份20g，85％乙醇热回流2次(3h，2h)，每次100ml，除去含单糖、低聚糖及苷类等干扰性成分后，药渣按正交方案提取，水提液浓缩至每毫升含生药量为0.5g，按正交方案醇沉，沉淀分别用适量无水乙醇，乙醚，丙酮依次洗涤，50℃烘干。
当归多糖提取实验报告
一、实验目的1. 了解当归多糖的提取原理和方法。
2. 掌握当归多糖的提取工艺，提高提取效率。
3. 比较不同提取方法对当归多糖得率的影响。
二、实验原理当归多糖是一种具有多种生物活性的天然高分子化合物，主要存在于当归的根中。
本实验采用热水浸提法、超声波法、纤维素酶与果胶酶法四种方法提取当归多糖，以当归多糖得率为指标，优化提取工艺，比较不同方法的效果。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：当归根（干燥）、苯酚、硫酸、K3[Fe(CN)6]、LBPS、纤维素酶、果胶酶等。
2. 实验仪器：组织匀浆机、水浴锅、台式高速离心机、分光光度计、电子天平等。
四、实验方法1. 热水浸提法：将当归根粉碎，用热水浸提，离心分离，得到多糖溶液。
2. 超声波法：将当归根粉碎，加入超声波处理，离心分离，得到多糖溶液。
3. 纤维素酶法：将当归根粉碎，加入纤维素酶处理，离心分离，得到多糖溶液。
4. 果胶酶法：将当归根粉碎，加入果胶酶处理，离心分离，得到多糖溶液。
五、实验步骤1. 准备当归根样品，粉碎至适当粒度。
2. 分别采用热水浸提法、超声波法、纤维素酶法、果胶酶法提取当归多糖。
3. 对提取得到的样品进行离心分离，收集多糖溶液。
4. 用苯酚-硫酸法测定当归多糖含量，计算多糖得率。
5. 比较不同提取方法对当归多糖得率的影响。
六、实验结果与分析1. 热水浸提法：多糖得率为21.78%。
2. 超声波法：多糖得率为22.15%。
3. 纤维素酶法：多糖得率为24.55%。
4. 果胶酶法：多糖得率为24.81%。
根据实验结果，酶法提取当归多糖的效果优于热水浸提法和超声波法。
其中，果胶酶法的提取效果最好，多糖得率为24.81%。
纤维素酶法的最佳提取条件为：加酶量1.0%，提取温度60℃，提取时间60 min，pH值6.0；果胶酶法的最佳提取条件为：加酶量1.0%，提取温度50℃，提取时间90 min，pH值5.5。
七、结论1. 酶法提取当归多糖的效果优于热水浸提法和超声波法。
正交实验优化当归多糖的提取工艺研究
正交实验优化当归多糖的提取工艺研究发表时间：2012-11-21T14:33:40.153Z 来源：《医药前沿》2012年第22期供稿作者：戴雅琴[导读] 优选当归多糖的提取工艺，建立当归多糖的含量测定方法。
戴雅琴（湖北省中山医院药学部 430032）【摘要】目的优选当归多糖的提取工艺，建立当归多糖的含量测定方法。
方法以多糖提取率为指标，以浸提温度、浸提时间、加水量和浸提次数为考察因素，采用正交试验法，优选当归多糖的提取工艺，采用紫外分光光度法测定多糖的含量。
结果优选出的当归多糖最佳提取工艺为：当归药材经乙醇热处理后，加药材10倍量水，80℃浸提1次，浸提时间2h，提取液经除蛋白，浓缩，乙醇沉淀。
结论优选出的工艺合理可行，为当归多糖的提取分离纯化及含量测定提供了依据。
【关键词】当归正交试验多糖【中图分类号】R284.2 【文献标识码】A 【文章编号】2095-1752（2012）22-0079-02 多糖又称多聚糖，其广泛存在于动物、植物及微生物中，具有复杂、多方面的生物活性和功能。
20世纪60年代后，随着分子生物学的发展，多糖所具有的增强免疫力的功能被广泛认同，并被广泛应用于肿瘤化疗，对多糖的研究与开发已越来越引起人们的关注[1]。
当归为伞形科植物当归（Angelica sinensis(Oliv.) Diels ）的干燥根，主要成分含有挥发油、有机酸以及多糖类。
现代研究表明，当归补血、活血的主要物质基础为当归多糖，并具有抗肿瘤、增强免疫力的功效[2]。
但当前当归多糖的研究报道较少见，本实验对当归多糖的提取工艺进行正交优化验证。
1 实验材料与方法 1.1 实验材料1.1.1 实验药材药材购自安徽省亳州市药材市场，经鉴定为伞形科科植物当归（Angelica sinensis(Oliv.) Diels ）的干燥根。
1.1.2 实验仪器 FW100型高速万能粉碎机（郑州市荥阳华盛仪器厂）；UV-2550紫外可见分光光度计（日本岛津公司）；电热恒温干燥箱202型（上海索谱仪器有限公司）；J-25型高效冷冻离心机（美国BECKMAN公司）；薄膜旋转蒸发仪（BUCHI Rotavapor R114）；FA1104型电子分析天平（上海精密科学仪器有限公司）；其它常规仪器。
当归多糖提取工艺的优化研究
当归多糖提取工艺的优化研究
以大枣当归为原料，研究当归多糖提取工艺优化。
提取多糖时，采用2-3-5步法：第一步静置，采用蒸馏水固定液比为1∶20，用0.1mol/L NaOH消化2h；第二步冷却沉淀，有效成分沉淀；第三步稀释混匀，用0.05mol/L HCI抽滤，滤液稀释15倍，调节温度60℃混合溶解；第四步再沉淀、再抽滤，升温至90℃抽滤，滤液稀释10倍，后冷却；第五步洗涤制备，采用0.01mol/L HCI洗涤，pH值调节至3.5-4.0，冷却沉淀，收集沉淀物。
以当归多糖出液的总糖量测定结果为指标，即可得出最优的提取工艺。
经研究结果表明：第一步消化时间1 h，第二步冷却温度维持–4°C，第三步料液比为1∶30，第四步温度为90°C，第五步冷却温度为0°C，最优的提取工艺为：蒸馏水（1∶20）+ NaOH消化（1h）+ 冷却沉淀–4°C + 稀释混匀（1∶30）+ 90°C抽滤+ 洗涤（pH.3.5-4.0）+ 0°C冷却沉淀，此提取工艺下提取的当归多糖总糖量为20.58 %。
当归及其不同炮制品多糖的提取、分离纯化和成分分析
当归及其不同炮制品多糖的提取、分离纯化和成分分析当归及其不同炮制品多糖的提取、分离纯化和成分分析当归，即Angelica sinensis，是一种被广泛应用于传统中药中的植物。
它属于伞形科，是中国传统药物中使用最为广泛的中草药之一。
当归不仅被用于妇科疾病的治疗，还有抗炎、抗氧化、免疫调节、抗衰老等多种药理活性。
而当归中的多糖则是其主要活性成分之一，具有重要的药理效应。
多糖是一类由多个糖基单元通过糖苷键连接形成的高分子化合物。
在当归中，糖基单元可以是葡萄糖、半乳糖、阿拉伯糖等多种单糖。
多糖具有许多独特的理化性质和药效活性，常常被用作天然药物的研究对象。
提取多糖是研究其药理活性的重要步骤之一。
目前常用的提取方法包括水提法、酶解法、超声波法等。
水提法是最常见的一种方法，即将当归粉末与适量的水浸泡一段时间，在适当的温度下进行提取。
酶解法则通过使用特定酶对当归进行水解，使多糖释放出来。
超声波法是利用超声波的机械能将多糖从当归中释放出来。
之后，分离纯化是进一步研究多糖的重要步骤。
传统的分离纯化方法包括离心、过滤、浓缩等。
离心是利用不同颗粒大小、密度的物质在旋转离心机中的离心力分离开的方法。
过滤是利用不同孔径的滤膜将物质分离开的方法。
浓缩则是通过去除大部分溶剂来将目标物质浓缩的方法。
近年来，随着科学技术的进步，还出现了许多新的分离纯化方法，如凝胶过滤层析、离子交换层析、逆流色谱、超高效液相色谱等。
在成分分析方面，可以使用许多不同的技术手段。
常见的有红外光谱分析、核磁共振分析、质谱分析等。
红外光谱分析可以通过检测物质与红外光的相互作用来研究样品的化学结构。
核磁共振分析可以通过检测样品在强磁场中的核磁共振信号来研究样品的结构。
质谱分析则是利用样品在质谱仪中的质荷比进行分析并得到样品的分子量和分子结构。
总的来说，当归及其不同炮制品多糖的提取、分离纯化和成分分析是研究当归药理活性的重要研究内容之一。
提取多糖、分离纯化多糖以及对其成分进行分析，有助于深入了解当归中多糖的组成、结构和药理活性。
多指标正交试验优选当归提取工艺
・ ６ １・
多指标正交试 验选 当归提 取工艺
秦晓宇 李 丹
（ 哈 药 集 团制 药 总厂 ， 黑龙 江 哈 尔滨 １ ５ ０ ０ ０ ０ ）
摘 要： 本 实验 以阿魏酸和 当归多糖 为指标 ， 采用正交试验 法对 当归的提取工艺进行研 究。 方法 ： 采用 高效液相法测定 阿魏酸 ， 甲醇 一 乙腈 一水 一磷 酸 一三 乙胺（ １ ５ ： ５ ： ８ ０ ： ０ ． ０ １ ： ０ ． １ ） ， 检 测波长为 ３ ２ ４ ｎ ｍ， 流速 为 １ ． Ｏ ｍｌ ／ ｍｉ ｎ ， 柱温为 ３ ０ ￣ Ｃ。阿魏 酸在 ０ ． ２ ～２ ． ０ ｇ ・ ｍＬ 范围 内呈良 好 的线性关 系％ ； 采用苯酚一硫 酸法测定 当归多糖 ， 葡萄糖在 ２—１ ６ ａｇ ｒ ・ ｍＬ 范围 内呈 良好 的线性 关 系％。结论 ： 测定方 法简便 、 准确 ， 可 用于 当归 中阿魏 酸和 当归多糖 的含量测定。该提 取工艺效 率高、 重现性好 ， 适合 当归的提取 。
关键词 ： 当归 ； 提取 ； 测 定
当归最常用的中药之一。当归具有补血和血 ， 调经止 表 １提 取 工 艺 因素 水 平 表 痛， 润燥滑肠的功效 。当归具有抗血栓形成 、 改善血液循 环、 改善冠脉循环 、 抗炎 、 镇痛等作用Ｐ ｑ ｔ ￣阿魏酸（ Ｆ ｅ ｒ ｕ ｌ ｉ ｃ Ａ ｃ ｉ ｄ ） 的化学名称为 ４ 羟基 ３甲氧基肉桂酸 ， 具有抗血小板 聚集 ， 抑制血小板血栓素 ａ ２ （ ｔ ｘ ａ ２ ） 的生成 ， 镇痛， 缓解血管 痉挛等作用 。当归多糖具有抗肿瘤、 抗氧化、 镇痛 、 抗肿 瘤等作用。本实验以阿魏酸和当归多糖为指标 ， 采用正交 最大吸收峰， 故选用 ４ ８ ６ ｎ ｍ为检测波长。 ４ ． ２ 苯酚—硫酸法。 精密移取 ２ 试隘法 对当归的提取工艺进行研究。 ｍＬ于 ２ ５ ｍ Ｌ量瓶中， 分别加入 ５ ％苯酚试液 １ ． ０ ｍＬ ， 浓硫酸 ７ ． ０ ｍＬ ， 混匀。 １ 仪器与试药 ０分钟 ， 取出后冰水浴 １ ５ 分 。 ４ ． ３ 对照品的线 考察 。 精密称 １ ． １ 仪器： 英国艾德姆 Ｐ ＷＣ分析天平 德姆衡器（ 武汉 ） 有限公司 沸水浴 ３ ０ ０ ｍｇ ， 置２ ５ ｍ ｌ 容量瓶中， 加入水液使溶解并稀释至刻 １ ７ ３ ０ Ｑ Ｆ Ｙ超声波菲 先 器（ 匕 海洽女 义 暑 币 ｛ ’ 技有限公司） ； Ｒ 一 １ ０ ０ １ 一 Ｖ Ｎ旋转 取葡萄糖对照品 ５ 摇匀， 分别精密吸取 １ … ２ ４ ６ 、 ８ ｍ Ｌ ， 置于 １ ０ ｍ Ｌ量瓶中， 加水释至刻度 ， 蒸发仪（ 郑州长城科工贸有限公司） ； Ｌ Ａ Ｕ Ｄ Ａ Ａ ｑ ｕ ￣ ｉ ｎ ｅ 普及型恒温锅防 度 ， 依照 ４ ． ２ ￣ ｊ ｈ － ． Ｖ 的条件测定 ， 记录吸收度。以吸收度为纵坐标 ， 对照品 达贸易（ 上 海洧 限公司 ） ； Ｓ Ｈ Ｂ — Ｉ Ｉ Ｉ 循环水真空泵晒安中诺仪器有限公司） ； 摇匀， 绘制标准曲线。结果表明， 葡萄糖在 ２ １ ６ ｍ ｇ ・ ｍ Ｌ － 范围 Ｔ Ｕ 一 １ ９ ０ １双光束紫外可见分光光度计 ｄ Ｅ 京普析通用仪器有限责任公 浓度为横坐标， 内呈 良好的线 系。 ４ ４准确度试验。 精密称取已知含量的样品 ６ 份， 分 司） ； Ｌ ｃ 一 １ ０ ０ 度澎哼讹 电脑智能控制高效液相色谱仪（ 上海伍丰科学仪 别加入一定量的葡萄糖对照品， 上述方法进行测定 ， 计算回收率， 平均 回 器 有 限公 司） ｏ １ ． ２色 谱 柱 ：奥 泰 公 司 Ｃ １ ８色 谱 柱 （ ２ ５ ０ ｍｍ× 收率分别为 ９ ９ ． ２ ％ ， Ｒ Ｓ Ｄ为 ０ ． ８ ９ ％。 ４ ． ６ ｍｍ 。 ５ ｍ） 。 １ ． ３ 对照品 ： 阿魏酸 购自中国药品生物制品检定所。 １ ４试
中药当归多糖的研究进展
基金项目：党参多糖-硒化当归多糖抗氧化活性研究（wzyzr201922）；肾去细胞基质的制备和鉴定（wzyrc201801）；GCs在血管化卵巢去细胞生物 支架中的增殖及功能鉴定，KJ2018A0691。
作者简介：谢诗慧（1991—），女，安徽淮北人，硕士，助教，研究方向：基础兽医学。 收稿日期：2019-04-26
当 归 是 伞 形 科 植 物 当 归［Angelica sinensis （Oliv.） Diels］的干燥根。当归喜阴凉湿润气候，主要产于我国甘 肃、云南、四川等地。当归药用最早始于《神农本草经》， 中医有“十方九归”之说，是中医使用频率较高的中药。 当归入肝、心、脾经，药性甘、辛、温，具有补血活血、调经 止痛、润燥滑肠等功效［1］。现代药理研究表明，当归具有 提高免疫、抗肿瘤、造血、抗辐射损伤、抗氧化、镇痛等多 种生理功效［2］。其药理学活性作用与其药用成分密不可 分，当归的药用化学成分主要分为精油和水溶性成分2大 部分，精油以藁本内酯、别罗勒烯、苯酚、邻甲苯酚等为 主；水溶性成分主要包括多糖、丁二酸、烟酸、尿嘧啶、腺 嘧啶和胆碱等［3］。当归多糖为当归饮片水溶性主要成分， 具有增强免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗辐射、保肝等多种生物 学活性［4］。分离提纯化的当归多糖表面含有大量活性集 团，这些活性集团可与某些化学试剂进行反应，对当归多 糖进行化学修饰，使当归多糖的生物学活性作用得以改 善或使当归多糖产生新的生物学活性作用［5］。
安徽农学通报，Anhui Agri，Sci，Bull，2019，25（11）
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中药当归多糖的研究进展
谢诗慧
（芜湖职业技术学院生物工程学院，安徽芜湖 241003）
摘 要：当归多糖为当归饮片主要的药理学活性成分，具有增强免疫、抗氧化、抗肿瘤、抗病毒和造血等多种
当归多糖的分离纯化及其部分理化性质的研究
当归多糖的分离纯化及其部分理化性质的研究刘 娟,彭仁王秀,乐 江,田卫群(武汉大学医学院药理学系,湖北武汉430071)摘要:目的 对甘肃岷县产当归中获得的当归多糖(ASP)进行分离纯化,并测定其部分理化参数。
方法 采用水煮-醇沉法从新鲜当归中提取当归粗多糖,Sevag法除蛋白,冷冻干燥。
苯酚-硫酸法测定总糖含量;UV法及IR法检测多糖性质;自动旋光仪测定旋光度;采用凝胶渗透色谱-激光光散射联用技术(SEC-LLS)分析多糖的分子量范围及其分布;HP LC鉴定多糖的单糖组分及其相对百分比含量。
结果 所得当归多糖为浅米灰色,无甜味,易溶于水,总糖含量为96.8%;192nm处有明显吸收峰,260、280nm处均无吸收峰,证明被测物为多糖,且不含核酸及蛋白质;红外吸收光谱分析,在3352、2940、1747、1626、1414、1237、1021、536cm-1处表现为典型的多糖吸收峰;旋光度为+94.6°,糖残基间的苷键可能为α-糖苷键;分子量在1×104～111×105之间,80%的组分集中在413×104左右;当归多糖主要由葡萄糖、阿拉伯糖、半乳糖、鼠李糖和木糖组成,其摩尔比值为17.8∶5.8∶12∶1∶2.2。
结论 所用方法提纯的当归多糖糖含量较高。
关键词:当归多糖;当归;单糖;分离纯化;理化性质中图分类号:R917文献标识码:A文章编号:1006-0103(2004)06-0412-03Isolation,purification and partial properties of polysaccharides from Angelica sinensisLI U Juan,PE NG Ren-xiu,Y UE Jiang,TI AN Wei-(Department o f Pharmacology,Medical College o f Wuhan Univer sity,Wuhan430071,China)Abstract:OBJECTIVE T o is olate and purify the polysaccharides fractions from Angelica sinensis(ASP),and to determine the partial char2 acters.METH ODS H ot water extracting and ethanol precipitating method were employed to is olate polysaccharides from fresh Angelica sinensis.A fter the rem oval of protein by Sevag method,the purified ASP was dried by frozen drier.The am ount of total carbohydrates of ASP was measured with phenol-sulfuric acid method.FT-IR spectrometry,UV-spectrophotometer,and automatic spectropolarimeter were used to determine the characteristic abs orption and optical rotation of the polysaccharides,respectively.S ize exclusion chromatography with laser light scattering(SEC-LLS)technology was employed to measure the m olecular masses.The m onosaccharides contained in ASP were analysed by HP LC.RESU LTS The am ount of total carbohydrates in ASP was96.8%.Both UV and IR displayed representative polysaccharides properties.The m olecular weight distribution was1×104-111×105,and eight percent was distributed in413×104.The m onosaccharides constituent of ASP were glucose,arabinose,galactose,rhamnose and xylose,and their m olar proportions were17.8∶5.8∶12∶1∶2.2.CON2 C L USION The am ount of total carbohydrates is high in ASP distilled by this method.The range of m olecular weight and m onosaccharides constituents of ASP are affirmed.K ey w ords:Angelica sinensis polysaccharides;Angelica sinensis;M onosaccharides;Is olation;PurificationC LC number:R917Document code:A Article I D:1006-0103(2004)06-0412-03 当归具有活血补血、润肠调经、扶正固本之功效。
当归多糖和黄芪多糖的提取工艺研究
当归多糖和黄芪多糖的提取工艺研究
当归多糖和黄芪多糖是常见的中药多糖，具有多种药理作用和应用价值。
为了获得高纯度的当归多糖和黄芪多糖，需要对它们的提取工艺进行研究。
以下是当归多糖和黄芪多糖的提取工艺研究内容。
1.提取溶剂的选定
当归多糖和黄芪多糖均为水溶性多糖，因此一般采用水作为提取溶剂。
同时，还可以采用乙醇、甲醇等有机溶剂进行提取，在提高多糖产率的同时，也会影响多糖的纯度和活性。
2.提取条件的优化
在提取过程中，影响多糖产率和质量的因素有很多，如提取时间、提取温度、提取液料比等。
通过对这些因素的优化可最大程度提高多糖的产率和活性。
3.精制工艺的研究
为了获得更高纯度的多糖，可以采用离子交换、凝胶过滤、超滤等多种精制工艺进行脱色、去除杂质等处理，以达到提高多糖纯度的目的。
4.质量控制
本品的质量控制应遵循国家有关药物质量管理的规定和要求，实行严格的检测、检验及记录制度，对照样品进行检测，确保产品质量稳定可靠。
总之，以上是当归多糖和黄芪多糖提取工艺的研究内容，其研究对于生产中药多糖产品具有重要意义。
当归多糖的酶法提取新工艺研究
当归多糖的酶法提取新工艺研究张新国;代兴超;王强林;李春雷;张应鹏;李坤;胡淑娟;任菁;周莉;智康康【摘要】目的:研究当归多糖的酶法提取新工艺,并就提取多糖的抗肿瘤活性进行评价.方法:采用生物酶辅助提取技术进行当归多糖提取工艺研究,选用单因素实验探索酶用量、酶解温度、酶解种间及pH值对当归多糖提取率的影响,在单因素实验的基础上,采用正交试验对工艺条件进行优化,并采用MTT法评价当归多糖对hela细胞的抗肿瘤活性.结果:各因素对提取效果影响由大到小依次为:酶浓度＞酶解时间＞pH值＞酶解温度,最佳提取工艺条件为,纤维素酶浓度:0.4mg/mL、提取温度:60℃、提取时间:4h,pH =5.0,当归多糖得率为150.34mg/g,MTT结果证实提取多糖具有一定的抗肿瘤活性.结论:该工艺操作简单,成本较低,本研究为当归多糖的深度开发提供了科学依据.%Objective: Enzymatic extraction technology of polysaccharide from Angelica and its antitumor activity were studied. Method: The effects of enzyme dosage, enzymolysis temperature, enzymolysis time, enzymolysis pH value on the extraction rate of polysaccharide were studied by single - factor test. Then, the orthogonal experiment was performed to screen the optimum extraction technology. Antitumor activity of Angelica polysaccharide was evaluated by MTT method in hela cells. Result:The factors influencing the extraction process were in the order:enzyme dosage>enzymolysis time>enzymolysis pH value > enzymolysis temperature, and the optimum extracting technology was as follows: enzyme dosage 0.4mg/ml,enzymolysis temperature 60℃, enzymolysis time 4h and enzymolysis pH value 5. The polysaccharide extraction rate was 150.34mg/g under these conditions. The results of MTTmethod confirmed that Angelica polysaccharide had some antitumor activity. Conclusion: The enzymatic extraction technology is simple with low cost and provides a scientific basis for the further development of Angelica polysaccharide.【期刊名称】《中医药学报》【年(卷),期】2012(040)003【总页数】5页(P96-100)【关键词】当归;多糖;酶法提取;苯酚-硫酸比色法;MTT;血清药理学实验【作者】张新国;代兴超;王强林;李春雷;张应鹏;李坤;胡淑娟;任菁;周莉;智康康【作者单位】兰州理工大学生命科学与工程学院,甘肃兰州 730050;兰州理工大学生命科学与工程学院,甘肃兰州 730050;兰州理工大学生命科学与工程学院,甘肃兰州 730050;兰州理工大学生命科学与工程学院,甘肃兰州 730050;兰州理工大学生命科学与工程学院,甘肃兰州 730050;兰州理工大学生命科学与工程学院,甘肃兰州 730050;兰州理工大学生命科学与工程学院,甘肃兰州 730050;兰州理工大学生命科学与工程学院,甘肃兰州 730050;兰州理工大学生命科学与工程学院,甘肃兰州 730050;兰州理工大学生命科学与工程学院,甘肃兰州 730050【正文语种】中文【中图分类】R284.2当归是一味著名中药，素有“十方九归”的说法，为伞形科植物当归的根。
当归药物成分及提取工艺分析
当归药物成分及提取工艺分析
当归，是一种常见的中药材，其学名为Angelica sinensis，属于伞形科五加科植物，是中医药学中的重要药材之一。
当归含有多种活性成分，如挥发油、红色素、黄酮类化合物、多糖等。
这些成分赋予了当归多种药理活性，具有活血祛瘀、调经止痛、免疫调节、
抗氧化等功效。
首先是当归的挥发油成分，主要是由α-齐墩果酸酯、β-齐墩果酸酯、己酸、柠檬酸、水杨酸等组成的。
这些挥发油具有抗菌、抗炎、镇痛、降血压等作用。
挥发油可以通过蒸
馏提取的方式获得，一般采用水蒸气蒸馏法进行提取。
其次是当归的红色素成分，主要由花色苷类、黄酮类和类黄酮类化合物组成。
这些成
分具有抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等功效。
红色素可以通过溶剂浸提法进行提取，常用的
溶剂有乙醇、甲醇等。
当归中的黄酮类化合物主要包括当归素、当归苷等，这些成分具有活血祛瘀、抗凝血、促进血液循环等作用。
黄酮类化合物可以通过水提法、酒精提取法、超声波辅助提取法进
行提取，其中水提法提取效果较好。
当归中还含有多糖类成分，这些多糖具有免疫调节、抗肿瘤、抗炎等作用。
多糖类可
以通过水煮法提取，将当归加入水中煮沸一段时间后，过滤得到提取液。
当归药物中的活性成分包括挥发油、红色素、黄酮类化合物和多糖类，它们可以通过
蒸馏提取、溶剂浸提、水提法和水煮法等多种工艺进行提取。
这些工艺可以充分提取当归
中的有效成分，为当归药物的研究和开发提供了基础。
不同工艺提取的药物成分含量和功
效可能有所差异，因此需要根据具体需要选择适合的提取工艺。
2019年当归多糖提取分离工艺研究与车间设计.doc
目录中文摘要 (3)英文摘要 (4)1 引言 (5)1.1 课题背景与研究意义 (5)1.2 国内外研究现状 (7)1.3 课题主要研究内容 (9)2 当归多糖提取分离工艺与纯化实验研究 (10)2.1 原料与试剂 (10)2.2 仪器与设备 (10)2.3 实验方法 (10)2.3.1 当归预处理 (10)2.3.2 当归多糖含量测定 (10)2.3.3 提取实验单因素设计 (11)2.3.4 正交实验设计 (13)2.4 结果与分析 (13)2.4.1 标准曲线绘制 (13)2.4.2 单因素试验分析 (14)2.4.3 正交实验结果分析 (23)2.4.4 最佳工艺放大实验 (25)2.5 当归多糖膜分离与纯化 (25)2.5.1 当归多糖初步纯化 (25)2.5.2 当归多糖的微滤 (25)2.5.3 当归多糖膜分离 (25)3 工厂设计 (27)3.1 物料恒算 (27)3.1.1 当归原料物料恒算 (27)3.1.2 乙醇物料恒算 (27)3.1.3 水物料恒算 (27)3.1.4 酶恒算 (27)3.2 热量恒算 (28)3.3 设备选型与计算 (28)3.3.1 粉碎机械设备选型 (28)3.3.2 水提罐设计 (28)3.3.3 微滤设备选型 (29)3.3.4 膜分离设备选型 (29)3.3.5 真空干燥设备选型 (29)3.3.6 包装设备选型 (29)3.3.7 其他辅助设备选型 (29)3.4 多功能提取罐设计与计算 (30)3.4.1 基本参数设计 (30)3.4.2 总体设计 (30)3.4.3 结构设计与计算 (30)3.5 技术经济分析 (32)3.5.1 全厂总投资 (32)3.5.2 成本核算 (33)3.5.3 毛利润核算 (34)3.5.4 其他费用核算 (35)3.5.5 年利润恒算 (35)结论 (36)谢辞 (36)参考文献 (37)当归多糖提取分离工艺研究与车间设计摘要:本文当归多糖提取率为考察指标，通过单因素试验和正交试验研究优化了当归多糖酶解水提法的提取工艺条件，结果表明：浸提时间150min，纤维素酶与果胶酶的比例2︰4，加酶总量0.3(g/10g当归)，酶解温度45℃，料液比1︰10，浸提温度80℃，浸提1次，在此条件下当归多糖提取率达到9.67%，放大试验证明该工艺稳定可行。
微博辅助提取当归多糖
5.8 5.6 5.4
多 糖 产 率%
5.2 5.0 4.8 4.6 4.4 4.2 10 15 20 25 30
提 取 时 间（ min ）
图2
提取时间的变化对当归中多糖的提取率的影响
由图2可知多糖的产率随着提取时间的增加而增 加最后趋于平稳，考虑到时间和能源的节约， 故可选取15min，20min，25min做后面的正交 试验。 3.2.3料液比的变化对当归中多糖的提取率的影 响 以料液比1：5，1：10，1：15，1：20，1：25 （20g/100 ml，10g/100 ml，6.67g/100 ml， 5g/100 ml，4g/100 ml）在80℃，600 W的条件 下分别微波提取20 min抽滤得多糖滤。标准曲 线法测多糖的含量并计算产率。多糖提取率对 料液比作图，（图3）
表1 微波辅助提取L9(34)正交实验设计
水平A微波功率(w)
1 500
因素
B微波时间(min) C料液比（mg/ml）
15
1：10
2
600
20
1：15
3
700
25
1：20
正交实验结果及分析 表2 L9(34)正交实验结果
因素与水平 试验号 A 1 2 3 4 5 6 7 8 9 1 1 1 2 2 2 3 3 3 B 1 2 3 1 2 3 1 2 3 C 1 2 3 2 3 1 3 1 2 D 1 2 3 3 1 2 2 3 1 5.55 7.21 5.74 5.38 7.67 4.39 3.64 4.42 6.00 多糖提取率(%)
7.0 6.5
多 糖 提 取 率 ％
6.0 5.5 5.0 4.5 4.0 400 500
微 波
当归多糖和黄芪多糖的提取工艺研究
当归多糖和黄芪多糖的提取工艺研究Extraction Process of Polysaccharides from Angelica sinensis and Astragalus学科专业：制药工程研究生：许会生指导教师：赵广荣副教授张铁军研究员天津大学化工学院二零零七年六月独创性声明本人声明所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作和取得的研究成果，除了文中特别加以标注和致谢之处外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果，也不包含为获得天津大学或其他教育机构的学位或证书而使用过的材料。
与我一同工作的同志对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示了谢意。
学位论文作者签名：签字日期：年月日学位论文版权使用授权书本学位论文作者完全了解天津大学有关保留、使用学位论文的规定。
特授权天津大学可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库进行检索，并采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编以供查阅和借阅。
同意学校向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘。
（保密的学位论文在解密后适用本授权说明）学位论文作者签名：导师签名：签字日期：年月日签字日期：年月日摘要当归和黄芪是两味常用的传统中药，本文主要探索了其有效部位当归多糖和黄芪多糖的提取工艺，建立了多糖含量测定方法，主要的研究内容和结果如下。
对苯酚-硫酸法和间羟基联苯法的线性和范围、精密度、稳定性和准确度等指标进行考察，为多糖质量控制标准的建立提供了参考。
同时确立了多糖中蛋白质含量方法。
用苯酚-硫酸法测定了当归和黄芪中的多糖含量，试验结果表明，当归和黄芪多糖的含量分别为11.31%和8.27%。
通过单因素试验和正交实验，确定了当归多糖的最佳提取条件为提取温度100℃，固液比为1：10，提取4次，每次2h。
当归多糖的乙醇沉淀最佳工艺为当归多糖的浓缩比为0.75g生药/ml水，加入3倍体积95%乙醇，静置12h。
脱除当归多糖中蛋白质的的最佳工艺为，5%三氯乙酸，静置1h，处理3次。
当归多糖的提取纯化工艺研究
图3 上样量对白果内酯分离效果的影响Fig 3 Effect of sample volume on isolation of bilobalide3 讨论硅胶柱色谱分离白果内酯时,洗脱剂、洗脱速度、上样量是影响分离效果的重要因素。
提高洗脱剂中醋酸乙酯的比例,可加快洗脱速度,但白果内酯的得率低;提高洗脱剂中石油醚的含量比例,则反之。
洗脱速度越慢越有利于白果内酯的分离。
本实验采用一次硅胶柱分离后得到了质量分数为82%的白果内酯,经结晶纯化,最终可得质量分数为98%的白果内酯单体。
此方法得率较高,可应用于白果内酯的批量制备。
参考文献:[1] 苏 静 高速逆流色谱法分离纯化银杏叶中白果内酯和银杏内酯A 、B 、C[J] 中草药,2008,39(11):1644 1648[2] 颜迎春 银杏内酯B 和白果内酯分离纯化的研究[D] 天津:天津大学,2003[3] 何 珺 银杏叶提取物中白果内酯分离提取及其综合利用的研究[D] 贵阳:贵州大学,2004[4] 潘 见,徐 涛 配位色谱法分离纯化白果内酯[J ] 药物分析,2005,25(6):614 617[5] 韩金玉 银杏内酯A 、B 和白果内酯的分离与纯化[J ] 中草药,2000,31(9):652 653[6] 王 帆,胡小钟 分析用银杏内酯对照品的制备研究[J] 中草药,2005,7(7):1008 1010[7] 何珺,何照范 DA201型大孔吸附树脂分离银杏叶提取物中银杏内酯A 、B 、C 和白果内酯的研究[J ] 中草药,2004,35(12):1359 1360[8] 中国药典[S ] 一部 2005当归多糖的提取纯化工艺研究韦 玮1,龚苏晓2,张铁军2*(1 天津中医药大学,天津 300193;2 天津药物研究院,天津 300193)摘 要:目的 优选并确立当归多糖的最佳提取和纯化工艺。
方法 以多糖收率为指标,采用正交试验法对提取过程中加水倍量,提取时间及提取次数进行优化研究;以多糖收率和质量分数为考察指标,采用传统乙醇沉淀法进行比较。
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图3 上样量对白果内酯分离效果的影响Fig 3 Effect of sample volume on isolation of bilobalide3 讨论硅胶柱色谱分离白果内酯时,洗脱剂、洗脱速度、上样量是影响分离效果的重要因素。
提高洗脱剂中醋酸乙酯的比例,可加快洗脱速度,但白果内酯的得率低;提高洗脱剂中石油醚的含量比例,则反之。
洗脱速度越慢越有利于白果内酯的分离。
本实验采用一次硅胶柱分离后得到了质量分数为82%的白果内酯,经结晶纯化,最终可得质量分数为98%的白果内酯单体。
此方法得率较高,可应用于白果内酯的批量制备。
参考文献:[1] 苏 静 高速逆流色谱法分离纯化银杏叶中白果内酯和银杏内酯A 、B 、C[J] 中草药,2008,39(11):1644 1648[2] 颜迎春 银杏内酯B 和白果内酯分离纯化的研究[D] 天津:天津大学,2003[3] 何 珺 银杏叶提取物中白果内酯分离提取及其综合利用的研究[D] 贵阳:贵州大学,2004[4] 潘 见,徐 涛 配位色谱法分离纯化白果内酯[J ] 药物分析,2005,25(6):614 617[5] 韩金玉 银杏内酯A 、B 和白果内酯的分离与纯化[J ] 中草药,2000,31(9):652 653[6] 王 帆,胡小钟 分析用银杏内酯对照品的制备研究[J] 中草药,2005,7(7):1008 1010[7] 何珺,何照范 DA201型大孔吸附树脂分离银杏叶提取物中银杏内酯A 、B 、C 和白果内酯的研究[J ] 中草药,2004,35(12):1359 1360[8] 中国药典[S ] 一部 2005当归多糖的提取纯化工艺研究韦 玮1,龚苏晓2,张铁军2*(1 天津中医药大学,天津 300193;2 天津药物研究院,天津 300193)摘 要:目的 优选并确立当归多糖的最佳提取和纯化工艺。
方法 以多糖收率为指标,采用正交试验法对提取过程中加水倍量,提取时间及提取次数进行优化研究;以多糖收率和质量分数为考察指标,采用传统乙醇沉淀法进行比较。
结果 最优提取工艺为加水10倍量,提取3次,每次提取时间3h;最佳纯化工艺为:当归水提液浓缩后,加入乙醇使醇沉体积分数达到80%,静置12h,醇沉2次。
结论 所得当归多糖的质量分数达到50%以上,满足实验要求。
关键词:当归;多糖;提取;纯化当归为伞形科植物当归A ngelica sinensis (Oliv )Diels 的干燥根,入肝、心、脾经,药性甘、辛、温,具有补血活血、调经止痛、润燥滑肠等功效,用于血虚萎黄,眩晕心悸,月经不调,经闭痛经,肠燥便秘等病症,为临床使用频率最高的中药之一,素有 十方九归 之称[1]。
当归多糖是当归中的主要成分之!137!中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第40卷增刊2009年*收稿日期:2009 05 06基金项目:国家科技支撑计划项目(2007BAI37B07)作者简介:韦 玮(1982∀),女,天津中医药大学,硕士研究生。
E mail:w eiw eih elen@yahoo com cn *通讯作者 张铁军 T el:(022)23006848 E m ail:tiez heng4@s ina com一,近年来国内外对当归多糖的成分研究和药理学研究有了新的进展,发现其对机体免疫系统、造血系统的明显作用以及抗肿瘤、抗放射性损伤的良好疗效[2]。
当归多糖有提升T淋巴细胞数量的作用,能通过促进T细胞产生白细胞介素2(interleukin 2, IL 2),也能显著促进血虚小鼠脾淋巴细胞产生IL 2。
同时,当归多糖还具有很强的诱生 干扰素的能力[3]。
但是当归多糖提取纯化工艺条件优化的报道较少,因此本实验针对提取和纯化的有关条件进行了研究,以当归多糖收率和质量分数为考察指标,采用L9(34)正交试验法对提取过程中加水倍量,提取时间,提取次数进行了优选研究,对纯化方法进行了比较研究,确立了当归多糖的最优制备工艺,旨在为后续新药研究工作提供参考。
1 仪器与材料UV∀1601型紫外 可见分光光度计(日本岛津),AB∀104型电子分析天平(M ettler T oledo上海仪器有限公司)。
95%乙醇(医用),葡萄糖(分析纯,天津市化学试剂一厂),苯酚(分析纯,天津市化学试剂一厂),硫酸(分析纯,天津市化学试剂三厂),其他试剂均为分析纯。
当归药材购于甘肃岷县,经天津药物研究院中药现代研究部张铁军研究员鉴定为伞形科植物当归A sinensis(Oliv )Diels的干燥根,经检测符合#中国药典∃2005年版一部的有关规定。
将当归药材粉碎,加95%乙醇提取两次,每次1h,将脱脂后的当归药渣于空气中晾干,挥发去溶剂后收集待用。
2 方法与结果2 1 影响提取的主要因素的选择:通过预试验和单因素试验得知影响当归提取的主要因素为加水倍量、提取时间及提取次数。
为进一步优选各因素最佳工艺水平,以当归多糖收率(当归多糖收率=多糖质量/药材质量%100%)为指标,采用L9(34)正交表优选水提当归多糖的最佳提取工艺条件,因素与水平见表1。
表1 因素与水平Table1 Factors and levels水平因 素A加水量/倍B提取时间/h C提取次数/次1101121222314332 2 当归多糖的测定2 2 1 对照品溶液的制备:精密称取105&干燥至恒重的无水葡萄糖对照品60 6m g,置100mL量瓶中,加蒸馏水溶解并稀释至刻度,摇匀,即得(每1mL中含无水葡萄糖0 606mg)。
2 2 2 4%苯酚试剂的配制:取苯酚100g,加铝片0 1g和碳酸氢钠0 05g,蒸馏,收集182&馏分。
称取此馏分4g,加蒸馏水100mL溶解,置棕色瓶中存冰箱备用。
2 23 供试品溶液的制备:各精密量取2mL,加乙醇10m L,搅拌,离心,取沉淀加水溶解,置250mL 量瓶中,并稀释至刻度,即得。
2 2 4 标准曲线的制备:精密量取葡萄糖对照品溶液1 0、2 0、3 0、4 0、5 0、6 0mL,分别置50mL 量瓶中,加水至刻度,摇匀。
精密量取上述各溶液2 m L,置具塞试管中,分别加4%苯酚溶液1m L,混匀,迅速加入硫酸7 0m L,摇匀,于40&水浴中保温30m in,取出,置冰水浴中5m in,取出,以相应试剂为空白,照紫外 可见分光光度法(#中国药典∃2005年版一部附录VA),在490nm的波长处测定吸光度(A)。
以A为纵坐标,葡萄糖质量浓度(C)为横坐标,绘制标准曲线,得回归方程A=0 009C-0 0011,r=0 9995。
结果表明葡萄糖在12 12~ 72 72 g/m L与吸光度呈良好的线性关系。
2 2 5 精密度试验:精密量取同一供试品溶液2 mL,按标准曲线的制备项下方法操作,测定吸光度值,重复测定6次,求得吸光度值的RSD为0 19%。
2 2 6 稳定性试验:精密量取供试品溶液2m L,按标准曲线的制备项下方法操作,每10min测定1次A值,到1h后改为30min测定1次,求得多糖质量浓度,测定值在120m in内保持稳定,其RSD值为0 92%。
2 2 7 测定方法:精密量取供试品溶液2mL,按标准曲线的制备项下方法操作,测定A值并代入回归方程计算多糖质量浓度,计算多糖收率。
2 3 正交试验设计:取当归药渣9份,每份28 8g (相当于原药材40g),按正交设计方案安排提取,滤过,合并水提液,测定,计算多糖收率。
对试验结果进行直观分析和方差分析,结果见表2和3。
方差分析的结果表明,以多糖收率为指标,提取时间和提取次数有显著影响。
直观分析可知,在所选取的条件中,当归多糖提取的影响因素的主次分别为C>B>A,提取次数对多糖收率影响最为明显,其次为提取时间和加水倍量。
从省时降耗及生产实际出发,在保证提取充分的前提下,综合分析各个因素,拟定最佳工艺条件为C3B3A1,即加水10倍量,提取3次,每次提取时间3h。
!138!中草药 Chinese Traditional and Herbal Drugs 第40卷增刊2009年表2 正交试验的设计与结果Table2 Design and results of orthogonal test试验号A B C D(空白)多糖收率/%111112 518212224 726313336 622421233 872522315 499623123 936731325 503832133 144933216 707K14 6223 9643 1994 908K24 4364 4565 1024 722K35 1185 7555 8754 546R0 6821 7912 6760 362表3 方差分析Table3 Analysis of variance因素偏差平方和自由度F值显著性A0 74623 787B5 135226 066P<0 05 C11 374257 736P<0 05 D(误差)0 202F0 01(2,2)=99 00, F0 05(2,2)=19 002 4 验证试验:为了进一步验证所选条件的正确性与科学性,对所选最佳提取工艺条件进行验证性试验,增加试验可信度。
按优选的工艺条件进行验证试验,测得多糖收率平均值为6 840%,RSD为1 91%。
对提取工艺进行考察和验证的另一个指标是提取率(即提取物目标成分质量/药材中目标成分质量%100%),当归原药材中多糖质量分数为8 54%,经计算其提取率可达到80%,结果表明该工艺稳定可行。
2 5 纯化工艺的研究:采用传统的乙醇沉淀法纯化当归多糖,以多糖收率(即多糖的质量/药材质量%100%)和多糖质量分数(即多糖的质量/提取物的质量%100%)为考察指标,研究最佳纯化工艺。
取当归多糖提取液,浓缩,加入乙醇使醇沉体积分数达到80%,静置12h,抽滤,收集沉淀,沉淀用无水乙醇反复清洗,称定质量,即为一次醇沉当归多糖。
将一次醇沉当归多糖用蒸馏水溶解,加入乙醇使醇沉体积分数达到80%,静置12h,抽滤,收取沉淀,沉淀用无水乙醇反复清洗,称定质量,即为二次醇沉当归多糖。
分别测定两份当归多糖的收率和质量分数,结果见表4。
可知,当归水提液经过二次醇沉后,其多糖质量分数显著提高,并且超过50%,对纯化工艺进行考察和验证的另一个指标是转移率(即纯化后目标成分质量/纯化前目标成分质量%100%),经计算其转移率可达到80%以上,达到相关要求,所以选取醇沉次数二次。
制备得到的当归多糖粉碎后为浅黄棕色粉末。
表4 不同醇沉次数对多糖的影响Table4 Effect of dif ferent alcohol precipitationtimes on polysaccharide醇沉次数固形物提取率/%多糖收率/%多糖质量分数/%一次15 335 5035 90二次10 165 1650 753 讨论多糖的测定一般用比色法,常用的显色剂有蒽酮 硫酸和苯酚 硫酸。