植物病毒田间接种、传染方式教材

实验六植物病毒病及其传染方式

一、实验目的

认识植物病毒形态和病毒病主要症状类型，通过植物组织汁液的摩擦接种和蚜虫传播试验了解病毒病的主要传染方式。

二、讲解要点

1．病毒颗粒很小，必须用电子显微镜才能观察到。植物病毒颗粒可以分为圆球状（或等边多面体）、炮弹状、长杆状和线条状4种。这些在课堂和本次实验课上只能通过观看电镜照片或幻灯片来了解。

2．植物病毒病的主要症状类型有花叶、变色、条纹、枯斑或环斑坏死、畸形。应该注意：一方面这些症状类型的分辨在病毒病鉴定上具有比起它病害更重要的意义，另一方面在实际观察中，也会发现同一种病毒病在发病过程中或在不同环境条件下会有不同的表现（不同病状甚至隐症）。

3．病毒病多为系统性侵染，没有病征，易与非侵染性病害相混淆，往往需要通过一定方式的传染试验证实其传染性。植物病毒病的传染方式有：机械（摩擦）接触传染、嫁接传染、介体（包括昆虫、线虫、真菌、螨类和菟丝子）传染、花粉及种子传染等。由于病毒是专性寄生物，它的侵染来源都与活体（活的动、植物体或介体）有关，传染要使病毒接触活体。例如汁液摩擦接种，要用新鲜的病毒汁液，摩擦的目的是造成寄主植物体表面的微伤，使病毒有可能进入活的细胞，过重的损伤造成组织坏死并不利于病毒的传染。蚜虫、飞虱等刺吸式口器昆虫取食植物汁液的方式更容易满足植物病毒传播的两方面要求。

4．大白菜病毒病的症状为幼苗受侵后首先心叶出现明脉即沿叶脉失绿，继呈花叶及皱缩。成株被害，出现不同程度的叶片皱缩、变硬而脆，后期出现褐色斑点或褐色坏死条纹；植株矮化。我国十字花科蔬菜病毒病主要由芜菁花叶病毒（简称TuMV）、黄瓜花叶病毒（简称CMV）和烟草花叶病毒（简称TMV）所致，前两种病毒能由蚜虫和汁液传染，第三种只能以汁液传染。

马铃薯病毒病主要是皱缩花叶病和卷叶病两种。前者的症状为叶片皱缩、变小；叶尖向下弯曲，全株矮化，叶片色泽深浅不均，以后出现黑褐色坏死斑，质地变脆，严重时全株发生坏死性叶斑，自下而上枯死。马铃薯皱缩花叶病是由马铃薯X病毒（简称PVX）和马铃薯Y 病毒（简称PVY）两种病毒复合侵染引起的。PVX只能由汁液传染，昆虫不传染。PVY的传染方式有汁液与蚜虫传染。马铃薯卷叶病的症状为叶缘向上卷曲，病重时呈圆筒状。叶片色泽较浅，有时叶背面呈红色或紫色。叶片变厚变脆，病叶不出现萎蔫下垂的现象，矮化亦

不甚明显。其病原物是马铃薯卷叶病毒（简称PLRV），只能由蚜虫传染，而汁液接触无传毒效果。

三、实验材料及用具

1．病毒颗粒的电镜照片或幻灯片、病毒病各类症状的照片或幻灯片。

2．毒源：温室种植或田间采到的大白菜病毒病植株，或由带毒的马铃薯块茎培育的幼苗和田间病株。

3．在隔离的病毒温室或防虫纱笼内培育的无毒健壮苗：1～4片真叶的大白菜幼苗（品种如小白口）或3～4片真叶的普通烟草及心叶烟幼苗，4片真叶的千日红幼苗或4片真叶的洋酸浆幼苗。

4．传毒介体昆虫：室内防虫笼内饲养的无毒桃蚜（无翅蚜）。

5．磷酸缓冲液，配方为：KH2PO4 5.445g NaHPO4·12H2O 21.49g 蒸馏水1000mL。配制方法为两种药品分别溶于水后，加足水量混和。

6．磷酸皂制备，配方为：洗衣肥皂20份，Na3PO4 5份，水100份。制备方法为，先将洗衣皂切成薄片，溶解在沸水中，然后加入磷酸钠，全部溶解搅匀呈糊状，放在定型容器内使其自然干固备用。

7．病毒试验温室及防虫笼病毒试验温室一般都有隔离条件较好的小房间，通气窗要安装40筛目纱网，工作人员进出都要注意不能带进昆虫。养虫笼和防虫笼往往是同一设备，为方形或圆筒形框架上复以40筛目纱网，或在侧面或在顶部设开口，装上袖套以便操作。

8．其他：400～600筛目金刚砂，放在带网口的瓶中或纱布袋内、研钵、剪子或刀片、纱布、洗瓶、毛笔、培养皿、蒸馏水、40%乐果乳剂。

四、实验步骤

1、观察照片或幻灯片、病害标本，认识病毒形态及病毒病症状的主要类型。

2、病毒汁液磨擦接种

（1）取大白菜病毒病症状典型的病叶（或马铃薯病毒病叶片）去掉大的叶脉，剪碎置于研钵中，加适量的磷酸缓冲液，研磨成泥浆状，用双层纱布滤出汁液，作为接种用病毒汁液。

（2）用磷酸皂洗手并用清水冲净，取健康的大白菜幼苗及千日红幼苗（或洋酸浆幼苗及心叶或普通烟幼苗，作马铃薯病毒病传染试验用），作好标记，在每株上选已展开的生长正常

的两片叶，先在叶正面撒少许金刚砂，左手托叶背，右手食指沾病毒汁液在叶面轻轻往返磨擦4次，立即用洗瓶内的清水冲洗。

（3）用磷酸肥皂洗手并用清水冲洗，按与（2）相同的程序进行，只是手指不沾病毒汁液而只是沾磷酸缓冲液磨擦叶面，作为未擦病毒的对照。

（4）将处理过的幼苗移入无虫的温室内培育，经过4-7天和2-3星期后观察发病情况并分析结果。

3、蚜虫传毒实验

（1）用毛笔取无毒桃蚜50-100头，放在干燥的培养皿内，饥饿2小时后，再移到大白菜病毒病株（或马铃薯病毒病侏）上，饲毒24小时。

（2）将饲过毒的桃蚜移到防虫笼中的5株健康的大白菜苗和5株千日红苗（或同样数目的洋酸浆苗和心叶烟或普通烟苗）上，每株5-10头，饲食24小时后喷2000倍40%乐果乳油杀死蚜虫。

（3）取50-100头无病桃蚜，在干燥的培养皿中饥饿24小时后，移到5株健康的大白菜苗和5株千日红苗（或同样数目的洋酸浆苗和心叶烟或普通烟苗）上，每株也是5-10头，饲食24小时后喷2000倍40%乐果乳油杀死蚜虫，以此作为对照处理。

（4）经过上述处理的幼苗，置温室内培育2-3周后观察发病情况。

五、作业

1、参阅教材及有关资料，分析毒源可能含有何种病毒，能以何种方式传染。

2、回答下列问题：

（1）为什么要在试验中安排仅用磷酸缓冲液或无毒蚜虫的处理。

（2）千日红、心叶烟或普通烟草幼苗的发病情况在分析中有什么意义。

3、总结传染试验成功或失败的经验。