高效液相色谱法测定柑橘汁糖的组成

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液相色谱在生物大分子分离研究中的应用

液相色谱在生物大分子分离研究中的应用谷春秀;赵伟;于志勇;谷雪枫;徐宏博【摘要】本文讨论了液相色谱法在生物大分子分离过程中的应用,主要探讨色谱柱的选择以及分离条件的确定。

以糖类为例介绍了液相色谱分离生物分子的具体方法,同时对柱温流动相等因素进行分析和讨论。

液相色谱法应用于生物大学子实验教学,对学生掌握先进的分离方法具有很重要的意义。

%In this study,the application of liquid Chromatography in biological macromolecular separation was discussed.The factors discussed indicate the selection of the column and condition for separation.The carbohydrate r are taken as experimental sample an influent factors,such as temperature of column and different elution were observed an analyzed.It was conclusion that Liquid Chromatography can be used in the course of macromolecular separation to let our students master some advanced separation method.【期刊名称】《生命科学仪器》【年(卷),期】2012(010)002【总页数】5页(P40-44)【关键词】生物大分子;糖类;液相色谱法【作者】谷春秀;赵伟;于志勇;谷雪枫;徐宏博【作者单位】北京联合大学生物化学工程学院,北京100023;北京联合大学生物化学工程学院,北京100023;北京联合大学生物化学工程学院,北京100023;北京联合大学生物化学工程学院,北京100023;北京联合大学生物化学工程学院,北京100023【正文语种】中文【中图分类】O657.72生物大分子包括多肽、酶、蛋白质、核酸( DNA和RNA)以及多糖等[1]。

超高效液相色谱法测定柑橘果肉中四种植物性内源激素的含量

超高效液相色谱法测定柑橘果肉中四种植物性内源激素的含量摘要:利用超高效液相色谱法同时测定柑橘(Citrus reticulate Bance)果肉中的玉米素､赤霉素､吲哚乙酸和脱落酸的含量｡以C8色谱柱,甲醇-0.1%冰乙酸为流动相梯度洗脱,检测波长为262 nm,流速0.22 mL/min｡结果表明, 玉米素含量在0.14~0.38 μg/mL间线性关系良好,R2为0.999 5,平均回收率为98.7%,RSD为0.99%;赤霉素含量在0.67~1.79 μg/mL间线性关系良好,R2为0.999 3,平均回收率为98.6% ,RSD 为0.70%;吲哚乙酸含量在0.25~0.67 μg/mL间线性关系良好,R2为0.999 6,平均回收率为99.0% ,RSD为0.68%;脱落酸含量在0.036~0.096 μg/mL间线性关系良好,R2为0.999 9,平均回收率为99.1% ,RSD为0.61%｡该方法简便､快速､精密度高､准确性好,可用于植物样品中激素含量的测定｡关键词:柑橘(Citrus reticulate Bance);植物激素;超高效液相色谱法Determination of Four Endogenous Hormones in Orange Pulp by UPLC Abstract: Determination of four endogenous hormones such as zeatin (ZT), gibberellin (GA), indole acetic acid (IAA) and abscisic acid (ABA) was proceeded by UPLC. The method used a C8 column, and adopted the gradient elution method with methanol-0.1% acetic acid as mobile phase and the UV detection wavelength was 262 nm, and flow rate was 0.22 mL/min. The calibration curve of ZT was linear between 0.14 μg/mL and 0.38 μg/mL, R2 was 0.999 5, the average recovery was 98.7%, and RSD was 0.99%.The calibration curve of GA was linear between 0.67 μg/mL and 1.79 μg/mL, R2 was 0.999 3, the average recovery was 98.6%, and RSD was 0.70%.The calibration curve of IAA was linear between 0.25 μg/mL and 0.67 μg/mL, R2 was 0.999 6, the average recovery was 99.0%, and RSD was 0.68%. The calibration curve of ABA was linear between 0.036 μg/mL~0.096 μg/mL, R2 was 0.999 9, the average recovery was 99.1%, and RSD was 0.61%. This method was proved to be simple, precise, accurate and could be used for the quality control of hormone content in the plant samples.Key words: Orange pulp(Citrus reticulate Bance); plant hormone; UPLC植物性内源激素是植物体内合成的对植物生长发育有显著作用的微量有机物,其生理效应复杂多样,对植物生长发育有重要的调节控制作用[1,2]｡吲哚乙酸､赤霉素､脱落酸､玉米素是植物体广泛存在的植物激素,本研究运用超高效液相色谱(UPLC)法同时测定柑橘中这4种内源激素,利用UPLC超高分离度､快速､超高灵敏度的优点,解决传统HPLC在植物激素分析中存在的分离度差,分析时间较长的缺点｡本研究建立了植物内源激素高效､稳定､准确的分离和测定方法,为植物内源激素调节其营养生理与生长的研究提供支撑｡吲哚乙酸(IAA)是一种植物体内普遍存在的含有一个不饱和芳香族环和一个乙酸侧链的内源激素,属吲哚类化合物,又名生长素,其基本作用在于调节植物生长;赤霉素(GA)是一类属于双萜类化合物的植物激素,典型生理作用是能促进枝条的生长,尤其是能促进无伤害植物的整体生长;脱落酸(ABA)是一种具有倍半萜结构的抑制生长的植物激素,因能促使叶子脱落而得名,具有加速植物器官脱落,抑制整株植物或离体器官的生长,并对细胞的分裂与生长起抑制等作用;玉米素(Zeatin)是一种天然的细胞分裂素,化学名称为6-(4羟基-3-甲基-2-反丁烯基)氨基嘌呤,它是从甜玉米灌浆期的子粒中提取并结晶出的第一个天然细胞分裂素,能刺激植物细胞分裂,促进叶绿素形成,加速植物新陈代谢和蛋白质的合成,从而达到有机体迅速增长,促使作物早熟丰产,提高植物抗病抗衰抗寒能力｡1 材料与方法1.1 仪器和试剂ACQUITY Uitra Performance LC超高效液相色谱系统,Empower色谱工作站,检测器:PDA eλ Detector紫外检测器(Waters公司);台式系列数控超声波清洗器(昆山市超声仪器有限公司)｡玉米素标准品(Sigma公司,纯度87.0%);赤霉素标准品(SUPELCO公司,纯度96.5%);吲哚乙酸(Riedel-de Haen公司,纯度99.0%);脱落酸(Sigma公司,纯度99.0%);甲醇(色谱纯);冰乙酸(分析纯);超纯水;C18柱(500 mg/6 mL,美国赛分科技公司)｡1.2 实验方法1.2.1 样品采集实验所用的柑橘样品均采自广西全州｡在不同时间共采集6组样品｡摘取生长中的柑橘果实,迅速放入冰盒中带回实验室,-20℃保存备用｡1.2.2 色谱条件色谱柱:ACQUITYUPLCRBEH130 C8,1.7 μm(2.1×50 mm);流动相:甲醇-0.1%冰乙酸梯度洗脱;流速0.22 mL/min;检测波长为262 nm;柱温为25 ℃｡1.2.3 标准溶液的制备分别精密称取玉米素､赤霉素､吲哚乙酸､脱落酸标准对照品0.12､0.28､0.21､0.15 mg置于50 mL容量瓶中,50%甲醇溶解定容,配制浓度分别为2.4､5.6､4.2､3.0 μg/mL的标准储备溶液｡1.2.4 样品溶液的制备称取已匀浆的柑橘果肉5.000 0 g置于25 mL容量瓶中,用80%甲醇溶解,冰水浴超声45 min,取出恢复常温后,80%甲醇定容,过滤,取过滤液10 mL于10 mL分度比色管,氮吹去除甲醇,残留液于C18柱中脱色,用6.0 mL 流动相分3次洗脱,用10 mL分度比色管收集所有从C18柱的流出液,流动相定容至8.0 mL,用0.22 μm有机滤膜过滤,滤液即为待测液｡1.2.5 四种植物激素混合标准曲线的制备分别吸取玉米素､赤霉素､吲哚乙酸及脱落酸标准储备溶液0.6､0.8､1.0､1.2､1.4､1.6 mL于6个10 mL容量瓶中,流动相定容至刻度,依次进样,进样体积为5.0 μL｡2 结果与分析2.1 提取方法的确定据文献报道,玉米素､赤霉素､吲哚乙酸和脱落酸4种激素可采用67%的丙酮水溶液[1]､0.5 moL/L NaOH溶液[3]､80%甲醇水溶液[4]等溶剂提取,石油醚､乙酸乙酯､PVP和C18柱等方式净化,根据4种激素对时间和热不稳定[4],易发生降解反应,所以在实验操作过程中应注意控制时间及温度,本试验通过对不同的提取溶剂,提取方式(超声提取､过夜浸提)､提取时间､提取次数分别做单因素考察实验,最终确定以80%甲醇为提取剂,冰水浴超声提取45 min,C18柱净化为最佳实验条件｡2.2 色谱条件的选择2.2.1 色谱柱的选择植物样品中含杂质量较多,分离难度较大｡UPLC选用粒径低于2 μm的小颗粒作为填料,比普通HPLC有更高的分离度､灵敏度和分析速度,因此对分离测定植物样品中的4种激素具有较大的优势｡本实验选用ACQUIY UPLC BEH130 C18 1.7 μm(2.1×100 mm)､ACQUIY UPLC BEH C8 1.7 μm(2.1×50 mm)和ACQUIY UPLC BEH C18 1.7 μm(2.1×50 mm)分别对样品进行分离测定,结果显示用ACQUIY UPLC BEH C8 1.7 μm(2.1×50 mm)能够对样品进行很好的分离｡2.2.2 波长的选择将4种激素的混合标准溶液于ACQUITY超高效液相色谱系统上进行测定,PDA紫外检测器对其进行光谱扫描,最大吸收光谱的波长分别为:玉米素(ZT)在204 nm和271 nm有吸收峰,赤霉素(GA)在192 nm和252 nm有吸收峰,吲哚乙酸(IAA)在218 nm和279 nm有吸收峰,脱落酸(ABA)在194 nm和261 nm有吸收峰｡将4种激素的混合标准液分别在以上多个波长下进行测定,发现在波长为262 nm下标准混合液出峰基线毛刺少且峰形较好,玉米素､吲哚乙酸和脱落酸的峰面积为最高,赤霉素峰面积也变化较少,所以本实验采用262 nm为4种激素的检测波长｡4种激素的吸收光谱图见图1｡2.2.3 流动相的选择根据4种激素的特性及植物样品所含的杂质量,通过对各种流动相如甲醇-水､乙腈-水､甲醇-乙酸-水､乙腈-乙酸-水等不同溶液系统的尝试,最终选用甲醇和0.1%冰乙酸-水溶液为流动相｡经反复试验后,发现甲醇和0.1%冰乙酸-水溶液在梯度洗脱的条件下,各组分分离较好,且各峰峰型较好,分析时间也较短｡4种激素保留时间合适,色谱图见图2;流动相比例见表1｡2.3 线性关系以对照品进样量为横坐标,峰面积为纵坐标,将所得数据绘成标准曲线,玉米素线性方程为:Y=593.810X-43.469,R2=0.999 5,线性范围0.14~0.38 μg/mL;赤霉素线性方程为:Y=48.948X-19.105,R2=0.999 3,线性范围0.67 ~1.79 μg/mL;吲哚乙酸线性方程为:Y=315.500X-43.471,R2=0.999 6,线性范围0.25~0.67 μg/mL;脱落酸线性方程为:Y=6 481.000X-136.610,R2=0.999 9,线性范围0.036~0.096 μg/mL｡结果见图3-图6｡2.4 精密度试验精密吸取玉米素､赤霉素､脱落酸和吲哚乙酸混合标准溶液各5.0 μL,重复进样5次,测定峰面积,玉米素､赤霉素､吲哚乙酸和脱落酸标准溶液峰面积的RSD分别为0.39%､0.47%､0.29%､0.25%｡表明方法精密度良好｡2.5 重复性试验同一批柑橘样品取样5份,按1.2.4操作,依法测定,计算玉米素､赤霉素､吲哚乙酸和脱落酸的含量,RSD分别为3.64%､2.48%､2.78%､3.15%｡表明方法重复性良好｡2.6 回收率试验称取已知含量的样品9份,加入玉米素､赤霉素､吲哚乙酸和脱落酸标准溶液5.0､7.5､10.0 mL各3份,按1.2.4进行操作测定,计算回收率,结果(表2-表5)表明,回收率在98.6%~99.1%,RSD在0.61%~0.99%,表明方法回收率较好｡3 小结与讨论以80%甲醇为提取剂,冰水浴超声提取45 min,C18柱净化为最佳实验条件,甲醇和0.1%冰乙酸为流动相,流速0.22 mL/min梯度洗脱,UPLC系统对样品进行测定,样品中4种激素能在7 min之内达到较好的分离｡充分利用了超高效液相色谱的优点与有利条件,建立的方法简单可靠,进一步拓宽了液相色谱在植物激素测定方面的应用｡参考文献:[1] 刘贤明,梁锦添,秦绪雄.用高效液相色谱分析植物内源激素吲哚-3-乙酸､脱落酸和玉米素[J].色谱,1996,8(1):340-341.[2] 陈小鹏,王秀峰,孙小镭,等.高效液相色谱测定黄瓜瓜条中赤霉素和脱落酸含量[J].山东农业科学,2005(1):65-67.[3] 郑春霞,王强,阮晓.HPLC分离测定香梨三种植物激素[J].新疆农业大学学报,2000,23(1):54-56.[4] 陈波浪,郑春霞,盛建东,等. HPLC分离和测定棉花中3种植物激素[J].新疆农业大学学报,2006,29(1):28-30.。

柑橘果实糖、酸、Vc含量的测定方法

柑橘果实糖、酸、Vc 含量的测定方法熊庆娥（四川农业大学）第一部分测定程序及计算公式一、样品制备样品果至少10个。

擦净果皮后，用水果刀在每样果对称部位切取两块。

去果皮后，用纱布包好果肉，挤压果汁于干燥烧杯中，总量不少于100ml 。

样品液混合搅拌均匀后，可供测定可溶性固形物（TSS ）、糖、酸、Vc 。

二、Vc 含量的测定1. 果汁5ml ，用1%草酸稀释，定容至50ml ，即稀释10倍。

用移液管吸取稀释液5ml 至50ml 三角瓶，通过半微量滴定管滴入2，6-D ，至溶液呈粉红色30秒内不消失止。

记录所耗2，6-D （ml ）。

重复滴定2~3次。

2. Vc 含量（mg/100ml ）=C 100V B ⨯A⨯⨯ （1式）V ：2，6-D 滴定值（ml ） A ：每毫升2，6-D 相当的Vc 量（mg ） B ：滴定用样品量（ml ） C ：样品稀释倍数三、总酸含量的测定1. 用移液管吸取果汁5ml ，转入100ml 三角瓶，加酚酞1~2滴，用0.1N NaOH （标定浓度为准）滴至溶液出现粉红色不消失止。

记录滴定所耗NaOH 量（ml ）。

重复滴定2~3次。

2. 总酸含量（g/100ml ）=0.064100V N B ⨯⨯⨯ （2式）V ：NaOH 滴定值（ml ） N ：NaOH 当量浓度B ：滴定用样品量（ml ） 0.064：柠檬酸折算系数四、糖含量的测定1. 还原糖的测定用移液管吸取果汁10ml ，转入100ml 容量瓶，加水稀释定容至刻度，摇匀后装入酸式滴定管。

用移液管分别吸取裴林液A 、B 各5ml 于200ml 三角瓶，摇匀后，加入蒸馏水约30ml ，置电炉上煮至沸腾。

继续保持溶液沸腾，并用样品液滴定至兰色大部分减退，加次甲基兰2滴，继续滴定至溶液刚转砖红色止。

记录样品液滴定值（ml），重复2~3次。

2. 转化糖的测定：用移液管吸取果汁10ml，转入100ml容量瓶，加入6N HCl5ml，置沸水浴上水解15min。

高效液相色谱法测定柑橘皮中柠檬苦素

高效液相色谱法测定柑橘皮中柠檬苦素徐旭耀;黄秋儿;黄惠玲【摘要】HPLC was applied to the determination of limonin in citrus peels. The sample was ultrasonically extracted with （φ） 70% ethanol solution at 50℃ for 75 min. Sinochrom ODS-BP （250 min×4. 6 mm, 10 μm） column was used as stationary phase, a mixture of acetonitrile and water mixed in the ratio of 45 to 55 （by volume） was used as mobile phase; UV detection at 210 nm was used in the determination. Linear relationship between values of peak area and mass concentration of limonin was obtained in the range of 12. 0-384 mg·L^-1 Values of average recovery and RSD （n=5） found were 99.9% and 1.8% respectively.%提出了高效液相色谱法测定柑橘皮中柠檬苦素含量的方法。

样品用体积分数为70％乙醇溶液于50C超声提取75min。

以Sinochrom ODS-BP（250min×4．6mm，10μm）为分离柱，以乙腈-水（45＋55）溶液作为流动相，用紫外检测器在波长210nm处进行测定。

柠檬苦素的质量浓度在12．0-384mg·L^-1范围内与其峰面积呈线性关系，方法的平均回收率为99．9％，相对标准偏差（n=5）为1．8％。

超高效液相色谱法测定柑橘果肉中四种植物性内源激素的含量

超高效液相色谱法测定柑橘果肉中四种植物性内源激素的含量作者：蒋艳芳黄岛平陈秋红黄艳来源：《湖北农业科学》2012年第01期摘要：利用超高效液相色谱法同时测定柑橘（Citrus reticulate Bance）果肉中的玉米素、赤霉素、吲哚乙酸和脱落酸的含量。

以Ｃ８色谱柱，甲醇－０．１％冰乙酸为流动相梯度洗脱，检测波长为２６２ｎｍ，流速０．２２ｍＬ／ｍｉｎ。

结果表明，玉米素含量在０．１４～０．３８μｇ／ｍＬ间线性关系良好，Ｒ２为０．９９９５，平均回收率为９８．７％，ＲＳＤ为０．９９％；赤霉素含量在０．６７～１．７９μｇ／ｍＬ间线性关系良好，Ｒ２为０．９９９３，平均回收率为９８．６％，ＲＳＤ为０．７０％；吲哚乙酸含量在０．２５～０．６７μｇ／ｍＬ间线性关系良好，Ｒ２为０．９９９６，平均回收率为９９．０％，ＲＳＤ为０．６８％；脱落酸含量在０．０３６～０．０９６μｇ／ｍＬ间线性关系良好，Ｒ２为０．９９９９，平均回收率为９９．１％，ＲＳＤ为０．６１％。

该方法简便、快速、精密度高、准确性好，可用于植物样品中激素含量的测定。

关键词：柑橘（Citrus reticulate Bance）；植物激素；超高效液相色谱法中图分类号：Ｏ６５６．２文献标识码：Ａ文章编号：0439－８114（２０12）01－0165-04ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＦｏｕｒＥｎｄｏｇｅｎｏｕｓＨｏｒｍｏｎｅｓｉｎＯｒａｎｇｅＰｕｌｐｂｙＵＰＬＣＪＩＡＮＧＹａｎ－ｆａｎｇ，ＨＵＡＮＧＤａｏ－ｐｉｎｇ，ＣＨＥＮＱｉｕ－ｈｏｎｇ，ＨＵＡＮＧＹａｎ（ＧｕａｎｇｘｉＣｅｎｔｅｒｆｏｒＡｎａｌｙｓｉｓａｎｄＴｅｓｔＲｅｓｅａｒｃｈ，Ｎａｎｎｉｎｇ５３００２２，Ｃｈｉｎａ）Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｆｏｕｒｅｎｄｏｇｅｎｏｕｓｈｏｒｍｏｎｅｓｓｕｃｈａｓｚｅａｔｉｎ（ＺＴ），ｇｉｂｂｅｒｅｌｌｉｎ（ＧＡ），ｉｎｄｏｌｅａｃｅｔｉｃａｃｉｄ（ＩＡＡ）ａｎｄａｂｓｃｉｓｉｃａｃｉｄ（ＡＢＡ） was proceeded ｂｙＵＰＬＣ．ＴｈｅｍｅｔｈｏｄｕｓｅｄａＣ８ｃｏｌｕｍｎ，ａｎｄａｄｏｐｔｅｄｔｈｅｇｒａｄｉｅｎｔｅｌｕｔｉｏｎｍｅｔｈｏｄｗｉｔｈｍｅｔｈａｎｏｌ－０．１％ａｃｅｔｉｃａｃｉｄａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅａｎｄｔｈｅＵＶｄｅｔｅｃｔｉｏｎｗａｖｅｌｅｎｇｔｈｗａｓ２６２ｎｍ，ａｎｄｆｌｏｗｒａｔｅｗａｓ０．２２ｍＬ／ｍｉｎ．Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｏｆ ZT ｗａｓｌｉｎｅａｒｂｅｔｗｅｅｎ０．１４μｇ／ｍＬ and ０．３８μｇ／ｍＬ，Ｒ２ｗａｓ０．９９９５，ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９８．７％，ａｎｄＲＳＤｗａｓ０．９９％．ＴｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｏｆＧＡｗａｓｌｉｎｅａｒｂｅｔｗｅｅｎ０．６７μｇ／ｍＬ and １．７９μｇ／ｍＬ，Ｒ２ｗａｓ０．９９９３，ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９８．６％，ａｎｄＲＳＤｗａｓ０．７０％．Ｔｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｏｆ IAA ｗａｓｌｉｎｅａｒｂｅｔｗｅｅｎ０．２５μｇ／ｍＬ and ０．６７μｇ／ｍＬ，Ｒ２ｗａｓ０．９９９６，ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９９．０％，ａｎｄＲＳＤｗａｓ０．６８％．ＴｈｅｃａｌｉｂｒａｔｉｏｎｃｕｒｖｅｏｆＡＢＡｗａｓｌｉｎｅａｒｂｅｔｗｅｅｎ０．０３６μｇ／ｍＬ～０．０９６μｇ／ｍＬ，Ｒ２ｗａｓ０．９９９９，ｔｈｅａｖｅｒａｇｅｒｅｃｏｖｅｒｙｗａｓ９９．１％，ａｎｄＲＳＤｗａｓ０．６１％．Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｗａｓｐｒｏｖｅｄｔｏｂｅｓｉｍｐｌｅ，ｐｒｅｃｉｓｅ，ａｃｃｕｒａｔｅａｎｄｃould ｂｅｕｓｅｄｆｏｒｔｈｅｑｕａｌｉｔｙｃｏｎｔｒｏｌｏｆｈｏｒｍｏｎｅｃｏｎｔｅｎｔｉｎｔｈｅｐｌａｎｔｓａｍｐｌｅｓ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：Ｏｒａｎｇｅｐｕｌｐ（Citrus reticulate Bance）；ｐｌａｎｔｈｏｒｍｏｎｅ；ＵＰＬＣ植物性内源激素是植物体内合成的对植物生长发育有显著作用的微量有机物，其生理效应复杂多样，对植物生长发育有重要的调节控制作用［１，２］。

柑橘蔗糖测定实验报告

一、实验目的1. 学习和掌握柑橘中蔗糖含量的测定方法。

2. 了解蔗糖在柑橘中的分布情况。

3. 通过实验，提高学生对分析化学实验技能的掌握和应用能力。

二、实验原理蔗糖是一种非还原性糖，其分子式为C12H22O11。

在酸性条件下，蔗糖可以被水解生成葡萄糖和果糖，两者均为还原性糖。

通过测定水解后溶液中的还原性糖含量，可以计算出柑橘中的蔗糖含量。

实验原理基于Fehling试剂与还原性糖反应生成红色氧化亚铜沉淀，根据沉淀的颜色深浅，可以计算出还原性糖的含量。

具体步骤如下：1. 将柑橘样品破碎，提取汁液。

2. 加入适量的Fehling试剂，在加热条件下，还原性糖与Fehling试剂反应生成氧化亚铜沉淀。

3. 通过比色法测定沉淀的颜色深浅，计算出还原性糖的含量。

4. 根据还原性糖含量，计算出柑橘中的蔗糖含量。

三、实验材料与仪器1. 实验材料：新鲜柑橘、Fehling试剂、氢氧化钠、盐酸、蒸馏水等。

2. 实验仪器：电子天平、烧杯、试管、滴定管、比色计、恒温水浴锅等。

四、实验步骤1. 准备实验材料：新鲜柑橘洗净，剥皮，切成小块，称取适量（约2g）。

2. 提取汁液：将柑橘块放入烧杯中，加入适量蒸馏水，用研钵研磨，过滤得到柑橘汁液。

3. 配制Fehling试剂：称取适量的氢氧化钠和硫酸铜，溶解于蒸馏水中，配制成Fehling试剂。

4. 测定蔗糖含量：a. 取洁净的试管，加入一定量的柑橘汁液。

b. 加入适量的Fehling试剂，摇匀。

c. 将试管放入恒温水浴锅中，加热至沸腾，保持5分钟。

d. 取出试管，用蒸馏水冲洗，加入适量盐酸，使溶液呈酸性。

e. 用比色计测定溶液的吸光度，以蒸馏水为空白对照。

5. 计算蔗糖含量：根据吸光度值，从标准曲线中查出相应的还原性糖含量，再根据计算公式计算出柑橘中的蔗糖含量。

五、实验结果与分析1. 实验结果：通过实验，测得柑橘汁液中的蔗糖含量为X g/100g。

2. 分析：本实验采用Fehling试剂法测定柑橘中的蔗糖含量，方法简便、准确。

高效液相色谱法测定柑橘汁糖的组成

实验选择柱温分别为１６ ± ２℃、２５ ± ２℃、３３ ± ２ ℃。结果表明：温度较低时，柑橘汁中糖的保留时间长；温度较高时，保留时间短。因此实验选择室温２５ ± ２ ℃进行实验。２．３样品前处理方法研究
柑橘汁组成复杂，其中除了糖外，还含有其它干扰组分，如色素、多酚、有机酸等。色素、多酚相对于糖疏水性强，易附着在柱材料上不被流动相洗脱而降低柱效，所以在采用高效液相色谱分析进样之前要预分离这些成分。本实验采用固相萃取小柱固相萃取预分离，由于糖的亲水性极强，样品通过小柱时在柱上没有保留，而色素、多酚等相对于测定组分疏水性较强，在小柱上有保留，从而可预分离除去色素、多酚、脂类等物质。固相萃取小柱先用２ｍｌ甲醇活化，再用２ｍｌ水洗去甲醇，弃去最初的２ｍｌ滤液，收集后续的３ｍｌ滤液，用０．４５μｍ滤膜过滤，取１０μｌ进样分析，这样可
190 2006, Vol. 27, No. 04
食品科学
※分析检验
高效液相色谱法测定柑橘汁糖的组成
李云康，潘思轶＊（华中农业大学食品科技学院，湖北武汉４３００７０）
摘要：研究了柑橘汁中糖组成的高效液相色谱测定方法。采用固相萃取小柱预分离干扰成分，以ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ（４．６ × ２５０ｍｍ，５μｍ）糖分析柱为固定相，８０％乙腈为流动相，柱温２５ ± ２℃。本方法的相对标准偏差０．８３％～１．７１％，标准回收率９６％～１０３％。该方法简便快速，结果准确可靠，为果汁中糖组成分析提供了一种高效快速的测定方法。关键词：高效液相色谱法；糖；柑橘汁；固相萃取
sample(b)
样品每样取２份，其中１份加入蔗糖、葡萄糖和
192 2006, Vபைடு நூலகம்l. 27, No. 04

柑橘果实的糖、酸、维生素c测定法-

柑橘果实的糖、酸、维生素c测定法-柑橘果实的糖、酸、维生素C测定法中国农业科学院柑桔研究所实验室柑桔果实的糖、酸、维生素丙的定量测定，对柑桔品种比较鉴定，柑桔施肥、贮运等研究有重要的意义。

为适应当前科学试验需要，兹介绍这些化学成分的简易而迅速的测定方法，供有关方面参考。

一、糖的测定测定的方法是以还原糖在碱性溶液中能将硫酸铜还原为氧化亚铜的特性为基础，用待测液直接滴定一定体积、已知浓度的铜碱性溶液，以次甲基兰为指示剂，由于次甲基兰能被碱性溶液中的糖还原为无机化合物，故终点明显。

反应方程如下：O OCHCOONa HO—CH--COONaRC +2Cu +2H2O= RCOOH + 2 +Cu2OH OCHCOOK HO—CH – COOK此法只能测定具有自由的醛基或铜基的还原糖。

双糖则用无机酸水解成单糖后，在用此法测定。

试剂：1.斐林试剂A：分析纯硫酸铜（CuSO4·5H2O）34.69g溶于水中，定溶至500mL，过滤备用。

2.斐林试剂B：50g分析纯氢氧化钠溶于水中，加入分析纯酒石酸钾钠173g，定溶至500 mL。

3.次甲基兰指示剂：1克次甲基兰溶于100毫升水中。

4.葡萄糖标准液：纯无水葡萄糖溶于105℃烘干至恒重，准确称取0.5克左右，用水溶解并定溶至100 mL。

测定步骤：1.斐林试剂混合液的标定吸取斐林试剂A和B各5毫升混合于250毫升三角瓶中，再加入50毫升水。

将葡萄糖标准液注入滴定管中，然后预先滴加一定体积于A、B混合液里，加热至沸腾。

沸腾一分半钟后，加入两滴次甲基兰指示剂，又隔半分钟，继续滴加葡萄糖标准液，直至混合液的蓝色完全消失呈现砖红色，即为终点。

滴定应迅速，从煮沸到滴定终了总共不超过三分钟。

在加热前向混合液中预加的葡萄糖标准液量应近似滴定值，使沸腾后滴加葡萄糖标准液的量在1.5—1.0毫升范围内，若超过或不足，则应将加热前预加的量增减，至适合为止。

重复滴定二次，滴定值相差不超过0.2毫升。

高效液相色谱法测定柑橘中2,4-二氯苯氧乙酸残留

Ｄｅｅｍｉａｉｎｆ２，ｄｃｌｒｐｅｘａｅｉｉｓｄｅｉｒｎｇｉｇｔｒｎｔｏｏ４一ｉｈｏｏｈｎｏｙｃｔｃＡｃｄＲｅｉｕｎＯａｅＵｓｎ
ＨｉｈｒｏｍａｃｑｉｒｍａｏｒｐｙｇＰｅｆｒｎｅＬｉｕｄＣｈｏｔｇａｈ
ＡｂｔａｔＡｉｈｐｒｏｍａｃｉｕｄｃｒｍａｏｒｐｉｍｅｈｄｗａｅｅｏｄｆｒｄｔｃｉｇ２，－ｉｈｏｐｅｏｙｃｔｓｒｃ：ｈｇｅｆｒｎｅｌｉｈｏｔｇａｈｃｑｔｏｓｄｖｌｐｏｅｅｔ４ｄｃｌｒｈｎｘａｅｉｅｎｏｃａｉ４Ｄｉｒｎｅｃｄ２，－ｎｏａｇ．２，－ｉｈｏｏｈｎｘａｅｉａｉｓｘｒｃｅｏｏａｇｔａｅ，ｐｒｅｙｐｓｉｇｔｒｕｈｓｉａ４ｄｃｌｒｐｅｏｙｃｔｃｄＷａｅｔｔｄｆｍｒｎｅｗｉｗｔｒｕｉｄｂａｓｎｏｇｉｃｃａｒｈｉｆｈｌ
Ｋｅｒｓｈｇｅｏａｃｑｉｈｏａｇａｈ；ｓｌ・ｈｅｅｔｃｏ；２４ｄｃｌｐｅｏｙｃｔｃ（，ｙｗｏｄ：ｉｈｐｒｒｎｅｌｕｄｃｒｍｔｒｐｙｏｉｐａｘａｔｎｆｍｉｏｄｓｒｉ，－ｉｈｒｈｎｘａｅｉａｉ２ｏｏｃｄ４Ｄ）ｒｎｅ－；ｏａｇ
（江苏省农业科学院食品质量安全与检测研究所，江苏南京２０１）１０４

反相高效液相色谱法测定柑橘中磺胺二甲基嘧啶

反相高效液相色谱法测定柑橘中磺胺二甲基嘧啶摘要:建立了用反相高效液相色谱测定柑橘中磺胺二甲基嘧啶的方法｡结果表明,磺胺二甲基嘧啶能得到较好地分离,用外标法定量,在0.8~15.0 μg/mL范围内与峰面积成良好线性关系,相关系数为0.999 0,检测限为12.6 ng/mL,方法可用于柑橘中磺胺二甲基嘧啶的测定｡关键词:反相高效液相色谱;柑橘;磺胺二甲基嘧啶Determination of Sulfamethazine in Citrus by Reversed Phase High Performance Liquid ChromatographyAbstract: A reversed phase high performance liquid chromatography(RP-HPLC) method for the separation and determination of the sulfamethazine was developed. External standard method was used and the calibration curves showed good linearity over the range of 0.8~15.0 μg/mL(r=0.999 0) for sulfamethazine. The detection limit was 12.6 ng/mL for sulfamethazine. Finally this method was applied for separating and determining sulfamethazinnum in citrus.Key words: reversed phase high performance liquid chromatography(RP-HPLC); citrus; sulfamethazine随着现代医药科学的不断发展,在畜､禽､牧､水产及农产品等领域应用药物对动物进行预防疾病和治疗,以及促动物生长､提高饲料转化率等方面日益普遍｡磺胺二甲基嘧啶(Sulfamethazine,SM2)是抗感染药剂,它是畜牧生产中应用最广泛的磺胺类药物之一｡磺胺二甲基嘧啶具有抗菌力强､毒性小､吸收迅速完全,在畜禽及农产品体内药效持续时间长等特点｡但过量的药物残留会损害人体健康,已发现磺胺二甲基嘧啶可诱发啮齿动物甲状腺增生或肿瘤[1]｡近年来也有将此药物用于蔬菜､水果中进行杀菌的报道｡目前,磺胺类药物常用的检测方法为HPLC法[2-11],主要用于动物性食品中的检测,但果蔬中磺胺二甲基嘧啶的检测尚未见报道｡本研究采用超声提取,反相高效液相色谱法测定了柑橘中磺胺二甲基嘧啶的残留量｡该方法简便､快速､前处理过程简单､重现性好､方法的准确度和灵敏度均符合农药残留检测要求,且费用较低,适合作为一种常规的残留检测方法｡1 材料与方法1.1 仪器LC-20AT高效液相色谱仪(日本岛津公司), 配备SPDM-20A检测器､SIL-20A自动进样器､CBM-20A系统控制器;电子天平(上海越平科学仪器有限公司);微孔过滤装置(北京莱伯泰科学仪器有限公司);SY3200超声波清洗器(上海声源超声波仪器设备有限公司);DHG-9070A型新型电热恒温鼓风干燥箱(宁波江南仪器厂);0412-1离心机(上海分析机械厂)｡1.2 试剂磺胺二甲基嘧啶(100 μg/mL,农业部环境保护科研检测所);无水硫酸钠;甲醇(分析纯);乙腈(色谱纯);去离子水｡所有溶液使用前均由0.45 μm孔径的滤膜过滤｡1.3 色谱条件检测波长:270 nm;色谱柱:Shim-pack VP-ODS(250 mm×4.6 mm, 日本岛津公司);流动相:甲醇∶乙腈∶水(含2%乙酸)=15∶15∶70;流速:0.6 mL/min;柱温:25 ℃;进样量:20 μL｡1.4 样品溶液的配制标准储备液的配制:取1 mL磺胺二甲基嘧啶(100 μg/mL)的标准溶液置于25 mL 的容量瓶中,用25%甲醇定容至刻度,制成浓度为4 μg/mL的标准储备液｡标准使用液的配制:用4 μg/mL的标准储备液配制标准使用液系列,用流动相定容至刻度,使其成为一系列的标准使用液｡1.5 提取和净化准确称取经捣碎柑橘汁液10.000 0 g,置于50 mL棕色容量瓶中,加入30 mL提取液(0.1 mol/L的盐酸溶液∶甲醇=3∶7),将容量瓶置于超声波仪器中超声提取30 min,摇匀,用提取液定容至刻度｡再加入2 g无水硫酸钠,2 000 r/min离心2 min,取上清液过0.45 μm有机滤膜待测｡2 结果与分析2.1 吸收波长的选择利用二极管阵列检测器扫描磺胺二甲基嘧啶标准溶液,得到磺胺二甲基嘧啶的最大吸光度出现在270 nm处,且样品中杂质在该波长时对测定无影响,且色谱峰形较好｡因此,选择270 nm作为最适检测波长｡2.2 流速的影响随着流速增加,各峰的保留时间均减少,在0.4~0.8 mL/min均能很好分离,但流速在0.5 mL/min以下时,色谱峰逐渐扩展,检测灵敏度下降｡流p在选定的色谱条件下进行样品添加回收试验,取柑橘样品3份,按0.10､0.50和1.00 mg/kg 3个添加水平进行回收试验,计算回收率和相对标准偏差(表1)｡2.5 实际样品测定应用本方法对市场上购买的18个柑橘样品进行分析,结果表明, 6个样品中检出磺胺二甲基嘧啶, 含量在1.25~3.78 μg/kg之间｡柑橘样品色谱图见图2｡3 结论建立了符合农药残留分析要求的柑橘中的磺胺二甲基嘧啶残留的分析方法,本方法简单､快速,具有很高的灵敏度与精密度,重现性好,回收率稳定｡参考文献:[1] LITTEFIELD N A, GAYLOR D W, BLACKWELL B N, et al. Chronic toxicity/carcinogenicity studies of sulfamethazine in B6C3F1 mice[J]. Food Chem Tixicol,1989,27(7):45-54.[2] 邵俊杰,袁智能,聂洪勇,等. 肉中十种磺胺兽药残留量的同时测定方法[J].色谱,19931(6):373-375.[3] 李俊锁,李西旺,魏广智. 鸡肝组织中磺胺类药物多残留分析法[J]. 畜牧兽医学报,2002,33(5):468-472.[4] 熊芳,戴华,袁智能. 固相萃取高效液相色谱法测定动物肝中4种磺胺残留量[J].分析科学学报,2002,18(5):415-417.[5] AMOLD D,聂洪勇. 猪肉中4种磺胺类药物残留的快速HPLC测定法[J]. 分析测试通报,1992,11(3):56-59.[6] KRISTOF E M. Quantitative analysis of twelve sulfonmides in honey after acidic hydrolysis by high-performance liquid chromatography with post-column derivatization and fluorescence detection[J]. Journal of Chromatography A,2004,1047(1): 85-92.[7] 张素霞,李俊锁,钱传范. 猪肌肉组织中磺胺类药物的MSPD净化和HPLC 测定[J]. 畜牧兽医学报,1999,30(6):531-535.[8] JEN J F, LEE H L, LEE B N. Simultaneous determination of seven sulfonmide residues in swine waste water by high-performance liquid chromatography[J]. Journal of Chromatogr A, 1998, 793(2):378-382.[9] 张利环,张春善,韩河平. 高效液相色谱法测定肉鸭组织中磺胺二甲基嘧啶的残留量[J]. 中国抗生素杂志,2006,31(5):309-310.[10] 郭根和,苏德森. 高效液相色谱法测定对虾中五种磺胺类药物残留[J]. 现代科学仪器,2005(1):70-72[11] 吴翠琴,陈迪云,黄燕屏,等. 高效液相色谱法测定鸡蛋清和蛋黄中磺胺类药物残留[J]. 环境监测管理与技术,2010,22(3):43-45,64.。

高效液相色谱法同时测定柑橘类果皮中柚皮苷和橙皮苷的含量

高效液相色谱法同时测定柑橘类果皮中柚皮苷和橙皮苷的含量1. 实验目的了解高效液相色谱仪基本结构和工作原理，以及初步掌握其通用操作技能；掌握高效液相色谱保留值定性方法和外标法的标准曲线定量方法；掌握高效液相色谱分析条件选择的依据和一般过程。

2. 实验原理若在高效液相色谱中固定相为非极性键合相（如辛基、十八烷基、苯基），流动相为极性溶剂，即构成反相色谱分离系统。

与正相色谱系统相比，反相色谱系统的应用更为广泛。

由于柚皮苷与橙皮苷在流动相很固定相中的溶解度不同，采用反相高效液相色谱法（RP-HPLC）可以将柑橘类果皮中柚皮苷和橙皮苷与其他组分（如黄酮类化合物、类柠檬苦素、天然色素等）进行分离。

在适宜、一致的色谱条件下，采用外标法，分别将柚皮苷与橙皮苷的单标样、体积不同的柚皮苷和橙皮苷混合标样进入色谱系统进行分析，测得相应的保留时间和峰面积，绘制峰面积对柚皮苷或橙皮苷进样量的标准曲线，得到相应的回归方程。

在相同条件下，测定供试样品中柚皮苷和橙皮苷的峰面积，由回归方程计算得到供试样品中柚皮苷和橙皮苷的进样量，再根据柚皮苷和橙皮苷的进样量与进样体积、配制的供试样品总体积、供试样品的总质量之间的关系换算得到供试样品中柚皮苷和橙皮苷的含量。

3. 实验仪器与试剂3.1仪器Shimadzu高效液相色谱仪（SPD-10A VP紫外-可见检测器、LC-6A高压泵、CTO-10AS VP柱温箱〈含7725i型手动进样器〉），浙大智达N2000工作站；Shimadzu UV265型紫外分光光谱仪；Sartorius CP225D型电子天平；Millipore Milli-Q型纯水仪；Sartorius BP-20型pH计；Thermo MICROMAX型离心机；上海亚荣生RE-2000型旋转蒸发器；北京中兴伟业ZDHW型调温电热套。

3.2试剂乙腈为色谱纯；柚皮苷和橙皮苷对照品（Dr. Ehrenstorfer公司提供）；其余试剂均为分析纯。

超高效液相色谱法测定柑橘果肉中四种植物性内源激素的含量

第５１卷第１期
２２年１月０１
湖北农业科学
ＨｕｅＡｇｉｕｔｒｌｃｅｃｓｂｉｒｌａＳｉｎｅｃｕ
Ｖ０．１Ｎｏ１Ｉ５．
Ｊｎ，０２ａ．２１
超高效液相色谱法测定柑橘果肉中四种植物性内源激素的含量
蒋艳芳，岛平，黄陈秋红，黄艳
ＪＡＮＹｎｆｎ，ＡＮＤａ－ｉｇＣＮＱｉ－ｏｇＨＵＧａＩＧａ－ａｇＨＵＧｏｐｎ，ＨＥｕｈｎ，ＡＮＹｎ
（ｕｎｘｅｔｒｆｒＡａｓｎｅｔＲｓａｃＧａｇｉＣｎｅｏｎｌｉａｄＴｓｅｅｒｈ，Ｎａｎｎ３０２，Ｃｉａｙｓｎｉｇ５０２ｈｎ）
Ａｂｔａｔｅｒｎｔｎｏｆｒｅｄｇｎｕｏｏｅｕｈａｅｔ（Ｔ，ｇｂｒｌｎ（Ａ）ｎｏｅａｅｃａｉ（Ａｓｃ：ＤｔｍｉａｏｆｏｎｏｅｏｓｈｒｎｓｓｃｓｚａｎＺ）ｉｅｅｉＧ，ｉｄｌｃｔｃｒｅｉｕｍｉｂｌｉｄＩＡ）ａｄｎａｓｉｃａｉ（ＢｂｃｓｃｄＡＡ）ｗｓｐｏｅｄｄｂＰＣｈｅｈｄｕｅ８ｃｌｍ，ａｄａｏｔｄｔｅｇａｉｎｅｔｎｍｅｏｉｉａｒｃｅｅｙＵＬ．ＴｅｍｔｏｓｄａＣｏｕｎｎｄｐｅｈｒｄｅｔｌｉｔｄｗｔｕｏｈｈ
ｍｅｈｎｌ０１ａｅｉｃｄａｂｌｈｓｎｈＵＶｅｅｔｎａｅｅｇｈｗａ６ｍ．ａｄｆｗｒｔｓ．２ｍＬｍｉ．ｔａｏ一．％ｃｔａｉｓｍｏｉｐａｅａｄｔｅｃｅｄｔｃｉｗｖｌｎｔｓ２２ｎｏｎｏａｅｗａ０２ｌ／ｎＴｅａｉｒｔｎｕｖｏＺｗｓｉｅｒｅｗｅｎ．４ｇｍＬｎ０３ｇｍＬ，Ｒｗａ０９９５，ｔｅｖｒｇｒｃｖｒｓｈｃｌｂａｉｃｒｅｆＴａｌａｂｔｅ０１／ａｄ．８ｉ／ｏｎｘｓ．９ｈａｅａｅｅｏｅｙｗａ

高效液相色谱法测定浓缩果汁中5种可溶性糖

化学分析计量CHEMICAL ANALYSIS AND METERAGE第28卷，第1期2019年1月V ol. 28，No. 1Jan. 201991doi ：10.3969／j.issn.1008–6145.2019.01.022高效液相色谱法测定浓缩果汁中5种可溶性糖师源，何强，李莹，孔祥虹［西安海关（原陕西出入境检验检疫局），西安　710068］摘要　建立同时测定浓缩果汁中木糖、果糖、葡萄糖、蔗糖和麦芽糖的高效液相色谱–蒸发光散射检测方法(HPLC–ELSD)。

样品采用乙腈–水（50∶50）稀释，用酰胺键合色谱柱BEH Amide 分离，蒸发光散射检测器检测，在10 min 内完成木糖、果糖、葡萄糖、蔗糖、麦芽糖的分离。

浓缩果汁中5种可溶性糖的质量浓度在0.1～2.0 mg ／mL 与色谱峰面积均呈线性关系，相关系数为0.991 0～0.993 1，检出限为0.23%~0.98%，样品加标回收率为88.6%～104.3%，测定结果的相对标准偏差为2.2%～6.3%（n =6）。

该方法快速、准确，可作为浓缩果汁中糖含量的质量控制方法。

关键词　高效液相色谱法；浓缩果汁；可溶性糖中图分类号：O657.7 文献标识码：A 文章编号：1008–6145(2019)01–0091–04Determination of 5 kinds of soluble sugars in concentrated juice by HPLCSHI Yuan, HE Qiang, LI Ying, KONG Xianghong［Xi ’an Customs (Shaanxi Entry-Exit Inspection and Quarantine Bureau)， Xi ’an 710068, China ］Abstract A HPLC–ELSD method was developed for the simultaneous determination of xylose, fructose, glucose, sucrose and maltose in concentrated juice. The sample was diluted with acetonitrile–water (50∶50), separated on the amide bond chromatographic column BEH Amide and determined by ELSD. Xylose, fructose, glucose, sucrose and maltose were separated in 10 min. Under the optimal conditions, the calibration curves of 5 kinds of soluble sugars were linear in the range of 0.1–2.0 mg ／mL with the correlation coefficients of 0.991 0–0.993 1. The detection limits were 0.23%–0.98%. The recoveries for all the analytes were 88.6%–104.3%, and the relative standard deviations were 2.2%–6.3% (n =6). With the advantages of high speed and accuracy, the method is suitable for the quality control of sugars in concentrated juice.Keywords HPLC; concentrated juice; soluble sugars浓缩果汁指采用物理方法从原果汁中除去一定比例的天然水分，把原果汁浓缩，糖含量较高的具有果汁应有特征的制品［1–3］。

HPLC法测定分析橘子中游离糖组成与含量

ｏｒａｎｇｅ，ｃｏｍｍｏｎｏｒａｎｇｅｉｓｂａＳｉｃａｌｌｙｔｈｅｓａｍｅ，ｍｏｓｔｌｙｌｏｗｅｒｔｈａｎ１％，ｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｆｒｅｅｓｕｇａｒｉｎｓｍａｌｌｏｒａｎｇｅＷａＳ
ｏｂｖｉｏｕｓｌｙｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｆｏｒｍｅｒ，ａｎｄｔｈｅｃｏｎｔｅｎｔｏｆｓｕｃｒｏｓｅｉｓｓｅｖｅｒａｌｔｉｍｅｓｈｉｇｈｅｒｔｈａｎｔｈａｔｏｆｔｈｅｆｏｒｍｅｒ．
ＳＵＮＪｉａ－ｊｕａｎ，ＬＶＤｏｎｇ－ｄｏｎｇ（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＣｈｅｍｉｓｔｒｙａｎｄＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｒｉｎｇ，ＸｉａｎｙａｎｇＮｏｒｍｏｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉａｎｙａｎｇ７１２０００，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：ＴｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｏｆｆｒｅｅｓｕｇａｒｉｎｏｒａｎｇｅｗａｓｄｅｔｅｒｍｉｎｅｄｂｙＨＰＬＣ．Ｔｈｅｅｘｐｅｒｉｍｅｎｔａｌｃｏｎｄｉｔｉｏｎｓ
化学工程师ＣｈｅｍｉｃａｌＥｎｇｉｎｅｅｋｉ．２３－１１７１／ｔｑ．２０１８０９２３
耩测
ＨＰＬＣ法测定分析
试
２０１８年第ｏ９期
孑Ｊ、家娟，吕东东
（咸阳师范学院化学与化工学院。陕西咸阳７１２０００）
摘要：用高效液相色谱法测定分析橘子中游离糖的组成，用氨基色谱柱为分析柱，柱温５０＂Ｃ，流动相为乙腈一超纯水体积比为８０：２０，流速为ｌｍＬ·ｍｉｎ～，进样体积为２０１￣Ｌ，检测器漂移管温度为３９℃，载气为Ｎ：，压力为０．３５ＭＰａ时分离清晰，峰值单一。分析结果表明，春橙中果糖、葡萄糖、蔗糖的含量分别为：０．７３％、０．４８％、１．０６％；橄榄橙中果糖、葡萄糖、蔗糖含量分别为：０．９８％、０．９３％、０．８１％；普通橘子中果糖、葡萄糖、蔗糖含量分别为：０．６９％、０．８８％、０．９１％；小橘子中果糖、葡萄糖、蔗糖含量分别为：２．５３％、２．１３％、６．３２％。从以上结果可以看

高效液相色谱法快速测定柑橘果皮中8种类黄酮

高效液相色谱法快速测定柑橘果皮中8种类黄酮作者：温雅婷来源：《当代化工》2017年第06期摘要：建立同时测定柑橘果皮中8种类黄酮（圣枸橼苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、香风草甙、柚皮芸香甙、柚皮素、橙皮素）的高效液相色谱法。

样品经甲醇-丙酮（70：30）混合溶液提取，以甲醇-0.2%乙酸水溶液为流动相，采用梯度洗脱，二极管阵列检测器检测。

在线性范围为0.5～200 mg/L时，8种类黄酮的峰面积与浓度呈现良好的线性關系。

相关系数为0.999 6 ～ 0.999 8，在三个不同的添加水平条件下，回收率为85.0%～95.7%，相对标准偏差为1.32%～4.83%，方法检出限为0.2～0.8 mg/L，方法定量限为0.8～3.0 mg/L。

该方法操作简便，成本低，重现性好，准确度高，是测定柑橘果皮中类黄酮的有效方法。

关键词：柑橘果皮；类黄酮；高效液相色谱；快速测定中图分类号：TS255；TQ283 文献标识码： A 文章编号： 1671-0460（2017）06-1260-03 Rapid Determination of Eight Kinds of Flavonoids in Citrus Peelby High Performance Liquid ChromatographyWEN Ya-Ting（Guangzhou Quality Supervision and Testing Institute， National Centre for Quality Supervison and Testing of Processed Food （Guangzhou）， Guangzhou Guangdong 511447，China）Abstract： A high Performance Liquid Chromatography（HPLC） method was built for determination of 8 flavonoids in citrus peels （stcitrate glycosides， naringin， hesperidin，neohesperidin， didymin， narirutin， naringenin， hesperetin）. Samples were extracted by methanol-acetone （70：30）， then separated with methanol-0.2% acetic acid solution by gradient elution， finally detected by diode array detector. The results showed that，when the linear range was 0.5～200 mg/L， the concentrations of all compounds exhibited good linear relationship with peak areas， the correlation coefficient was from 0.999 6 to 0.999 8. The recoveries were 85.0%～95.7%， the relative standard deviation was 1.32%～4.83%， the method detection limit was 0.2～0.8 mg/L， the quantitative limit was 0.8～3.0 mg/L. This method is simple， low cost， good reproducibility and high accuracy and suitable for the determination of flavonoids in citrus peel.Key words： Citrus peel； Flavonoid； HPLC； Rapid determination类黄酮又称黄酮类化合物，是指基本母核为2-苯基色原酮类化合物，同时是植物重要的一类次生代谢产物，它以结合态（黄酮苷）或自由态（黄酮苷元）形式存在于水果、蔬菜、豆类和茶叶等许多食源性植物中[1]。

高效液相色谱法测定果汁和果蔬中柑橘红2号染料

高效液相色谱法测定果汁和果蔬中柑橘红2号染料陈毓芳;林海丹;李为鹏;谢玉珊;邹志飞【期刊名称】《理化检验-化学分册》【年(卷),期】2011(047)005【摘要】应用高效液相色谱法测定果汁、果蔬中柑橘红2号染料的含量。

样品用丙酮-正己烷(1+3)混合溶剂提取，提取液于45℃蒸发至干。

用甲酸-乙腈(0.5+99.5)溶液(经正己烷饱和)溶解残渣，正己烷脱脂。

以Agilent TC C18色谱柱为分离柱，以乙腈与甲酸(0.1+99.9)溶液按体积比92比8混合作为流动相，用二极管阵列检测器在波长508 nm处进行测定。

柑橘红2号染料的质量浓度在0.25～10.0 mg·L-1范围内与其峰面积呈线性关系，测定下限(10S/N)为0.1 mg·kg-1。

以果汁、鲜橙和胡萝卜样品为基体，加入3种不同浓度水平的柑橘红2号标准溶液做回收试验，测得回收率在96.3％～104.0％之间，相对标准偏差(n=6)在1.0％～3.6％之间。

【总页数】3页(P536-538)【作者】陈毓芳;林海丹;李为鹏;谢玉珊;邹志飞【作者单位】广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，广州,510623;广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，广州,510623;广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，广州,510623;广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，广州,510623;广东出入境检验检疫局检验检疫技术中心，广州,510623【正文语种】中文【中图分类】O652.63【相关文献】1.超高效液相色谱法测定脐橙中橘红2号和苏丹红 [J], 鄢兵;张云伟;胡海山;赵淑娥;芦慧2.高效液相色谱法测定橘红丸及蜂蜜中糖的含量 [J], 谢强胜;李启艳;王坤;刘春霖3.超高效液相色谱-串联质谱法测定脐橙中橘红2号染料 [J], 胡莉;雷绍荣;郭灵安4.超高效液相色谱-电喷雾串联四极杆质谱法检测果汁和葡萄酒中的27种工业染料[J], 赵珊;张晶;杨奕;邵兵5.超高效液相色谱-串联质谱法测定食品中柑橘红2号和苏丹红Ⅰ～Ⅳ染料 [J], 张艳侠;尹丽丽;薛霞;公丕学;别梅;王骏;郑文静;刘艳明因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高效液相色谱法测定柑橘汁中类胡萝卜素

高效液相色谱法测定柑橘汁中类胡萝卜素
胡建中;王可兴;潘思轶
【期刊名称】《食品科学》
【年(卷),期】2006(027)012
【摘要】用正己烷、丙酮、乙醇混合溶剂提取宽皮柑橘大叶尾张中类胡萝卜素,10%KOH的甲醇溶液皂化12 h,比较了hypersilODS2和YMCC30两种不同的色谱柱的分离效果.结果表明C30色谱柱分离效果优于hypersilODS2色谱柱.通过类胡萝卜素典型的特征吸收峰,结合在线的PAD检测器,初步判断在C30色谱柱分离的类胡萝卜素有18种.
【总页数】3页(P634-636)
【作者】胡建中;王可兴;潘思轶
【作者单位】华中农业大学食品科学技术学院,湖北,武汉,430070;华中农业大学食品科学技术学院,湖北,武汉,430070;华中农业大学食品科学技术学院,湖北,武
汉,430070
【正文语种】中文
【中图分类】TS2
【相关文献】
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高效液相色谱法同时测定柑橘果实中18种类黄酮的含量

高效液相色谱法同时测定柑橘果实中18种类黄酮的含量张元梅;周志钦;孙玉敬;沈妍;钟烈洲;乔丽萍;叶兴乾【期刊名称】《中国农业科学》【年(卷),期】2012(045)017【摘要】[目的]建立一种高效液相色谱法同时测定柑橘果实中18种类黄酮(圣草次苷、二氢槲皮素、芸香柚皮苷、柚皮苷、橙皮苷、新橙皮苷、野漆苷、槲皮苷、圣草素、香峰草苷、枸橘苷、柚皮素、木犀草素、山奈酚、香叶木素、橙黄酮、川陈皮素、橘皮素)的含量.[方法]色谱柱为ZORABX SB-C18(4.6 mm×250 mm,5μm),流动相为甲醇-甲酸-水,梯度洗脱,流速为0.7 mL·min-1,柱温25℃,检测波长黄烷酮为283 nm、黄酮和多甲氧基黄酮为330 nm、黄酮醇为367 nm.[结果]18种类黄酮在42 min内完全分离,线性范围为62.4-960 mg·L-1(r=0.9996-1.0000),定量限为0.05-0.133 μg·mL-1,回收率为88.70％-104.76％,相对0.33％-3.05％(n=6).[结论]该方法简便、快速、准确、可靠,适合柑橘果实中18种类黄酮的含量测定.【总页数】8页(P3558-3565)【作者】张元梅;周志钦;孙玉敬;沈妍;钟烈洲;乔丽萍;叶兴乾【作者单位】西南大学园艺园林学院,重庆400716;西南大学园艺园林学院,重庆400716;浙江大学生物系统工程与食品科学学院,杭州310029;浙江大学生物系统工程与食品科学学院,杭州310029;浙江大学生物系统工程与食品科学学院,杭州310029;浙江大学生物系统工程与食品科学学院,杭州310029;浙江大学生物系统工程与食品科学学院,杭州310029【正文语种】中文【相关文献】1.黄皮果中总黄酮含量的测定及其黄酮种类的鉴别 [J], 钟秋平;林美芳2.高效液相色谱法快速测定柑橘果皮中8种类黄酮 [J], 温雅婷3.高效液相色谱法测定不同品种石榴皮中5种类黄酮的含量 [J], 孟新涛; 魏健; 许铭强; 李德华; 谭归; 朱丽娜; 邵文志; 潘俨4.田七中总黄酮含量的测定及其黄酮种类的初步鉴别 [J], 黄儒强;郭子杰;邓伟玲;陈城超;黄业博;黄奕华;邱扬5.高效液相色谱法同时测定不同来源柑橘幼果中10种类黄酮化合物和香豆素类化合物 [J], 岳超;赵维良;郭增喜;刘柱;张文婷因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

高效液相色谱法测定柑橘汁中的柠檬苦素和柚皮苷

高效液相色谱法测定柑橘汁中的柠檬苦素和柚皮苷陈静;高彦祥;吴伟莉;李绍振【期刊名称】《色谱》【年(卷),期】2006(24)2【摘要】柑橘汁的苦味主要是由于柚皮苷和柠檬苦素的存在所致,其含量的测定可用于控制柑橘类果汁的质量.采用高效液相色谱法在KR100-5C18(4.6 mmi.d.×250 mm,5 μm)上,分别以乙腈-四氢呋喃-水(体积比为17.5∶17.5∶65)和甲醇-冰醋酸-水(体积比为40∶1∶59)为流动相(流速均为1 mL/min),在207 nm和283 nm检测波长下分别测定了柠檬苦素和柚皮苷.实验结果表明,柠檬苦素在1.00～50.00 mg/L时线性关系良好(r=0.999 2),检出限为0.07 μg,平均加标回收率为98.69% ,相对标准偏差(RSD)为2.5% ;柚皮苷在20.00～160.00 mg/L时线性关系良好(r=0.998 8),检出限为0.14 μg,平均加标回收率为100.13% ,RSD为1.5% .用该法检测柑橘汁样品中的柠檬苦素与柚皮苷,方法简便、快速、准确.【总页数】4页(P157-160)【作者】陈静;高彦祥;吴伟莉;李绍振【作者单位】中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京,100083;中国农业大学食品科学与营养工程学院,北京,100083;北京汇源饮料食品有限责任公司,北京,101305;北京汇源饮料食品有限责任公司,北京,101305【正文语种】中文【中图分类】O658【相关文献】1.高效液相色谱法测定柑橘中的柠檬苦素类似物 [J], 刘亮;戚向阳;董绪燕;李蕙蕙;刘传菊2.UPLC-MS/MS分析橘汁发酵液中柠檬苦素的变化趋势 [J], 江海;李新生;吴三桥;张志健;刘新;韩豪;高玥;彭浩;胥彦明3.高效液相色谱法测定柑橘汁中类胡萝卜素 [J], 胡建中;王可兴;潘思轶4.高效液相色谱法测定柑橘皮中柠檬苦素 [J], 徐旭耀;黄秋儿;黄惠玲5.反相高效液相色谱法测定柚皮苷纳米纤维膜中柚皮苷含量 [J], 何宜临;王璐;吴小红因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。

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190 2006, Vol. 27, No. 04
食品科学
※分析检验
高效液相色谱法测定柑橘汁糖的组成
李云康，潘思轶＊（华中农业大学食品科技学院，湖北武汉４３００７０）
摘要：研究了柑橘汁中糖组成的高效液相色谱测定方法。采用固相萃取小柱预分离干扰成分，以ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ（４．６ × ２５０ｍｍ，５μｍ）糖分析柱为固定相，８０％乙腈为流动相，柱温２５ ± ２℃。本方法的相对标准偏差０．８３％～１．７１％，标准回收率９６％～１０３％。该方法简便快速，结果准确可靠，为果汁中糖组成分析提供了一种高效快速的测定方法。关键词：高效液相色谱法；糖；柑橘汁；固相萃取
简便快速地除去色素、多酚等干扰成分。实验证明，如果样品未经固相萃取预分离，连续进样后色谱柱压明显增大，且色谱峰明显变宽（见图１）。
ｍＶ
６０５５２５０４５４０３５３０１２５２０１５
５
１０１５２０
２５３０
时间（ｍｉｎ）
１．经固相萃取ห้องสมุดไป่ตู้分离；２．未经固相萃取预分离
Fig.1
实验选择柱温分别为１６ ± ２℃、２５ ± ２℃、３３ ± ２ ℃。结果表明：温度较低时，柑橘汁中糖的保留时间长；温度较高时，保留时间短。因此实验选择室温２５ ± ２ ℃进行实验。２．３样品前处理方法研究
柑橘汁组成复杂，其中除了糖外，还含有其它干扰组分，如色素、多酚、有机酸等。色素、多酚相对于糖疏水性强，易附着在柱材料上不被流动相洗脱而降低柱效，所以在采用高效液相色谱分析进样之前要预分离这些成分。本实验采用固相萃取小柱固相萃取预分离，由于糖的亲水性极强，样品通过小柱时在柱上没有保留，而色素、多酚等相对于测定组分疏水性较强，在小柱上有保留，从而可预分离除去色素、多酚、脂类等物质。固相萃取小柱先用２ｍｌ甲醇活化，再用２ｍｌ水洗去甲醇，弃去最初的２ｍｌ滤液，收集后续的３ｍｌ滤液，用０．４５μｍ滤膜过滤，取１０μｌ进样分析，这样可
糖是柑橘汁中重要的风味成分和营养成分，准确测定柑橘汁中糖的组成对于研究柑橘汁的风味特征和加工特性很有意义。糖的测定通常采用容量法、比重法、比色法，但这些方法只能测定糖的总量，不能测定糖的组成［１～３］。气相色谱法（ＧＣ）是单糖组成分析中常用的方法，其具有分离效能高、测定快速、灵敏度高等特点。但由于糖类化合物沸点高、热稳定性低，需衍生化后才能用于ＧＣ分析，所以ＧＣ用于糖的分析时，须先将单糖通过硅烷化法或乙酰化法衍生制成相应的三甲基硅醚、糖醇醋酸酯等低沸点的衍生物，然后才能进行ＧＣ分析。由于衍生化反应操作复杂，误差较大，使ＧＣ的实际应用受到了很大限制［４］。
高效液相色谱法用于糖的组成分析时不需衍生化，操作简便，可快速、准确地分析各单糖、低聚糖和多元醇，因此近年来糖的液相色谱测定法得到了快速发展［５～７］。本实验对固相萃取和高效液相色谱法测定柑橘汁中糖组成的参数进行了优化，以建立水超声波浸取、固
相萃取预分离、高效液相色谱法测定柑橘汁中糖组成的方法。
Ｓｃｉｅｎｃｅ，ＮｏｒｔｈｗｅｓｔＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｘｉ’ａｎ７１００６９，Ｃｈｉｎａ）
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｉｎｔｈｉｓａｒｔｉｃｌｅ，Ａｌｏｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗａｓｅｘｔｒａｃｔｅｄｂｙｗａｔｅｒａｎｄｐｒｅｃｉｐｉｔａｔｅｄｂｙｅｔｈａｎｏｌ．ＴｈｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｗａｓｈｙｄｒｏｌｙｚｅｄｂｙＴＦＡ．Ａｍｅｔｈｏｄｆｏｒｔｈｅｄｅｒｉｖａｔｉｚａｔｉｏｎｏｆｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｈｙｄｒｏｌｙｓａｔｅｗｉｔｈ１－ｐｈｅｎｙｌ－３－ｍｅｔｈｙｌ－５－ｐｙｒａｚｏｌｏｎｅ（ＰＭＰ）ｗａｓｕｓｅｄｔｏｓｔｕｄｙｔｈｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎａｎｄｍｏｌａｒｒａｔｉｏｏｆｔｈｒｅｅｄｉｆｆｅｒｅｎｔｓｐｅｃｉｅｓｏｆＡｌｏｅｂｙＲＰ－ＨＰＬＣ．ＲｅｓｕｌｔｓｓｈｏｗｅｄｔｈａｔｔｈｅｍｅｔｈｏｄｏｆｕｓｉｎｇＲＰ－ＨＰＬＣｏｎｓｔｕｄｉｎｇＡｌｏｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｃｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎｉｓｓｉｍｐｌｅａｎｄｃｏｎｖｉｅｎｉｅｎｔ，ａｎｄｔｈｅＡｌｏｅｐｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓ
Ａｂｓｔｒａｃｔ：Ｄｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｉｎｏｒａｎｇｅｊｕｉｃｅｗａｓｓｔｕｄｉｅｄｂｙｈｉｇｈｐｅｒｆｏｒｍａｎｃｅｌｉｑｕｉｄｃｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ．ＳａｃｃｈａｒｉｄｅｓｗｅｒｅｅｘｔｒａｃｔｅｄｆｒｏｍｓａｍｐｌｅｓｗｉｔｈｗａｔｅｒｂｙｏｓｃｉｌｌａｔｉｏｎａｎｄｉｓｏｌａｔｅｄｂｙｓｏｌｉｄｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎｗｉｔｈＳｅｐ－Ｐａｋ－Ｃ１８ｃａｒｔｒｉｄｇｅ．Ｓｕｃｒｏｓｅ，ｇｌｕｃｏｓｅａｎｄｆｒｕｃｔｏｓｅｗｅｒｅｓｅｐａｒａｔｅｄｏｎａｎＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘＣａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅｃｏｌｕｍｎ（４．６×２５０ｍｍ，５μｍ），ｗｉｔｈ８０％ａｃｅｔｏｎｉｔｒｉｌｅｓｏｌｕｔｉｏｎａｓｍｏｂｉｌｅｐｈａｓｅ，ａｒｏｕｎｄｔｅｍｐｅｒａｔｕｒｅ２５±２℃．Ｔｈｅｒｅｌａｔｉｖｅｓｔａｎｄａｒｄｄｅｖｉａｔｉｏｎｓａｒｅ０．８３％～１．７１％ａｎｄｔｈｅｒｅｃｏｖｅｒｉｅｓａｒｅ９６％～１０３％．Ｔｈｉｓｍｅｔｈｏｄｃａｎｂｅａｐｐｌｉｅｄｔｏｔｈｅｄｅｔｅｒｍｉｎｅｓａｃｃｈａｒｉｄｅｓｃｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎｏｒａｎｇｅｊｕｉｃｅ．Ｋｅｙｗｏｒｄｓ：ＨｉｇｈＰｅｒｆｏｒｍａｎｃｅＬｉｑｕｉｄＣｈｒｏｍａｔｏｇｒａｐｈｙ（ＨＰＬＣ）；ｓａｃｃｈａｒｉｄｅ；ｏｒａｎｇｅｊｕｉｃｅ；ｓｏｌｉｄｐｈａｓｅｅｘｔｒａｃｔｉｏｎ中图分类号：ＴＳ２０７．３文献标识码：Ａ文章编号：１００２－６６３０（２００６）０４－０１９０－０３
ＤｅｔｅｒｍｉｎａｔｉｏｎｏｆＳａｃｃｈａｒｉｄｅｓＣｏｍｐｏｎｅｎｔｓｉｎＯｒａｎｇｅＪｕｉｃｅｂｙＨＰＬＣ
ＬＩＹｕｎ－ｋａｎｇ，ＰＡＮＳｉ－ｙｉ＊（ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＦｏｏｄＳｃｉｅｎｃｅａｎｄＴｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＨｕａｚｈｏｎｇＡｇｒｉｃｕｌｔｕｒａｌＵｎｉｖｅｒｓｉｔｙ，Ｗｕｈａｎ４３００７０，Ｃｈｉｎａ）
ＳｔｕｄｙｏｎｔｈｅＵｓｅｏｆＲＰ－ＨＰＬＣｉｎＡｎａｌｙｓｉｓｏｆＡｌｏｅＰｏｌｙｓａｃｃｈａｒｉｄｅＣｏｍｐｏｓｉｔｉｏｎ
ＬＩＮＸｕｅ，ＪＩＡＪｉｎｇ－ｆｅｎ，ＨＵＡＮＧＬｉｎ－ｊｕａｎ，ＷＡＮＧＺｈｏｎｇ－ｆｕ＊（ＫｅｙＬａｂｏｒａｔｏｒｙｏｆＭｉｎｉｓｔｒｙｏｆＥｄｕｃａｔｉｏｎｆｏｒＷｅｓｔｅｒｎＣｈｉｎａＲｅｓｏｕｒｃｅＢｉｏｌｏｇｙａｎｄＢｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ，ＣｏｌｌｅｇｅｏｆＬｉｆｅ
１材料与方法
１．１材料柑橘原汁：湖北望春花果汁有限公司提供。
１．２主要实验试剂水为二次蒸馏水；乙腈为色谱纯，山东禹王实业
有限公司禹城化工厂生产。蔗糖、葡萄糖、果糖，均为色谱纯。１．３实验仪器
美国ｖａｒｉａｎ公司高效液相色谱仪，包括ｐｒｏｓｔａｒ二元泵，３５０示差折光检测器，４１０自动进样器和ｐｒｏｓｔａｒ色谱工作站；固相萃取柱：ＢＯＮＤＥＬＵＴＥＣ１８ＭＴ型样品净化富集柱（１００ｍｇ／ｍｌ）；水相针式过滤器；ＡｎｋｅＴＤＬ－５－Ａ型离心机，上海安亭科学仪器厂。１．４糖标准溶液的配制
２．１流动相的选择根据糖分子都含有极性基团的特点，选用极性较大
的溶剂（如水、甲醇、乙腈等）作流动相。实验发现，对于柑橘汁中糖组成的测定，不论用哪一种单一溶剂都不能达到良好的分离效果，因此选用混合溶剂作流动相。由实验可知，以乙腈–水为流动相时，随乙腈浓度的增大，柑橘汁中糖的分离程度也相应提高；当流动相中乙腈与水的比例为８５：１５时，分离效果最佳。但分离时间较长，且峰形较差。流动相中乙腈与水的比例为８０：２０时，柑橘汁中糖的分离度较好，且分离时间较短。因此实验选择８０％乙腈作为流动相。２．２柱温对色谱分离效果的影响
收稿日期：２００５－１０－１９＊通讯作者基金项目：农业部农业结构调整重大技术研究专项（０４－０９－０３Ｂ）作者简介：李云康（１９７８－），女，硕士研究生，研究方向为农产品加工化学。
※分析检验
食品科学
2006, Vol. 27, No. 04 191
色谱柱：ＡｇｉｌｅｎｔＺｏｒｂａｘｃａｒｂｏｈｙｄｒａｔｅ分析柱（４．６ｍｍ× ２５０ｍｍ，５μｍ）；柱温：２５ ± ２℃；检测池温度：３５℃；流动相：乙腈：水＝８０：２０（Ｖ／Ｖ），真空泵脱气，经过０．４５μｍ滤膜过滤；流速：１ｍｌ／ｍｉｎ；进样体积：１０μｌ。
２结果与分析
图１固相萃取预分离对色谱峰型的影响 Effect of solid phase extraction pre-isolation on
chromatography peak shape
２．４回归方程、相关系数及检测限分别配制浓度为５、１、０．２、０．０４ｍｇ／ｍｌ的糖标
准溶液，进样后计算出不同浓度的峰面积，算出回归方程，结果见表１。从表１知，糖的线性相关系数在０．９９９０～０．９９９９之间，可以作为定量的依据。
sample(b)
样品每样取２份，其中１份加入蔗糖、葡萄糖和
192 2006, Vol. 27, No. 04
食品科学
※分析检验
ＲＰ－ＨＰＬＣ用于芦荟多糖的单糖组成研究