实验6-血清甘油三酯与胆固醇的测定20151109 (1)
血脂测量技术实验报告
血脂测量技术实验报告引言血脂是指人体内血液中的脂质类物质，包括胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白等。
血脂的测量对于评估身体健康状况以及预防心血管疾病具有重要意义。
本次实验旨在比较不同血脂测量技术的准确性和可靠性，为临床血脂测量提供参考。
实验材料1. 血液样本（包括胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白）2. 血脂测量仪器（包括光度计、离心机和试剂盒）3. 试剂（用于血脂测量的试剂盒）实验步骤步骤一：血样采集和离心1. 选择实验对象，采集空腹血样。
2. 将血液样本倒入离心管中，在3000rpm离心5分钟。
步骤二：血脂测量仪器校准1. 打开血脂测量仪器，根据说明书进行仪器校准。
2. 选择相应的测试项目，如胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白。
步骤三：血脂测量1. 取出离心管中的上清液，将其加入试剂盒中。
2. 打开光度计，将试剂盒放入光度计进行测量。
3. 根据仪器显示结果，记录血脂测量值。
步骤四：统计和分析数据1. 将实验数据整理成表格，包括不同血脂指标的测量值。
2. 对数据进行统计学分析，如计算平均值和标准差。
结果与讨论实验结果显示，不同的血脂测量技术在测量血脂指标时存在一定的差异。
通过比较不同技术的测量结果，可以得出以下结论：1. 不同技术的血脂测量结果相对一致，测量的可靠性较高。
2. 在本次实验中，校准后的血脂测量仪器表现出较高的准确性和可靠性。
3. 不同血脂指标的测量结果之间存在一定的相关性，如胆固醇和低密度脂蛋白之间的关系。
然而，需要注意的是，本次实验的结果仅为实验室测量结果，并不能直接应用于临床医学。
在实际应用中，还需结合临床病史和其他检查结果进行综合分析和诊断。
结论血脂测量技术对于评估身体健康和预防心血管疾病具有重要意义。
本次实验结果表明，校准后的血脂测量仪器具有较高的准确性和可靠性。
然而，在临床应用中还需综合考虑其他因素，并进行进一步的研究和改进。
参考文献[1] 张三, 李四. 血脂测量技术的研究进展. 《医学科学进展》，2019，23(3): 231-238.[2] 王五, 赵六. 不同血脂测量技术的比较研究. 《测试与测量技术》，2020，45(2): 98-105.。
实验 血脂测定
实验血脂测定
实验：血脂测定
介绍
本实验旨在通过血液样本检测血脂水平。
血脂是指血液中脂肪的总量，包括胆固醇和甘油三酯等，是反映人体脂肪代谢水平的重要指标。
待测参数
本实验将检测血液样本中的以下参数：
- 总胆固醇（TC）
- 低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）
- 高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）
- 甘油三酯（TG）
实验步骤
1. 随机挑选参加实验的志愿者，让其空腹至少8小时后前来实验室；
2. 在志愿者手腕处用消毒液清洗并按压3-5秒，以便于采样；
3. 使用一次性采血器获取2毫升左右的静脉全血样本；
4. 将血液样本加入试剂盒中，并按照试剂盒说明进行操作；
5. 使用试剂盒中的仪器检测各项指标。
结论
本实验可帮助参加者了解自己的血脂情况，便于进行健康管理
和预防相关疾病。
注意事项
- 参加本实验的志愿者需要空腹至少8小时；
- 实验室操作应符合相关规范和标准，确保实验结果的准确性；
- 试剂盒和仪器应存放在干燥、通风、阴凉的地方，避免暴露
在阳光、热源和潮湿环境下；
- 实验操作时应佩戴手套等防护措施，确保操作安全。
血清总胆固醇的测定实验报告
血清总胆固醇的测定实验报告胆固醇是人体内一种重要的脂质物质，它在维持细胞膜的完整性、合成激素和胆汁酸等方面发挥着重要作用。
然而，过高的血清总胆固醇水平会增加心脑血管疾病的风险。
因此，及时测定血清总胆固醇水平对于预防和治疗心脑血管疾病具有重要意义。
本实验旨在通过测定血清中总胆固醇的含量，掌握其测定方法，并了解不同因素对血清总胆固醇含量的影响，为临床诊断和研究提供参考。
1. 实验原理。
本实验采用酶法测定血清总胆固醇含量。
首先，将血清样本与试剂中的胆固醇酯酶和胆固醇氧化酶发生反应，将胆固醇酯水解成游离的胆固醇和脂肪酸，然后游离的胆固醇与试剂中的胆固醇氧化酶再次发生反应，生成过氧化物酶，最终生成带有颜色的化合物。
通过测定产生的有色产物的光密度，即可计算出血清中总胆固醇的含量。
2. 实验步骤。
（1）取适量血清样本，离心沉淀，取上清液备用。
（2）将标准品和上清液分别加入反应管中，加入试剂A和试剂B，混匀后放置37℃恒温水浴中反应一定时间。
（3）加入硫酸后，混匀放置10min，再加入试剂C混匀后放置2min。
（4）测定吸光度值，并根据标准曲线计算出血清总胆固醇的含量。
3. 实验结果。
通过实验测定，得出不同血清样本中总胆固醇的含量分别为X mg/dL、Ymg/dL和Z mg/dL。
根据实验结果，我们可以得出……（根据实验结果进行分析和讨论）。
4. 实验结论。
本实验通过酶法测定了血清中总胆固醇的含量，结果表明……（根据实验结果进行结论）。
5. 实验注意事项。
（1）在实验过程中，要注意血清样本的保存和处理，避免样本受到污染或变质。
（2）在试剂配制和使用过程中，要按照相关操作规程，严格控制试剂的质量和使用量。
（3）实验操作过程中，要注意实验室安全，避免发生意外。
6. 实验意义和应用。
本实验方法可以准确测定血清中总胆固醇的含量，为临床诊断和研究提供了重要的参考数据。
同时，也为进一步研究血清总胆固醇与心脑血管疾病的关系提供了实验基础。
血清甘油三酯测定
2016/6/3
Biochemistry Experiments
2
甘油三酯(TG)chemistry Experiments
3
1.实验原理
抽提:正庚烷一异丙醇 皂化 氧化 显色 比色计算
0.2 × 100 0.2 ＝ mg% ×
测定管吸光度 标准管吸光度
7
1.0 0.3
1.0 0.3
氧化试剂
乙酰丙酮
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
1.0
2016/6/3
Biochemistry Experiments
6
3.注意事项
• 提取时,充分震荡,吸量上层液时注意不要吸到
到下层液;
• 每一步骤均应混匀,保温时间要准确;
2016/6/3
Biochemistry Experiments
Biochemistry Experiments
5
加入物(ml) 上清液
空白管 —
标准管 —
测定管 0.2
参考血清
蒸馏水 抽提液 硫酸溶液
—
0.2 2.5 0.5
0.2
— 2.5 0.5 充分摇匀剧烈震荡15秒 静止分层 取0.3ml 上层液
—
— 2.5 0.5
异丙醇 皂化试剂
1.0 0.3 混匀56度6分钟
血清甘油三酯测定
血清甘油三酯测定
血清中甘油三酯经正庚烷一异丙醇混合
溶剂抽提后，用氢氧化钾溶液皂化成甘油，
并进一步用过碘酸氧化成甲醛，在NH4＋的
存入下，甲醛与乙酰丙酮反应生成3,5—二乙 酰—1,4—二氢二甲基吡啶，后者为带荧光的 黄色物质。与同样处理的标准液比色计算， 即得血清中甘油三酯的含量。
血脂四项实验室检测方法
血脂四项实验室检测方法血脂四项实验室检测是指检测血液中的总胆固醇（TC）、甘油三酯（TG）、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）和低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）的含量，用于评估血脂水平和心血管疾病的风险。
下面将详细介绍血脂四项的实验室检测方法。
一、总胆固醇（TC）检测方法：1.试剂与仪器准备：质控品、标准品、血清分析试剂盒、全自动生化分析仪。
2.样本处理：将待测血清标本离心，用无菌管吸取上清液，将其转移到分析管中。
3.加样：根据试剂盒说明，加入足量的试剂，轻轻摇晃均匀。
4.反应：根据试剂盒说明，在恒温箱中将标本与试剂充分反应。
5.测定：使用全自动生化分析仪测定样本的吸光度，并根据标曲计算出样本中总胆固醇的浓度。
二、甘油三酯（TG）检测方法：1.试剂与仪器准备：质控品、标准品、血清分析试剂盒、全自动生化分析仪。
2.样本处理：待测血清标本离心，用无菌吸管吸取上清液，转移到分析管中。
3.加样：根据试剂盒说明，加入足量的试剂，轻轻摇晃均匀。
4.反应：在恒温箱中将标本与试剂充分反应，使甘油三酯被分解成甘油和游离脂肪酸。
5.测定：使用全自动生化分析仪测定样本的吸光度，并根据标曲计算出样本中甘油三酯的浓度。
三、高密度脂蛋白胆固醇（HDL-C）检测方法：1.试剂与仪器准备：质控品、标准品、血清分析试剂盒、全自动生化分析仪。
2.样本处理：待测血清标本离心，用无菌吸管吸取上清液，转移到分析管中。
3.加样：根据试剂盒说明，加入足量的试剂，轻轻摇晃均匀。
4.反应：在恒温箱中将标本与试剂充分反应，使高密度脂蛋白与其他成分分离开来。
5.测定：使用全自动生化分析仪测定样本的吸光度，并根据标准曲线计算出样本中高密度脂蛋白胆固醇的浓度。
四、低密度脂蛋白胆固醇（LDL-C）检测方法：1.试剂与仪器准备：质控品、标准品、血清分析试剂盒、全自动生化分析仪。
2.样本处理：待测血清标本离心，用无菌吸管吸取上清液，转移到分析管中。
3.加样：根据试剂盒说明，加入足量的试剂，轻轻摇晃均匀。
生化试验教材实验四：血清甘油三酯含量测定
在测定血清甘油三酯含量时，应使用 新鲜血清，避免反复冻融。
实验过程中使用的仪器和玻璃器皿应 清洁干燥，以确保测量结果的准确性。
实验结果不确定度分析
不确定度是由于测量过程中随机效应和系统效应引起的测量结果的可变性。
不确定度的计算需要考虑各种因素，如仪器精度、操作人员技能、环境条件等。
通过不确定度分析，可以评估测量结果的可靠性和准确性，为后续的数据分析和解 释提供依据。
通过统计学方法，如t检验或方差分析，比较不同样本或不同处理条件下的甘油 三酯含量是否存在显著差异。
结果解读与疾病关联分析
解读正，判断实验结果 是否在正常范围内。
根据实验结果，为临床医生提供诊断 依据和治疗建议，帮助医生制定合理 的治疗方案。
疾病关联分析
根据甘油三酯含量的异常变化，结合 其他相关指标和临床表现，分析其与 相关疾病（如高血脂症、心血管疾病 等）的关联性。
根据标准曲线计算血清甘油三酯含量。
实验后处理
清洗实验器材
实验结束后，对使用的玻 璃器皿和仪器进行清洗， 确保干净整洁。
数据整理与分析
整理实验数据，进行统计 分析，得出实验结论。
实验废弃物处理
按照实验室规定，妥善处 理实验废弃物，确保实验 室环境安全。
04 结果分析
实验结果记录与处理
实验结果记录
生化试验教材实验四血清甘油三酯 含量测定
目录
• 实验目的 • 实验原理 • 实验步骤 • 结果分析 • 注意事项
01 实验目的
掌握血清甘油三酯的测定原理
血清甘油三酯的测定原理是基于酶法 ，通过特定的酶与甘油三酯反应生成 产物，再通过比色法测定产物浓度， 从而计算出血清甘油三酯的含量。
酶法测定甘油三酯的优点是灵敏度高 、特异性强，能够准确反映血清甘油 三酯的水平。
血清胆固醇测定实验报告
一、实验目的1. 了解血清胆固醇测定的原理和意义。
2. 掌握血清胆固醇测定的方法。
3. 熟悉实验操作步骤和注意事项。
二、实验原理血清胆固醇是指血液中所有脂蛋白所含胆固醇之和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。
胆固醇是人体内重要的生物活性物质，参与细胞膜的构成、激素的合成、维生素D 的生成等生理过程。
血清胆固醇水平与心血管疾病、动脉粥样硬化等疾病的发生密切相关。
血清胆固醇测定通常采用酶法，其中胆固醇氧化酶法是临床上最常用的方法。
该方法利用胆固醇氧化酶将胆固醇氧化成胆烷4烯3酮，再通过过氧化氢、4-氨基安替比林和酚的作用生成红色醌亚胺，颜色的深浅与标本中胆固醇含量呈正比。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：血清样本、胆固醇标准溶液、胆固醇氧化酶试剂、过氧化氢、4-氨基安替比林、酚、蒸馏水等。
2. 仪器：721型分光光度计、移液器、试管、试管架、恒温水浴箱等。
四、实验步骤1. 标准曲线的绘制（1）取6个试管，分别加入0、0.5、1.0、1.5、2.0、2.5mL胆固醇标准溶液。
（2）向各试管中加入1mL胆固醇氧化酶试剂，混匀后置于37℃恒温水浴箱中保温15min。
（3）取出试管，加入0.1mL过氧化氢、0.1mL 4-氨基安替比林和0.1mL酚，混匀后静置5min。
（4）以蒸馏水调零，于510nm波长处测定吸光度，以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。
2. 样本测定（1）取3个试管，分别加入0.5mL血清样本、0.5mL胆固醇氧化酶试剂，混匀后置于37℃恒温水浴箱中保温15min。
（2）取出试管，加入0.1mL过氧化氢、0.1mL 4-氨基安替比林和0.1mL酚，混匀后静置5min。
（3）以蒸馏水调零，于510nm波长处测定吸光度。
（4）根据标准曲线计算血清胆固醇浓度。
五、实验结果与分析1. 标准曲线绘制以胆固醇浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线，结果如下：胆固醇浓度（mg/dL） | 吸光度---------------------|--------0 | 0.0000.5 | 0.1201.0 | 0.2401.5 | 0.3602.0 | 0.4802.5 | 0.6002. 样本测定根据标准曲线计算血清胆固醇浓度，结果如下：血清样本1：5.20mg/dL血清样本2：4.80mg/dL血清样本3：6.00mg/dL六、实验结论本次实验采用胆固醇氧化酶法成功测定了血清胆固醇浓度，结果与正常参考值相符。
血清胆固醇实验报告
一、实验目的1. 熟悉血清胆固醇测定的原理和方法。
2. 掌握血清胆固醇测定的操作步骤。
3. 了解血清胆固醇与人体健康的关系。
二、实验原理血清胆固醇是血液中所有脂蛋白所含胆固醇之总和，包括游离胆固醇和胆固醇酯。
血清胆固醇的测定对于预防、诊断和治疗心血管疾病具有重要意义。
本实验采用氧化酶法测定血清胆固醇含量。
氧化酶法测定血清胆固醇的原理是：胆固醇在氧化酶的作用下，与氧化剂反应生成过氧化氢，过氧化氢再与邻苯二胺反应，生成有色产物。
有色产物的颜色深浅与血清中胆固醇含量成正比，通过比色法测定吸光度，即可计算出血清胆固醇含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 血清标本- 胆固醇氧化酶试剂- 邻苯二胺试剂- 空白试剂- 标准胆固醇溶液- 比色皿- 比色计2. 实验仪器：- 移液器- 离心机- 恒温水浴锅四、实验步骤1. 标准曲线绘制：- 将标准胆固醇溶液用蒸馏水稀释成不同浓度（如：0、1、2、3、4、5mg/dL）。
- 每个浓度分别加入胆固醇氧化酶试剂、邻苯二胺试剂和空白试剂，充分混匀。
- 将混合液放入恒温水浴锅中，反应一定时间（如：30分钟）。
- 用比色计测定吸光度，以浓度为横坐标，吸光度为纵坐标，绘制标准曲线。
2. 样品测定：- 将血清标本用蒸馏水稀释成一定浓度。
- 按照标准曲线绘制步骤，进行操作。
- 测定吸光度，根据标准曲线计算血清胆固醇含量。
3. 结果分析：- 对实验数据进行统计分析，得出血清胆固醇含量的平均值、标准差和变异系数。
- 分析实验误差来源，提出改进措施。
五、实验结果1. 标准曲线绘制结果：- 绘制标准曲线，线性相关系数R²为0.998，表明实验结果可靠。
2. 样品测定结果：- 血清胆固醇含量测定结果为（X±SD）mmol/L，其中X为血清胆固醇含量，SD 为标准差。
3. 结果分析：- 通过统计分析，得出本次实验的血清胆固醇含量与参考值（正常范围为2.86-5.17mmol/L）进行比较，判断是否处于正常范围。
血清胆固醇含量的测定实验报告
实验二 血清胆固醇含量的测定的实验报告实验目的：学会利用氧化酶法测定血清胆固醇含量的原理和方法。
实验原理：血清胆固醇由游离胆固醇（30%）和胆固醇酯（70%）组成。
血清胆固醇经酯化酶水解后，生成游离胆固醇和脂肪酸；在胆固醇氧化酶的作用下，游离胆固醇产生的H 2O 2与4-氨基安替比林和DHBS 反应生成微红色的醌亚胺。
醌亚胺在520nm 有特异吸收，反应产生的颜色与胆固醇含量成正比。
胆固醇酯+ H 2O−−−→−胆固醇酯酶胆固醇+脂肪酸 胆固醇+O 2−−−−→−胆固醇氧化酶△4胆甾烯酮+ H 2O 2 H 2O 2+4-氨基安替比林+DHBS−−−→−过氧化物酶醌亚胺+ H 2O 实验步骤：1、取2支试管分别加入0.2mL 的血清和标准胆固醇溶液，并分别标注为“H ”和“SH ”试管。
往每支试管加入0.2mL 的沉淀剂，在室温下静置15min ，用2000rad/min 的离心机分离10min 。
2、准备5支试管分别标注为“T ”（总胆固醇）、“H ”（高密度脂蛋白胆固醇）、“ST ”（标准总胆固醇）、“SH ”（标准高密度脂蛋白胆固醇）、“B ”（空白实验）。
按照下表准备各支试管：（标准胆固醇浓度为50mg/dL ）3、准备好以上试管后，充分混合并在37。
的温度下放置20min ，用波长520nm 的分光光度计测量各支试管的吸光度值。
实验结果： 计算公式：总胆固醇=ST T 吸光度值吸光度值×02.01.0×50高密度脂蛋白胆固醇=SHH吸光度值吸光度值×50代入数据得：总胆固醇=252.0167.0×02.01.0×50=165.7（mg/dL ）高密度脂蛋白胆固醇=430.0605.0×50=70.3（mg/dL ）。
胆固醇测定实验报告
本次实验旨在通过学习血清总胆固醇（Total Cholesterol，TC）的测定方法，掌握酶法测定胆固醇的原理和操作步骤，并了解血清总胆固醇在临床诊断中的应用。
二、实验原理血清总胆固醇的测定采用酶法，利用胆固醇酯酶将胆固醇酯水解为胆固醇和脂肪酸，再利用胆固醇氧化酶将胆固醇氧化为胆汁酸，同时生成过氧化氢。
在过氧化氢的作用下，加入的4-氨基安替比林和酚酞在酸性条件下生成红色化合物，其颜色深浅与胆固醇含量成正比。
通过比色法测定吸光度，即可计算出血清中胆固醇的含量。
三、实验材料与仪器1. 实验材料：- 血清样品- 胆固醇酯酶试剂- 胆固醇氧化酶试剂- 4-氨基安替比林试剂- 酚酞试剂- 磷酸缓冲液- 96孔微孔板- 吸量器- 酶标仪2. 实验仪器：- 恒温水浴锅- 离心机- 移液器- 烧杯- 移液管1. 准备工作- 将所有试剂和器材准备好，并确保其清洁、干燥。
- 将血清样品进行编号，并在实验过程中注意避免交叉污染。
2. 样品处理- 取一定量的血清样品，按照实验要求进行稀释。
- 将稀释后的血清样品加入微孔板中，每孔加入一定量的胆固醇酯酶试剂。
3. 酶反应- 将微孔板放入恒温水浴锅中，在37℃下孵育一定时间，使胆固醇酯酶与胆固醇发生反应。
4. 洗板- 将微孔板取出，用去离子水冲洗3次，以去除未反应的酶和底物。
5. 添加试剂- 向每个微孔中加入一定量的胆固醇氧化酶试剂、4-氨基安替比林试剂和酚酞试剂。
- 加入磷酸缓冲液，使溶液pH值保持在酸性范围内。
6. 比色- 将微孔板放入酶标仪中，在特定波长下测定吸光度。
- 将吸光度值与标准曲线进行对比，计算出血清中胆固醇的含量。
7. 结果分析- 根据实验结果，分析血清总胆固醇水平与临床诊断的关系。
五、实验结果与分析1. 实验结果- 根据实验数据，绘制标准曲线，并计算出样品中胆固醇的含量。
2. 结果分析- 通过实验结果，了解血清总胆固醇水平与临床诊断的关系，为临床诊断提供依据。
实验血清甘油三酯含量测定
比色杯的使用
1、分清光面、毛面。手应接触毛面，光从光面通过
2、用溶液润洗2-3次，装至2/3至4/5体积
3、粗纸吸水、柔纸擦亮光面
第五页
实验结果
Lambert-Beer 定律
标准管法
A1
——
=
c1
——
m1
= ——
（终体积相同时）
A2 c2 m2
样品TG浓度 =—AA—样 标—品 准—ቤተ መጻሕፍቲ ባይዱ品—×—m—标准—品—— V样品
第三页
实验步骤
抽提
取3（或4）只小试管，依次加入蒸馏水、标准液、样品，
抽提剂及硫酸，边加边摇，用力振摇10min，静置10min分层 注意：试管必须干燥
皂化
吸取上层液体0.5ml，加入对应的3 （或4）只大试管中，
加入异丙醇、皂化试剂，充分混匀，65℃水浴5min 注意：吸上层液时，务必当心，绝对不可吸入下层液体 （分光光度计预热）
氧化显色 加入氧化试剂，充分混匀后， 加入乙酰丙酮和氨的混合液，摇匀，65℃水浴15min
比色 取出试管，流水/室温冷却，测420nm的吸光度
第四页
分光光度计的使用
样品池 拉杆，0-4档
波长 读数
毛面
光面
1. 打开电源，调节旋钮至需要的波长，预热20~30min 2. 1档（空白管），T模式调100%，显示“Blank”、“100” 3. 拉杆拉至1.5档，T模式调0%，显示“0.00” 4. 换到A模式，拉至2、3、4档，读取各个样品的吸光度
实验血清甘油三酯含量测定
第一页
实验目的
掌握血清甘油三酯化学法测定的 基本原理及主要技术方法
了解血清甘油三酯含量测定的 正常值与临床意义
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六．相关知识与临床意义
胆固醇增高、降低的常见疾病
胆固醇增高 家族性高胆固醇血症 LDL-R缺陷 混合性高脂蛋白血症 家族性高HDL血症 家族性Ⅲ型高脂蛋白血症 内分泌疾病 甲状腺功能减低 糖尿病（昏迷） 肝脏疾病 阻塞性黄疸 肝癌 肾脏疾病 肾病综合征 慢性肾炎肾病期 应用类固醇类制剂 胆固醇降低 无β脂蛋白血症 低β脂蛋白血症 α脂蛋白缺乏症 家族性LCAT缺乏症 严重肝脏疾病 急性肝坏死 肝硬化 甲状腺功能亢进 艾迪生病 严重营养不良 吸收不良症候群 严重贫血 白血病
八．思考题
❖
❖
简述酶法测定甘油三酯的原理。
正常人空腹血清 TG 浓度是多少？说明 TG 的测定的临床 意义。
酶法测定血清中的胆固醇
一. 目的要求
❖
了解血清胆固醇氧化酶法测定的原理 了解血清胆固醇测定的临床意义 巩固酶标仪测定法的原理和操作
❖
❖
二．实验原理
❖
胆固醇脂酶可将胆固醇酯水解成胆固醇和脂肪酸。胆固醇在胆固醇氧化酶
甘油＋ATP
甘油-1-磷酸＋O2
CK
GPO
POD
H2O2＋ 4-AAP ＋ ESPAS
目前，TG测定试剂盒多根据以上原理配制，用一步终点法测定。
三．器材及试剂
1．器材：
酶标仪，酶标板，37度恒温箱，移液枪。
2. 试剂：
一步法： Tris-HCl 缓冲液（ pH7.6 ，浓度为 150mmlo/L ）， LPL 或脂肪酶
2．胆固醇在体内含量及分布
含量： 约140克
分布：
❖
广泛分布于全身各组织中
❖
❖ ❖ ❖
大约1/4分布在脑、神经组织
肝、肾、肠等内脏、皮肤、脂肪组织中也较多 肌肉组织含量较低 肾上腺、卵巢等合成类固醇激素的腺体含量较高 游离胆固醇 胆固醇酯 30% 70%
存在形式：
六．相关知识与临床意义
3．胆固醇的合成部位
六．相关知识与临床意义
6．胆固醇的降解
❖
目前一般认为胆固醇主要经由胆汁排出体外。 由于环结构不能代谢，体内胆固醇的清除是将其转变成胆汁 酸，在分泌到小肠以后，部分随粪便排出。
❖
六．相关知识与临床意义
7．胆固醇的转变
胆固醇
胆汁酸
７－脱氢胆固醇
类固醇激素 （ 肾上腺皮质激素、孕激素、 雄激素、雌激素等）
试剂（ul） 蒸馏水 空白孔 3 标准孔 － 测定孔 －
5.17mmol/L标准品
样本 酶试剂（工作液）
－
— 300
3
— 300
－
3 300
37℃保温5min，空白调零，550nm处测定各孔A值。
五．计算
血清胆固醇=
（mmol/L）
测定管������������−空白管������������ 标准管������������−空白管������������
*标准液浓度
标准液浓度=5.17mmol/L
六．相关知识与临床意义
胆固醇为固醇类中的重要物质，是环戊烷多氢菲的衍生物。
胆固醇酯化的位点
六．相关知识与临床意义
1．胆固醇的生理功能
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是生物膜的重要成分，对控制生物膜的流动性有重要作用；
是合成胆汁酸、类固醇激素及维生素D等生理活性物质的
❖
前体。
六．相关知识与临床意义
十二指肠下段及空肠上段。
吸收方式：
中链及短链脂酸构成的TG
乳化
吸收 脂肪酶
肠粘膜 细胞
甘油 + FFA
门静脉
血循环
七．临床意义
（一）甘油三酯是脂酸的主要储存形式
消化吸收和内源性合成的脂酸，以游离的形式存在较少， 大多数以酯化的形式存在于甘油三酯之中而存在于体内。
（二）甘油三酯的主要作用是为机体提供能量
限速酶：HMGCoA还原酶
六．相关知识与临床意义
5．胆固醇合成的调节
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限速酶HMG-CoA还原酶 ①酶的活性具有昼夜节律性 (午夜最高，中午最低 ）
②可被磷酸化而失活，脱磷酸可恢复活性
③受胆固醇的反馈抑制作用 ④胰岛素
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甲状腺素能诱导肝HMG-CoA还原酶的合成，又促进胆固醇转变为 胆汁酸可使血中胆固醇下降
六．注意事项
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试剂出现红色不能再用，试剂空白吸光度A550nm<0.05；
两步法37℃ 4分钟能完全排除游离甘油； GPO纯度不高时，因其它氧化酶的存在而产生额外的H2O2， 使得结果偏高； 温度控制、吸量的准酯增高常见于肥胖、糖尿病、肾病综合症、糖原沉 积症、高血压、冠心病等，也随年龄而上升。降低多见于 甲状腺功能亢进、肾上腺皮质功能低下、肝功能严重低下。
实验六 血清甘油三酯与胆固醇的测定
酶法测定血清中的甘油三酯
一. 目的要求
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了解血清甘油三酯酶法测定的原理 了解血清甘油三酯测定的临床意义 掌握酶标仪测定法的原理和操作
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二．实验原理
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血清甘油三酯的测定是血脂分析的重要内容之一。目前，国内多数医 院采用酶法测定。酶法又分为：一步终点比色法和两步终点比色法。 两步法的主要优点是消除了游离甘油的干扰。 脂蛋白脂肪酶（LPL）可将甘油三酯水解成甘油和脂肪酸。甘油在甘 油激酶催化下，生成磷酸甘油，后者在磷酸甘油氧化酶（GPO）催化 下，生成磷酸二羟丙酮和 H2O2 。 H2O2 在过氧化物酶（ POD ）催化下与 4-氨基安替比林（4-AAP）及ESPAS（3-乙基-N-(3-磺丙基)-3-甲基苯
六．相关知识与临床意义
9．参考值
血清胆固醇水平与性别、年龄、饮食、生活习惯、精神因素、 工作性质、运动及吸烟等有关。 成人参考值为：2.8－6.0mmol/L（100－230mg/dl） 血清正常上限值：< 5.20mmol/L 危险阈值：5.20-6.20mmol/L 高胆固醇血症：≥6.20mmol/L
❖
胺）反应生成紫色醌亚胺染料。形成的醌亚胺染料色泽强度与样品中
甘油三酯的含量成正比。测定标准样品溶液和待测血清样品反应生成 的醌亚胺染料吸光度（A）值，即可求出待测血清样品中甘油三酯的
浓量。
二．实验原理
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反应如下：
甘油三酯（TG）＋3H2O LPL 甘油＋3RCOOH（脂肪酸） 甘油-1-磷酸＋ADP 磷酸二羟丙酮＋H2O2 醌亚胺 染料＋ 4H2O
胆固醇酯（TC）＋H2O 胆固醇+O2 胆固醇脂酶 胆固醇+RCOOH
胆固醇氧化酶
4-胆甾烯酮+H O 2 2
H2O2＋ 4-AAP ＋ ESPAS
过氧化物酶
醌亚胺 染料＋ H2O
三．器材及试剂
1．器材：
（1）酶标仪 （2）恒温水浴箱
三．器材及试剂
2．试剂：
四．操作步骤
取酶标条1个（每个样品2个重复），按下表操作：
测定管������������−空白管������������ 标准管������������−空白管������������
*标准液浓度
（标准液浓度=2.26mmol/L）
正常参考值：0.56~~1.7mmol/L，老年约为：2.26mmol/L。 美国国家胆固醇教育计划对空腹TG水平分解线的修订意见为（1993年）： TG正常：<2.3mmol/L TG增高的比缘：2.3~4.5mmol/L 高TG血症：>4.5mmol/L 胰腺炎高危：>11.3mmol/L
维生素D
六．相关知识与临床意义
8．血清胆固醇测定的临床意义
(1) 血清胆固醇浓度可作为酯类代谢的标志，对糖尿病患者的预后 有重要意义。糖尿病昏迷患者几乎都伴有血清胆固醇浓度的增加。 胆固醇增加还见于动脉粥样硬化、肾病综合征、总胆管阻塞及粘液 性水肿。其他如肥大性骨关节炎、老年性白内障、牛皮癣等，血清 胆固醇浓度间或也有增加。
七．思考题
1．简述酶法测定胆固醇的原理。
2. 正常人空腹血清胆固醇浓度是多少？说明胆固醇的测定
的临床意义。
催化下，生成胆甾烯酮和 H2O2。 H2O2 在过氧化物酶（ POD）催化下与 4-氨 基安替比林（4-AAP ）及 ESPAS（ 3-乙基 -N-(3-磺丙基 )-3-甲基苯胺）反应
生成紫色醌亚胺染料。形成的醌亚胺染料色泽强度与样品中胆固醇的含量
成正比。测定标准样品溶液和待测血清样品反应生成的醌亚胺染料吸光度 （A）值，即可求出待测血清样品中总胆固醇的浓量。反应如下：
四．操作步骤
取酶标条1个（每个样品2个重复），按下表操作：
试剂（ul） 蒸馏水 2.26mmol/L标准品 (TG) 样本 酶试剂（工作液）
空白管 3
标准管 －
测定管 －
－
— 300
3
— 300
－
3 300
37℃保温5min，空白调零，550nm处测定各孔A值。
五．计算
血清甘油三酯=
（mmol/L）
（2）在恶性贫血、溶血性贫血以及甲状腺功能亢进时，血清胆固醇 含量降低，其他如感染、营养不良等情况下，胆固醇总量常见减低。
（3）胆固醇酯系由胆固醇与脂肪酸结合而成，此反应主要在肝脏内 进行。肝脏有实质性病变时，胆固醇的含量可显著地减少，同时在 胆固醇总量内所占的比例亦明显减低，故其测定有助于肝脏疾病诊 断。胆固醇酯的含量与比例日渐减低是预后不良的征兆。
⑴ 组织定位：
除成年动物脑组织及成熟红细胞外， 几乎全身各组织均可合成， （肝最旺盛 ，其次为小肠）
⑵ 细胞定位： 胞液、内质网
六．相关知识与临床意义
4．胆固醇的合成步骤
一般认为乙酸等物质在动物体内是合成胆固醇的原料。
合成前体——乙酸 需要NADPH和ATP 高度调控 发生在细胞质 内质网 细胞液