骨保护素基因敲除小鼠腰椎间盘退变与腰椎骨质疏松
补骨脂素对骨质疏松小鼠骨代谢指标和生物力学的影响
补骨脂素对骨质疏松小鼠骨代谢指标和生物力学的影响黄奎;邹季【摘要】Objective To investigate the effect of psoralen on bone metabolism and biomechanics in ovariectomized (OVX) micemodel.Methods A total of 40 mice were randomly divided into sham operation group (SHAM+NS),model group (OVX+NS),estradiol group (OVX+ estradiol) and psoralen group (OVX+ psoralen),with 10 mouse in each group.After the medication for 6 weeks,blood was collected to assay serum alkaline phosphatase (ALP),Cterminal cross-linking telopeptides of type Ⅰ collagen (CTX-1) and estrogen.Biomechanics was studied using three-point bending test.Results Compared with the model group,the levels of ALP in psoralen group was increased but not significant,the level of CTX-I were significantly decreased in estradiol group and psoralen pared with the model group,level of estrogen was obviously increased in estradiol group but maintained a low level in psoralen pared with the model group,the maximum load,maximum stress and flexure modulus were significantly increased.Conclusion Psoralen as a natural phytoestrogen promotes the bone metabolism and biomechanics in ovariectomized mice.%目的利用卵巢切除小鼠模型,研究补骨脂素对骨质疏松小鼠骨代谢指标和股骨生物力学的影响.方法 40只雌性C57BL/6小鼠随机分为4组:假手术组(不切除卵巢+生理盐水),模型组(切除卵巢+生理盐水),雌二醇组(切除卵巢+雌二醇),补骨脂素组(切除卵巢+补骨脂素).给药6周后测定血清碱性磷酸酶、Ⅰ型胶原羧基末端肽和雌激素含量.利用3点弯曲实验对股骨生物力学进行检测.结果与模型组比较,补骨脂素组血清碱性磷酸酶水平升高,但无统计学差异,补骨脂素组和雌二醇组血清Ⅰ型胶原羧基末端肽水平明显降低.雌二醇组血清雌激素水平较模型组明显升高,补骨脂素组血清雌激素水平仍保持较低水平,与模型组比较无统计学差异.与模型组比较,补骨脂素治疗组小鼠股骨的最大载荷,最大应力和弯曲弹性模量系数指标显著升高.结论补骨脂素作为一种天然植物雌激素可改善骨质疏松小鼠骨代谢指标和股骨生物力学性能.【期刊名称】《生物骨科材料与临床研究》【年(卷),期】2017(014)006【总页数】4页(P11-13,21)【关键词】补骨脂素;卵巢切除小鼠;骨代谢;生物力学【作者】黄奎;邹季【作者单位】湖北中医药大学,湖北武汉430065;长江大学附属第一医院骨科,湖北荆州434000;湖北中医药大学,湖北武汉430065【正文语种】中文【中图分类】R282骨质疏松症是老年人和绝经后妇女常见疾病，以骨量减少、骨组织显微结构退化为特征，包括松质骨骨小梁变细、断裂、数量减少，皮质骨多孔、变薄，从而导致骨质脆性和骨折危险性增加的一种全身代谢性骨病。
类风湿关节炎骨代谢及骨侵蚀的临床研究进展
综述类风湿关节炎骨代谢及骨侵蚀的临床研究进展邓娟徐胜前类风湿关节炎(rheu m atoi d arthritis ,RA )是一种以慢性进行性关节病变为主的自身免疫病,发病机制未明,是最常见的关节炎性疾病之一。
在我国,约有四五百万人深受RA 的困扰。
该病的特征表现是对称性多关节炎,以双手、腕、肘、膝、踝和足关节受累最为常见,病情逐渐发展,最后可导致关节畸形、功能丧失,严重威胁着广大人民的健康。
研究表明,RA 患者中骨代谢的异常和骨侵蚀的发生是患者致残的主要原因。
一、RA 患者中骨质疏松概况骨质疏松症(osteoporosi s ,OP)是以单位体积内骨量减少,骨的微结构退化,骨皮质变薄,骨小梁数目减少,骨髓腔增宽,骨强度减低,易于骨折等为特征的骨病。
OP 分为原发性和继发性两种,原发性OP 是最常见的临床类型;继发性OP 是指由各种其他原因所导致的OP,如糖尿病、RA 、肿瘤等,长期使用影响骨代谢的药物(如大剂量使用糖皮质激素、抗凝剂等),营养摄入和吸收障碍等。
其中RA 在继发性OP 中占有重要的地位,且研究认为OP 是RA 常见并发症之一,而且是RA 患者骨和关节受累的一种早期表现。
早在2000年,H augeberg 等[1]首次进行大样本研究就证实RA 患者中存在较高的OP 的发生率,该研究共收集394例20~70岁挪威RA 患者,结果显示RA 患者OP 的发生率在股骨颈为147%,在腰椎为168%,总体OP 的发生率是正常对照组的2倍。
其OP 的发生与年龄、绝经与否、病程、废用、激素的使用等多种因素相关。
2002年Tengstrand 等[2]研究表明:104例不同年龄段的男性RA 患者(平均病程4年)中股骨颈和腰椎骨量减少的比例均为正常人群的2倍。
另一项对绝经后女性RA 患者进行多部位骨密度(bo ne M ine ra l density ,B MD)测定的调查发现:高达56%的患者至少有一处B MD 达到OP 的诊断标准[3]。
骨钙素的能量代谢调节作用
862 中华内分泌代谢杂志2014年10月第30卷第10期Chin J Endocrinol Metab，October 2014，V01．30，No．10·讲座·骨钙素的能量代谢调节作用盛彤郭翔宇王新祥谢培凤商学征周晖关菘龚雁冰王颖【提要】成骨细胞分泌的骨钙素是反映成骨细胞活性的敏感而特异的指标。
近年的研究还发现，骨钙素是骨骼内分泌功能的重要媒介。
羧化不全骨钙素可以促进胰岛B细胞增殖和胰岛素分泌，降低血糖和血脂水平，表明骨钙素对能量代谢具有重要的调控作用，这一发现将为肥胖症和糖尿病等代谢性疾病的治疗提供新的思路。
【关键词】骨钙素；成骨细胞；肥胖症Regulation of energy metabol ism b y o ste oca lcin Shen g To ng，Gu o X ian gyu，W ang Xinxiang，Xie Pe咖ng，Sh angXue zh en g，Z hou H ui，Gu an S on g，G0，喈Ya nbi ng，Wa ng Ying．Department of End ocrinolo gy，Donfan g Hospital，Be彬ng University of Ch in e s e Medicine，Beijing 100078，C hin aEma il：she ng to n91919@163．co m【Summary】Osteo ca lc in(O C)se cr et ed by osteoblasts is sensitive and specific indicator of osteobl astac ti v it y．Re ce n tl y．it has bee n found that os te oc al ci n important mediato r of e n d o c ri n e function．Undercarboxylated O C c a n promote insulin secretion and B—cell pro li fe r at io n，an d lower glucose and lipid levels，that oste oc al ci n might play major role in the regul at io n of energy metabolism．These findings pr o vi d e n ewsuggestinginsight for the treatment of meta b o li c diseases such obesity and diabetes．【Key words】O st e o ca l c in；O s t e ob l a st s；O b e si t y(Chin J En d o c ri n o l Metab，2014，30：862—864)一直以来认为，骨骼具有运动支持、器官保护、造血和维持phosphatase，OST一明P)和维生素K依赖的1一谷氨酸羧化酶(1．钙磷代谢平衡的功能，近年研究发现，骨骼还是一种具有内分g lu ta m yl carbox yl ase，G GCX)。
骨保护素在预测和治疗绝经后骨质疏松症中的应用
雌激素水平 、 骨密度 及骨转 换标志 物等是 目前 临床 常用的预测绝经 后骨 质疏松症 的检 查项 目， 都存在 一 但 定的局 限性 。血清雌激素水平 只能间接反 映其对 骨代谢
进破骨 细胞 前 体 细 胞 的 生 长 、 化 和存 活 ， Ｏ Ｇ 与 活 而 Ｐ
Ｒ Ｋ竞争性结合 Ｒ Ｋ ， ＡＮ ＡＮ Ｌ 阻止 Ｒ Ｋ ＡＮ Ｌ与 Ｒ Ｎ 之 Ａ Ｋ 问的结合 ， 从而在早期 阶段 即抑 制破骨 细胞前体 细胞 向
成熟 破 骨细 胞 分 化及 生 长 ｜ 。绝 经 后 骨质 疏 松 症 的主 要 ３ 一
２ １ Ｏ Ｇ 与 绝 经后 雌 激 素 水 平 ． Ｐ
近年发现的 ， 在破 骨细胞分 化过程 中的一 个重要 信号 转
导通路 ， Ａ Ｋ Ｒ Ｎ Ｌ的受体是位 于破骨细胞 膜上 的 Ｒ Ｎ Ａ Ｋ， Ｏ Ｇ为 Ｉ ＮＫ Ｐ Ｌ的假性受体 。 Ｏ Ｇ Ｒ ＮＫ ／ Ａ Ｋ 系统调控 成骨 细胞与破 骨细 Ｐ ／ Ａ ＬＲ Ｎ 胞 的平衡 ， 而改 变骨 形成 和 骨 吸收 的动 态平 衡 关 系。 从
骨密度及骨转换标 志物等实 验室检 查存在 推广受 限 、 技 术要求高 、 灵敏度和特异度不够 理想等 问题 ， 往往难 以早 期发现 。为此 ， 大量骨代谢机制 相关研究 的展 开 ， 为绝 经 后骨质疏松症的预测 及治疗 提供 了新 的理论 依据 ， 中 其 骨保护素（ Ｐ ） Ｏ Ｇ 在绝经后骨质疏松症 的研 究 中取得 了突
破性进展。
发病机制是破骨细胞 骨吸收作用增加 而成 骨细胞骨形成 作用减少 ， Ｐ Ｏ Ｇ抑制破骨细胞 前体 细胞 向成熟破 骨细胞 分化及生长 ， 以减少 骨 吸收 ， 加 骨形成 ， 增 因而在绝 经后 骨质疏松症早期 阶段 即发 挥重 要 的抗 骨质疏 松症作用 。 动物研究［ ４ 显示 ， Ｐ Ｏ Ｇ基 因敲除 鼠模型表现为严重骨质 疏松 ， 髋部缺乏骨小梁 ， 破骨 细胞 数量增加及 骨转换效率 高， 而过 度 表 达 Ｏ Ｇ 转 基 因 鼠则 表 现 为 严 重 的 骨 硬 Ｐ
OPG缺失后小鼠下颌骨微结构增龄性变化的Micro-CT评价
OPG缺失后小鼠下颌骨微结构增龄性变化的Micro-CT评价杜海明;张旗【摘要】目的:基于Micro-CT评价骨保护素基因敲除(Opg-knockout,Opg-KO)型小鼠与野生型(wild type,WT)小鼠的下颌骨微结构增龄性变化,以便更好了解小鼠下颌骨的增龄性骨质改建情况.方法:分别采集6周、12月龄Opg-KO小鼠和WT小鼠各6只,采用Micro-CT扫描观察小鼠下颌骨三维结构,对感兴趣区域根分叉部位松质骨及前牙颏孔前缘区皮质骨骨微结构进行定量分析.结果:与WT小鼠相比,Opg-KO小鼠6周时第一磨牙根分叉处松质骨、髁突颈部、下颌角处、前牙颏孔前缘区均出现了明显的坑凹状吸收;12月时,这些区域破坏愈发严重,甚至出现穿孔;根分叉松质骨区域骨小梁平均厚度、骨密度、骨体积分数明显降低(P<0.05),骨小梁分离度明显升高(P<0.05);前牙颏孔前缘区皮质骨骨密度及骨体积分数明显降低(P<0.05).结论:OPG缺失引起小鼠下颌骨发生严重的骨质破坏,随着年龄增加骨质破坏程度越发严重,并且松质骨骨微结构改变更显著.%Objective: The purpose of this study was to evaluate whether mice with knock out osteoprotegerin gene (Opg-KO) was associated with the age-related changes of mandible. Methods: 6-week-old and 12-month-old Opg-KO mice (n=6) and WT mice (n=6) were comprised in this study. Micro-CT was used to evaluate the osteoporosis degree of the ROI (the region of interest). Results: Compared with WT mice, Opg-KO mice developed serious bone resorption in the cancellous bone of the mandible, the neck of condyle, the angle of mandible and the incisors at 6 weeks, and the bone resorption became more serious at 12 months. The Tb. Th, BMD, BV/TV of the cancellous bone decreased obviously, but the Tb. Sp increased obviously. The BMD andBV/TV of the cortical bone decreased obviously. Conclusion: OPG deficiency causes serious bone destruction in mouse mandible. The more severe bone destruction positive related to increased age. The bone remodeling of the mandibular cancellous bone are more remarkable.【期刊名称】《口腔颌面外科杂志》【年(卷),期】2017(027)001【总页数】6页(P13-18)【关键词】骨保护素;基因敲除;增龄性;Micro-CT【作者】杜海明;张旗【作者单位】同济大学口腔医学院·同济大学附属口腔医院牙体牙髓科,上海牙组织修复与再生工程技术研究中心,上海 200072;同济大学口腔医学院·同济大学附属口腔医院牙体牙髓科,上海牙组织修复与再生工程技术研究中心,上海 200072【正文语种】中文【中图分类】R782骨保护素（osteoprotegerin,OPG）是一种可溶性、分泌性糖蛋白，于1997年分别由美国和日本两家实验室同时发现[1]。
骨保护素基因敲除小鼠发生骨质疏松症的特征
骨保护素基因敲除小鼠发生骨质疏松症的特征陈子贤;盛哲津;邵云潮;施德源;陈统一【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2007(34)3【摘要】目的研究我国自行开发的骨保护素(OPG)基因敲除小鼠的骨质疏松基本数据及其所属的骨质疏松类型,为其进一步推广应用提供基线数据.方法将野生型OPG(OPG-WT)小鼠,7和13周龄的骨保护素基因敲除小鼠(OPG-/-)分成3组(每组6只),分别检测其血清碱性磷酸酶(ALP)、酸性磷酸酶(ACP)及骨钙素(OC)水平,并行骨密度测定、X线摄片、扫描电镜检查和生物力学测试,将所得数据进行统计学分析.结果 OPG-/-小鼠的骨密度、股骨刚度和最大折断负荷均显著降低(P＜0.01),血清ALP和ACP明显升高(P＜0.01),OC在早期与对照组无明显差异.OPG-/-小鼠在X线平片上表现为骨量减少,骨小梁稀疏或塌陷,骨皮质变薄.扫描电镜观察到OPG-/-小鼠骨小梁变细、变尖,骨小梁间隙增大,部分骨小梁塌陷.结论 OPG-/-小鼠骨吸收活性增强伴继发性成骨活性提高,符合高转换型骨质疏松的特征,具有明显的优点,为研究OPG/OPGL/RANK体系提供了新的平台,有可能成为一种新的模型用于高转换型骨质疏松症的实验研究.【总页数】5页(P373-377)【作者】陈子贤;盛哲津;邵云潮;施德源;陈统一【作者单位】复旦大学附属中山医院骨科,上海,200032;中国科学院上海生命科学研究院模式生物研究中心,上海,200031;复旦大学附属中山医院骨科,上海,200032;复旦大学附属中山医院骨科,上海,200032;复旦大学附属中山医院骨科,上海,200032【正文语种】中文【中图分类】R681.1【相关文献】1.雌激素对ApoE基因敲除小鼠骨保护素和RANKL的影响 [J], 李慧;贾少杰;贾晓静2.不同频率脉冲电磁场对骨保护素基因敲除小鼠骨代谢指标影响 [J], 刘亚林;王红;张新玉3.四连接素基因敲除小鼠表现出脊柱后凸畸形和骨质疏松症的特征 [J], 茹德文;颜玉峰;李炳;谢强;汤日;沈晓;余果;杜嘉瑞;王尔松4.骨保护素基因敲除小鼠腰椎间盘退变与腰椎骨质疏松 [J], 郝晓东;王善金;蒋雷生;蒋盛旦;郭震;戴力扬5.骨保护素基因敲除小鼠腰椎间盘退变与腰椎骨质疏松 [J], 郝晓东;王善金;蒋雷生;蒋盛旦;郭震;戴力扬因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
Fat-1转基因小鼠的研究进展
Fat-1转基因小鼠的研究进展高翔;李文德【摘要】多不饱和脂肪酸(PUFAs)为人体必需脂肪酸,与人体健康密切相关,其中主要分为n-6和n-3两大类,在哺乳动物中n-6和n-3不能自身合成,只能通过饮食获取.人体内n-6/n-3 PUFAs比例均衡,是人类保持健康的一个重要组成部分.为了研究n-6/n-3 PUFAs的比例在疾病中的预防作用,研究者培育了可自身将体内n-6转化为n-3的fat-1转基因小鼠,解决了以往研究PUFAs只能通过对动物喂养富含n-3和n-6饲料的不便.因而,fat-l小鼠可以作为一种理想的动物模型去研究在不改变饮食结构的状态下,体内的n-6/n-3 PU-FAs比例的生物学作用.本文将对fat-1转基因小鼠的研究现状进行综述.【期刊名称】《药学研究》【年(卷),期】2014(033)004【总页数】4页(P215-218)【关键词】Fat-1转基因小鼠;n-6/n-3多不饱和脂肪酸;研究进展【作者】高翔;李文德【作者单位】广东天然药物研究与开发重点实验室,广东医学院,广东湛江524023;广东天然药物研究与开发重点实验室,广东医学院,广东湛江524023【正文语种】中文【中图分类】Q343.1多不饱和脂肪酸(PUFAs)为人体必需脂肪酸，具有很重要的生理功能。
其中与人体健康密切相关的PUFAs主要是n－3和n－6 PUFAs。
摄入高水平的n－3 PUFAs 伴有较低的n－6 PUFAs可以促进婴幼儿视网膜、大脑和神经系统的发育;降低人体心血管疾病和炎症的发生，还可以抑制体外培养的乳腺癌、肺癌、前列腺癌和结肠癌细胞［1～4］的增生，促进肿瘤细胞的凋亡。
这提示n－6/n－3 PUFAs的比例对于维持细胞稳态和正常生长起着关键的作用。
世界卫生组织建议，人体内正常细胞的细胞膜和细胞器n－6/n－3 PUFAs理想比例应该在1∶1到4∶1。
随着社会的发展，大量的加工和养殖产品的出现，人类食用非野生动植物过量导致体内的脂肪酸比例严重的失去平衡。
OPG基因与小鼠腰椎间盘退变关系研究论文
OPG基因与小鼠腰椎间盘退变的关系研究【摘要】目的：比较骨保护素（opg）基因敲除（opg-/-）小鼠与正常（wt）小鼠腰椎间盘退变的关系。
方法：分别取出生后4w、8w、12w的opg-/-小鼠及正常对照组小鼠的l4/5椎间盘，运用番红o-固绿染色法观察l4/5椎间盘形态学变化，测量椎间盘及软骨终板高度。
应用免疫组化染色观察椎间盘聚集蛋白聚糖（aggrecan）基因表达量的变化。
结果：1.小鼠腰椎椎间盘番红o-固绿染色结果：opg-/-小鼠的椎间盘软骨终板在第8w及第12w 时可观察到退化改变：软骨终板排列不规则，并有骨髓腔组织进入软骨终板及外层纤维环。
2.免疫组化染色结果显示：各年龄点opg-/-组小鼠椎间盘aggrecan的蛋白表达均低于同龄wt 组小鼠。
3. opg-/-小鼠软骨终板及椎间盘高度在4周时较正常对照组无明显变化，随着年龄的增长，第8周时较对照组降低，第12周时高度下降最明显（p 1 材料和方法1.1 实验材料：实验动物：本研究所用实验动物为opg基因敲除纯合子小鼠（opg knock-out type mouse， opg-/-）及野生型c57/bl（wild type mouse， wt）小鼠，实验动物均由上海南方模式生物科技发展有限公司培育。
实验分组方法：将24只opg-/-小鼠，按饲养终点随机分为4w、8w、12w组，每组8只，24只同龄的c57/bl小鼠也采用相同的分组方法作为正常对照。
实验动物饲养于上海交通大学医学院新华医院实验动物中心清洁级动物室（室温控制于（23 ±1）℃，湿度56， 12 h间隔照明，定期紫外线消毒与通风）。
设备与试剂：奥林巴斯bx51显微图像分析系统（olympus bx51 dp72； japan）。
一抗（鼠抗多克隆） abbiotec1.2 实验方法：将每个观察终点的opg-/-小鼠及对照组wt小鼠在相同条件下同时处死，在严格无菌条件下分离l4-5段腰椎，去除腰椎周围多余的软组织后，立即泡入4%多聚甲醛，置于4℃环境中固定24小时，流水冲洗后转入脱钙液处理，完成脱钙后流水冲洗，再转入75%酒精固定，作为组织学评价及免疫组化染色标本的标本。
淫羊藿苷抑制小鼠腰椎间盘退变机制研究
淫羊藿苷抑制小鼠腰椎间盘退变机制研究作者：石依姗来源：《中国市场》2016年第31期[摘要]目的：建立腰椎间盘退变小鼠模型，观察淫羊藿苷对Ⅱ型胶原蛋白和基质金属蛋白酶表达影响，从而研究能改善腰椎间盘退变的机制。
方法：随机选取60只大鼠，分成对照组、假手术组、淫羊藿苷组、活血止痛组，假手术组仅切开不穿刺，其余三组采用纤维环穿刺法建立椎间盘退变模型。
四组分别灌胃生理盐水、生理盐水，淫羊藿苷、活血止痛胶囊，剂量均为6g/kg·d。
结果：COL-Ⅱa上，假手术组最高，对照组最低，淫羊藿苷组、活血止痛组相近；MMP-13、TIMP-1mRNA上，对照组最高，假手术组最低，淫羊藿苷组、活血止痛组相近，COL-Ⅱa、MMP-13、TIMP-1mRNA三个指标中，假手术组和其他三组比较差异显著（p0.05）。
结论：淫羊藿苷能影响MMP-13、TIMP-1mRNA表达，从而改善腰椎间盘退变。
[关键词]淫羊藿苷；小鼠；腰间盘退变[DOI]10.13939/ki.zgsc.2016.31.297腰椎间盘疾患是临床上发病率很高的疾病，临床表现为腰腿痛、下肢感觉异常等症状，严重影响人们的生活质量。
腰椎间盘由纤维环、髓核等组成，主要是胶原蛋白和水分，其中胶原蛋白有Ⅰ型胶原蛋白（COL-Ⅰa）、Ⅱ型胶原蛋白（COL-Ⅱa），外层主要是COL-Ⅰa，其有较强韧性，能抗张力，椎间盘能抗较强压力，内层有较好的保水能力，能缓冲椎间盘受到的压力。
而椎间盘病变则是胶原蛋白逐渐下降引起。
研究[1]称，生化机制在椎间盘退变中扮演重要角色，炎症因子能促进基质金属蛋白酶-13合成，抑制金属蛋白酶组织抑制剂-1合成，通过使用有抗炎作用淫羊藿苷处理腰椎间盘退变模型小鼠，观察其是否能够影响基质金属表达，延缓椎间盘退变过程。
1材料与方法1.1实验材料（1）实验动物：随机选取60只小鼠，均为雄性，平均体重为（15±20）g。
（2）实验试剂：淫羊藿苷标准品由成都领航者生物技术有限公司生产，纯度>98%；RT-PCR试剂盒购自上海星科生物技术有限公司。
体内损伤构建椎间盘退变动物模型的研究进展
体内损伤构建椎间盘退变动物模型的研究进展按照构建椎间盘退变动物模型时的损伤方式对体内构建退变椎间盘动物模型的方法进行综述。
体内构建椎间盘退变动物模型的方法很多，但各有优缺点，在以后的实验过程中进一步研究和建立综合模型仍然是努力的目标。
近年来，随着人们生活和工作习惯的改变，椎间盘退变性疾病(disc degeneration disease，DDD)已成为现代人群中常见的疾病。
本病是造成颈、肩、腰、腿痛的主要原因，严重影响了人们的生活和工作，甚至有些患者因出现严重的神经损伤病症而不得不行手术治疗，给患者带来巨大的精神和经济负担。
为了更好地探索本病的发生机制及治疗方法，20多年前，人们开始运用具有与人类椎间盘高度相似性的动物退变椎间盘来研究本病的病因病机，寻找更好的治疗方法。
近几年，用于构建动物模型的种类和造模的方法主要分为2大类型：体内损伤动物模型和体外动物模型。
体内损伤动物模型主要指通过干预、诱导动物椎间盘退变，依据其在影像学、形态学和生物化学等方面的变化，动态观察动物椎间盘退变的病理过程。
体外动物模型是指在体外培养的细胞和器官模型，此模型多用于短期的实验观察，实验结果论证能力弱。
笔者通过查阅近十年来大量的国内外文献，总结了在动物体内构建椎间盘退变模型的方法，并分析每种方法的优缺点。
从开始使用动物构建椎间盘退变模型到现在，研究者尝试了各种各样的动物，总结出用于构建椎间盘退变模型的动物应符合如下几个条件[1]：①所用动物脊柱的解剖特点、生物力学特性、生理、病理功能等应与人类高度相似;②所选动物可客观地重复椎间盘退变的病理过程;③所构建的动物模型具有可复制性;④动物价格较为廉价，且较易饲养，种群数量较多。
目前，很多小型哺乳动物及啮齿类动物被学者作为动物模型;但是由于某些伦理因素[2]，现如今大多数学者采用鼠及兔作为建模动物[3]。
2.1 生物力学模型(biomechanical model，BM) Goff等[4]运用手术方式培训大鼠，改变其爬行习惯使其靠双后肢如人类直立行走，从而使大鼠的椎间盘发生退变，他也是首个通过改变大鼠行走习惯来构建椎间盘退变动物模型的学者。
hOPG基因治疗大鼠绝经后骨质疏松症的实验研究
第三军医大学硕士学位论文图片１－１１为ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ，２为质粒ＰＵＣ１９一ｈＯＰＧ经ＥｃｏＲＩ和ＢａｍＨＩ双酶切为１．２ｋｂ和２．７ｋｂ两个片段，３为＾ＨｉｎｄⅡＩｍａｒｋｅｒ。
图片１－３１为ＰＡｄｔｒａｃｋ－ＣＭＶ－ｈＯＰＧ经ＫｐＮＩ酶切为３００ｂｐ和１０．２Ｋｂ两个片段，２为ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ，３为＾ＨｉｎｄｌＩＩｍａｒｋｅｒ。
图片１．２ｈＯＰＧ编码区基因部分测序图图片１．４１为阳性对照，２为阴性对照，３为Ｐ１、Ｐ２扩增产物５７２ｂｐ，４为Ｐ。
Ｐ。
扩增产物５４３ｂｐ，５为ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ图片１－５１为ＡｄＥａｓｙ－Ｐａｄｔｒａｃｋ－ＣＭＶ－ｈＯＰＧ经Ｐａｃｌ酶切为２３Ｋｂ和４．５Ｋｂ两个片段，２为＾ＨｉｎｄｌＩＩｍａｒｋｅｒ图片ｌ－６：ｌ为Ｐ１、Ｐ２扩增产物５７２ｂｐ，２为Ｐｃ、Ｐｏ扩增产物５４３ｂｐ，３为阳性对照，４为阴性对照，５为ＤＬ２０００ｍａｒｋｅｒ第三军医大学硕士学位论文图片１．７：初次病毒包装４８ｈ（２００×荧光显微镜）图片１＿８：初次病毒包装４８ｈ（２００Ｘ可见光）图片１－９：初次病毒包装第８ｄ（２００Ｘ荧光显微镜）图片１．１０：初次病毒包装第８ｄ（２００Ｘ可见光）图１．１１：初次病毒包装第８ｄ（４００×荧光显微镜）图１．１２：初次病毒包装第８ｄ（４００×可见光）４１第三军医大学硕士学位论文图１－１３：第二代病毒包装第４ｄ（２００×荧光显微镜）图１－１４：第二代病毒包装第４ｄ（２００×可见光）图片１．１５：１为Ｐ。
、Ｐ２扩增产物５７２ｂｐ，２为Ｐ。
、、图片ｌ－１６：滴度测定（２００Ｘ荧光显微镜）Ｐ０扩增产物５４３ｂｐ，３为阴性对照，４为阳性对照，５为ＤＬ２０００ｍａｋｅｒ图片１－１７：滴度测定（２００×可见光）图片１。
１８：Ａｄ２９３细胞中表达ＯＰＧ的Ｗｅｓｔｅｍｂｌｏｔ检测ＯＰＧｌ为阳性对照，ＯＰＧ２为样本，分子量为６５ＫＤ。
骨钙素调节糖代谢的研究进展
骨钙素调节糖代谢的研究进展骨钙素（OC）是由成骨细胞合成并分泌的骨特异性蛋白，是临床中常用的骨转换血清学指标。
近期研究表明，OC，尤其是羧化不全骨钙素（ucOC）可通过促进B细胞增殖、胰岛素分泌及改善周围组织对胰岛素敏感性等途径调节糖代谢。
GPRC6A是骨钙素在胰腺的受体，ESP基因与胰岛素信号可调节骨钙素的活性，进而调节血糖水平。
临床研究也证实了OC调节糖代谢的作用。
OC有望成为糖尿病和肥胖治疗的新靶点。
骨钙素（osteocalcin OC）又称骨-羧基谷氨酸蛋白（BGP），是由成骨细胞合成和分泌的一种特异的非胶原骨基质蛋白。
骨钙素原在维生素K依赖羧化酶的作用下可羧化成7-羧基化谷氨酸（Gla），其具有很强的结合羟磷灰石的能力[1]。
酸性条件下，OC分子中的Gla可以脱羧成为羧化不全骨钙素（ucOC）[2]。
以往大量研究均证实，OC的主要功能和骨代谢相关，可维持骨的正常矿化速率，抑制生长软骨矿化的速度，从而维持正常骨量[3]；且证实血糖水平升高可影响骨代谢，降低骨转换率，导致血清OC水平降低[4]，因此糖尿病患者骨质疏松和骨折风险均明显增加[5]。
而近期动物学研究及细胞学研究发现了骨骼新的生理功能，即骨骼的内分泌功能，证明了骨骼与能量代谢之间的相互作用。
1 骨钙素对糖代谢调节的基础研究1.1 动物体内实验2007年Lee等[6]首次分析骨钙素基因敲除的小鼠（OC-/-），观察到这些基因突变的小鼠内脏脂肪异常增加，推测OC可调节能量代谢。
为证实上述猜测，Lee等[6-7]将野生小鼠OC基因敲除，观察发现OC-/-小鼠与野生型小鼠相比，胰腺B细胞增殖下降了2倍，胰岛的大小及B细胞质量、胰腺胰岛素含量和胰岛素免疫反应性均显著下降，而血糖水平增加。
给OC-/-小鼠中再次注入重组OC后，可纠正他们的葡萄糖不耐受，胰岛素分泌减少等症状。
以上研究表明OC可通过促进诱导胰腺B细胞的增殖，胰岛素的合成与分泌等途径对血糖稳态进行调节。
骨保护素基因敲除对老年小鼠关节软骨的影响
骨保护素基因敲除对老年小鼠关节软骨的影响张立立;孙瑶【摘要】Objective: To investigate the roles of osteoprotegerin (OPG) in the age related changes of articular cartilage in old mice. Methods: The long bone tissues of one-year-old Opg-Knockout (Opg-KO) mice and wildtype mice (WT mice) were examed by X-ray, micro-CT, HE staining to observe the histological changes of articular cartilage; toluidine blue staining was used to exam the changes of proteoglycan in articular cartilage; immunohistochemistry was used to observe the expression level of collagen Ⅱ in articular cartilage. Results: Compared with WT mice, specific changes in Opg-KO mice articular cartilage included rough joint surface, increased marginal osteophytes, increased bone density of the subchondral bone, flattened and collapsed articular cartilage surface, decreased number of chondrocytes, disorganized chondrocytes, loss of proteoglycan, decreased expression of collagen Ⅱ. Conclusion: Opg-KO mice develope severe osteoarthritis, and osteoprotegerin is important for maintaining the structural integrity of articular cartilage in aged mice.%目的：研究骨保护素（osteoprotegerin, OPG）在老年小鼠关节软骨增龄性变化中的作用及意义。
四连接素基因敲除小鼠表现出脊柱后凸畸形和骨质疏松症的特征
四连接素基因敲除小鼠表现出脊柱后凸畸形和骨质疏松症的特征茹德文;颜玉峰;李炳;谢强;汤日;沈晓;余果;杜嘉瑞;王尔松【摘要】目的研究四连接素(tetranectin,TN)基因敲除对小鼠骨骼生长发育的影响,从而探究该基因的正常生理功能及其缺失与疾病的关系.方法通过基因同源重组的方法构建出TN基因敲除(TN-/-)小鼠模型,分别对2月龄和8月龄的TN-/-雄性小鼠(n=10)和同龄野生型(wild-type,WT)雄性小鼠(n=10)进行全身正侧位X线摄片和脊柱后凸角度(Cobb角)测量,并对8月龄TN-/-雄性小鼠(n=10)和WT雄性小鼠(n=10)的多部位骨骼进行骨密度(bone mineral density,BMD)及骨矿含量(bone mineral content,BMC)测定和病理切片检查,所得数据进行统计学分析.结果TN-/-小鼠与同龄WT小鼠体质量无明显差异;2月龄及8月龄TN-/-小鼠Cobb角均较同龄WT小鼠显著增大(P＜0.01),且随月龄增加,Cobb角显著增大(P＜0.01);8月龄TN-/-小鼠的胸椎椎间盘结构不对称,外侧纤维环呈增大、疏松改变;与同龄WT小鼠相比,8月龄TN-/-小鼠全身、腰3椎体和左侧股骨BMD及BMC显著降低(P＜0.05),股骨及腰椎在组织学上也呈现出骨小梁变细、稀疏、排列紊乱或断裂等特点,且骨小梁成骨细胞减少,破骨细胞增多.结论 TN-/-小鼠表现出脊柱后凸畸形和骨质疏松症的特征,提示TN与骨骼的正常生长发育关系密切.TN-/-小鼠作为一种潜在的脊柱后凸畸形或骨质疏松症疾病动物模型具有重大的研究意义.【期刊名称】《复旦学报（医学版）》【年(卷),期】2016(043)002【总页数】6页(P159-163,169)【关键词】四连接素;基因敲除;脊柱后凸畸形;骨质疏松症;小鼠【作者】茹德文;颜玉峰;李炳;谢强;汤日;沈晓;余果;杜嘉瑞;王尔松【作者单位】复旦大学附属金山医院神经外科上海201508;复旦大学附属金山医院神经外科上海201508;复旦大学附属金山医院中心实验室上海201508;复旦大学附属金山医院神经外科上海201508;复旦大学附属金山医院神经外科上海201508;复旦大学附属金山医院神经外科上海201508;复旦大学附属金山医院神经外科上海201508;复旦大学附属金山医院神经外科上海201508;复旦大学附属金山医院神经外科上海201508【正文语种】中文【中图分类】R682.2*This work was supported Science and Technology Commission of Shanghai Municipality,China (124119a1900) and Shanghai Municipal Commission of Health and Family Planning (20124339).四连接素 (tetranectin,TN)属于C型凝集素家族成员。
骨质疏松症动物模型的制作与评价
骨质疏松症动物模型的制作与评价付小卫;宋长恒;刘梅洁;于峥;赵宏艳;张治国;张方珍;李岳泽【期刊名称】《中国中医基础医学杂志》【年(卷),期】2014(020)010【总页数】3页(P1338-1340)【关键词】中医药;骨质疏松症;实验研究;动物模型【作者】付小卫;宋长恒;刘梅洁;于峥;赵宏艳;张治国;张方珍;李岳泽【作者单位】陕西中医学院第二临床医学院,陕西咸阳 712046;中国中医科学院中医基础理论研究所,北京 100700;中国中医科学院中医基础理论研究所,北京100700;中国中医科学院中医基础理论研究所,北京 100700;中国中医科学院中医基础理论研究所,北京 100700;中国中医科学院中医基础理论研究所,北京 100700;中国中医科学院中医基础理论研究所,北京 100700;中国中医科学院中医基础理论研究所,北京 100700;中国中医科学院中医基础理论研究所,北京 100700【正文语种】中文【中图分类】R332骨质疏松症(Osteoporosis，OP)是以骨量减少或(和)骨组织微结构破坏为特征的全身性骨骼疾病，表现为骨强度下降、骨脆性增加，从而极易发生骨折。
骨质疏松症及由其引起的骨折等并发症，对中老年人尤其是绝经后妇女的身体健康和生存质量构成了严重威胁，并极大地增加了社会和家庭的经济和生活负担。
近20多年来，中医药工作者在大量临床实践经验的基础上，开展了广泛的防治骨质疏松症的实验研究工作，取得了较大的研究成果。
本文简述中医药科研中各种骨质疏松症动物模型的制作方法并进行评价。
1 去势法去势法分为雌性去卵巢法和雄性去睾丸法。
1.1 去卵巢法此法是20世纪60年代末由Saville利用实验大鼠首次建立的［1］，目前已成为研究绝经后骨质疏松症的经典模型之一。
大鼠双侧卵巢切除后的骨丢失，与妇女绝经或卵巢切除后的骨丢失极为相似，都是由于体内雌激素水平迅速降低，使其对成骨细胞的促成熟功能和对破骨细胞的抑制功能减弱，使骨代谢呈现负平衡，即骨吸收和骨形成都明显增加，但骨吸收功能大于骨形成功能，以骨丢失为主，进而启动了骨的合成，属高转换型骨质疏松。
Notch-1基因敲除兔骨髓间充质干细胞可阻止椎间盘退行性变吗？
Notch-1基因敲除兔骨髓间充质干细胞可阻止椎间盘退行性变吗？莫日格乐;邵增务【期刊名称】《中国组织工程研究》【年(卷),期】2013(000)036【摘要】背景：前期实验证明退变椎间盘内 Notch-1基因高表达，但骨髓间充质干细胞向髓核样细胞转化时 Notch-1的作用尚不明确。
<br> 目的：观测Notch-1基因敲除后的骨髓间充质干细胞修复退变椎间盘的作用。
<br> 方法：①4只体质量0.4-0.5 kg新西兰兔麻醉后，取股骨骨髓，以密度梯度离心法分离培养骨髓间充质干细胞。
②将针对Notch-1的shRNA及无意空质粒shRNA，瞬时转染入骨髓间充质干细胞，转化生长因子β1诱导转染骨髓间充质干细胞分化。
③体质量1.0-1.5 kg新西兰兔10只，对兔脊柱L3-4、L4-5、L5-63个椎间盘行穿刺抽吸髓核组织造模，将细胞分为转化生长因子β1诱导转染空质粒组、转化生长因子β1诱导转染shRNA-Notch-1质粒组、转化生长因子β1诱导无转染组细胞，于造模2周后分别移植入L3-4、L4-5、L5-63个椎间盘。
<br> 结果与结论：①细胞移植4周后MRI检测发现，L3-4(无转染组)及L5-6(空质粒组)%T2加权像扫描(%ST2WI)值有明显增加，L4-5(shRNA-Notch-1质粒组)%ST2WI值增加最为显著，与其他2组比较差异有显著性意义(P<0.05)。
②甲苯胺蓝染色可见L4-5(shRNA-Notch-1质粒组)椎间盘组织内蛋白多糖的表达显著高于L3-4(无转染组)及L5-6(空质粒组)。
③RT-PCR和Western blot检测发现L4-5(shRNA-Notch-1质粒组)椎间盘内Ⅱ型胶原及蛋白多糖的表达明显高于 L3-4(无转染组)及L5-6(空质粒组)，差异有显著性意义。
结果提示兔退变椎间盘内移植Notch-1基因敲除兔骨髓间充质干细胞，有效修复了退变的椎间盘组织。
蛇床子素现代药理研究进展
蛇床子素现代药理研究进展贾丽娜;康学智;张栩【摘要】本文从补益和祛邪2个方面总结蛇床子的有效成分蛇床子素的现代药理研究进展,认为蛇床子素补益方面具有保护生殖系统作用、抗骨质疏松、保护神经系统;祛邪方面具有抗肿瘤、抗氧化和免疫调节、降酶保肝、降糖降压、镇痛作用.【期刊名称】《西部中医药》【年(卷),期】2018(031)004【总页数】5页(P141-144,封3)【关键词】蛇床子;蛇床子素;药理;综述【作者】贾丽娜;康学智;张栩【作者单位】复旦大学附属华东医院中医科,上海200040;上海交通大学;复旦大学附属华东医院中医科,上海200040【正文语种】中文【中图分类】R285蛇床子首见于《神农本草经》：“主男子阴痿湿痒，妇人阴中肿痛，除痹气，利关节，癫痫，恶疮”；李时珍在《本草纲目》中认为蛇床子“乃右肾命门、少阳，三焦气分之药；神农列之为上品，不独补助男子，而又有益妇人”；《别录》载蛇床子：“温中下气，令妇人服热，男子阴强，令人有子”。
能除妇人男子一切虚寒湿所生病，是一味入肾经有补益祛邪双重作用的药物。
现代研究认为蛇床子的有效成分为蛇床子素(osthole，OST)，化学名为7-甲氧基-8-异戊烯基香豆素，该物质药理活性广泛，临床多用于生殖内分泌、肿瘤、炎症、骨质疏松、糖尿病、缺血再灌注损伤、变态反应及免疫系统等疾病。
本文基于蛇床子的中医归经和功效，对其近年来实验和临床药理研究新进展进行归类总结，分别从补益作用和祛邪作用2方面进行阐述。
1 补益作用蛇床子入肾经，温补肾阳，五脏之中，肾主骨生髓，脑为髓海。
所以蛇床子素的补益作用我们拟从生殖系统保护作用，抗骨质疏松作用，中枢神经系统保护作用等方面分别总结。
1.1 生殖系统保护作用基于《本草纲目》所载：“暖丈夫阳气，助女人阴气”的功效，现代研究发现蛇床子素有利于生殖内分泌功能的修复。
Xie JX等［1］采用蛇床子混悬液150 mg/kg与75 mg/kg高、低剂量对环磷酰胺致生殖系统损伤雄性小鼠进行灌胃治疗，发现蛇床子素高剂量可显著升高血清中睾酮的含量，免疫组化结果显示，高剂量可增加睾丸肌样细胞睾酮受体阳性细胞表达百分率，高、低剂量均可增加精囊的脏器系数。