Alteon 实验操作手册
天门冬氨酸氨基转移酶标准操作程序
天门冬氨酸氨基转移酶测定标准操作程序1. 摘要本试剂盒供医疗机构用于体外定量测定人血清或血浆中天门冬氨酸氨基转移酶的活力，作辅助诊断用。
2. 适用范围程序适用于日立7600自动生化分析仪检测血清、血浆中天门冬氨酸氨基转移酶的浓度。
3. 职责使用日立7600自动生化分析仪进行测定天门冬氨酸氨基转移酶浓度的工作人员要严格按照本SOP 程序进行,室负责人监督管理；本SOP 的改动，可由任一使用本SOP 的工作人员提出，并报经生化室负责人、科主任签字批准生效。
4. 检测方法上海科华生物工程股份有限公司生产的天门冬氨酸氨基转移酶试剂盒采用的是紫外-苹果酸脱氢酶法。
5. 原理底物L-天门冬氨酸与α-酮戊二酸在天门冬氨酸氨基转移酶（AST ）作用下生成草酰乙酸，生成的草酰乙酸在苹果酸脱氢酶（MDH ）作用下转化成L-苹果酸，同时伴随着NADH 的氧化，引起在波长340 nm 处吸光度下降，下降速率与血清中AST 活力成正比。
谷氨酸草酰乙酸酮戊二酸天门冬氨酸---L L AST +−−→−+α酮戊二酸苹果酸草酰乙酸-++-−−→−++++αNAD L H NADH MD H6. 仪器日立7600自动生化分析仪7. 试剂7.1 试剂来源：上海科华生物工程股份有限公司提供7.2 试剂瓶内主要成分：Tris 缓冲液、β-NADH 、乳酸脱氢酶、苹果酸脱氢酶（MEDH ）、L-天门冬氨酸、α-酮戊二酸7.3 试剂稳定性：试剂避光保存于2-8℃，若无污染，可稳定至失效期，本试剂有效期为12个月。
试剂不可冰冻。
7.4 试剂准备：试剂为即用式。
8. 标准品和质量控制8.1 校准程序：使用某某公司提供的标准品对自动分析仪进行校准。
按照公司标准品使用要求，并以9g/L氯化钠溶液或去离子水为空白，经校准测定，仪器自动对标准品响应量通过合适的数学模型绘制校准曲线。
8.2质控品某某公司提供的生化复合定值质控血清做为室内质控品。
每日在测定前做一次质控。
安捷伦操作手册
提问汇总：1.GC静态顶空能做农产品或水质中痕量物质检测吗？2.PE顶空原理是什么？怎么只有注射器和定量环？3.用静态顶空测定有机残留溶剂，如苯系列化合物，如果用FID，能检测到大致多少限量呢？4.顶空进样的参数优化问题能否举几个例子详细讲解下5.在静态顶空进样过程中，样品瓶需要一直放在水浴中不拿出吗？一旦样品瓶凉了，是不是结果就不准确了？如果不是密封针，会不会在吸取顶空气的时候吸入空气啊？6.顶空进样可以分几种？有静态顶空，是不是还有动态的？7.顶空进样的检测灵敏度跟哪些因素有关系呀？8.顶空技术的最大优势是什么？9.传输线的温度和组分沸点的关系什么？10.我现在用顶空做二氧化硫的检测，现在除了重复性差之外线性也不好，（色谱柱DB-624，检测器FPD,亚硫酸钠与盐酸反应生成的二氧化硫）请问我现在应该从哪些方面排查问题呢？11.顶空技术应该进的是气体样品，那么，应该进多大体积呢？顶空技术进样和液体进样有什么不同？农药残留检测可以用在顶空技术上么？12.顶空技术中所谓的气液平衡，液体是什么液体，是有机溶剂吗？还是别的？13.我觉得这项技术比较适合易挥发物质的检测，相溶于溶液中的物质是不检测不了，局限性还是挺大的，不知道我说的对不对？14.这项技术对色谱仪有没有特殊的要求？15.在现有的仪器上加装顶空进样系统有什么难点或者需要注意的地方？16.DMF在100度恒温20分钟，会不会分解产生杂质？我们用PE顶空，最近发现采用DMF作为溶剂，在100度恒温20分钟进样，柱温40度，用DB-624的柱子，在5分钟左右总是有一个小杂质峰。
空气和水作为溶剂就没有。
17.我们常用水，DMF，DMSO作为溶剂，有的文献采用二甲基乙酰胺，不知道老师用过没有，能不能介绍一下二甲基乙酰胺作为顶空系统的溶剂使用时，有哪些优点。
18.顶空时样器如果长时间用脏了怎么办？曾经有过这样的例子，无论进什么溶剂都会有很多杂质峰出来，如果用手动进样的话就没有，后来把顶空所有的管路都取下来用高压锅煮，煮了半天拿出来重新安装效果比原来好多了，但这可操作性太差了，不是人人都能做的，请问有没有可操作性强，而且省力的好方法呢？19.我用的PE的顶空仪器，检测液体样品的话，一般取样量多少质量或体积？因为对于含有很多有机物的液体来说，即使进几十微升的量也可能出现检测器饱和的问题。
大鼠丙氨酸氨基转移酶ALT试剂盒使用说明书
大鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒使用说明书检测范围：96T2.5 IU/L -80 IU/L使用目的：本试剂盒用于测定大鼠血清、血浆及相关液体样本中丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中大鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。
用纯化的大鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入丙氨酸氨基转移酶(ALT)，再与HRP标记的丙氨酸氨基转移酶(ALT)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中大鼠丙氨酸氨基转移酶(ALT)浓度。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将20倍浓缩洗涤液用蒸馏水20倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
Alteon设备用户使用手册
Alteon设备调试管理使用手册目录目录 (2)Alten 四层交换机的配置 (3)一、网络拓扑 (3)二、登录设备 (4)2.1使用con sole连接设备 (4)22远程telnet (4)三、设备配置及说明 (5)3.1系统配置 (5)3.2二层配置 (6)3.2三层配置 (7)3.3VRRP 配置 (7)3.4Server LB 配己置 (9)Alten四层交换机的维护 (11)一.检查设备运行的状态的方法 (11)二................................................................................ 检查设备硬件是否有故障或是否起作用的方法 (13)三.出现故障时的处理流程 (14)Alten 四层交换机的配置一、网络拓扑网络拓扑图如下：（标准架构）in$:10 6<J62.69&7 4an15BS 7125—耳 Server 4■ \i r| Addr 1CG4 62 60^27 II JJjf GW. 10.04.6271整个网络由防火墙、路由交换机、二层交换机和两台负载均衡交换机组成。
路由交换机连接防火墙的DMZ ^,负载均衡交换机通过二层交换机连接路由交换 机。
Alteon 交换机划分两个Vlan ，分别连接服务器和交换机。
两台alteon 交换机工作于主备模式，平时一台设备为 active 状态，另一台为backup 状态，当active 设备出现故障的时候，backup 设备会变为active 状 ^态。
VI.AN ISAddrlOB^ 62 66/27 bsr-^er 1Addi 1C B4 和 6W27 GW 1064 fi?7l6er.^r 25er.^r2 AddrlOB^ 62 6B/27 GW 1DB4 B3.71 Addr 10 B4 62 67；??10 64 6271iMaiMMjartRP Bs 左up]riS10.64.B2nJQ7Man15 OW1D54 62.7123IE :ai-4E125i27 U 右nl5iVlfil IQ.B4E2 VSR.：' W E 4 62.1C0*^4 10.64 Bl 1D1BW IE 04 6271Hr、登录设备2.1使用console连接设备按照如下连接参数配置ternimal终端:Baud rate = 9600Data bits =Parity = noneStop bits =Flow con trol = none输入密码就可以登录管理界面默认的密码是admin2.2远程tel nettelnet ＜设备ip地址＞输入密码，就可以登录管理界面三、设备配置及说明Alte on交换机的管理分为命令行和图形界面两种方式，图形界面需要EMS 软件或者Optivity 网管软件实现，命令行则可以通过超级终端、telnet等方式，最常用的就是超级终端的方式本说明主要针对命令行的方式来说明实现对Alteon交换机的管理维护，命令行方式是推荐的使用方式。
19、天冬氨酸氨基转移酶标准操作规程(AST-SOP)
前言为使临床检验操作规范化，指导检验人员严格按规程进行正确的常规操作，保证检验质量，特制定本操作规程。
本规程的编写遵循了ISO 15189《医学实验室——关于质量和能力的特殊要求》及WS/T 227-2002《临床检验操作规程编写要求》的有关规定并结合产品实际情况制订，作为本产品的标准操作程序。
本规程从2007年5月2日起实施，每2年复审1次。
本规程由浙江伊利康生物技术有限公司编制。
本规程起草单位：伊利康生物技术有限公司技术部。
本规程主要起草人：蒙凯、蔡其浩。
本规程首次起草。
目录1 检验申请 (3)2 标本采集与处理 (3)3 试剂及成份 (4)4方法原理 (4)5 仪器 (4)6 校准液及校准模式 (4)7质控品与室内质控规则 (4)8标本检测步骤 (5)9 结果计算 (5)10 操作性能 (5)11试剂使用的注意事项 (5)12参考范围及医学决定水平 (5)13检验结果的报告及范围 (5)14临床意义 (6)15结果审核分析以及相关项目的联系 (6)16威胁生命的“紧急值”及报告规定. (6)17有关引用程序与文件 (6)18参考文献附录A XXX型全自动生化分析仪参数天门冬氨酸氨基转移酶测定标准操作规程1.检验申请单独检验项目申请：血清天门冬氨酸氨基转移酶（Apartate Aminotransferase,缩写(AST/GOT）测定；组合项目申请：肝功能测定项目组合。
临床医生根据需要提出检验申请。
2.标本采集与处理2.1 受检者的准备：病人空腹12h，不饮酒24h后。
体检对象抽血前应有两周的正常状况记录。
注意有无应用影响测试项目的药物。
此外，对于体检者，采血的季节都应做相关记录，因为样本中各项目的含量有季节性变动，为了前后比较应在每年同一季节检验。
应嘱体检对象在抽血前24小时内不做剧烈运动。
2.2标本采集2.2.1除非是卧床的病人，一般在采血时取坐位。
体位影响水分在血管内外的分布，会影响测试项目的浓度。
伊利特使用说明
伊利特使用说明1.样品配制1.1样品浓度不宜过大，尽量使用接近流动相的溶剂溶解1.2样品应均一稳定，澄清透明，无可见不溶物。
任何样品，进样前皆应经过0.45μm滤头滤过2.检测器选择2.1无紫外吸收用蒸发光散射检测器（详见ELSD使用说明）2.2有紫外吸收将对照品溶液在紫外分光光度计中进行全波长扫描，确定最大吸收波长3.开机注意事项3.1流动相瓶中液体不可直接使用，有机相需重新过滤，水相弃去换新，过滤、超声脱气3.2观察管路中是否有气泡，如有气泡则应开启冲洗阀门，将气泡排出3.3有机泵、水泵各司其职，不应经常变换，如需变换，则应采取与排气泡相同的操作步骤，将吸液滤头与管路中的旧液体置换过来，否则极易产生气泡3.4泵启动时以0.2为宜，逐渐升至1ml/min，停止时逆向操作3.5废液瓶尽量封闭，减少挥发4.流动相选择4.1参照文献4.2根据极性大致判断，对于C18柱而言，常见流动相洗脱力为：四氢呋喃＞乙腈＞甲醇，一般后两者与水混合即可满足要求。
另外，当检测波长≤210nm时，已接近甲醇最大吸收，最好选用乙腈4.3流动相比例确定：4.3.1从95%有机溶剂开始试验，逐渐降低有机相比例，直到目标峰保留时间满足要求4.3.2设置梯度洗脱程序，在一定时间内（一般1h），从10%有机相到100%有机相梯度洗脱，观察目标峰的出峰时间，推测合适流动相比例5.样品分析进样前最好清洗进样阀，Load和Inject位置皆需清洗，进样时擦净针头，防止污染进样口。
5.1等度洗脱：等度洗脱时泵与EC2000独立运行，操作如下：泵处于运行状态，进样阀位于Load位置，点击EC2000进样按钮，进样，掰至Inject位置，自动触发数据采集。
EC2000允许在采集过程中更改采样时间，如果既定时间过短，可随时更改，过长也可随时停止。
5.2梯度洗脱：梯度洗脱时通过EC2000控制泵的运行，操作如下：5.2.1泵处于停止状态，进样阀处于Load位置，点击梯度按钮，设置需要的梯度程序，梯度项中“形状”值“0”表示突变，“1”表示渐变，确定。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)检测(赖氏法)规程
丙氨酸氨基转移酶（ALT）检测（赖氏法）规程原理本法系依据丙氨酸氨基转移酶（Alaurine Transaminase 缩写为ALT）与由丙氨酸及α-酮戊二酸组成的底物缓冲液产生丙酮酸及谷氨酸。
丙酮酸与2，4-二硝基苯肼作用，生成丙酮酸2，4-二硝基苯腙，在碱性溶液中显红棕色。
通过比色测定可以了解血浆中丙氨酸氨基转移酶的活力。
试剂（1）0.1mol/L磷酸盐缓冲液（pH7.4）准确称取磷酸氢二钠二水合物15.04g、磷酸二氢钾1.09g溶于实验用水中，补加实验用水至500ml。
然后用1mol/L HCl溶液或1mol/L NaOH溶液调整pH至7.4，密封保存。
（2）底物缓冲液（200mmol/L DL-丙氨酸；2mmol/Lα-酮戊二酸）精确称取DL-丙氨酸1.79g 和α-酮戊二酸29.2mg，用0.1mol/L磷酸盐缓冲液溶解并稀释至100ml，用1mol/L氢氧化钠（约0.5ml）调节pH值至7.4，密封保存。
（3）1mmol/L2，4-二硝基苯肼溶液称取2，4-二硝基苯肼19.8mg，用1mol/L浓度的盐酸溶液溶解，并稀释至100ml。
（4）0.4mol/L氢氧化钠溶液称取氢氧化钠16.0g，用实验用水溶解至1000ml。
（5）2mol/L氢氧化钠溶液称取氢氧化钠80g，用实验用水溶解至1000ml。
（6）2mmol/L丙酮酸标准液精确称取丙酮酸钠22.0mg，置于100ml称量瓶中，加0.05mol/L 的硫酸溶液溶解，然后移入100ml容量瓶中，再用0.05mol/L的硫酸溶液洗涤称量瓶三次，将洗涤液并入容量瓶中，补加0.05mol/L的硫酸溶液至容量瓶刻度，摇匀。
（7）1mmol/L丙酮酸标准液取2mmol/L丙酮酸标准液用0.05mol/L的硫酸溶液作1:1稀释测定法（1）试管法(单点定量)样品酶活力按下式计算样品酶活力（单位）＝样品管吸光度值÷标准管吸光度值×标准的单位（2）试管法(标准曲线)试验前将除氢氧化钠外检测试剂预热至37℃后使用。
安捷伦高效液相色谱仪操作说明
安捷伦高效液相色谱仪操纵说明之答禄夫天创作一、校枪及样品处理1. 校枪仪器：两个小烧杯、分析天平、移液枪1000μL、100μL步调：打开分析天平预热，一只烧杯放到称量盘上调零，一只装入纯水。
将移液枪1000μL、100μL调至950μL、50μL，分别吸取纯水称质量，如偏大或偏小，调节移液枪直至准确到0.001g。
（如枪使用过久或气密性欠好，可以准备一个小烧杯装入纯水，每次先轻轻沾湿枪口，甩掉水或在用卫生纸吸取口上的水，再插上枪头使用。
）注意慢吸慢放，不要挂珠。
2. 样品处理：用1.5mL离心管取0.5mL发酵液，取出样品后，首现在离心机上离心（13000rap/min 3min）。
然后将样品稀释20倍，取950μL纯水、50μL发酵液于离心管中。
混匀后在离心机上离心（13000rap/min 3min）。
准备自动进样瓶（瓶中放上内衬管），取200μL待测液盖紧盖子。
按顺序放到自动进样盘中。
二、开机1、仪器各组件将在线脱气器、泵：四元、进样器：自动进样器（六通阀）、柱温箱、检测器：示差折光检测器开关打开。
打开计算机,进入Windows XP 画面,并运行CAC Server程序，打开色谱仪各组件电源，待显示已联上各组件的信息及各模块自检完成后，双击Instrument 1 Online ，图标打开工作站。
化学工作站自动与1200LC通讯。
流动相:将流动相（一般不主张使用偏酸、偏碱的流动相）放入溶剂瓶中，打开冲洗阀，设流速为2ml/min，单击确定，再依次单击泵→控制，选中启动，单击确定，则系统开始冲洗，至管路无气泡为止，切换管路反复操纵至所需管路均无气泡。
在“控制”选项中选“关闭”，关闭泵，关闭冲洗阀。
单击泵下面瓶图标，输入溶剂的实际体积和瓶体积。
每次四元泵开始前，要打开冲洗阀阀门以5ml/min的流速冲洗10分钟，使脱气机与泵之间的流动相从冲洗阀流出，以免隔夜的流动相损伤色谱柱。
每次进样检测前，要用流动相冲洗色谱柱30分钟，达到柱温前20min流速设为0.2ml/min，达柱温后再改为0.6ml/min。
丙氨酸氨基转移酶(ALT)实验操作规程
1.目的和适用范围：1.1.为保证血液检测的结果正确性，规范实验操作，特制定本操作规程。
1.2.适用于本实验室，全体工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
2.术语：无。
3.职责：3.1.实验室工作人员都必须严格按照本操作规程进行操作。
3.2.实验室负责人负责最终实验室报告的签发。
4.操作说明4.1.实验原理：血清中谷－丙转氨酶作用于由丙氨酸及α酮戊二酸组成的基质产生丙酮酸，丙酮酸与2,4－二硝基苯肼作用，形成丙酮酸二硝基苯腙，在碱性溶液中呈红棕色。
反应过程如下：α酮戊二酸 + L丙氨酸→ L-谷氨酸 + 丙酮酸L-丙酮酸 + 2,4二硝基苯肼→ 2，4-二硝基苯腙 + 水4.2.实验所需设备和材料：ALT测定试剂盒、100μl加样器、一次性吸头、37℃水浴箱、DNM-9602酶标仪。
4.3.实验操作步骤：4.3.1.将基质液37℃保温5min。
4.3.2.微孔板上设定1个空白对照，3个标准孔，其余为样品孔。
4.3.3.各孔加缓冲液、基质液、丙酮酸与样品量如下：4.3.3.1.空白孔：10ul磷酸缓冲液后，再加50ul基质液。
4.3.3.2.标准孔：10ul磷酸缓冲液，加5ul丙酮酸标准液，再加45ul基质液。
4.3.3.3.样品孔：分别加样本10ul，加50ul基质液。
4.3.4.适当震荡混匀，置37℃温育30min。
4.3.5.每孔加2,4二硝基苯肼50ul,混匀后置37℃温育20min。
4.3.6.每孔加NaOH溶液150ul, 混匀后，置37℃温育5min。
4.4.结果判读：4.4.1.双波长（492nm,参考波长630nm）,以空白孔为零点，测定标准液与样品的OD值。
4.4.2.CUT OFF值为3个标准孔的平均值。
4.4.3.若样品OD值大于或等于CUT OFF值，为阳性。
4.4.4.若样品OD值小于CUT OFF值为阴性。
4.5.注意事项4.5.1.严重脂血，溶血或黄胆血清可使吸光度明显增加，因此检测此类标本应作血清对照管。
安捷伦气相使用方法
• 在“Method ”中设置方法，并保存。
常见问题处理
• 1.检查氮气压力是否正常 • 2.检查色谱柱安装情况（先安装进样口，安
装完毕后，先通氮气5min左右后，将接检 测器的另一端放入无水乙醇中，如有气泡 产生，说明进样口端顺畅。
Agrcp.exe如图
Agrcp.exe
• 参数设置 • 1.如顶空进样在该工作站中选择“后进样”，“
后检测”，在后进样口将所有参数设置为“打 开”。 • 2.在后检测中，将所有参数设置为“打开”
• 控制模式为打开。
• 模式为一般为分流模式（分流比一般设置 10:1，可根据峰形进行调节）
• 色谱柱：要更改成自己所用的型号的色谱 柱，流速一般默认的为2ml/min,默认为恒定 流量，后运行流速仍为2ml/min。
柱箱模块-设置
• 柱箱设置—起始温度 • 如果为等温法，只设定 （初始值）速率，
保持分钟。运行分钟便可以。 • 如等
设置进样口
设置色谱柱
设置柱箱温度及进样时间
设置检测器温度
设置进样口，出样口及加热源
设置就绪组件
• 设置完毕后，点击应用按钮等待就绪。 • 另外在7697A顶空界面在“Seq’中设置序列
温、平衡时间）
顶空进样进样口设置
• 选择顶空进样时，选择后进样口。手动进 样时选择前进样口。并在Agrcp.exe中打开 后进样口。柱温、检测器、火焰、尾吹气 等相关程序。设置成功后点击开始按钮。
• 在联机中设置---在工具栏“仪器”中选择设置 Agilent 7820A仪器参数---将进样口改为后 进样口设置，进样口温度一般为200℃，如 采用火焰离子化检测器（FID）温度为 250℃。
安捷伦气相使用方法.ppt
ALT检测操作规程
ALT检测操作规程ALT（丙氨酸氨基转移酶）是一种存在于细胞质中的酶，广泛分布于人体包括肝脏、心脏、肾脏等组织中。
ALT是肝脏功能的重要指标之一，通过测量血液中ALT的活性，可以评估肝脏功能的健康程度。
本文将介绍ALT（丙氨酸氨基转移酶）检测操作规程（速率法）。
一、实验器材和试剂准备1.乙醚：用于准备昏迷鼠模型；2.丙酮：用于制备丙酮胺溶液；3.氯化二乙酸：用于制备氯化二乙酰胺试剂；4.丙酮胺：用于制备丙酮胺溶液；5.磷酸氢二钾溶液：用于制备缓冲液；6.氧化丙酮胺：用于制备氧化丙酮胺试剂；7.pH7.0缓冲液：用于制备反应体系；8.4-氨基硫代洪美酸：用于停止反应；9.甲醛：用于制备甲醛溶液；10.维生素C溶液：用于制备维生素C溶液；11.肝组织磷酸化酰胺：用于制备肝组织提取液；12.酶提取液：用于提取ALT酶。
二、实验步骤1.制备ALT酶提取物：（1）取新鲜动物（小鼠）肝脏组织15g，加入磷酸缓冲液5倍的体积；（2）放入冷冻机中，-20℃下保存12h；（3）取出，加入万能匀浆器中，对肝脏组织进行研磨；（4）将研磨后的肝脏组织加入毛细管离心管中，进行离心，1800r/min 离心10 min；（5）将提取液转入新的毛细管离心管中，再次离心，3000r/min 离心10 min；（6）将上清液收集至离心管中，取出备用。
2.制备标准曲线：（1）取6个试管，分别标记为A、B、C、D、E、F，一个空白试管用作对照；（2）分别加入0.1ml、0.2ml、0.3ml、0.4ml、0.5ml、0.6ml的ALT 酶提取液；（3）加入pH 7.0缓冲液，使总体积为2.0ml；（4）每个试管中加入0.2ml的氧化丙酮胺试剂；（5）按顺序加入2ml、0.2ml、2ml的维生素C溶液、氧化丙酮胺试剂和ALT提取液；（6）加入4-氨基硫代洪美酸停止反应，并立即搅拌均匀；（7）用甲醛溶液处理样品；（8）分别在0.1、0.2、0.3、0.4及0.5的浓度范围内，测定样品的吸光度。
谷丙转氨酶ALT测定标准操作程序SOP文件
生化实验室
ABCD-SOP-04-05
ALT测定版序：ABCD
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1 测定方法
酶动力学法。
2 测定原理
L-丙氨酸 + α-酸戊二酸谷丙转氨酶丙酮酸 + L-谷氨酸
丙酮酸 + NADH + H+ 乳酸脱氢酶乳酸 + NAD+
上述偶联反应中，NADH的氧化速率与标本中酶活性成正比，因此可通过监测吸光度的下降速率，计算出ALT的活性单位。
3 标本
血清、肝素或EDTA抗凝血浆，处理方法见标本处理程序。
稳定性：20-25℃稳定1天
4－8℃稳定7天
-20℃稳定1周
4 试剂
4.1试剂
来源：ROCHE配套试剂（详见试剂说明书）。
贮存条件及稳定性：未打开试剂盒：2－8℃储存至效期末
R1：打开后机上稳定28天
R2：打开后机上稳定90天
准备：R1：将试剂R1与1a互溶后使用，请按图事示操作：
R2：直接使用。
4.2 校准物
来源：ROCHE配套校准物,符合WHO标准，具体如下：
S1:0.9%NaCl
S2:C.f.a.s
贮存条件：未溶解：2-8°C到有效日期；
溶解后：15–25°C 8 小时
2–8°C 2 天
(-15)–(-25)°C 2 周 (只能复溶一次)。
准备：每瓶用3ml去离子水溶解。
定标频率：A 试剂盒在仪器上放置28天后
B试剂批号更换后
C 由质控结果决定。
安捷伦操作
安捷伦操作1 开机1.1 打开电脑1.2 打开液相色谱各个模块的电源1.3 双击桌面“LC1260(Online)”，进入联机界面1.4 排气：1.4.1 手动旋开泵处冲洗阀（逆时针旋转约1圈）1.4.2 右键单击“Pump”图标区域，选择“Method”选项，进入泵编辑画面，设流速：5ml/min，点击“确定”；1.4.3 右键单击“Pump” 图标区域，点击“Control”选项，选中“ON”，点击“确定”，则系统开始冲洗，直到管线内（由溶剂瓶到泵入口）无气泡为止（一般为5分钟），切换通道继续冲洗，直到所有要用通道无气泡为止；1.4.4 右键单击“Pump” 图标，点击“Method”选项，设流速：0ml/min，手动旋紧冲洗阀；1.4.5 右键单击“Pump”图标，点击“Method”选项，按照方法要求选择合适比例的流动相，设流速：1.0ml/min；（不一定是1）1.4.6 同理右键单击“Column Comp”，“DAD”图标，点击“Method”选项，按照方法的要求设置温度，波长，点击“控制” 选项，“ON”打开柱温箱和检测器。
2 编辑方法2.1 点击“Method”——“Edit EntireMethod”开始编辑完整方法；2.2 选中除“Data Analysis ”外的三项，进入下一选项卡，选择“Als”（自动进样），点击“OK”，进入下一选项；2.3 选择“Method”菜单下“Method Information”选项，在“Method Comments”中加入方法的信息（如：This is for test!），选择“OK”，进入下一选项；2.4 泵参数设定：右键单击“Pump”图标，点击“Method…”选项，设置“Flow”：如1.0ml/min；“Stop Time”：如10 min （该停止时间仅为做一个样品需要的时间），按照要求选择合适比例的流动相配比，选择“OK”，进入下一选项；2.5 自动进样器参数设定：右键单击“Sampler”图标，点击“Method”选项，选择“Injection volume”，输入进样体积，选择“OK”，进入下一选项；2.6 柱温箱参数设定：右键单击“Column Comp”，点击“Method”选项，设置“Left”温度（可设置温度范围：低于室温10℃-80℃），一般“Left”和“Right”温度一致，选择“Combined”绑定即可，“Stop Time”选择“As Pump /Injector”，选择“OK”，进入下一选项；2.7 UV检测器参数设定: 右击“DAD” ，点击“Method…”选项，下方的空白处输入所需的检测波长（可根据需要选择多个波长，最多可选8个波长）；“Stop Time”选择“As Pump /Injector”；“Spectrum”——“Store”选项下，根据需要选择“None”或“All（全波长扫描）”等选项，选择“OK”，进入下一选项；2.8 编辑方法完毕，从“Method”菜单中，选中“Save Method As”，输入一方法名，选择“OK”，保存方法成功。
alt测定实验报告
alt测定实验报告本文将介绍一个名为“alt测定”，也叫“alanine aminotransferase测定”的实验。
这项实验通常在医学和生命科学领域中使用，是检测人体血液中肝脏功能的一种方法。
实验步骤首先，需要收集被测试者的血液样本。
可以使用长针或针头手术刀获得血液样本。
然后，将样本放入试管中，并放到离心机上进行离心。
这将分离血细胞和血浆，以便更准确地检测血液中的alt含量。
接下来，在一个反应管中加入4毫升的双乳酸盐缓冲液（pH7.4），然后加入100微升的血浆样本。
将血液和缓冲液混合均匀。
然后，加入2.5毫升的L-丙氨酸酐试剂，以激活样本中的alt。
将试管放到恒温器中，在37℃下孵化10分钟。
在孵化过程中，alt将与L-丙氨酸酐反应，形成谷氨酸和丙酮酸。
接下来，需要立即添加5毫升的5％的三氯乙酸溶液，停止反应过程，并加入10毫升的钼酸试剂A和钼酸试剂B混合物。
这将导致混合物颜色变化，从浅黄色变为深蓝色。
这反应是比色反应，颜色的深浅程度代表血液中alt的浓度。
最后，可以使用分光光度计读取混合物的吸光度值，以测量血液中alt的浓度。
该值通常以每升国际单位（IU/L）表示。
结果解读正常人血液中的alt值通常在5-40 IU/L之间。
如果测试结果高于正常范围，则可能表明肝脏功能异常，例如肝炎、肝硬化或肝细胞癌等。
但需要注意的是，如果被测试者有其他身体问题，如心肌炎或肌肉损伤，也可能导致alt水平升高，因此应该结合其他检查结果，确定是否存在肝脏损伤。
实验注意事项在进行alt测定实验时，需要注意以下几点：1.收集样本后，应立即进行处理，以防止血液成分的变化。
2.正确添加试剂，混合均匀，以确保反应可靠。
3.避免把其他物质如汽油、清洗剂、酒精等与实验中使用的试剂混合，因为这样会影响测试结果的准确性。
结论alt测定是一种简单但有用的实验，可以用来评估肝脏功能是否正常。
如果测试结果显示alt浓度高于正常水平，则可能意味着需要进行其他的检查，以确定疾病的具体原因。
TAdvancedGradient96PCR扩增仪的简要操作指南
TAdvanced Gradient 96 PCR扩增仪的简要操作指南仪器工作环境：1. 正常室温条件，确保仪器的底部和背部通风口没有堵塞物2.在开机前请确认仪器底部的电压选择开关是否指向“230V”的位置仪器操作：一、开机仪器开关在仪器背部的左下角位置二、进入主操作界面1. EN/DN 界面语言切换，EN：英语；DN：德语2. Quick tart Block 没有用户权限的情况下启动程序Free：无程序运行，模块处于空置状态3. Log in 进入已存在的用户Admin User密码是“Admin” 仪器总共可以设置30个用户三、编辑运行程序1. 点击“Programs” 进入程序编辑界面：选择已存在的程序，在用户（User）所在目录（Programs）下已存在的程序，点击开始运行即可。
可以对已存的程序进行复制（Copy）、删除（Delete）和编辑（Edit）。
2. 新程序编辑点击“New from template”⑴, 分别设置好程序名称“Name”、热盖温度（Lid）105℃、开启热盖预热“Preheating：ON”;⑵, 点击“Step”列的空栏区进入程序扩增条件的编辑：a, 扩增温度（Temperature）扩增时间（Hold Time）：格式是时：分：秒，直接输入数字即可b, 设置循环步骤GOTO：输入循环起始的Step，Cycles：输入循环数c, ΔT:每循环中温度变化，Δt:每循环时间的变化，ΔR：模块的升温频率（ΔR默认即可）Grad：梯度设置，从第1列到第12列，共12个跨度，底下有12组图分别代表模块的12列，并注明。
梯度设置分线性法（Lin.）和标准法（Std.）线性法：输入第6列的退火温度（Annealingtemp），变化步骤（Grad.incr）温度梯度跨度：0.1~30℃,中间6列按设定的变化频率渐变，其余列依大小排列随机赋值标准法：输入第1列的最低温度（First Lane），第12列的最高温度（Last Lane）设置跨度：20~99℃d, 确认设置好后，点完成设置。
人丙氨酸氨基转移酶ALT试剂盒使用方法
人丙氨酸氨基转移酶(ALT)试剂盒使用方法检测范围：96T2 U/L -60U/L使用目的：本试剂盒用于测定人血清、血浆及相关液体样本中丙氨酸氨基转移酶(ALT)含量。
实验原理本试剂盒应用双抗体夹心法测定标本中人丙氨酸氨基转移酶(ALT)水平。
用纯化的人丙氨酸氨基转移酶(ALT)抗体包被微孔板，制成固相抗体，往包被单抗的微孔中依次加入丙氨酸氨基转移酶(ALT)，再与HRP标记的丙氨酸氨基转移酶(ALT)抗体结合，形成抗体-抗原-酶标抗体复合物，经过彻底洗涤后加底物TMB显色。
TMB在HRP酶的催化下转化成蓝色，并在酸的作用下转化成最终的黄色。
颜色的深浅和样品中的丙氨酸氨基转移酶(ALT)呈正相关。
用酶标仪在450nm波长下测定吸光度（OD值），通过标准曲线计算样品中人丙氨酸氨基转移酶(ALT)浓度。
标本要求1．标本采集后尽早进行提取，提取按相关文献进行，提取后应尽快进行实验。
若不能马上进行试验，可将标本放于-20℃保存，但应避免反复冻融2．不能检测含NaN3的样品，因NaN3抑制辣根过氧化物酶的（HRP）活性。
操作步骤1.标准品的稀释：本试剂盒提供原倍标准品一支，用户可按照下列图表在小试管中进行稀释。
2.加样：分别设空白孔（空白对照孔不加样品及酶标试剂，其余各步操作相同）、标准孔、待测样品孔。
在酶标包被板上标准品准确加样50μl，待测样品孔中先加样品稀释液40μl，然后再加待测样品10μl（样品最终稀释度为5倍）。
加样将样品加于酶标板孔底部，尽量不触及孔壁，轻轻晃动混匀。
3.温育：用封板膜封板后置37℃温育30分钟。
4.配液：将30倍浓缩洗涤液用蒸馏水30倍稀释后备用5.洗涤：小心揭掉封板膜，弃去液体，甩干，每孔加满洗涤液，静置30秒后弃去，如此重复5次，拍干。
6.加酶：每孔加入酶标试剂50μl，空白孔除外。
7.温育：操作同3。
8.洗涤：操作同5。
9.显色：每孔先加入显色剂A50μl，再加入显色剂B50μl，轻轻震荡混匀，37℃避光显色15分钟.10.终止：每孔加终止液50μl，终止反应（此时蓝色立转黄色）。
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Alteon 实验操作手册LAB 1Alteon Web Switch 基本操作实验环境：alteon web switch 交换机1台。
1、准备工作用console线连接PC机串口到alteon web switch交换机管理口打开超级终端软件设置为以下参数打开switch电源，按回车键进入如下提示：输入缺省管理密码：admin输入N 跳过初始化配置，直接进入命令行配置界面2、更改密码在主菜单输入：Main#/cfg 进入配置菜单输入：>> Configuration#sys 进入系统菜单输入：System# user/admpw 更改系统密码Changing ADMINISTRATOR password; validation required... Enter current administrator password:输入当前密码Enter new administrator password:输入新密码Re-enter new administrator password:重复密码System# apply 应用配置System# save 保存配置3、配置VLAN，端口等L2信息。
创建VLAN进入配置菜单输入：>> Configuration#vlan （2-1024）进入vlan配置菜单>> vlan 2# ena （打开vlan 2）>> vlan 2# add 2 （把端口2加到 vlan 2）4、配置IP 接口地址、路由、网关等L3信息。
配置Interface 信息在配置菜单输入：>> Configuration#ip进入ip选项菜单输入：>> IP#if 1进入interface配置输入：>> IP Interface 1#addr 192.168.0.252>> IP Interface 1#mask 255.255.255.0>> IP Interface 1#ena>> IP Interface 1#..(返回IP配置菜单)配置路由信息输入：>> IP#route 进入路由配置>> IP Static Route#add （添加静态路由记录）>> IP Static Route#..(返回IP配置菜单)配置缺省网关输入：>> IP#gw 配置网关信息>> Default gateway 1#addr 192.168.0.254 (网关地址) >> Default gateway 1#ena>> Default gateway 1#apply>> Default gateway 1#save5、升级image系统软件、boot image 、bin文件。
Image 升级步骤在客户端终端打开TFTP软件用console连接到alteon L4交换机备份老版本软件>> # /cfg/ptcfgEnter hostname or IP address of TFTP server:Enter name of file on TFTP server:升级新版本软件>> # /boot/gtimgEnter name of switch software image to be replaced["image1"|"image2"|"boot"]: boot（升级引导系统）Enter hostname or IP address of TFTP server:Enter name of file on TFTP server:>> # /boot/gtimgEnter name of switch software image to be replaced["image1"|"image2"|"boot"]:image1 or image 2（升级软件系统）Enter hostname or IP address of TFTP server:Enter name of file on TFTP server:选择下次启动的image文件（选择刚升级完的image）>> Boot Options# imageCurrently set to use switch software "image1" on next boot.Specify new image to use ["image1"/"image2"]:>> Boot Options# resetbin code 升级步骤1) 打开Alteon switch电源。
2)用console线连接PC 到Alteon 交换机。
3) 打开超级终端。
4) 连续按"shift+f" 键。
5) 打开alteon switch电源连续按"shift+f" 键，直到进入“xmodem”状态。
6) 在超级终端上改变console速率到57600 波特率7) 在超级终端上选"Transfer"8) 选择"Send file"9) 在PC机上选“*bin”文件例如"8049_bin.180e"10) 在超级终端上改到"xmodem"协议11) 按"send"12) 当看到“done”以前不要停止任何下载文件工作13) 关掉Alteon switch电源14)改回console端口速率到960015) 输入“/b/cur” 查看软件版本LAB 2SLB 基本操作实验环境：一台alteon web switch，2台http web server。
环境说明：alteon 交换机的端口1上连路由器，两台台服务器分别连接2、3端口。
在主菜单下输入：/cfg/slb进入负载均衡配置菜单输入：>> Layer 4#on 打开负载均衡功能1、建立rip>> Layer 4#real 1(建立real server 1)>> Real server 1#rip 192.168.0.1>> Real server 1#ena>> Layer 4#real 2(建立real server 2)>> Real server 2#rip 192.168.0.2>> Real server 2#ena>> Real server 2#..(返回负载均衡菜单)2、建立group 并加入rip>> Layer 4#group 1（进入负载均衡组配置子菜单）>> Real server group 1#add 1（把real server 1加入到负载均衡组 1）>> Real server group 1#add 2（把real server 2加入到负载均衡组 1）>> Real server group 1#..(返回负载均衡菜单)3、建立虚拟服务器负载均衡并配相应的服务>> Layer 4#virt 1 （建立虚拟服务器 1）>> Virtual Server 1#ena （打开虚拟服务器）>> Virtual Server 1#vip 192.168.1.100（配置虚拟服务器地址）>> Virtual Server 1#service 80 （虚拟服务器的服务为http负载均衡）>> Virtual Server 1 http Service#group 1 （设置负载均衡组为 group 1）>> Virtual Server 1 http Service#rport 80 （设置服务端口为80）>> Virtual Server 1 http Service#..>> Virtual Server 1#..(返回负载均衡菜单)4、端口的负载均衡模式配置>> Layer 4#port 1>> SLB Port 1#client ena 打开client模式>> SLB Port 1#..>> Layer 4#port 2>> SLB Port 2#server ena 打开 server模式>> SLB Port 2#..>> Layer 4#port 3>> SLB Port 3#server ena 打开 server模式>> SLB Port 3#..>> Layer 4#port 4>> SLB Port 4#client ena 打开 server模式>> SLB Port 4#..>> Layer 4#apply>> Layer 4#save完成以上操作，在客户端打开浏览器软件对vip进行WWW浏览，如果能够访问到WWW 服务器的内容说明SLB配置成功。
5、查看负载均衡的状态和信息返回到命令行主菜单输入：Main#stats进入状态菜单>> Statistics#slb（进入负载均衡状态子菜单）>> Server Load Banlance Statistics#group 1（查看组信息）如果正常应该出现类似下面的信息从状态当中应该能够查看到2台server的session记录。
>> Server Load Banlance Statistics# /（返回主菜单）输入：Main#information进入信息菜单>> Information#slb（进入负载均衡状态子菜单）>> Server Load Banlance Information#dump （查看所有的负载均衡信息）>> Server Load Banlance Information#sess（session表信息）>> Session table Information#dump 查看session表信息E = 建立P = 持续U = pass UP for L7 processingS = 特别的session象cookie 或者SSL6、更改slb算法并查看各种算法之间session表的区别用上面的stats和information命令查看负载均衡状态和信息并保存Main#cfg/slb (回到配置模式的负载均衡选项)>> Layer 4#group 1>> Real server group 1#metric (更改负载均衡算法)分别使用roundrobin、minmisses、hash、response、bandwidth 负载均衡算法，并分别从客户端发起www请求，然后使用stats和information命令查看负载均衡状态和信息并进行比较。