中药血清药理学研究金银花的抑菌活性

μg /mL , 将它 们分 装于 试管 中 , 并 加入 种菌 液 2、 1
0105mL ,在 37 ℃ 下培养约 48h。以含药量低而肉眼
看不见细菌生长的那一管的含药量为药物对该菌种 的最低抑菌浓度 (M IC ) 。
1. 6. 4 含药血清抑菌活性试验
南 )、 3. 75% (四川 ) 、 3. 69% (贵州 ) 。对于单峰面积 占总峰面积 2%以上的峰 , 其色谱峰的相对保留时 间和相对峰面积恒定与否是方法学考察的重点 。稳 定性试验结果显示 , 其 RSD 在 1. 07%以内 , 样品溶 液在 48h 内稳定 ; 精密度试验结果表明 , 其 RSD 小 于 0. 79% ; 重复性试验结果为 : 其 RSD 在 1. 74%以 内 。绿原酸的加样回收率为 98. 2% ～101. 9% , RSD 为 1. 47% ( n = 5 ) 。
将金银花药材制成的供试液 , 按上述色谱条件 进样分析 ,不同产地金银花提取液中绿原酸提取率 分别为 6. 1% (秀山 ) 、 4. 12% (山东 ) 、 3. 82% (河
表 1 产地 秀山 药物浓度 (μg /mL ) 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 山东 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 金黄色葡萄球菌 河南 大肠杆菌 四川 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌 贵州 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌
2. 2 金银花中绿原酸含量检测的方法学考察
金银花提取液对大肠杆菌 、 金黄色葡萄球菌的 最低抑菌浓度测定结果见表 1。表 1 结果显示 , 金 银花提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球力的 M IC 分别为 9. 375m g /mL 和 75mg /mL (秀山 金银 花 例 外 ,其 M IC 均低一半 ) 。它们对大肠杆菌和金黄色 葡萄球菌均有较强的抑制作用 。金银花对金黄色葡 [2 - 6] 萄球菌的抑菌作用强于大肠杆菌 , 这与文献 报 道基本相符 。
2. 4. 3 含药血清最低抑菌浓度 含药血清对大肠杆菌 、 金黄色葡萄球菌的最低 抑菌浓度测定结果见表 2。表 2 结果显示 , 含药血 清对大肠 杆菌 和 金 黄 色 葡 萄 球 菌 的 M IC 分 别 为
μg /mL 和 0. 25 μg /mL。它们对大肠杆菌和金黄 015 色葡萄球菌均有较强的抑制作用 。含药血清对金黄 色葡萄球菌的抑菌作用强于大肠杆菌 。
金银花提取液对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的 M IC 测定
1200 600 300 150 75 + 37. 5 + + + 18. 75 + 9. 375 + + + + + + + + + + + + + + + + + + 4. 6875 + + + + + + + + + +
“+” 表示观察到生长 ( “+” means colony was observed) ;“ - ” 表示未观察到生长 ( “- ” means no colony) 。
2. 3 含药血清中绿原酸含量
采用平板法分别测试金银花提取液 、 含药血清 对大肠杆 菌 和 金 黄 色 葡 萄 球 菌 的 抑 菌 能 力 。取 10mL 培养基倒入无菌培养皿中 , 铺匀 ; 取 1mL 菌液 加到培养皿中 ,铺匀 ,待凝固后 ,放入几只钢圈 ,钢圈 内分别加入一定量的金银花提取液 、 含药血清以及 012mL 生理盐水 。在 37 ℃下培箱中培养 24h 观察 结果 , 并 测 量 抑 菌 环 直 径 。当 抑 菌 环 直 径 大 于 20mm 为极敏 ; 15 ～ 20mm 为高敏 ; 10 ～ 15mm 为中 敏 ; 10mm 以下为低敏 。 2 结果与讨论
2. 1 绿原酸标准工作曲线的建立
将含药血清按上述色谱条件进样分析 , 其中绿 μg /mL。 原酸含量为 16 2. 4 抗菌试验 2. 4. 1 种菌的筛选 从种菌实验可肉眼观察到 : 在滴有金银花提取 液和含药血清的培养盘中 , 大肠杆菌和金黄色葡萄 球菌在滤纸周围基本无生长 , 而其它三个种菌生长 良好 。这表明含药血清对大肠杆菌和金黄色葡萄球 菌有抑制作用 ,而对其它三种种菌则无抑制作用 。
TA gNO 3.
Cl -
=
W × 25 /500 × 0. 6066 P × V - V0 100
含药血清对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的 M IC 测定
16 8 4 2 1 0. 5 + 0. 25 + +
“+” 表示观察到生长 ( “+” means colony was observed) ;“ - ” 表示未观察到生长 ( “- ” means no colony) 。
金 银 花 为 忍 冬 科 植 物 忍 冬 ( lonicera japonica [1] thunb. )的干燥花蕾或初开的花 ,为传统清热解毒 和抗菌消炎中药材 。其中 , 绿原酸是金银花的主要 药效成分 ,其含量高低用于评价金银花的质量 。 中药血清药理学是给动物经口服药后 , 一定时 间采集分离血清 ,用此含药血清进行体外药理实验 , 观察含药血清对正常或病理状态下的离体器官 、 细 胞或体外培养细胞的作用 。它具有以下优点 : ( 1 ) 能排除中药初制剂本身理化性质的干扰 ; ( 2 ) 真实 反映体内血药浓度变化 ; ( 3 ) 有利于发现中药的真 正有效成分和有效部位 ; ( 4 ) 有利于从细胞分子水 平阐明中药作用机制 。本实验采用给家兔灌胃金银 花提取液 ,分离含药血清 ,在分子水平上考察含药血 清的抑菌能力 。 1 实验部分

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2009 年第 3 期
ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ 林 : 中药血清药理学研究金银花的抑菌活性
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牙 膏 工 业 TOOTHPASTE I NDUSTRY
第十九卷第三册 2009 年 8 月
表 2 类型 血清 血药浓度 (μg/mL) 金黄色葡萄球菌 大肠杆菌
对比
2. 1 间接测定 NaC l含量的国标方法及过程
用《 制盐工业通用试验方法氯离子的测定 ( GB T 13025. 5 - 9 ) 》 国标 中的 测定 方法 中的 第 一 种 方 法— — — 银量法 。第一步是先计算硝酸银对氯离子的 滴定度 ( TA gNO 3. C l - ) 。 计算式 :
食盐氯化钠含量测定方法与对比
王 霞
(丹东康齿灵保洁用品有限公司 118000)
摘 要 : 通过对国标《 制盐工业通用试验方法氯离子的测定 》 中公式上的符号 、 常 数的解释及推理公式的列出 ,诠释了国标中未明确指出的细节 。依据科学反应原理提 出了对现有的间接测定 NaCl含量的国标方法的改进 , 建议使用直接测定 NaCl含量的 方法 ,并对二者进行了对比性试验 。 关键词 : P 0. 6066 氯化钠 %
1 前言 食盐有较强的抑菌作用 ,早在古时 ,我们的先人 就有盐水漱口 ,用盐水消毒的做法 。食盐能吸收牙 周炎的组织液 ,改善牙周血液循环 。因此 ,将食盐加 入到牙膏中 ,增强了牙膏对口腔的保健作用 。 同时 食盐自身的纯度直接关系到牙膏用盐量的多少及稳 定性 ,即食盐纯度也就受到了关注 。 2 浅析应用国标测定食盐过程 ,并与新的方法
2. 4. 2 不同产地金银花的 M IC 比较
将上述一系列配制好的绿原酸对照品进样检 测 ,获得绿原酸标准工作曲线 : Y = 44261X - 137. 18 2 R = 0. 9997 ( n = 5 ) μg /mL , 检 测 限 为 其线性 范 围 为 : 0. 05 ～ 5. 0 - 3 215 × 10 μg /mL。
1. 1 仪器和试剂 Agilent 1100 液相色谱仪 (UV 检测器 ) ; KQ2200 超声波清洗器 (昆山市超声波仪器有限公司 ) ; pHS - 3C 精密 pH 计 (上海雷磁精密仪器厂 ) 。 绿原酸对照品 (中国药品生物制品检定所 , 批
1. 3 对照品溶液的制备
号 110753 - 200212 ) 。金银花 (秀山 、 山东 、 河南 ,购 于桐君阁大药房 ; 贵州 、 四川 , 购于沙坪坝大药房 ) 。 大肠杆菌 、 金黄色葡萄球菌 、 绿脓杆菌 、 枯草杆菌 、 白 念株菌等由第三军医大学生物学院提供 。雄性家兔 2. 5kg ± 50g (重庆市第三军医大学实验动物中心提 供 )。 乙腈 、 甲醇 、 磷酸为分析纯 。实验用水为自制蒸 馏水 。 1. 2 色谱条件 流动相 : 乙腈 ∶ 0. 37%磷酸 = 13 ∶ 87 (体积比 ) , pH 值 2. 10; 流速 1. 0mL /m in; 检测波长 254nm。所 μm 滤膜过滤 。 有流动相 、 标品及样品均经过 0. 45
2. 4. 4 含药血清抑菌活性试验结果 含药血清抑菌活性试验结果如表 3 所示 。结果 表明 ,含药血清抑菌活性为高敏 。
精密称取绿原酸对照品适量 ,置于棕色量瓶中 , μg /mL 的绿原酸溶液 (冰 加甲醇溶解定容 ,制成 500 ) 箱冷藏保存 。将上述对照品溶液用液动相稀释为 μg /mL 等一系列浓度 , 备 0. 05、 0. 25、 0. 5、 1. 5、 5. 0 用。 1. 4 金银花提取液的制备 精密称取金银花粉末 (过 50 目筛 ) 0. 5000g, 置 于具塞锥形瓶中 ,精确加入 50%甲醇 20mL , 称定重 量 ,超声处理 0. 5h, 放冷 , 再称定重量 , 用 50%的甲 醇补足减失的重量 , 摇匀 , 过滤 , 再用流动相稀释即 得。 1. 5 含药血清的制备 给家兔按照 20g金银花 (山东 )提取液 / kg灌胃 3 天 ,早晚各两次 。在最后一次灌胃 90m in 后从耳 缘静脉取血 , 静置 3h, 待凝血后 , 在 5000 r/m in 下离 心 20m in,取上清液 , 用乙腈去除蛋白 , 获得含药血 清供试品 ,待用 。 1. 6 抗菌试验 1. 6. 1 种菌液的制备 取大肠杆菌 、 金黄色葡萄球菌 、 绿脓杆菌 、 枯草 杆菌 、 白念株菌等 5 个菌株 , 分别在肉汤培养基 37 ℃ 下培养约 24h 后 , 经振荡 、 搅匀 , 作为种菌液备 用。 1. 6. 2 种菌的筛选 在 5 种种菌的滤纸上滴加金银花提取液和含药 血清 ,将装有种菌提取液的培养盘置 37 ℃ 培养箱中 培养 48h。 1. 6. 3 最低抑菌浓度 (M IC )的测定 用肉汤培养基稀释金银花提取液 , 成为一系列 对倍稀释液 ,其浓度分别为 1200、 600、 300、 150、 75、 3715、 18175、 91375、 416875mg /mL ,同时将含药血清 稀释为一系列对倍稀释液 , 其浓度分别为 16、 8、 4、
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第十九卷第三册 2009 年 8 月
中药血清药理学研究金银花的抑菌活性
梅 林
(中国人民解放军后勤工程学院 重庆 400016)
摘 要 : 采用最低抑菌浓度 (M IC )测定方法和抑菌活性试验 ,考察不同产地的金银 花以及含药血清的抑菌效果 。试验结果为 : 含药血清对大肠杆菌和金黄色葡萄球菌的 μg绿质酸 /mL 和 0. 25 μg绿原酸 /mL; 含药血清抑菌活性为高敏 。 M IC 分别为 0. 5 关键词 : 金银花 绿原酸 中药血清药理学 含药血清 抑菌活性