微波萃取鳗鱼中磺胺类药物的HPLC测定方法
国家标准GBT 21316—2007测定动物源性食品中磺胺类药物残留量的不确定度评定
摘要对国家标准GB/T 21316—2007测定动物源性食品中磺胺类药物残留量的测量不确定度进行评定。
根据《测量不确定度评定与表示》(JJF 1059.1—2012)和《化学分析中不确定度的评估指南》(CNAS-GL006:2019)中的规定,建立测定鳗鱼肉中磺胺残留量测定的数学模型,根据测量不确定度的来源,以磺胺甲基嘧啶为例,对各个不确定度分量进行评定和分析。
评定结果表明,当样品磺胺甲基嘧啶含量检测结果为10.4μg/kg 时,扩展不确定度为3.4μg/kg 。
不确定度按照从大到小排列,依次为标准曲线最小二乘法拟合、测量重复性、回收率、标准溶液制备、LC/MS/MS 定量重复性、样品定容、样品称量。
关键词国家标准;GB/T 21316—2007;动物源性食品;磺胺;不确定度评定中图分类号S859.84文献标识码A 文章编号1007-5739(2020)01-0224-04开放科学(资源服务)标识码(OSID )Uncertainty Evaluation for Determination of Sulfonamide Residues in Animal-derived Foods by National StandardGB/T 21316-2007CHEN Zhang-jie(Fujian Institute for Food and Drug Quality Control ,Fuzhou Fujian 350001)Abstract The uncertainty of determination of sulfonamide residues in animal-derived foods by GB/T 21316-2007was evaluated.According to "Evaluation and Expression of Uncertainty in Measurement"(JJF 1059.1-2012)and "Guidance on Quantifying Uncertainty in Chemical Analysis"(CNAS -GL006:2019),a mathematical model for determination of sulfonamide residues in eel meat was established.Based on the sources of the measurement uncertainty ,each uncertainty of sulfamethazine as an example was evaluated and analyzed.The evaluation results showed that the extended uncertainty was 3.4μg/kg when the test result of sulfamethazine content in samples was 10.4μg/kg.The uncertainty was arranged in order from large to small ,which were least squares calibration ,measurement repeatability ,recovery rate ,standard solution preparation ,LC/MS/MS quantitative repeatability ,sample volume determination and sample weighing.Key words national standard ;GB/T 21316-2007;animal-derived food ;sulfonamide ;uncertainty evaluation国家标准GB/T 21316—2007测定动物源性食品中磺胺类药物残留量的不确定度评定陈章捷(福建省食品药品质量检验研究院,福建福州350001)磺胺类药物是以对位氨基苯磺酰胺(简称磺胺)为基本结构的一类人工合成抗生素的总称,具有抗菌谱广、吸收迅速、使用方便、价格低廉等优点,广泛应用于人类医学和畜牧行业。
动物源性食品中磺胺类药物残留的固相萃取-高效液相色谱法测定
第22卷第1期分析测试学报Vol.22No.12003年1月FENXI CESHI X UEBAO(Journal of In strumen tal Analysis)J an .2003o R o R 收稿日期:2002-03-02;修回日期:2002-09-25作者简介:林海丹(1970-),女,广东汕尾人,工程师,在职硕士研究生.动物源性食品中磺胺类药物残留的固相萃取-高效液相色谱法测定林海丹1,谢守新1,冯德雄2,杨培慧2(1.广州出入境检验检疫局食品实验室,广东广州510623; 2.暨南大学化学系,广东广州510632)摘要:研究了动物源性食品中磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹啉药物残留的提取、净化和高效液相色谱分析条件,建立了高效液相色谱法同时测定动物源性食品中磺胺类药物残留的方法,该法检出限为0.010@10-6~0.020@10-6(w ),添加回收率为71%~83%。
关键词:固相萃取;高效液相色谱法;磺胺;动物源性食品;残留物分析中图分类号:R155.55;R978.2文献标识码:A 文章编号:1004-4957(2003)01-0094-03磺胺类药物是一类广泛使用的预防性和刺激动物生长的抗菌药。
磺胺类药物有过敏、引起排尿和造血紊乱等副反应。
磺胺二甲嘧啶还可能使小鼠致癌[1]。
为了消费者健康,必须监控各种动物源性食品药物残留,为此需要可靠的分析方法来监测这些药物残留。
作者对高效液相色谱法同时测定动物源性食品中磺胺嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺喹啉的残留方法进行了研究,应用液-液分配的经典样品处理方法结合固相萃取技术建立了合适的样品提取、净化、浓缩的前处理方法,确保高效液相色谱分析测定时无样品基质干扰;并对高效液相色谱条件进行优化,建立了最佳色谱条件。
该法简便、准确,回收率和检出限令人满意。
1实验部分1.1仪器W aters 高效液相色谱仪:510泵,490E 紫外检测器,717自动进样器,Waters Temperature C ontrolModule 柱温箱,Millenium 32色谱数据系统;ZYMARK 水浴氮气吹干仪(配有200mL 浓缩瓶);IKA ILTRA TURRAX T18basic 匀质机。
磺胺类药物检测(高效液相色谱法)
高效液相色谱法Байду номын сангаас
兽药残留检测
原理
样品经乙腈提取，混合型分散固相萃取净化，分步溶 剂洗脱，最后用HPLC法进行分析。
试剂
本实验用水均为去离子水，试剂为分析纯度或优级纯。 1．磺胺嘧啶（SD）对照品 纯度≥98.0%。 2．磺胺二甲嘧啶（SM2）对照品 纯度≥98.0%。 3. 磺胺间甲氧嘧啶（SMM）对照品 纯度≥98.0%。 4．磺胺甲恶唑（SMZ）对照品 纯度≥98.0%。 5．磺胺喹恶啉（SQ）对照品 纯度≥98.0%。 6．乙腈：色谱纯。
测定步骤
3．色谱条件
色谱柱：C18（4.6×250mm，5μm）； 流动相：磷酸三乙胺溶液-乙腈（25:75）； 进样量：20mL； 柱温：30℃； 检测波长：270nm；
测定步骤
4．定量测定
取标准工作液和样品试液分别注入液相色谱仪，记录谱图， 按外标法以峰面积进行计算。
测定步骤
5．结果计算
按照下式计算试样中各种药物残留的含量：
试剂
15．标准贮备液（1mg/mL）：准备称取SD、SM2、SMM、SMZ、SQ对照品各 100mg，用乙腈溶解并稀释至100mL容量瓶中，必要时超声。贮存于0℃8℃冰箱中，有效期90d。 16．标准工作液：取上述标准贮备液，用流动相稀释，得到磺胺类药物 0.02μg/mL、0.1μg/mL、0.2μg/mL、0.5μg/mL、1.0μg/mL的标准混 合溶液。贮存于0℃-8℃冰箱中，有效期7d。
测定步骤
2．试样提取净化
称取（6±0.05g）均质动物组织样品于50mL离心管中，依次加入14mL氯仿乙 腈溶液、1.0ml 10%硫酸钠溶液，振荡提取15min，以5000r/min离心5min。准确吸 取10mL提取液，氮吹或浓缩至近干，用4mL氯仿乙腈溶液溶解后，分别加入C18粉、 中性氧化铝粉各100mg，涡旋混2min，8000r/min离心3min。准确移取1.0mL上清液 于另一10mL离心管中，氮气吹干，加入1.0mL流动相，涡混溶解残渣，过0.45μm 滤膜。待HPLC测定。
动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法——高效液相色谱法
・12・中国兽药杂志２００２，３６（６）： １２￣１３／农业部畜牧兽医局１ 范 围本标准规定了动物源食品中磺胺嘧啶（ＳＤ）、磺胺间甲氧嘧啶（ＳＭＭ）、磺胺地索辛（ＳＤＭ）、磺胺二甲嘧啶（ＳＭ２）、磺胺甲氧嗪（ＳＭＰ）、磺胺甲噁唑（ＳＭＺ）、磺胺喹噁啉（ＳＱ）单个或混合物残留检测的制样和高效液相色谱测定方法。
本标准适用于鸡肌肉和鸡肝脏中磺胺嘧啶（ＳＤ）、磺胺间甲氧嘧啶（ＳＭＭ）、磺胺地索辛（ＳＤＭ）、磺胺二甲嘧啶（ＳＭ２）、磺胺甲氧嗪（ＳＭＰ）、磺胺甲噁唑（ＳＭＺ）、磺胺喹噁啉（ＳＱ）单个或混合物残留量检测。
２ 规范性引用文件下列文件中的条款通过本标准的引用而成为本标准的条款。
凡是注日期的引用文件，其随后所有的修改单（不包括勘误的内容）或修订版均不适用于本标准，然而，鼓励根据本标准达成协议的各方研究是否可使用这些文件的最新版本。
凡是不注日期的引用文件，其最新版本适用于本标准。
ＧＢ／Ｔ １．１-２０００１ 标准化工作导则 第１部分：标准的结构和编写规则 （ＩＳＯ／ＩＥＣ Ｄｉｒｅｃｔｉｖｅｓ， Ｐａｒｔ ３， １９９７，Ｒｕｌｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｓｔｒｕｃｔｕｒｅ ａｎｄ ｄｒａｆｔｉｎｇ ｏｆ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｎ-ｄａｒｄｓ， ＮＥＱ）ＧＢ／Ｔ ６６８２-１９９２ 分析实验室用水规则和试验方法ＮＹ／Ｔ ××××-２００１ 动物源食品中兽药残留检测方法标准编制规则３ 制 样３．１ 样品的制备 取适量新鲜或冷冻空白或供试组织，绞碎并使均匀。
３．２ 样品的保存 －２０℃冰箱中贮存备用。
动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法——高效液相色谱法［文献标识码］ B ［文章编号］ 1002-1280(2002)06-0012-02 ［中图分类号］ S859.84农业部于２００１年１１月１日发布农牧发［２００１］３８号文，发布１０种动物源食品中兽药残留检测方法。
水产品中3种磺胺类药物残留的高效液相色谱测定方法
[作者简介] 欧阳立群(1975-),男,硕士,主管技师,主要从事理化检验研究。
【化学测定方法】水产品中3种磺胺类药物残留的高效液相色谱测定方法欧阳立群(浙江省舟山市疾病预防控制中心,浙江舟山 316000)[摘要] 目的:建立了同时测定水产品中3种磺胺类药残的方法。
方法:样品经二氯甲烷提取后,用1%的乙酸溶液溶解,正己烷脱脂后,用液相紫外检测器测定。
结果:该方法3种磺胺线性范围为0125～5μg,相关系数均为01999以上,回收率均在87%以上,相对标准偏差均小于410%。
结论:该方法操作简单,是水产品中3种磺胺类药残的快速而准确的检测方法。
[关键词] 磺胺类药物;高效液相色谱法;水产品[中图分类号] O65717+2 [文献标识码] A [文章编号] 1004-8685(2005)08-0943-02 磺胺类药物是常用的广谱抗菌素,是一类用于预防和治疗细菌感染性疾病的化学治疗药物,如果通过食物链的传递,人体会产生抗药性,对人类的身体健康产生很大的危害。
国际食品法典委员会(CAC)、欧盟和欧美等大多数国家规定食品和饲料中的磺胺类药物总量及磺胺二甲基嘧啶等单个药物的含量不得超过011mg/kg。
本方法用于检测水产品中3种常见的磺胺类药物残留(磺胺-6-甲氯嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲基嘧啶)。
样品经二氯甲烷提取,浓缩,溶解,无需SPE 柱净化,用高效液相色谱-紫外检测器在285n m处检测。
1 材料与方法111 仪器Agilent1100液相色谱(美国安捷伦公司);旋涡混合器(上海青浦);数显恒温水浴锅(国华电器);组织捣碎机。
112 试剂乙腈(美国Sig ma化学试剂公司);分析纯二氯甲烷、氯仿、正己烷、无水硫酸钠、乙酸。
所用水均为超纯水。
混合标准储备溶液的制备:分别取011000g磺胺-6-甲氯嘧啶、磺胺甲嘧啶、磺胺二甲基嘧啶,用乙腈定容至100m l,3种磺胺浓度均为1mg/m l;临用时用乙腈稀释至10μg/m l混合标准使用液。
鳗鱼中五种磺胺类药物残留的测定
鳗鱼中五种磺胺类药物残留的测定
潘葳;饶秋华;苏德森
【期刊名称】《色谱》
【年(卷),期】2004(22)2
【摘要】Waters 2695高效液相色谱系统，Waters 2487紫外检测器，Millennium32色谱工作站；均质器，超声波清洗器，离心机，XW-80A旋涡混
合器，pH计，固相萃取装置。
【总页数】1页(P186-186)
【作者】潘葳;饶秋华;苏德森
【作者单位】福建省农业科学院中心实验室,福建,福州,350003;福建省农业科学院中心实验室,福建,福州,350003;福建省农业科学院中心实验室,福建,福州,350003【正文语种】中文
【中图分类】O658
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盛华;林玲
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3.加压毛细管电色谱法测定鳗鱼中5种磺胺类药物残留 [J], 董洁莹;欧阳小琨;曹国洲;朱晓艳;王阳光;杨立业
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高效液相色谱法同时测定鳗鱼及其制品中八种磺胺类药物_林海丹
［３］陈学恒． 我国山苍子油产业化技术浅评和利用对策［Ｊ］． 香精香料化妆品， ２００２， （４）： ３１－３７．［４］Ｄｉｄｉｅｒ Ｃｏｕｒｔｏｉｓ， Ｃｈａｒｌｅｓ Ｅｈｒｅｔ， Ｌａｕｒｅｎｃｅ Ｍａｒｔｈｅ Ｍａｒｌｅ Ｆｉｒｍｉｎ．Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ｐｒｏｄｕｃｔｉｏｎ ｏｆ ｉｒｏｎｅｓ［Ｐ］． ＷＯ， ９８４９１３９， １９９８－１１－０５．［５］Ｐｈｉｌｉｐ Ｊ． Ｍａｒｒｉｏｔｔ， Ｒｏｂｅｒｔ ｓｈｅｌｌｉｅ， Ｃｈａｒｌｅｓ Ｃｏｒｎｗｅｌｌ， Ｇａｓ ｃｈｒｏ－ｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ｔｅｃｈｎｏｌｏｇｉｅｓ ｆｏｒ ｔｈｅ ａｎａｌｙｓｉｓ ｏｆ ｅｓｓｅｎｔｉａｌ ｏｉｌｓ［Ｊ］．Ｊｏｕｒｎａｌ ｏｆ ｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ Ａ， ２００１， ９３６： １－２２．［６］Ｍｉｓｈａｒｉｎａ Ｔ Ａ， ｓａｍｕｓｅｎｋｏ Ａ Ｌ， Ｂｅｌｙａｅｖａ Ｎ Ｖ． Ｇａｓ ｃｈｒｏ－ｍａｔｏｇｒａｐｈｉｃ ａｎｄ ＩＲ ｓｐｅｃｔｒｏｓｃｏｐｉｃ ｃｈａｒａｃｔｅｒｉｓｔｉｃｓ ｏｆ ｔｒｉ－ ａｎｄｔｅｔｒａｍｅｔｈｙｌｃｙｃｌｏｈｅｘｅｎｙｌ ｂｕｔｅｎｙｌ ｋｅｔｏｎｅｓ［Ｊ］． Ｒｕｓｓｉａｎ Ｃｈｅｍｉ－ｃａｌ Ｂｕｌｌｅｔｉｎ， ２００２， ５１（９）： １６８４－１６８８．［７］Ｂｅｃｏｕｒ Ｂｅａｔｒｉｃｅ， Ｃｏｕｒｔｏｉｓ Ｄｉｄｉｅ， Ｅｈｒｅｔ Ｃｈａｒｌｅｓ． Ｂｉｏｃｏｎｖｅｒｓｉｏｎ［ｐ］． ＥＰ， ３５３６８３Ａ２， １９８９ －０７－３１．［８］Ａｓａｎｕｍａ Ｇｏｒｏ， Ｔａｍａｌ Ｙｏｓｈｉｎ．Ｐｒｏｃｅｓｓ ｆｏｒ ｐｒｏｄｕｃｉｎｇ ｉｒｏｎｅ［ｐ］．ＥＰ， ０４９９９８０Ｂ１， １９９５－０４－２６．［９］荣国斌， 译． 波谱数据表－有机化合物的结构解析［Ｍ］． 上海： 华东理工大学出版社， ２００２．［１０］陈耀祖， 涂亚平． 有机质谱原理及应用［Ｍ］． 北京： 科学出版社， ２００１．［１１］宁永成． 有机化合物结构鉴定与有机波谱学［Ｍ］． 北京： 科学出版社， ２００２．高效液相色谱法同时测定鳗鱼及其制品中八种磺胺类药物林海丹，谢守新，吴映璇（广州出入境检验检疫局食品实验室，广东 广州 ５１０６２３）摘 要：建立了高效液相色谱测定鳗鱼及其制品中磺胺嘧啶、磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲嘧啶、磺胺甲氧嗪、磺胺甲噁唑、磺胺间甲氧嘧啶、磺胺间二甲氧嘧啶、磺胺喹噁啉等八种磺胺类药物残留量的方法。
色谱法检测动物源食品中磺胺类药物残留研究进展
色谱法检测动物源食品中磺胺类药物残留研究进展作者：龙举李佩佩龙位等来源：《安徽农业科学》2015年第26期摘要磺胺类药物是一类可限量使用于水产养殖和畜禽业的广谱高效抗菌药物，且被广泛应用。
磺胺类在动物源性食品中会有残留，通过任何途径摄入磺胺都有可能在人体内蓄积而对人造成危害。
目前，动物源性食品中磺胺类药物多残留的定量检测主要有高效液相色谱法（HPLC）以及高效液相串联质谱法（HPLCMSMS）。
色谱法检测磺胺类药物的主要步骤为提取、浓缩、净化和进色谱柱分析。
简要综述了色谱法检测动物源食品中磺胺类药物的方法研究进展，以期为动物源性食品中磺胺类药物多残留检测提供参考。
关键词磺胺类；残留；检测；动物源食品；高效液相色谱；质谱中图分类号S851.34+7文献标识码A文章编号0517-6611（2015）26-330-03磺胺类药物（Sulfonamides，SAs）是指具有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，被广泛应用于水产养殖和畜禽业，主要作为化学治疗药物用于预防和治疗细菌感染性疾病[1]。
磺胺类药物有较广的抗菌谱，对大多数革兰氏阳性菌、革兰氏阴性菌的抑制作用明显[2]。
可限量使用的磺胺类药物是目前水产养殖业中最常使用的抗生素之一，多用于养殖类水生生物的烂鳃病、肠炎病、弧菌病、疖疮病、细菌性败血病等。
在生物体内，磺胺类药物有着比较长的作用时间和代谢时间，通过食物链等途径摄入的磺胺类药物都有可能蓄积在人体内并富集，磺胺二甲嘧啶等甚至有引起潜在致癌性的可能[3]。
人类造血系统会遭受磺胺类药物残留的破环，从而引发粒细胞缺乏症、血小板减少症、溶血性贫血症等[4]；磺胺类药物残留也会引起人体过敏反应，轻则出现荨麻诊或皮肤瘙痒，严重时则引起血管性水肿，甚至导致死亡[5]。
世界上一些地区或国家对动物源性食品中的磺胺类药物最高残留限量要求不断提高[6]，欧盟、美国等地区或国家规定了动物源性食品中单个磺胺以及总磺胺的最高残留限量（MRLs）为100 μg/kg，而潜在致癌的磺胺二甲基嘧啶（SM2）最高残留限量（MRLs）为25 μg/kg[7]。
鳗鲡肌肉中喹诺酮类及磺胺类药物残留基体标准物质的研制
鳗鲡肌肉中喹诺酮类及磺胺类药物残留基体标准物质的研制磺胺类和喹诺酮类药物为广谱抑菌药，因具有抗菌谱广、高效、低毒、价格低廉等优点，被广泛用于畜牧、水产养殖业。
但过量或不当用药会导致其在动物源食品中残留超标，影响人类健康。
国际食品法典委员会、欧美国家、日本和我国都规定食品中磺胺类药物总量以及磺胺二甲基嘧啶等单个磺胺的最大残留限量为100ug/kg；根据不同品种、组织和药物种类，食品中喹诺酮类药物的最大残留限量为10-6000ug/kg。
因此，准确监控检测该类药物残留对于控制食品质量安全具有重要意义。
标准物质（reference material，RM）在保证分析方法的准确性及可溯源性方面具有重要作用。
由于药物在动物体内代谢复杂，与动物体的结合形式多样，在提取方式、提取溶剂的使用方面均同人为添加药物残留的检测不同。
自然基体RM的候选材料获取于天然基体，目标物和基体结合情形与真实检测样品完全一致，可有效避免基体效应对物质成分分析的影响。
我国食品分析用RM数量虽不少，但基本集中在无机元素测定上，在兽药基体RM的研究及研制方面相对滞后，无论种类还是数量都十分缺乏。
文献均研制了含有单一目标化合物的基体RM。
余孔捷等研制了含5种喹诺酮类鳗糜基体RM，但目前尚未见同时含喹诺酮类及磺胺类多残留基体RM的研制报道。
本文以鳗鲡肌肉为基体，研制含恩诺沙星、环丙沙星、氧氟沙星、诺氟沙星、嗯喹酸、氟甲喹、磺胺二甲基嘧啶、磺胺间甲氧嘧啶的多残留基体RM。
1.实验部分1.1仪器与设备Waters UPLC/Premier液相色谱一串联质谱仪，配有电喷雾离子源（美国Waters公司）；直线电子加速器（同方威视IS075型，7.5MeV，5kW）；离心机（上海安亭科学仪器厂）；匀浆机（丹麦FOSS公司）；拍击均质器（英国Seward公司）；真空包装机（安溪韵和机械有限公司）；旋转蒸发仪（上海申生科技有限公司）；分析天平（德国Sartorius 公司）；涡旋振荡器（德国IKA公司）。
磺胺总量测定实验报告
一、实验目的1. 学习并掌握磺胺类药物的定量分析方法；2. 了解实验原理及实验操作步骤；3. 培养实验操作技能和数据处理能力。
二、实验原理磺胺类药物是一类含有磺酰基的有机化合物，具有抗菌、消炎、抗病毒等作用。
本实验采用高效液相色谱法（HPLC）对磺胺类药物进行定量分析。
原理如下：1. 样品处理：将待测样品经过适当的预处理，使磺胺类药物在特定条件下转化成可定量的衍生物；2. 样品测定：将预处理后的样品通过高效液相色谱仪进行分析，测定其含量；3. 数据处理：根据标准曲线和样品峰面积，计算样品中磺胺类药物的含量。
三、实验仪器与试剂1. 仪器：高效液相色谱仪、色谱柱、自动进样器、紫外检测器、微量移液器、超声波清洗器等；2. 试剂：磺胺类药物标准品、甲醇、乙腈、磷酸二氢钠、磷酸氢二钠、盐酸等。
四、实验步骤1. 样品预处理（1）准确称取一定量的待测样品，加入适量溶剂溶解；（2）将溶液转移至分液漏斗中，加入适量酸性溶剂（如盐酸）进行酸化；（3）用氯仿萃取，弃去水层；（4）将氯仿层蒸干，残渣用适量溶剂溶解；（5）过0.22μm微孔滤膜，备用。
2. 标准曲线制备（1）准确称取一定量的磺胺类药物标准品，用溶剂溶解，配制成不同浓度的标准溶液；（2）将标准溶液依次进样，记录峰面积；（3）以标准溶液浓度为横坐标，峰面积为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品测定（1）将预处理后的样品溶液依次进样；（2）记录样品峰面积；（3）根据标准曲线，计算样品中磺胺类药物的含量。
五、实验结果与讨论1. 标准曲线线性范围：根据实验结果，磺胺类药物标准品的线性范围为0.1～1.0mg/mL，相关系数R²为0.999。
2. 精密度：对同一批样品进行6次测定，相对标准偏差（RSD）为2.5%，表明实验精密度良好。
3. 回收率：对添加不同浓度的磺胺类药物标准品的样品进行测定，平均回收率为98.2%，表明实验回收率良好。
4. 讨论：本实验采用高效液相色谱法对磺胺类药物进行定量分析，方法简单、准确、灵敏度高，适用于磺胺类药物的定量测定。
HPLC-MSMS法测定鳗鱼及其制品中三类药物残留的开题报告
HPLC-MSMS法测定鳗鱼及其制品中三类药物残留
的开题报告
一、研究背景
鳗鱼是我国重要的经济鱼类之一，其可供食用的制品如鳗鱼干、鳗鱼丝等在市场上很受欢迎。
随着人们对食品安全问题的不断关注，对鳗鱼及其制品中残留药物的检测问题也引起了广泛关注。
目前，鳗鱼养殖中常使用抗生素、抗菌素和激素等药物，这些药物的残留会对鳗鱼及其制品的质量和安全造成很大影响。
因此，开发一种快速、准确、敏感的检测鳗鱼及其制品中药物残留的方法，具有很重要的现实意义。
二、研究目的
本研究旨在发展一种HPLC-MSMS方法，用于检测鳗鱼及其制品中三类药物残留，包括氟喹诺酮类、四环素类和磺胺类药物。
三、研究内容和方法
1.样品制备
取鳗鱼及其制品样品，经过初步处理和样品制备，得到适宜的样品溶液。
2.仪器设备
采用色谱-质谱联用仪器，包括Agilent 1200系列HPLC和Agilent 6460三重四极杆质谱仪。
3.分析方法
采用HPLC-MSMS技术，建立三类药物的分析方法。
在质谱仪中设置多重反应监测模式（MRM），通过对分子离子和碎片离子的选择性监测，实现药物残留的分析。
四、研究预期结果
本研究预计开发出一种快速、准确、敏感的HPLC-MSMS方法，用于检测鳗鱼及其制品中三类药物残留。
该方法具有较高的精确度和准确度，可为鳗鱼及其制品的安全生产和检测提供技术支持。
柱后衍生法检测鳗鱼肌肉中磺胺类药物残留量研究
柱后衍生法检测鳗鱼肌肉中磺胺类药物残留量研究刘海新【期刊名称】《食品科学》【年(卷),期】2009(030)002【摘要】建立了鳗鱼肌肉中磺胺类药物残留的高效液相色谱柱后衍生分析方法.鳗鱼肌肉样品经乙腈和水提取,液-液分配和固相萃取净化浓缩后,采用高效液相色谱柱后衍生法检测磺胺类药物经C18色谱柱分离,在柱后反应单元中与荧光胺反应,生成具有荧光特性的分子,荧光检测器检测方法定量检测限为2.0μg/kg,磺胺浓度在0.005～0.2μg/ml范围内线性关系良好(r≥0.9998),磺胺浓度范围在2.0～50.μg/kg鳗鱼肌肉加标样,日内和日间回收率为85.1%～90.2%,相对标准偏差2.74%～6.04%.实验结果表明,该检测方法适用于低浓度水平鳗鱼肌肉中磺胺类药物残留检测.【总页数】4页(P204-207)【作者】刘海新【作者单位】福建省水产研究所,福建,厦门,361012【正文语种】中文【中图分类】O656.31【相关文献】1.在线柱后衍生-高效液相色谱-荧光检测法同时测定牛肉中16种磺胺类药物残留[J], 许旭;肖远灿;耿丹丹;皮立;董琦;胡风祖2.柱后衍生高效液相色谱法测定虾中14种磺胺类药物残留量 [J], 黄冬梅;黄宣运;顾润润;惠芸华;田良良;冯兵;张璇;于慧娟3.动物源食品中同时检测磺胺类、沙星类药物残留量的方法--高效液相色谱法的研究 [J], 江诗韵4.动物性肌肉组织中多种磺胺类药物残留量的研究 [J], 佘永新;巴桑旺堆;董禄德;刘佳佳;王静;刘永;曹维强5.QuEChERS-高效液相色谱法同时检测动物组织中的克球酚、地克珠利和磺胺类药物残留量 [J], 董静;宫小明;张立;孙军;王洪涛因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
色谱法检测动物源食品中磺胺类药物残留研究进展
色谱法检测动物源食品中磺胺类药物残留研究进展龙举;李佩佩;龙位;严忠雍;张小军【期刊名称】《安徽农业科学》【年(卷),期】2015(000)026【摘要】磺胺类药物是一类可限量使用于水产养殖和畜禽业的广谱高效抗菌药物,且被广泛应用.磺胺类在动物源性食品中会有残留,通过任何途径摄入磺胺都有可能在人体内蓄积而对人造成危害.目前,动物源性食品中磺胺类药物多残留的定量检测主要有高效液相色谱法(HPLC)以及高效液相串联质谱法(HPLC-MS-MS).色谱法检测磺胺类药物的主要步骤为提取、浓缩、净化和进色谱柱分析.简要综述了色谱法检测动物源食品中磺胺类药物的方法研究进展,以期为动物源性食品中磺胺类药物多残留检测提供参考.【总页数】4页(P330-332,335)【作者】龙举;李佩佩;龙位;严忠雍;张小军【作者单位】浙江省海洋水产研究所,浙江省海水增养殖重点实验室,浙江舟山316021;浙江省海洋水产研究所,浙江省海水增养殖重点实验室,浙江舟山316021;内蒙古农业大学食品科学与工程学院,内蒙古呼和浩特010018;浙江省海洋水产研究所,浙江省海水增养殖重点实验室,浙江舟山316021;浙江省海洋水产研究所,浙江省海水增养殖重点实验室,浙江舟山316021【正文语种】中文【中图分类】S851.34+7【相关文献】1.色谱法检测动物源食品中喹诺酮类药物残留研究进展 [J], 李佩佩;郭远明;陈雪昌;张小军;梅光明;龙举2.高效液相色谱法测定动物源食品中磺胺类药物残留量 [J], 何红梅;吴俐勤;章虎3.动物源食品中同时检测磺胺类、沙星类药物残留量的方法--高效液相色谱法的研究 [J], 江诗韵4.动物源食品中磺胺类药物残留的检测方法--高效液相色谱法 [J], 农业部畜牧兽医局5.液相色谱法检测动物源食品中氨基糖苷类药物残留的研究进展 [J], 李佩佩;龙举;方益;严忠雍;张小军因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
SPE_HPLC法测定鳗鲡中13种磺胺类药物_牛曰华
第 34 卷第 5 期 2012 年 10 月
福建水产 Journal of Fujian Fisheries
文章编号： 1006 － 5601（ 2012） 05 － 0375 － 07
Vol． 34 NO． 5 Oct． 2012
SPE － HPLC 法测定鳗鲡中 13 种磺胺类药物
牛曰华
（ 福建省海洋环境与渔业资源监测中心，福建 福州 350003）
32． 5
81． 2
33． 4
83． 5
磺胺二甲基嘧啶
35． 1
87． 8
35． 8
89． 4
磺胺甲氧哒嗪
32． 2
85． 6
35． 2
87． 9
磺胺氯哒嗪
31． 7
79． 3
32． 5
81． 3
磺胺甲基异噁唑
35． 0
87． 5
34． 7
86． 7
磺胺 － 6 － 甲氧嘧啶
31． 9
79． 8
33． 2
中图分类号： O 657. 7
文献标识码： A
磺胺类药物 （ sulfonamides，SAs） 属人工合 成的抗菌药，是一类含有对氨基苯磺酰胺结构药 物的总称，具有促进生长、预防和治疗微生物疾 病的作 用［1］。 磺 胺 类 药 物 广 泛 应 用 于 水 产 养 殖 业，在控制鱼病传染和感染方面起了很大作用， 对水产 养 殖 中 的 细 菌 性 竖 鳞 病、 烂 鳃 病、 弧 菌 病、疖疮、赤鳍病、肠炎、鞭毛虫病有良好的防 治效果［2］。但其广泛使用也带来了一些新问题， 如毒性反应、二重感染、细菌产生耐药性以及危 害人体健康等不良后果，特别是在滥用的情况下 更为严重。因此很多国家都对水产品中磺胺类药 物的残留限量有一定的要求。中国农业行业标准 《NY 5070 － 2002 无公害食品 水产品中渔药残 留限量》 规定磺胺类药物在水产品中的最高残 留总量限量为 100 μg / kg。
离子液体单滴微萃取-高效液相色谱法测定水体中磺胺类药物
离子液体单滴微萃取-高效液相色谱法测定水体中磺胺类药物吴翠琴;陈迪云;周爱菊;邓红梅;刘永慧【摘要】应用离子液体单滴微萃取(SDME)技术,建立了水体中7种磺胺类药物的高效液相色谱(HPLC)分析方法.考察了萃取剂种类与体积、萃取时间、搅拌速度、溶液pH值、盐浓度及萃取温度对萃取效率的影响.确定了最佳萃取条件为:利用9 μL-丁基-3-甲基咪唑六氟磷酸盐([C<,4MIM][PF<,6])离子液体作为萃取液滴,在搅拌速度为300r/min、萃取温度为50℃的条件下,对pH3,NaCl浓度为0.33g/mL 的10.0 mL水样萃取35 min.存最佳条件下,7种磺胺在0.005～2.000 mg/L浓度范围内呈良好的线性关系,线性相关系数为0.9994～0.9998;检出限为0.001～0.003 m/L(S/N=3);[C<,4MIM][PF<,6]对7种磺胺的富集倍数在22～107之间;5次平行测定的相对标准偏差为3.1%～5.6%;对自来水、江水、湖水和废水的加标回收率为84.3%～106%.%A novel method was developed for the determination of seven sulfonamides in water samples using ionic liquid-based single drop microextraction coupled with high performance liquid chromatography. The influence of extraction parameters including extraction solvent, volume of extraction solvent, extraction time, stirring speed, pH value, NaCl concentration of sample solution and extraction temperature were investigated. Using 9 μL 1-butyl-3-methylimidazolium hexafluorophosphate ([C4MIM][PF6])as extraction drop, 10. 0 mL aqueous sample with 0. 33 g/mL NaCl (pH 3) was extracted for 35 min with stirring at 300 r/min at 50 ℃. Under the optimal conditions,good linear relationships were obtained in the sulfonamides concentrations of 0. 005-2. 000 mg/L with the correlation coefficients of 0. 9994-0. 9998; the detectionlimits were 0. 001-0. 003 mg/L (S/N=3); the enrichment factors of[C4MIM][PF6] for the seven sulfonamides were from 22 to 107; the RSD of matrix spiked samples were 3.1％-5.6％(n=5). The proposed method was applied to the determination of the seven sulfonamides in tap, river, lake and waste water with recoveries of the seven sulfonamides in the range of 84.3％-106.0％.【期刊名称】《分析化学》【年(卷),期】2011(039)001【总页数】5页(P17-21)【关键词】离子液体;单滴微萃取;磺胺类药物;高效液相色谱【作者】吴翠琴;陈迪云;周爱菊;邓红梅;刘永慧【作者单位】广州大学环境科学与工程学院,广州,510006;广州大学环境科学与工程学院,广州,510006;广州大学化学化工学院,广州,510006;广州大学环境科学与工程学院,广州,510006;广州大学环境科学与工程学院,广州,510006【正文语种】中文磺胺类药物是指含有对氨基苯磺酰胺结构的一类药物的总称，具有抗菌谱广、疗效强等优点，是目前水产养殖业中最常使用的抗生素之一，广泛用于鱼类的疖疮病、细菌性败血病、肠炎病、烂鳃病、弧菌病等的治疗［1］。
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微波萃取鳗鱼中磺胺类药物的HPLC测定方法卢立泓 陶建伟 蔡蕍 曹付莹（上海应用技术学院化工系，上海200235）王顺凤（上海新仪微波化学科技有限公司，上海200235）本次论文采用微波萃取反相高效液相色谱的测定方法对鳗鱼中磺胺类药物的含量进行测定。
实验结果表明，采用微波萃取，其方法的分析时间短并可排除其它基质干扰，所用的试剂量少且污染小等优点而具有一定的优越性；与常规的萃取法进行比较，其精密度、重复性及方法的回收率均达到了分析要求。
关键词： 微波萃取，磺胺类药物，反相高效液相色谱中图分类号：AbstractAfter researching the test conditions, we introduce the microwave extraction and setup a system method via HPLC to determine the sulfamethazine and the sulfadimethazine contained in eels. The method shows great selectivity, high sensitivity, good reproductivity .Also it shorten the length of the test and can obviate the interference come from impurities as well. Secondly, compare two different extraction methods: regular extraction and microwave extraction. The result shows that with the help of microwave extraction, the preciseness and reproductivity are up to the standard and it is pretty good in recovery.Keywords：microwave extraction, sulfa, reversed-phase high performance liquid chromatograph磺胺类药物作为常用抗生素，被广泛用作饲料添加剂来预防动物疾病和提高饲料利用率，这不仅增加了残留物在鱼体组织中蓄积的可能性，并且还会使鱼类产生严重的抗药性，其体内沉积物还可能以各种方式传入人体。
磺胺甲基嘧啶（Sulfamethazine，C11H12N4O2S）和磺胺二甲基嘧啶（Sulfadimethazine，C12H14N4O2S）均为白色结晶性粉末，前者MP 234~238℃，在水中的溶解度为1:3300，微溶于乙醚和氯仿，溶于稀酸和强碱溶液；后者MP :197~199℃，几乎不溶于水，溶于稀酸、强碱和碳酸碱液中。
文献报道测定动物肝中磺胺残留量的方法有固相萃取高效液相色谱法[1][2],高效液相色谱质谱测定法[3]等,本文采用微波技术萃取鳗鱼中的磺胺类药物，用HPLC法对其进行测定。
1．试验部分1.1 仪器与试剂Agilent1100 型高效液相色谱仪（Hypersil ODS-C18色谱柱）MDS-6型温、压双控密闭微波消解/萃取系统（上海新仪微波化学科技有限公司）UV-1601pc（日本岛津）循环水式多用真空泵（上海豫康科教仪器设备有限公司）磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶标样（Riedel-dehaen）二氯甲烷（分析纯AR，国药集团化学试剂有限公司）无水硫酸钠（分析纯AR，金山化工厂）乙酸铵（分析纯AR，上海化学试剂有限公司）乙腈（HPLC/SPECTRO AS-1122, TEDIA COMPANY）甲醇（Fish Scientific, Fisher ChemAlert®Guide）斯柏克林蒸馏水标准溶液：称取磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶0.0100g、0.00990g（精确至0.0001g）分别定容于50mL容量瓶，用甲醇稀至刻度，其浓度分别为200.0mg/L,198.0mg/L。
鳗鱼样品（市售）1.2 试验方法1.21标准曲线的制备准确吸取磺胺甲基嘧啶、磺胺二甲基嘧啶的标准溶液0.10、0.20、0.30、0.40及0.50mL于5个10mL容量瓶，用甲醇稀释至刻度摇匀，得到磺胺甲基嘧啶浓度为2.00mg/L, 4.00mg/L,6.00mg/L, 8.00mg/L和10.00mg/L；磺胺二甲基嘧啶浓度为 1.98mg/L, 3.96mg/L, 5.94mg/L,7.92mg/L和9.90mg/L的系列标准溶液。
分别吸取不同浓度的磺胺甲基嘧啶及磺胺二甲基嘧啶标准溶液，每次进样20µL（实际进样量三倍于定量管的量）采用外标法定量，以峰面积对浓度（mg/L）作图。
得到磺胺甲基嘧啶线性关系为y=175.29x-2.2476，相关系数R=0.99970；磺胺二甲基嘧啶为y=169.02x-6.6429，相关系数R=0.99930。
1.22 样品处理与测定将市售鳗鱼去除内脏后洗净，粉碎，加入磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶的标准溶液各2毫升，充分混匀，冷冻保存7天备用。
准确称取5g鳗鱼样品（精确至0.001g），加入25mL二氯甲烷, 控制一定的温度和时间进行微波萃取。
加入适量无水硫酸钠，静置并过滤，滤液置50mL梨形烧瓶中，真空泵去除二氯甲烷。
于其中加入2mL流动相，移入刻度试管中，超声波混匀，离心，其水相经滤膜过滤至10mL 容量瓶中。
油相中再加入流动相进行萃取，如此重复操作4次，合并滤液并用流动相稀至刻度，进行HPLC分析。
2．结果与讨论2.1HPLC测定的色谱条件分别吸取标准溶液各0.50mL于同一刻度试管中，在不同的色谱条件下，用相应的流动相稀释一倍。
连续注入数针，用配制的标准溶液，采用峰保留值比较法进行定性，确定色谱条件（流动相的配比、流速及检测波长）。
根据对实际样品进行的HPLC分析，对此色谱条件再进行优化，确定最佳色谱条件。
数据处理均由惠谱高效液相色谱化学工作站完成。
经过实验，HPLC测定的色谱条件确定为：检测波长270nm，流速0.5mL/min, 流动相为乙腈︰水=25︰75（用乙酸铵调节PH至5.1）。
2.2 微波萃取的实验条件分别吸取标准溶液各0.50mL于同一萃取罐中，加入25mL二氯甲烷, 控制一定的温度和时间进行微波萃取。
用真空泵去除二氯甲烷，加入2mL流动相，移入刻度试管中稀至刻度进行HPLC分析，用外标法测定其回收率。
提高微波萃取的温度，有利于萃取过程的进行。
然而，由于磺胺甲基嘧啶和磺胺二甲基嘧啶遇热易分解，所以温度提高很有可能使回收率反而降低。
实验中分别于70℃、60℃、50℃、45℃和35℃下，萃取时间4~5min，做空白实验，得到如下的色谱图和测定结果。
图1．微波萃取不同温度下空白试验的色谱分离图表1. 微波萃取温度对空白试验回收率的影响温度含量（ppm） 回收率 （℃） 磺胺甲基嘧啶 磺胺二甲基嘧啶 磺胺甲基嘧啶 磺胺二甲基嘧啶 701.5231.55076.2% 77.5%600.82160.802082.2% 80.2%500.81580.772981.6% 77.3%451.9861.96199.3% 98.0%351.9781.96598.9% 98.3%从图谱和表格可见，70℃、60℃、50℃下，待测物质都有一定程度的分解，空白回收率不高。
在45℃、35℃下，待测物质没有分解，回收率都达到98%以上，完全符合要求。
因此，确定微波萃取条件为： 45℃，5min，800W。
2.3 微波萃取法与常规萃取法的比较2.31方法的精密度比较取一个样品，分别进行常规萃取法和微波萃取法处理后，各重复进样5次，根据其峰面积的大小，计算回收率及RSD，进行精密度的比较。
表2．两种方法的精密度比较平均回收率（%） RSD（%） 方法磺胺甲基嘧啶 磺胺二甲基嘧啶磺胺甲基嘧啶 磺胺二甲基嘧啶常规萃取法 83.06% 84.62% 0.89% 0.36%微波萃取法 77.04% 85.58% 0.37% 0.96%2.32方法重复性及回收率比较在上述色谱条件及处理方法下，分别选用常规萃取和微波萃取两种方法，对同一批样品平行处理五份，进行方法重复性的验证及回收率的比较。
表3 两种方法的重复性比较平均加入标样量（mg） 平均测得量（mg）平均回收率（%） RSD（%）方法A B A B A B A B常规萃取7.007.025.956.0484.985.51.413.18微波萃取9.759.747.898.2680.984.82.551.63注：A为磺胺甲基嘧啶；B为磺胺二甲基嘧啶。
结果表明，从精密度、重复性、回收率来看，微波萃取基本可以达到萃取要求，回收率较高，方法可行。
因其具有节省时间、节省试剂和污染小等优点，所以此方法具有一定的优越性，可应用于萃取工作中。
参考文献1．熊芳，戴华，袁智能．固相萃取高效液相色谱法测定动物肝中四种磺胺残留量。
《分析科学学报》。
2002，18（5）；415-4172．林海丹，谢守新，冯德雄，杨培慧．动物源性食品中磺胺类药物残留的固相萃取－高效液相色谱法测定．《分析测试学报》．2003，22（1）；94-963．吴西梅，杨业，梁春穗，杜达安．高效液相色谱质谱测定肉品中的磺胺二甲嘧啶．《中国卫生检验杂志》．2004，14（2）；164-1654．刘天才．试谈微波技术在分析测试中的应用．《广石化科技》．2002，3；40-435． Nagaraja Padmarajaiah,Yathirajan Hemmige S,Sunitha Kallanchira R,Vasantha Ramanathapura A.A new,sensitive,and rapid spectrophotometric method for the determination of sulfa drugs.《Journal of AOAC International》． 2003，85(4)；869-8746．Furusawa N,Kishida K.High-performance liquid chromatographic procedure for routine residue monitoring of seven sulfonamides in milk.《Fresenius` Journal of Analytical Chemistry》．2003，371(7)；1031-1033。