除草剂生物测定方法

30
三、除草剂室内生物测定方法

2.3 、燕麦法 本法适于测定三氮苯除草剂如阿特拉津、 西玛津以及取代服类除草剂的活性。
31
三、除草剂室内生物测定方法

2.4 、萝卜叶子法 常用于测定触杀型除草剂，如百草枯、 除草醚、敌稗等。
32
三、除草剂室内生物测定方法

2.4 、萝卜叶子法 萝卜种子放于垫有二层滤纸的在培养皿内， 加入适量蒸馏水，加盖后置于27 ℃恒温 箱内培养约30h，从幼苗上切下子叶，选 择一致的10片放于垫有一层滤纸的培养皿 内（直径5cm），皿内盛有2mM磷酸缓冲 液配制的除草剂药液5ml，25 ℃ ， 2000~3000lx光照下恒温培养，3天后， 称子叶鲜重（也可测叶绿素含量）。
3.1 藻类实验法 用烧杯或三角瓶，分别加入培养基和一定 浓度的除草剂，25 ℃下，荧光灯照明培 养。
37
三、除草剂室内生物测定方法

测定方法 A：观察颜色变化方法 某些药剂处理小球藻后，可使小球退色， 可以施药5天后观察小球藻退色变化情况。
38
三、除草剂室内生物测定方法

测定方法 B：通过比色测定小球藻增殖率的方法 小球藻增殖，培养液中的绿色逐渐变浓， 用分光光度计在波长547nm下比色测定， 吸光度与小球藻细胞数量间存在明显的直 线关系。
48
四、除草剂生物测定技术的应用

2、除草剂作用特性的测定 在研究除草剂的吸收与作用部位时，可用活 性炭作隔离层。
41
三、除草剂室内生物测定方法

3.2 浮萍法 以10%的Hoagland培养液配制待测药剂， 在每杯100ml药液表面上放10株大小一致 不带芽体的紫萍，1-2周后调查反应级数 （根据药害，即叶片黄化或失绿等），或 用80%丙酮于冰箱中萃取叶绿素，以分光 光度计在652nm下测光密度。
42
三、除草剂室内生物测定方法
18
三、除草剂室内生物测定方法

1.2、小杯法 在50ml小烧杯底部放一张圆滤纸片，加入 5ml待测除草剂溶液，选10粒大小一致刚 发芽的稗草粒放入杯内（根据除草剂种类 可选用小麦、水稻、油菜等）。如用旱地 作物，可在滤纸下放一层（约10粒）直径 为0.5cm的玻璃球，置28℃生长箱内培养 4~7天，白天给予日光灯照。培养期间加 盖玻璃片，并补蒸馏水。三天后可测量株 高或鲜重。
除草剂生物测定

除草剂生物测定是利用活的生物体或 生物体器官，在生长、形态等方面对 化学物质（除草剂）的不同反应来确 定除草剂的效果。
1
第四章 除草剂生物测定

通常选择对除草剂敏感的植物作生测材料。 如单子叶植物（稗草、马唐、谷子等）对 拉索、拿扑净敏感
2
3
稗草
4
一、测定试材选择


生物材料选择必须符合的条件： （1）在一定浓度范围内，植物体对除草 剂的反应随着浓度的增加而有规律的增加。 （2）在环境条件相似时，实验要有可重 复性
5
一、测定试材选择

1、生物试材的选择 对除草剂的敏感性和不敏感性； 生物试材的生育期和生长状况 同种作物的不同品种 一株作物的不同部位
27
三、除草剂室内生物测定方法


2.1、去胚乳小麦幼苗法 本法是测定抑制光合作用除草剂的专用方 法。 有研究认为，药剂浓度的变化对叶长（根 基到最长叶尖）影响最大，因此，应以叶 长作为评价指标，而其他指标则偏低或偏 高，不宜采用。
28
三、除草剂室内生物测定方法


2.2、番茄水栽法 将10ml除草剂的培养液稀释液倒入试管中， 取4 株具有2片真叶的番茄幼苗，剪去子 叶及主根称重后，插入试管中，尽量使番 茄幼苗重量一致， 25℃光照培养2周后称 幼苗鲜重，计算抑制率。 本法适于测定取代脲类及三氮苯类光合作 用抑制型除草剂。
44
鉴定法 根据除草剂对某种植物产生的特异症状来 鉴定是否含有该类除草剂，常见的是激素 类除草剂。 2，4-D在浓度低至0.025μg 就使棉叶产生 明显的杯状叶。
45
三、除草剂室内生物测定方法


5、愈伤组织鉴定法 应用愈伤组织鉴定除草剂是一项新技术， 必须具备组织培养技术。 应用愈伤组织与应用整株植物做实验，其 结果具有相关性。
11
二、除草剂室内生物参数的选择



2、植株的生长量 即称量试材的重量，通常有鲜重和干 重。 当用光合作用抑制剂处理植物进，可 测量叶长或株高，以代替称重。
12
二、除草剂室内生物参数的选择


3、生理生化指标 植物呼吸作用、光合作用、新陈代谢 物质的变化、植物的耗水量等。
13
二、除草剂室内生物参数的选择
24
三、除草剂室内生物测定方法

2,4-D在较低浓度时，能够促进植物生长 和扦插枝条生根等。当高浓度时，它能够 抑制植物生长，甚至还能够杀死双子叶植 物。
25
三、除草剂室内生物测定方法

2、植株生长量测定法 将试材在含有药剂的基质中生长一段时间 后，测定某个部位或整株植物的生长量， 如株高、鲜重或叶长、叶面积等。
29
三、除草剂室内生物测定方法

2.3、燕麦法 将土样烘干，过lmm筛后，加入除草剂， 使土壤水分达到最大田间持水量的60 % 。取土200g装人底部带孔的玻璃皿中，播 种己催芽露白的燕麦种子10~12粒, 出苗 后定8株苗，每天从底部灌水，保持原来 的重量。于光照下培育14d后，测定植株 地上部鲜重与干重，或幼龄叶片数及第 2、 3叶片的重量，计算IC50。
34
三、除草剂室内生物测定方法



2.6 、再生苗测量法 将6粒已催芽的玉米种子在截面积为8c㎡的 瓷钵内，在幼苗3叶期时喷草甘膦，24小时 后，从第一片玉米叶基部剪去顶端，经过一 段时间，测量再生苗的鲜重或高度。 也可用在喷药后不同时间剪去苗的地上部分， 测其再生后地上部分的鲜重。 此法可测定内吸性传导性且作用缓慢的除草 剂。
8
野燕麦
9
二、除草剂室内生物参数的选择

除草剂对植物的影响一般为非专一性 的，多种器官均可作为某一除草剂的 活力指标。
10
二、除草剂室内生物参数的选择




1、种子发芽 许多除草剂可抑制敏感种子的发芽及 胚根和芽鞘的生长。 抑制光合作用的除草剂一般不影响种 子发芽。 黄瓜、高梁、燕麦、水稻、玉米等是 萌发实验常用的植物。


4、症状 有些除草剂可引起一些典型的症状。 根据棉花叶片的畸形现象来判断2,4D的存在。
14
二、除草剂室内生物参数的选择



5、特殊技术 如烟草愈伤组织用某些除草剂处理后 生长量减少。 一些除草剂处理分离的原生质体后， 使原生质体出现异常现象。
15
三、除草剂室内生物测定方法

1、种子发芽测定法 利用种子发芽率、根与茎的生长量或伸长 度在一定范围内与药剂剂量呈相关性，进 行除草剂的生物测定，有较高的灵敏度。
6
一、测定试材选择



除草醚、拉索、氟乐灵、敌草隆等作为土 壤处理剂，要求试材是种子或刚发芽和幼 苗。 选择一致的种子。 稗草粒秋天成熟后有3-6个月的休眠期， 可用50℃及0℃进行变温处理打破休眠。 也可用赤霉素、激动素、硫酸或热水浸泡 等方法打破种子休眠。
7
一、测定试材选择

2、试材所需环境条件 水分、温度、氧气，光照 野燕麦：10-18 ℃ 稗草： 17-32 ℃
1.5、黄瓜幼苗形态法 将15ml不同浓度除草剂溶液移入垫有滤纸 片的直径15cm的培养皿中，加入10~20 粒黄瓜种子，在28℃恒温箱中培养96h后， 测量初生根和地上部分长度或描绘整个幼 苗图形。除草剂浓度与生长受抑制程度间 存在着定量关系。
23
三、除草剂室内生物测定方法

1.5、黄瓜幼苗形态法 此法是测定激素类除草剂及其他植物生长 调节剂活性的常用方法，测定范围大 （0.1-1000μL/ml），在测定2,4-D类除草 剂含量时，常制作“标准黄瓜幼苗形态 图”。
19
三、除草剂室内生物测定方法


1.2、小杯法 此法适于测定二苯醚类、酰胺类、氨基甲 酸酯类除草剂。对抑制光合作用的除草剂 不能用此法。 此法简便、周期短，范围广。
20
三、除草剂室内生物测定方法

1.3、小麦根长法 直径9cm培养皿内铺满一层0.5cm的玻璃 球，移入10ml不同浓度的待测药液，放入 10粒露白的小麦种子，以蒸馏水为对照， 在20~25 ℃培养箱中培养5~7天，测其根 长。
39
三、除草剂室内生物测定方法

测定方法 C：浓缩细胞量测定法 把一定量的小球藻悬浊液放入带刻度的离 心管中，1800rpm离心5分钟，测定沉淀 小球藻的体积。
40
三、除草剂室内生物测定方法


测定方法 D：叶绿素含量测定法 根据小球藻中叶绿素的含量与药剂浓度的 相关性，可以把叶绿素提取出来，测其含 量。 用甲醇在0-5 ℃黑暗条件下提取24小时。
33
三、除草剂室内生物测定方法

2.5 、叶鞘滴注法 当正常生长的燕麦长至1个半叶(即1叶1心) 时，在第一片叶张开的叶鞘里滴加供试的 一定浓度的药液，24-28小时后，从根上 部切下2cm长的一段茎，插入清水洋菜培 养基上，再经24小时(此时对照叶片伸长 约11-13cm)，取出测量每一剂量处理的叶 片延伸长度。
26
三、除草剂室内生物测定方法

2.1、去胚乳小麦幼苗法 将小麦种子浸泡 2h 后， 铺在放有湿布或 湿滤纸的瓷盘中，于 20 ℃左右恒温箱中催 芽，待芽长至 2~3cm 时，选高度一致的幼 苗，用镊子摘除胚乳，在清水中漂洗后放 人 50ml 烧杯中，每杯10 株，加人 3ml 待 测除草剂和 6ml 稀释 10 倍后的培养液， 保持 21~26℃，在光照下培养 7d，测定从 芽鞘到最长叶尖的距离。

3.3 圆叶片漂浮法 它是测定光合作用抑制剂的方法。 其原理是植物在进行光合作用时，叶片组 织内产生较高浓度的氧气，使叶片容易漂 浮，而光合作用受抑制，不能产生氧气， 则叶片难以漂浮。
43
三、除草剂室内生物测定方法

3.3 圆叶片漂浮法 生长6周的黄瓜幼叶或3周的蚕豆叶或展10 天的南瓜叶片，用打孔器打9㎜直径的圆 叶片，立即转入250mL的三角瓶中，加入 50mL 0.01M磷酸钾缓冲液配制的不同浓 度的除草剂，并加入适量的碳酸氢钠，使 叶片全部沉底。在黑暗下保持5分钟，在 250W荧光灯下曝光，开动秒表，记录全 部叶片漂浮所需要的时间。
35
三、除草剂室内生物测定方法


3、生理生化指标测量法 3.1 藻类实验法 应用绿藻(chlorophyta)、蓝藻(cyanophyta) 等微小的藻类进行测定，小球藻法是最为 普遍的一种方法。 对光合作用抑制剂，小球藻和高等植物间 有较好的一致性。
36
三、除草剂室内生物测定方法

16
三、除草剂室内生物测定方法


1.1、高粱根茎法 高粱法操作简便，培养期间不用管理，周 期短，测定范围广等优点，还可改用燕麦、 黄瓜等为材料来扩大测试范围。 此法适用于多种非光合作用抑制剂，高粱 提前1天25 ℃催芽，芽长1~2mm即可。
17
三、除草剂室内生物测定方法

1.1、高粱根茎法 直径9cm培养皿，装满干净的河沙，刮平， 每皿缓慢加入20ml不同浓度的待测药液， 使全皿沙子湿润。用细玻璃棒扎孔，将萌 发的高粱种子(根尖尚未长出根鞘,可提前 一天在25 ℃温箱内催芽)置于小孔中，胚 芽朝上，于26~28 ℃培养箱中黑暗培养 36-42h，测高粱的根长和芽长。
46
三、除草剂室内生物测定方法


5、愈伤组织鉴定法 培养基的制备 外植体的选择与消毒 接种：100mg比较适宜 培养条件 生长量的测定：测鲜重或干重，也可测定 浓缩细胞量。
47
四、除草剂生物测定技术的应用

1、对作物安全性的测定 选择性指数 =抑制作物生长（或死亡）10%的剂量/抑制 杂草生长（或死亡）90%的剂量
21
三、除草剂室内生物测定方法


1.4、稗草胚轴法 在50ml烧杯中，加入5ml不同浓度的除草 剂溶液，放入10粒发芽一致的稗草粒，在 种子周围撒些干净石英砂，以防幼苗浮起， 置28~30℃恒温箱内培养4天，测定稗草 胚轴长度。 此法适于测定酰胺类除草剂。
22
三、除草剂室内生物测定方法