农药登记中的急性毒理学试验
农药登记的各类毒性试验要求(下)
化 学品或环境 因素造成遗传 毒性 的机 制主要有 ：
Ｄ Ｎ Ａ损伤 、Ｄ Ｎ Ａ修 复与 突变 、整 倍体 和非 整倍体 的形 Ｒ ｅ ｐ ａ ｉ ｒ ／ Ｕ ｎ ｓ ｃ ｈ ｅ ｄ ｕ ｌ ｅ ｄ Ｄ Ｎ Ａ Ｓ ｙ ｎ ｔ ｈ ｅ ｓ ｉ ｓ ｉ ｎ Ｍ ａ ｍ ｍ ａ ｌ Ｊ ａ ｎ
，
遗传信息改变
基 因 突 变 方 向
错义突变 无义突变 正 向 突 变 回 复 突 变
从而 出现染色体 结构异 常，成 为染色 体改变 。整数倍体改变可 以有二倍体 、三倍体或 体畸变或染色体 结构畸变 。 四倍体 。
０ Ｉ 衷化市埸Ｉ ｏ＠０农 化 行 业 资 深 媒 体 １ ８ ／ ７ ２ ６
ｌ 埸 Ｉ 农 化
木本刊特 稿 木
农药登记 的各 类毒性 试验要求 （ 下）
３ ．遗传毒性试验 （ ｇ ｅ ｎ ｏ ｔ ｏ ｘ ｉ ｃ ｉ ｔ ｙ ｔ ｅ ｓ ｔ ）
般 采 用组 合 材料 方 式，如 利用 病 毒、细 菌 、真菌 、
培 养 的哺 乳 动物 细胞 、植物 、 昆虫和 哺 乳动 物等 。
成等 。 Ｃ ｅ ｌ ｌ ｓ ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ ） ， 小 鼠斑 点试 验 （ Ｍ ｏ ｕ ｓ ｅ Ｓ ｐ ｏ ｔ
遗传 毒性造成 的后果有 多种 。体细胞 突变的后果 Ｔ ｅ ｓ ｔ ）， 小 鼠可 遗 传 易 位 试 验 （ Ｍ ｏ ｕ ｓ ｅ Ｈ ｅ ｒ ｉ ｔ ａ ｂ ｌ ｅ
农药 的遗传 毒性 目的就是 阐明农 药对人及生物体遗传 乳动物 细 胞姐 妹染 色 单体 互换 体外 试 验 （ Ｉ ｎ ｖ ｉ ｔ ｒ ｏ 物质潜在 的危 害作用 ， 建立预警机制 ， 采取干预措施 ，
确保人类健康 和生物 安全及生态平衡 。
农药使用常见风险
农药使用常见风险化学农药可有效防控各类病虫害，减少农林业损失，但也伴随着带来生态环境污染、食品安全、人类健康等问题。
化学农药的不合理使用，有可能引发安全风险，甚至导致安全事故发生。
随着生活水平的提高，健康、安全问题成为人们关注的重点，高毒、高残留和“三致”农药的使用风险不容忽视。
1 农药毒性农药毒性可分为急性毒性、亚急性毒性和慢性毒性。
（1）急性毒性指农药一次进入动物体内后，短时间引起的中毒现象，是比较农药毒性大小的重要依据之一。
根据《GB15670-1995农药登记毒理学试验方法》相关规定，农药急性毒性的分级和制定以老鼠为实验对象，对比经口、经皮和吸入药剂后，老鼠的半数死亡剂量（LD50）（见表1）作为参考依据。
（2）亚急性毒性指动物在较长时间内（一般连续投药观察3个月）服用或接触少量农药，引起的中毒现象。
（3）慢性毒性指小剂量农药长期连续使用后，在动物体内逐渐积蓄所引起的中毒现象，主要包括农药的致癌性、致畸性和致突变性（三致）。
2 高毒农药使用风险常见高毒农药有呋喃丹、久效磷、甲胺磷、磷化铝等。
由表1可知，高毒农药经口的LD50值为5～50mg·kg-1，即成人（体重约60kg）摄入约300mg就可能导致死亡；经皮和吸入的LD50值为20～200mg·kg-1，在喷药的过程中，操作者常由于防护不到位或施药设备“跑冒漏滴”导致吸入农药或浸湿衣物而接触皮肤，随即可出现头晕、恶心、呕吐等中毒症状，严重时会导致昏迷，甚至死亡。
3 高残留农药使用风险高残留农药主要指在生物体内或环境中难以降解、残留性强的一类农药。
该类农药可长时间存在于植物、土壤、水体、动物体中，并伴随生物富集效应，有毒物质随着接触时间的延长而在体内不断累积，引起慢性中毒，一定量时可造成人体细胞或脏器机能受损，导致疾病的发生，甚至影响到下一代。
4 “三致”农药使用风险近年来，致癌性、致畸性和致突变性越来越受到人们的重视，据世界卫生组织（WHO）国际癌症研究机构报道，2018年癌症新增人数为1810万，死亡人数达960万，预计将成为全球头号“杀手”。
急性毒性试验
试验步骤和操作要点
1
试验设计
2
确定试验物质的给药途径、剂量和
暴露时间，合理设计试验组和对照
组，以确保试验数据的可比性。
3
数据分析
4
收集和整理试验数据，进行统计分 析和结果解读，评估化学物质的毒
性潜力和危害等级。
试验准备
准备动物和试验物质，并遵守试验 室安全和伦理规定，保证试验过程 的准确性和可靠性。
试验操作
按照设定的方案进行实验操作，严 格控制剂量和暴露时间，记录动物 的毒性反应和不良效应。
试验结果的解读和评价标准
急性毒性试验结果一般以LD50值为指标进行解读，在国际上有一系列评价标准，用于评估化学物 质的毒性程度和危害等级。
试验的局限性和改进方向
1 动物模型的局限性 2 测试方法的改进
动物模型不能完全代 表人类生物反应，因 此在试验结果的解读 和评估时需要谨慎考 虑。
急性毒性试验
急性毒性试验是一种评价化学物质对生物体的短期毒性潜力的试验方法，通 过暴露一定剂量的物质给实验动物，观察其对动物的毒性反应以及产生的不 良效学物质对生物体的毒性程度及其可能产生的危害， 为了规范评估过程，国际上制定了一系列的试验方法和评价标准。
常用的试验方法和原理
需要进一步发展和改 进更精准、准确的试 验方法，以提高试验 结果的预测性和可比 性。
3 替代和替补模型
发展替代和替补模型， 例如体外细胞实验和 计算机模拟，以减少 对动物实验的依赖。
试验的应用领域和意义
急性毒性试验在化学品安全评估、药物研发、环境保护等领域具有重要意义， 为保障人类健康和环境安全提供科学依据。
LD50试验 通过确定半数致死剂量（LD50）来评估化学物质的毒性，以毫克/ 千克体重作为单位。 急性口服毒性试验 通过将一定剂量的物质通过口服给予 动物，观察其对动物的毒性反应，用于评估化学物质的毒害程度。 急性皮肤 毒性试验 通过将一定剂量的物质涂抹于动物皮肤上，观察皮肤反应和毒性症 状，用于评估化学物质的皮肤刺激和毒害作用。
微生物农药毒理学试验准则
微生物农药毒理学试验准则微生物农药的毒理学试验准则主要用于评估和确定微生物农药对生物体的毒性效应，帮助规范微生物农药的使用和管理。
本文将从试验对象、试验设计、试验指标等多个方面介绍微生物农药毒理学试验准则。
一、试验对象
微生物农药毒理学试验主要针对植物和动物两种生物进行，其中动物试验对象通常包括小鼠、大鼠、兔子等哺乳动物，而植物试验对象主要包括水稻、小麦等农作物。
二、试验设计
微生物农药毒理学试验的设计有一定的规范要求，以确保试验结果的可靠性和稳定性。
首先，需要确定试验的剂量范围，采用不同浓度的微生物农药进行试验。
其次，需要确定试验时间和观察指标，比如观察植物生长情况、动物行为表现、生物体内毒素浓度等。
三、试验指标
微生物农药毒理学试验的指标主要包括对试验对象的致死性、急性毒性、亚急性毒性、慢性毒性等方面的评估。
对于植物试验对象，可以观察其生长情况、叶片变化、果实质量等指标。
对于动物试验对象，可通过观察其行为、检测其器官功能等进行综合评估。
四、试验结果分析
在微生物农药毒理学试验中，对试验结果的准确分析至关重要。
可以通过比较各组试验结果的差异，进行统计学分析，得出微生物农药在不同浓度下对试验对象的毒性效应。
同时，还需要综合考虑试验对象的生理特征、环境因素等其他因素，以确保分析结果的准确性。
综上所述，微生物农药毒理学试验准则是保证微生物农药安全使用的重要依据。
通过规范试验对象、试验设计、试验指标以及结果分析，能够有效评估微生物农药的毒性效应，为农业生产提供科学依据。
在进行试验过程中，需要严格遵守准则要求，确保试验结果的可靠性和准确性。
农药登记毒理学急性吸入毒性试验
农药登记毒理学急性吸入毒性试验1 范围GB/T15670的本部分规定了急性吸入毒性试验的基本原则、方法和要求。
本部分适用于为农药登记而进行的急性吸入毒性试验。
2 规范性引用文件下列文件对于本文件的应用是必不可少的。
凡是注日期的引用文件，仅注日期的版本适用于本文件凡是不注日期的引用文件，其最新版本（包括所有的修改单）适用于本文件。
GB14925实验动物环境及设施农药登记资料规定中华人民共和国农业部令第10号（2007年12月8日）3 术语和定义列术语和定义适用于本文件。
3.1急性吸入毒性acuteinhalationtoxicity实验动物在短时间内（指24h 或24h 之内，通常采用4h ）—次连续吸入较高浓度的受试物（气体、蒸汽、气溶胶或颗粒状物）出现的健康损害效应。
3.2吸入剂量inhaleddose动物单位体重所吸入受试物的量，即式中：。
伍吸入剂量，单位为毫克每千克（mg/kg ）；c ——吸入气中受试物的浓度，单位为毫克每升（mg/L ）；t 吸入持续时间，单位为分（min ）；R 呼吸频率，单位为次每分（次/min ）；T v ——受试动物的潮气量，单位为升每次（L/次）；a —与受试物反应性和溶解性相关的保持系数；W ——体重，单位为千克（kg ）。
3.3半数致死浓度medianlethalconcentration （LC 50）在规定的时间内，经呼吸道一次连续吸入受试物后，引起实验动物总体中半数死亡的毒物的统计学浓度，以单位体积空气中受试物的质量（mg/m 3）来表示。
3.4剂量-反应关系dose-responserelationship 剂量与特定效应的发生率间的关系。
3.5Dih ctRT y a W (1)空气动力学直径aerodynamicequivalentdiameter，AD将不同形状和密度的气溶胶颗粒与不同直径的标准单位密度（1.0g/cm3）球形颗粒相对比，当它们的终端沉降速度相同时，就以该标准球形颗粒的直径表示此气溶胶颗粒的直径，并称之为该气溶胶颗粒的空气动力学直径，其计量单位为微米（gm）o3.6质量中值空气动力学直径massmedianaerodynamicdiameter，MMAD由空气动力学直径大小不一的颗粒组成的气溶胶样品中，小于和等于某一空气动力学直径（例如5ym）的颗粒占气溶胶样品总质量或总重量50%时，则该气溶胶颗粒空气动力学直径即为此气溶胶样品的质量中值空气动力学直径（5ym）o3.7几何标准差geometricstandarddeviation，GSD用以描述气溶胶颗粒粒径范围的无量纲数。
农药登记毒理学试验单位管理办法
附件：农药登记毒理学试验单位管理办法第一章总则第一条为做好农药登记管理工作，保证农药登记毒理学试验的准确性和科学性，根据《农药管理条例实施办法》、《农药登记资料要求》等有关规定，制定本办法。
第二条本办法所指农药登记毒理学试验是为评价农药毒理学安全性而进行的试验(详见附件1)。
第三条农业部农药检定所负责农药登记毒理学试验单位考核、委托和管理的具体工作。
具备相应资质的单位方可承担农药登记毒理学试验。
具备A级资质的单位可以承担附件1中全部试验，具备B级资质的单位可以承担附件1中第一、二部分试验，具备C级资质的单位只能承担附件1中第一部分试验。
第二章申请与受理第四条具备下列条件的试验机构可以自愿向农业部农药检定所申请承担农药登记毒理学试验：（一）具有独立法人资格或得到独立法人的授权，具备承担农药登记毒理学试验工作条件的科研和教学等单位。
（二）农药登记毒理学试验单位的实验室应符合《农药毒理学安全性评价良好实验室规范》（NY/T 718）的相关要求。
（三）申请承担农药登记毒理学试验的单位技术人员应熟悉《农药登记毒理学试验方法》(GB 15670)。
第五条申请承担农药登记毒理学试验的单位应提交下列资料：（一）单位概况和实验室基本情况；（二）实验设施；（三）技术负责人、质量负责人及主要试验人员情况，包括职称、学历、专业、培训情况、工作能力和简历等；（四）动物使用和动物实验室合格证书；（五）相关仪器设备清单及使用情况；（六）近五年相关工作总结和典型试验报告；（七）管理制度及其它参考资料；（八）自身诚信情况申明。
第六条农业部农药检定所负责农药登记毒理学试验单位申请资料的受理和初审。
对资料齐全的，组织专家考核组进行技术考核（包括资料审查和现场评审）。
对资料不全或不具备申请条件的，退回申请，书面通知申请单位并说明理由。
第三章考核第七条农业部农药检定所聘请相关领域有资质的技术人员建立农药登记毒理学试验单位考核专家库。
农业部农药检定所根据考核领域从专家库中抽取专家组成考核组进行技术考核，与被考核机构有利害关系的考核人员应当回避。
农药登记毒理学试验方法
农药登记毒理学试验方法农药是一种用于保护农作物、畜牧、林业以及家庭中害虫、草药和微生物的化学物质。
由于农药的使用会产生潜在的环境和人类健康风险，因此，对于农药的授权需要进行严格的评估和审批过程。
其中，毒理学试验方法是评估农药对生物毒性的主要工具之一。
毒理学试验方法是基于生物学理论和毒性机制的，可分为急性毒性和慢性毒性试验。
急性毒性试验通过直接暴露测试对象（如实验室动物和细胞）来评估化合物在短时间内对生物的影响。
慢性毒性试验则更关注长期使用农药对人类和环境的影响，因此需要更长的试验时间。
以下是几种常用的毒理学试验方法：1.急性毒性试验急性毒性试验一般应用于生物体内某些口服、吸入或皮肤接触的化学物质，试验结果可以产生毒性分类标准和确定最大容忍剂量（MDT），从而确认农药使用的安全性。
目前国际通行的急性毒性试验是斯图尔特法。
斯图尔特法是使用实验动物体内的Lethal Dose（LD）作为毒性的指标，其安全系数根据不同物种和试验组进行调整。
2.染色体畸变试验染色体畸变试验通过评估农药对动植物细胞核DNA的影响来评估农药的致突变效应。
这些效应包括染色体片段、染色体断裂、染色体畸变等。
该试验是在实验室中使用动植物细胞的分裂期进行的。
3.遗传毒性试验遗传毒性试验通过评估农药对DNA的影响来评估其致突变效应。
与染色体畸变试验不同，遗传毒性试验可以检测出突变后DNA序列的改变。
此次试验一定会使用实验动物进行。
4.慢性毒性试验慢性毒性试验的设计是为了持久性接触或摄入导致的毒性。
gavage试验和繁殖试验是用于进行此类试验的一种环节。
长期饮用毒性实验是毒理学试验中使用的最常见的方法之一。
它的主要目的是评估长时间使用农药对生物的健康影响。
这种试验可以进行几个月甚至几年的长期暴露。
总体而言，农药的毒理学试验方法是在安全性评估中不可避免的一环。
通过这些试验，我们可以更好地理解和掌握该物质的潜在危险。
然而，毒理学试验环节需要仔细设计，以使试验结果有实用意义，同时避免动物的不必要痛苦和伤害。
农药登记中的特种毒理学要求
欧盟对所有原药登记都要求长期毒性试验 （ 也可 以 胚胎 的形态结构和功能发育完成的整个过程 。
称 为慢性毒性试验 ）和致癌试验。这些试验 的 目的是 ：
确定 长期接触原药造成的毒害作用 ； 确定毒作用器官 （ 有关的话 ）； 确定剂量 一反应 关系 ； 确定 毒作用症状 的变化和可观察到的表现 ；
ｇ ｎ ｒｔ ｎ ｓ ｄｅ ）和发育毒性试验 。 ｅ ｅａｉ ｔ ｉｓ ｏ ｕ 多代试验 的 目的是提供充足的信息来说 明如 下问
题：
同样 ，致癌试验 的 目的是 ： 确定 接触原药可能造成 的致癌作用 ； 确定导致肿瘤的动 物种和靶器官特异性 ；
确定剂量 ～反应关系 ；
Ｐａ ｔ ｒ Ｂ。
经毒性的作用 。迟发性神经毒性的机理 尚不清楚。 发育神 经 毒性 （ｅ ｅｏ ｍｅｔｌ ｎ ｕ ｏｏ ｉｉ ） ｄｖ ｌｐ ｎａ ｅ ｒｔｘｃｔ ｙ
发育毒性试验的 目的是 ：
对 非遗 传 毒 性 的致 癌 物 ，确 定 不 引 发有 害 作 用
（ｄ ｅｓ ｆ ｃ）的 最大剂量 （ ａ ｖ ｒｅ ｅ ｅｔ ｆ 阈剂量 ）。
（ ）确定供试原药对生殖 的直接和 间接影响 ； １ （ ）确定对一般毒性 （ ２ 在短期和慢性试验 中发现的 ）
欧盟要求 的试验方法为 ：Ｄ ｒｃ ｖ ７ ３ ２ Ｅ Ｃ， 是否有加强作用 ； ｉ ｔ ｅ ８／ ０／ Ｅ ｅｉ Ｐ ｒ Ｂ，即慢性 毒性试验 、致癌试 验或者慢性 ／致癌 ａｔ 联 合试验。 （ ）确 定 剂 量 ～反 应 关 系 ，确 定 毒 害症 状 （ｏ ｉ ３ ｔｘｃ ｓｎ ｉ ）和表现 （ ｎｆｓａｉｎ ｇ ｍａ ｉ ｔｔ ）的变化 ； ｅ ｏ
对 精子运动性 （ ｔ ｉ ｍｏｉｔ ｌｙ）、迁 移率 （ ｂｌｙ ｍｏ ｉｔ ） ｉ
47种含嘧菌酯农药急性经口、经皮毒性探讨
47种含嘧菌酯农药急性经口、经皮毒性探讨目的比较国内生产的47种含嘧菌酯农药急性毒性结果，为此类农药的毒理学安全性评价以及安全使用提供参考。
方法依据GB 15670-1995《农药登记毒理学试验方法》相关要求进行检测。
结果大鼠对含嘧菌酯农药中毒症状以中枢神经系统与躯体感觉和运动系统异常为主。
5种农药大鼠急性经口毒性属中毒或低毒类，42种属低毒或微毒类。
42种农药大鼠急性经皮毒性属低毒，1种为微毒。
复配制剂中毒类比例高于嘧菌酯原药/单一制剂。
结论本实验室检测的国内生产的含嘧菌酯农药多为低毒农药，但部分复配制剂因可能存在联合毒性，安全性需进一步研究。
标签：嘧菌酯；急性毒性；LD50；复配制剂嘧菌酯（Azoxystrobin），属于strobilurins类杀菌剂，具有保护、治疗、铲除、层移和内吸作用，其杀菌原理为通过结合bc1复合物中细胞色素b的Qo位点，阻止复合物Ⅲ中bc1间的电子传递，从而阻止ATP的产生，干扰真菌内的能量循环，其杀菌谱广，对几乎所有真菌（子囊菌纲、担子菌纲、卵菌纲和半知菌纲）病害有很好的活性。
因其专利于2010年到期，国内申请原药和制剂登记企业逐年增加，为降低其抗性风险及扩大防治范围，嘧菌酯又多以复配制剂的形式面市，其使用安全性更值得关注[1]。
本实验室于2010年～2013年对47种含嘧菌酯农药进行急性毒性检测并对检测结果进行整理，以期为该类农药的毒理学安全性评价以及安全使用提供参考。
1 资料与方法1.1样品农药47种，由国内多家生物技术有限公司及农药生产厂家提供。
1.2实验动物SD大鼠，健康成年，体重180～220g，由长沙市天勤生物技术有限公司提供，生产许可证号：[SCXK（湘）2009-0012]。
1.3方法依据GB 15670-1995《农药登记毒理学试验方法》相关要求进行[2]。
1.4毒性分级标准依据GB 15670-1995《农药登记毒理学试验方法》/中华人民共和国农业部2007年发布的《农药登记资料规定》中”产品毒性分级标准”进行评定[3]。
农药安全性毒理学评价程序
农药安全性毒理学评价程序本程序规定了农药安全性毒理学评价的原则、项目及要求。
本程序适用于在我国申请登记及需要进行安全性评价的各类农药。
一、总则1 在评价农药的安全性时，毒理学方面应考虑以下诸因素1.1 化学名称，化学结构1.2 产品组成（有效成份含量及其他成份含量）1.3 理化性质外观、比重、蒸气压、溶解度、乳化性、悬浮性、相混性、熔点、沸点等。
1.4 一般毒性试验和特殊毒性试验项目，依此划分为四个阶段，可根据申请登记的农药类别及有规定进行相应试验。
1.5 每人每日容许摄入量的规定根据动物试验中最大无作用计量，按下列公式计算每人每日容许摄入量（ADI)mg/kg体重=最大无作用剂量（mg/kg)/安全系数。
根据农药的性质及其他因素确定安全系数，一般为100。
每人每日容许从食品中摄入的农药量=ADI(mg/kg)x60(人体标准体重,kg) 最大残留限量(MRL) = ADIx60/1.2（每人每日食品摄入总量）x某种食品所占比例。
如每月食品结构为：谷物12.5公斤，薯类3公斤，干豆1.25公斤，食油0.75公斤，糖类0.5公斤，肉禽类2公斤，鱼0.75公斤，蛋1.0公斤，奶0.75公斤，蔬菜10.0公斤，水果1.5公斤，总计34公斤，每人每日总摄入量则为1.13公斤。
各种食品所占比例为：谷物0.37(36.76%),薯类0.09(8.82%),干豆0.04(3.68%),食油0.02(2.21%),糖类0.01(1.47%),肉禽类0.06(5.88%)，鱼0.02(2.21%),蛋0.03(2.94%),奶0.02(2.21%),蔬菜0.29(29.41%),水果0.04(4.41%)。
1.6 人群接触毒性和意外事故的毒性资料。
开发新品种农药时，对在实验、试产和大田试验阶段的密切接触人员，必须保留完整的健康记录，并定期随访。
申请登记时，递交上述资料。
在新品种农药正式投产和使用的最初阶段（根据具体情况确定年限），设置健康监测点，对包括最密切接触和高危人群在内的观察对象实施健康监测。
农药登记毒理学试验方法试卷
农药登记毒理学试验方法试卷
一、填空题（每题2分，共20分）
1. 农药登记毒理学试验方法的主要目的是__________。
2. 在进行急性口服毒性试验时，受试动物应为__________，给药途径为__________。
3. 在进行亚慢性和慢性毒性试验时，受试动物应为__________，至少需要观察__________。
4. 通常，试验报告需要包括以下内容：试验目的、__________、__________、实验数据和结论。
5. 在进行致突变性试验时，应选择__________作为受试对象，同时需要注意保持足够的样品量以保证检测的敏感性。
6. 在农药登记毒理学试验方法中，主要的致癌性评价方法是
__________和__________。
7. 对于环境可降解的农药，在进行毒性试验时应该关注__________。
8. 在农药毒性试验中，体重是一个重要的观察指标，通常用__________来表示动物的体重。
二、简答题（每题10分）
1. 描述急性毒性试验的主要步骤。
2. 说明在进行亚慢性毒性试验时，如何判断动物是否出现临床异常症状？
三、论述题（共20分）
请以实际案例为例，论述如何应用农药登记毒理学试验方法评估农药的安全性。
注意：以上答案仅供参考，具体内容要根据实际情况作答。
毒理学 实验二、急性经口毒性试验
LD50测定方法 霍恩（Horn)法（剂量递增法） ——查表 改进寇氏法(karber’s method) 几率单位法
13
改进寇氏法(karber’s method) 基本要求：
每个染毒剂量组的实验动物数量相同； 各剂量组组距呈等比级数； 死亡率呈正态分布； 最低剂量组死亡率<20%，最高剂量组死亡率>80%。
实验二、经口急性毒性试验
1
急性毒性的概念
急性毒性（acute toxicity）是指实验动物一次或 24h内多次接触一定剂量外源化学物后在短期内所产生的健 康损害作用及致死效应。
观察指标包括一般行为和外观改变、大体形态变化 以及死亡效应。
2
（二）急性毒性试验的目的
1.求出致死剂量及其他急性毒性参数，并根据 LD50对急性毒性进行分级。 2.观察中毒表现、毒作用强度和死亡情况，初步 评价毒物的毒效应特征。 3.为后续的毒性试验提供接触剂量和观察指标选 择的依据。 4.为毒理学机制研究提供线索。
i——相邻两剂量组之对数剂量差值； Xk——最大剂量的对数值； p——死亡率； q——存活率（q = 1－p）； ∑p——各剂量组死亡率总和； m —— lgLD50； n——每组动物数。
最后求反对 数得LD50及 可信区间
22
表6-3 我国农药的急性毒性分级
级别
经口LD50
经皮LD50
吸入LC50
18
19
表1. 急性毒性实验原始记录
受试物名称： 动物物种品系： 染毒途径：
受试物性状： 动物来源： 室温：
受试物来源：
组别 剂量 动物 性 体重 染毒量 染毒 体征及 死亡 体重 (mg/kg) 编号 别 (g) (ml) 时间 出现时间 时间 记录(g)
农药登记毒理学试验单位资质级别可承担的试验项目一览表
11、哺乳动物生殖细胞染色体畸变试验
12、体外哺乳动物细胞染色体畸变试验
13、体外哺乳动物细胞基因突变试验
14、微生物农药致病性试验
15、亚急性经皮毒性试验
16、亚急性吸入毒性试验
17、亚慢性经口毒性试验
√
√
第
三
部
分
18、致畸试验
19、两代繁殖试验
20、迟发性神经毒性试验
21、慢性毒性试验
22、致癌试验
23、慢性毒性与致癌合并试验
24、毒物代谢动力学试验
25、人群接触毒性
√
附件2：
各资质级别可承担的试验项目一览表
试验项目
资质级别
A
B
C第一部源自分1、急性经口毒性试验
2、急性经皮毒性试验
3、急性吸入毒性试验
4、皮肤刺激性试验
5、眼刺激性试验
6、皮肤致敏性试验
√
√
√
第
二
部
分
7、鼠伤寒沙门氏菌回复突变试验（Ames试验）
8、哺乳动物骨髓细胞微核试验
9、哺乳动物骨髓细胞染色体畸变试验
农药登记中的急性毒理学实验
然 后记 录排 皮 肤反 应级 别 。如果 在 这三 个步 骤 中的任何 一 步
试验 目的：确定化学物对哺乳动物皮肤局部是否有刺激 发现有腐蚀作用，则立即停止试验。 作用或腐蚀作用及其程度，为制定防护化学物对皮肤的刺激
保 护措施 提供 依 据 。
在没有腐蚀性 而只有刺激性作用时，Байду номын сангаас需要进行单只动
液体药物一般需要稀释后使用。固体药物 （ 必要时可 以 立即进行刺激分级。如果皮肤受到损伤，而在 ７ ２ 小时 内还
粉 碎 后使 用 ）需 要 用最 小量 的 水 或其它 溶媒 湿 润后 使 用 ， 以 无法断定是刺激还是腐蚀作用造成的，就需要继续观察到第 保 证 与动 物 皮肤 更好 接触 。使 用其 它溶 媒是 要 求溶 媒对 皮 肤 ｌ ４ 天 以确定 皮肤 是否 能够 恢 复 。除 了观察 红斑 和 水肿 之外 ， 的刺 激性 必须 很 小 。
溶 剂洗 去 残 留药 物 。
试验药物用量一般是 ０ ． ５ ｍｌ 液体 ，或 ０ ． ５ ｇ固体或膏 。
初步试验 （ ｉ ｎ ｉ ｔ ｉ ａ ｌ ｔ ｅ ｓ ｔ ） ：一般要求首先采用一只动物进 料的 Ｗｅ ｉ ｇ ｈ ｔ — ｏ ｆ － ｅ ｖ ｉ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅ 分析 ，包括顺序试验策略得到的 行初步试验 ，尤其是当供试药物可能具有腐蚀性时。如果根 结 果 。 据有 充分证据 （ ｗｅ ｉ ｇ ｈ ｔ ～ ｏ ｆ — ｔ ｈ ｅ — ｅ ｖ ｉ ｄ ｅ ｎ ｃ ｅ ａ ｎ ａ ｌ ｙ ｓ ｉ ｓ ）证 明 ２ ． 试验材料 ：材料来源、Ｃ Ａ Ｓ编号、纯度、 已知 的杂
并没有受到伤害的动物皮肤 才能参 与试验。 试验动物应单 便 有 足够 时 间观 察 到被 处 理 动 物 皮 肤 的恢 复 性 和 不 可 恢 复 独饲养，饲养家兔 的室 内温保持为 ２ ０ ￣ Ｃ （ ±３ ℃）。相对湿 性 。如果在 ｌ ４天以内发现动物 已经恢复，则可在恢复之时 度以５ ０ — ６ ０ ％为宜，人工灯光 ｌ ２ 小 时明暗交替 。
200 gL 氯虫苯甲酰胺悬浮剂对斑马鱼的急性毒性试验
农业灾害研究2022，12（2）作者简介 丁洁（1989—），女，江苏南京人，中级工程师，硕士，主要研究方向：化学品和农药的生态毒理学测试。
收稿日期 2021-12-20Acute Toxicity Test of 200 g/L Chloride Worm Benzamide Suspension Agent Against Zebrafish DING Jie et al(Jiangsu CICA KunTesting Technology Co., Ltd., Jiangsu, Nanjing 210000) Abstract Chlorbenzoamide is the highest selling wide-spectrum insecticide worldwideand can be reissued with multiple pesticides. This test was designed and conducted for studying the acute toxicity of a 200 g/liter chloride worm benzamide suspension in zebrafish.The results show that the established HPLC method is suitable for the quantitative analysis of chlorozobenzamide in exposedwater samples, with 96 h-LC50:72.15 mg a.i. / L in zebrafish at 200 g / liter: 64.61 to 80.55 m g a. i. / L (measured HPLC concentration). The 200 g / liter benzoamide suspension had a "low toxic" toxicity grade to zebrafish.Key words Chloride worm benzoamide; Zebrafish acute toxicity; HPLC; Analysis200 g/L氯虫苯甲酰胺悬浮剂对斑马鱼的急性毒性试验丁 洁1，刘建梅2江苏雅信昆成检测科技有限公司，江苏南京 210000摘要 氯虫苯甲酰胺是全球销售量最高的广谱杀虫剂，可与多种杀虫剂进行复配。
[医疗药品管控]农药登记毒理学试验方法
![[医疗药品管控]农药登记毒理学试验方法](https://img.taocdn.com/s3/m/5db34e8977232f60dccca1b6.png)
（医疗药品管理）农药登记毒理学试验方法中华人民共和国国家标准GB15670-1995农药登记毒理学试验方法ToxicologicaltestmethodsofPesticidesforregistration1主题内容和适用范围本标准规定了农药登记毒理学试验的方法、条件的基本要求。
本标准适用于为农药登记而进行的毒理学试验。
2急性经口毒性试验2．1目的求出试验农药对试验动物的半数致死剂量（LD50）；通过观察急性毒性效应的临床表现，初步估测毒作用的靶器官和可能的毒作用机理；为亚慢性、慢性和其他毒性试验的剂量水平设计提供参考；为急性毒性分级和制定安全防护措施提供依据。
2．2试验农药原药和制剂。
2．3试验动物2．3．1主要选用品系、遗传背景明确的初年大鼠。
各剂量组内同性别动物体重差异应小于平均体重的10%，组间同性别动物体重均值差异应小于5%。
2．3．2每壹剂量组的大鼠8~10只（雌雄各半），试验前要对动物观察壹周，确认健康后，方可使用。
2．4剂量分组2．4．1至少应设4~5个剂量组，各剂量组之间要有适当的剂量间距。
以便各组出现不同程度的毒性效应（死亡率），求得剂量效应曲线及LD50。
2．4．2如剂量达5000mg/kg体重之上，动物仍不出现死亡，则不需要进行更高剂量的试验。
2．5给药方法及观察时间2．5．1动物给药前应隔夜禁食但不禁水，称重后，壹次灌胃给药，给药后至少间隔2h进食。
2．5．2灌胃量大鼠按100g体重给1mL，小鼠按20g体重给0.4mL计算，灌胃可用水溶液、油溶液或悬液。
2．5．3给药后立即观察且记录动物的中毒表现，症状出现和消失的时间及死亡时间。
给药当日应连续观察，其后，每日至少观察2次，观察期为14d。
如于给药96h后出现迟发性新效应，则应延长观察期至3周或4周。
2．6观察指标2．6．1中毒症状全面观察中毒的发生、发展过程和规律以及中毒特点和毒作用的靶器官。
观察的系统包括：a．中枢神经系统和神经肌肉系统：体位异常、叫声异常、不安、呆滞、痉挛、抽搐麻痹、运动失调、对外反应过敏或迟钝；b．植物神经系统：瞳孔扩大或缩小、流涎或流泪；c．呼吸系统：鼻孔流液、鼻翼煽动、呼吸深缓、呼吸过速、蜂腰；d．泌尿生殖系统：会阴部污秽、有分泌物、阴道或乳房肿胀；e．皮肤和毛：皮肤充血、紫绀、被毛蓬松、污秽；f．眼：眼球突出、结膜充血、角膜混浊；g．消化系统：腹泄、厌食。
国内外有关化学品急性毒性分级标准
国内外有关化学品急性毒性分级标准以下为收集到的国内外有关化学品急性毒性分级的一些标准。
从这些分级标准可以看出，各标准之间无论是分级还是界限值都有较大差别，这给化学品的国际贸易和化学品危险信息的传递带来了障碍和困难。
为消除分级标准之间的差别，建立协调、统一的化学品分级标准，由国际劳工组织（ILO）、经济合作与发展组织（OECD）以及联合国危险货物运输专家委员会（TDG）三个国际组织共同提出框架草案，建立了全球化学品统一分类与标签制度（GHS）。
2002年9月在约翰内斯堡召开的“联合国可持续发展世界首脑会议”提出：各国应在2008年全面实施GHS?。
为适应国际化学品分类统一的这种必然趋势，结合国内化学品管理的实际需要，《剧毒目录》在剧毒化学品判定标准上参照了GHS?的急性毒性分级标准。
表1GHS关于化学品急性毒性分级标准注：1）1h数值气体和蒸气除2，粉尘和雾除4；2）某些受试化学品在试验染毒时呈气液相混合状态（有气溶胶），而有些则接近气相，如为后者按气体分级界限分级（ppm）表2TDG第14修订版关于危险货物急性毒性判定标准*LC50（4h）×4＝LC50（1h）表3世界卫生组织关于化学品急性毒性分级标准注：上述标准出处是WHO/IPCS.TheUser’sManualfortheIPCSHealthandSafetyGu ides,1996.表4世界卫生组织关于农药危险性分级标准注：上述标准出处是TheWHORecommendedClassificationofPesticidesbyHazardan dGuidelinestoClassification1990-1991.表5欧盟化学品急性毒性分级标准注：上述标准出处是欧盟理事会《关于统一危险物质分类、包装与标志法律法规指令（2000/33/EEC）》.表6美国国家标准协会（ANSI）化学品急性毒性分级标准注：上述标准出处是USOccupationalandHealthAdministration“hazardcommunicat ionstandard”,February1994.表7美国环保局的急性毒性分类标准effectstestguidelinesOPPTS870.1000acutetoxicitytesting-Back ground表8日本有毒物质和有害物质急性毒性分级标准注：日本国立医药品食品卫生研究所网站，2005/06/23表9化学品毒性鉴定技术规范急性毒性分级标准毒性指标剧毒高毒中等毒低毒经口LD50（mg/kg）＜5 5～50～＞500 吸入LC50（mg/m3）＜20 20～200～＞2000 经皮LD50（mg/kg）＜20 20～200～＞2000 注：引用《工业化学品毒性鉴定规范及实验方法》表10中国农业部农药产品毒性分级标准注：上述标准出处是《农药登记毒理学试验方法（GB15670－1995）》表11《危险货物运输包装类别划分原则（GB/T15098-94）》一级毒害品（剧毒品）急性毒性分类标准出处：铁道部《危险货物运输包装类别划分原则（GB/T15098-94）》，1994年表12《危险货物运输包装类别划分原则（GB/T15098-94）》二级毒害品（有毒品）急性毒性分类标准出处：铁道部《危险货物运输包装类别划分原则（GB/T15098-94）》，1994年。
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固定剂量法是 １ ９ ９ ２年首次被 采用 的取代传统方法 隔的时间要足 以预知前一个动物可能不会死亡 ，然后 ４ ０ １ 的 。传统方法 采用动物死亡作为 急性毒 性测试终 才开始下一个 动物 的试验 。如果第二个动物死 亡 ，就
０ Ｉ 衷化 市埸Ｉ ｏ国＠农 化 行 业 资 深 媒 体 ５ — ６ ／ ６ ￣ ａ
的畸形 ， 死亡情 况及任何其他毒性作用） 之 间的关 系。 择从 ３ ０ ０ ｍｇ ／ ｋ ｇ这一 剂量 开始 试验 。如一 个剂量 无 Ｏ Ｅ Ｃ Ｄ制定 的急性 毒性试验方法 主要有 ４ ０ １（ 传 中毒表现 ，其上一个剂量 动物死亡 ，则需在其间插入
统 方法 ）、４ ２ ０（ 固 定 剂量 法 ）、４ ２ ３（ 分 级 法 ）、 ４ ２ ５（ 上下法 ）。为 了保 护动物 ，２ ０ ０ ２ 年 将传统方法
固定剂量法分 ２ 个阶段进行： 预试验和正式试验 。
般 是评价某种物质毒性特性 的初始步骤 。急性经 口毒 固定剂量 为 ：５ 、５ ０ 、３ ０ ０或 ２ ０ ０ ０ ｍｇ ／ ｋ ｇ 。
性试验 可以提供短期经 口接触可 能对健康和环境引起
１ ． １ ． １预试验 （ ｓ ｉ ｇ ｈ ｔ ｉ ｎ ｇ ｓ ｔ ｕ ｄ ｙ ） பைடு நூலகம்的是为主试
定某 种物质毒性 作用方 式提供初始信息 。对急性毒性
根据供 试化合 物或结构相似化合物的 已有 资料 ，
试验数据 的评价 ，应该包括实验动物对供试化合物 的 如 活体 或 离体 试验 资 料 ，从 ５ ，５ ０ ，３ ０ ０ ，２ ０ ０ ０ ｍｇ ／ 接 触与各 种畸形的发生和严 重程度 （ 包括行为和 临床 ｋ ｇ中选择 一种剂量 进行 。如 果没有这 些资料 ，就选
希望有助于登记人员理解急性毒理学评估的试验原则 剂量 也不 能采用 。固定剂量法的作用是提供被试物的
和相关数据所代表的农药评估 的具体意义 。
一
毒害作用信 息并进行毒性分级和分类 （ 依据全球统一
标签体系 ，ＧＨ Ｓ ）。
、
急性经 口毒性试验
急性 经 口毒性试验 的 目的 ：急性经 口毒性试验一
计算 ）。
亡 ，最 多再 用另 外 ３ 个 动 物进行 试验 （ 剂量 仍然 是
１ ． １ 固 定 剂 量 试 验 法 （ｆ ｉ ｘ ｅ ｄ ｄ ｏ ｓ ｅ ｐ ｒ ｏ ｃ ｅ ｄ ｕ ｒ ｅ ， ５ ｍｇ ／ ｋ ｇ ）。因为动 物死亡的风 险很高 ，所 以为了保 ０ Ｅ Ｃ Ｄ ４ ２ ０ ，２ ０ ０ １ 年１ ２月 １ ７日） 护动物的利益 ，这三个动物需要按顺序饲毒 。饲毒 间
目前保 留的三种方法 比传统的方 法减少 了大量 的 需要按 如 下步骤 继续 试验 。用 ５ ｍｇ ／ ｋ ｇ的剂 量对 第 实验动物 ，并要求将垂 死动物尽快无痛苦处死 ， 多 采 二个动物进行试验 ，如果这个动 物也 中毒死亡 ，那么 用雌性动物。 分级 法和 固定计量法可 以用于毒性分 级 ， 这个供 试物 的急性 经 口毒性就可 以被 确认为 ＧＨ Ｓ第 而上下法 可 以获得准确的 Ｌ ＤＳ ０值 （ 可用计算机程 序 １ 类 ，并立 即中止试验 。如果第 二个供 试动物没有死
的危害。急性毒性试验数据可 以作为毒性分类和产 品 验选择一个合适的开始剂量 。预试验采用单性 别一只 标签 的基础 。传统上还将急性毒性试验数据作为确定 动物顺序进 行 ，接受试验 的前后两只动物饲毒 时间间
亚慢性 和其他毒性试验 剂量 的一个步骤 ，还可能为确 隔至少 ２ ４ 小时。 所有试验动 物都需要至少观察 ４ 天。
剂量 。
采用最低剂量 （ ５ ｍｇ ／ ｋ ｇ ）试 验 ，若 动 物 因 中
（ ４ ０ １ ）从 Ｏ Ｅ Ｃ Ｄ毒理 试验 方 法 名 单 中删 除。美 国 毒 死亡 ，一般 需要 中止试 验 ，将 被试物 的毒 性归 为 Ｅ Ｐ Ａ也建议 采用 Ｏ Ｅ Ｃ Ｄ的 ４ ２ ０ 、４ ２ ３ 和４ ２ ５ 三种方法 。 ＧＨ Ｓ第 １ 类 。但是 ，若需要 进一 步的证 实 ，则可 能
｝ 埸 ｛ 农 化
农药登记中的急性毒理学试验
在国 际农药登记 中，急性毒理学 试验 是评估 中所 点 （ ｅ ｎ ｄ － ｐ ｏ ｉ ｎ ｔ ）。 固定剂量 法采用 中等毒性 剂量 ，
必需 的项 目。本文针对 目前国 际农药登记 中所涉及的 而不是采用导致动物死亡的剂量 。同时 ，已知 的由于 ６项急性毒理学试验 的原理 和评估方法做一 定介绍 ， 腐 蚀性 或严 重刺激性能够导致动 物明显痛苦或悲伤的