胆红素钙盐法工艺的改进
高纯度胆红素工业化生产工艺的研究
稀释到１ ０００ ｍｌ，ｐＨ值为４．７；检测波长：４５０ ｎｍ；
收稿日期：２００５—０３—１８修回日期：２００５—０５—１６ 作者简介：徐利锋，１９５２年生，男，汉族，辽宁省辽阳市人，１９７５年毕业于沈阳药学院，１９８２年于沈阳药学院硕士毕业，１９９２年赴美留
学，１９９６年获得美国有机化学硕士和博士学位，并在美国西牙图生物医学研究所从事博士后研究，２００２年８月回国，现任 辽宁大学药物研究所所长。主要研究方向：药物化学、天然产物化学。 ＊通讯作者：关鹏，Ｅ－ｍａｉｌ：ｂｌｕｅｃｕｓ０４＠１６３，ｃｏｒｎ，辽宁大学药物研究所１１００３６，０２４—６２２０２０６２
药物生物技术
Ｐｈａｒｍａｃｅｕｔｉｃａｌ Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ ２００６，１３（２）：１２３～１２６
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高纯度胆红素工业化生产工艺的研究 徐利锋１，关鹏ｈ，朱彦卓１，周云鹏１，刘革萍１，曾晓非１，王永贵２
（１．辽宁大学药物研究所，辽宁沈阳１１００３６；２．丹东市铁路医院，辽宁丹东１１８０００）
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胆红素
(6)氢氧化钠NaOH(1M)，20gNaOH加500ml蒸馏 水，作用是胆红素酯水解成胆红素便于提取。 (7)pH试纸，广泛(1—14)和精密(3.8—5.4，9—14) 试纸。 (8)蒸馏水，用于配置药品。
3 提取方法和操作步骤 (1)用不锈钢医用剪刀剪破胆汁(胆汁要新鲜)，双层 纱布过滤，每100ml新鲜胆汁加入氯仿lml。 (2)将(1)步所得液加热至70℃取下。 (3)加入1MNaOH，调节pH=11～l2，大约每 100ml胆汁加1MNaOH 6ml。 (4)将此液加热煮沸3min，煮时不断搅拌。如有气 泡冒出要吹压几下，以防溢失。
胆红素也可以根据与重氮试剂的不同反应性而 分为两种类型：游离胆红素由于分子中有氢键，与 一种重氮试剂反应缓慢，必须先加入甲醇、乙醇、 尿素、乙酸钠、苯甲酸钠、咖啡因、表面活性剂破 坏氢键后，才能与重氮试剂起明显的颜色反应生成 紫红色的偶氮化合物——偶氮胆红素；而结合胆红 素中由于丙酸基团被取代，胆红素分子不再存在分 子内氢键，因而它可与重氮试剂作用迅速产生红色 偶氮化合物。因此，前者又称为间接胆红素或间接 反应胆红素，后者又称为直接胆红素。
3 讨论 3．1 由于胆红素在溶液中极易被氧，尤其是存在 Fe3+ 、酸及碱的介质中，同时温度越高越易氧化， 时间越长被氧化的量越多。因此，要提高胆红素的 产率，则必须减少氧化。为此，常在溶液中加入 NaHSO3消除氧化剂的影响，加入少量的EDTA以 消除Fe3+ ，制备全过程需时越短越好。在上述三种 方法中，直取法需时最短，2小时即可，而无醇法则 要4—6小时，钙盐法需1—2天。从这个角度说，直 取法最好。
胆红素 提取分离及分析测定实验研究
药学综合性与设计性试验
猪脏器生化药物提取及其开发利用
猪脏器生化药物提取及其开发利用李兴武;章黎黎【摘要】本文概述了猪脏器生化药物提取的研究现状,并对猪脏器生化药物的生产与综合开发利用提出了一些建议.【期刊名称】《肉类研究》【年(卷),期】2011(025)001【总页数】4页(P78-81)【关键词】猪脏器;生化药物;综合开发利用【作者】李兴武;章黎黎【作者单位】西南大学食品科学学院,重庆,40071;西南大学园艺园林学院,重庆,400716【正文语种】中文【中图分类】TS251.91 猪脏器生化药物提取现状猪全身是宝，它不仅能向人类提供肉、皮、毛等畜产品，而且还具有极高的药用价值。
随着现代生化制药业的发展，人们以猪脏器为原料，已能提取出各种生化药物。
生化药物是从生物体分离纯化所得，用于预防、治疗和诊断疾病的生化基本物质，以及用化学合成、微生物合成或现代生物技术制得的这类物质。
生化药物有两个基本特点：其一，它来自生物体；其二，它是生物体的基本生化成分。
这类药物主要有氨基酸类、多肽蛋白质类、核酸类、多糖类、脂类和细胞生长调节因子等，使用起来具有针对性强、疗效显著、毒副作用小等优点，能较好地发挥替代疗法的作用，目前已广泛应用于临床。
1.1 猪心猪心味甘、咸，性平，归心经。
具有安神定惊、养心益气、止汗补血等功效。
目前从猪心脏里提取的主要有细胞色素、胸腺素、苹果酸脱氢酶等生化药剂。
细胞色素C，在生物氧化过程中是一个非常重要的电子传递体，能加速酶促反应的进行，是一种药用价值较高的生物产品。
姚从等[1]用疏水色谱法从猪心中快速制备高纯度的细胞色素C，此方法纯化工艺简单、操作时间短，细胞色素C的质量回收率高，纯度好。
李琳子等[2]研究了Q SepharoseTM NL强阴离子交换色谱快速纯化猪心中肌红蛋白和细胞色素C，经过Q SepharoseTM NL柱初步纯化所得肌红蛋白和细胞色素C的产率分别为89.7%和93.2%。
苹果酸脱氢酶是重要的医用诊断用酶，用作生产丙氨酸氨基转移酶测定试剂盒的主要原料，广泛用于生化研究、丙酮酸盐的检定，白血病及心肌梗死的诊断。
猪胆汁提取胆红素、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸的联产方法[发明专利]
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(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请(10)申请公布号 (43)申请公布日 (21)申请号 201911076648.6(22)申请日 2019.11.06(71)申请人 河南利伟生物药业股份有限公司地址 454850 河南省焦作市温县产业集聚区纬二路17号(72)发明人 薛家禄 薛雯月 马啸 薛智文 余闻 余博 (74)专利代理机构 焦作市科彤知识产权代理事务所(普通合伙) 41133代理人 杨东(51)Int.Cl.C07D 207/44(2006.01)C07J 9/00(2006.01)(54)发明名称猪胆汁提取胆红素、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸的联产方法(57)摘要本发明公开了猪胆汁提取胆红素、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸的联产方法，包括猪胆汁处理、过滤、胆红素提取、猪去氧胆酸提取、鹅去氧胆酸提取等步骤。
本发明以猪胆汁为原料，按照操作步骤，依次从猪胆汁中提取出胆红素、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸三种产品，属于一种联产方法。
本发明的联产方法，使用分子膜过滤，缩短了上述三种产品的生产时间，提高了生产效率，生产成本低，且获得的产品纯度高达97%。
权利要求书1页 说明书4页 附图3页CN 110724085 A 2020.01.24C N 110724085A1.猪胆汁提取胆红素、猪去氧胆酸、鹅去氧胆酸的联产方法，其特征在于，包括以下步骤：S1，猪胆汁处理：向猪胆汁中加入碳酸钠，调节猪胆汁pH至9～11；将猪胆汁加热至85℃～95℃，持续搅拌20～40min后自然冷却至30℃～40℃；随后向猪胆汁中加入浓度为1mol/L 的稀盐酸调pH至6～8，得到处理后猪胆汁；S2，过滤：将步骤S1得到的处理后猪胆汁进行过滤，得到一级滤液；S3，胆红素提取：将步骤S2得到的一级滤液放入容器内，加热至沸腾进行浓缩，浓缩至干后得到浓缩物；向浓缩物内加入浓度为95wt%的乙醇溶液，加热到78℃后进行搅拌并溶解回流20～40min；回流完毕后用砂芯漏斗过滤，得到二级滤液及一级滤渣，一级滤渣即为胆红素；S4，猪去氧胆酸提取：向步骤S3得到的二级滤液内加入浓度为10wt%的碳酸钠溶液，搅拌降温至0℃～5℃，静置1h进行分层；静置分层后，将下层放出得到猪去氧胆酸，将上层取出得到母液；S5，鹅去氧胆酸提取：将步骤S4得到的母液用浓度为36wt%的乙酸调节pH至3～5，母液中出现膏状物；将膏状物捞出，向膏状物内加入浓度为20wt%的碳酸氢钠溶液或25wt%的碳酸氢钠溶液，随后加热至35℃～45℃使其溶解，得到膏状物溶液；将膏状物溶液降温至3℃～7℃，膏状物溶液内析出固体物；将固体物过滤出来后进行烘干，得到二级滤渣；向二级滤渣内加入乙酸乙酯，加热至77℃进行溶解；在77℃的温度下搅拌回流20～40min，随后降温至室温结晶；将结晶离心分离，得到鹅去氧胆酸。
一种从胆汁中提取胆红素的方法[发明专利]
![一种从胆汁中提取胆红素的方法[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/495090e4c0c708a1284ac850ad02de80d4d8063b.png)
(10)申请公布号(43)申请公布日 (21)申请号 201510197306.5(22)申请日 2015.04.24C07D 207/44(2006.01)(71)申请人天益阳（天津）生物分离工程技术有限公司地址301799 天津市武清区开发区新兴路1号3-2(72)发明人欧阳玉岭(54)发明名称一种从胆汁中提取胆红素的方法(57)摘要本发明提供一种从胆汁中提取胆红素的方法，首先取新鲜猪胆汁，加入亚硫酸氢钠和硫酸铵进行水解3-8h ；然后在水解液中加入将一定量大孔树脂进行吸附2-4h ；再用热的乙醇和氯仿的混合液对经过吸附处理的树脂进行多次洗涤，在洗涤液中继续加入少量亚硫酸氢钠，静置10-30min，将得到的混合物用少量微热的95％乙醇和蒸馏水冲洗多次；最后对滤液进行减压干燥、结晶，得到胆红素晶粒。
本发明利用大孔树脂的吸附作用来提取胆红素，对胆红素无损伤，工艺简单，提取的胆红素产品收率高，纯度高。
(51)Int.Cl.(19)中华人民共和国国家知识产权局(12)发明专利申请权利要求书1页 说明书2页(10)申请公布号CN 104829517 A (43)申请公布日2015.08.12C N 104829517A1.一种从胆汁中提取胆红素的方法，其特征在于：包括如下步骤：(1)水解处理：取新鲜猪胆汁，加入亚硫酸氢钠和硫酸铵进行水解3-8h；(2)吸附处理：在步骤(1)中的水解液中加入将一定量大孔树脂进行吸附2-4h；(3)洗涤处理：用热的乙醇和氯仿的混合液对经过吸附处理的树脂进行多次洗涤，在洗涤液中继续加入少量亚硫酸氢钠，静置10-30min，再将得到的混合物用少量微热的95％乙醇和蒸馏水冲洗多次；(4)减压干燥处理：对滤液进行减压干燥、结晶，得到胆红素晶粒。
2.根据权利要求1所述的一种从胆汁中提取胆红素的方法，其特征在于：在步骤(1)中，亚硫酸氢钠和硫酸铵的加入量为猪胆汁质量的0.15％-0.2％。
胆红素精制工艺流程[发明专利]
![胆红素精制工艺流程[发明专利]](https://img.taocdn.com/s3/m/160df3bb85868762caaedd3383c4bb4cf7ecb7f9.png)
[19]中华人民共和国专利局[12]发明专利申请公开说明书[11]公开号CN 1069265A[43]公开日1993年2月24日[21]申请号92110301.8[22]申请日92.9.9[71]申请人刘振启地址102101北京市延庆县康庄镇太平庄村[72]发明人刘振启 [74]专利代理机构三友专利事务所代理人曹广生[51]Int.CI 5C07D 207/44A61K 31/40A61K 35/413权利要求书 1 页 说明书 4 页[54]发明名称胆红素精制工艺流程[57]摘要本发明涉及一种药物原料的制作方法，其实施步骤依次为：吸取胆汁、粗品形成、分层析出、回收蒸馏、析出胆酸、粗品提纯、净洗、真空抽滤和干燥。
其中净洗是加入10倍量E2级A型溶液，净洗沉淀，20％NaHSO 3，虹吸上层溶液加入E2级A2型溶液，净洗至无色为止；真空抽滤是净化精品至真空泵进行抽滤至抽干，反复加入E2级A2型溶液至无味，水分在10～20％为止。
从而产品出率和含量大大提高，从而提高了胆红素的经济效益。
92110301.8权 利 要 求 书第1/1页1、一种胆红素精制工艺流程，其实施步骤依次为：一、吸取胆汁：收集新鲜胆汁至容器，加入20%NaHSO3、搅拌均匀，加温同时不停搅拌至55℃～60℃，调入NaOH至pH=10……11，继续加温到98℃时停止、保温10分钟，水冷至30～35℃。
二、粗品形成：加入NaHSO320%浓度和1%抗氧剂溶液，充分搅拌，再加入30%CHCl3，搅拌1分钟，调入10%浓度的H C l混合搅拌至p H=5～6止。
三、分层析出：沉淀5～10分钟，倒出混合液，将下层红色透明的CHCl3倒入分液漏斗，静置10～15分钟，而后分液，收集C H C l3混合液。
四、回收蒸馏：将收集的CHCl3溶液冷凝蒸馏，收集CHCl3，待蒸馏瓶中沉淀物一定量时，加入C2H5OH10倍量，充分溶解，倒入容器。
五、析出胆酸：粗品沉淀物达到一定量时，加入2倍量C2H5OH，搅拌均匀、沉淀24小时，直至胆酸析出为止。
几种常见生化药品的提取方法
几种常见生化药品的提取方法作者：赵晓娟来源：《科学种养》2015年第01期一、胆红素利用猪胆汁提取胆红素，工序如下：1. 取新鲜胆汁用纱布过滤，除去杂质。
2. 在盛胆汁的缸中加入澄清石灰水，石灰水量冬季为胆汁量的3.5倍，夏季为4倍。
3. 把胆汁和石灰水充分搅拌后慢慢加热，温度升到50～60℃时，除去表面浮起的白沫。
4. 当温度升到60℃时，开始出现胆红素钙盐小颗粒，当温度升到95℃时，液面就会浮起一层橘黄色的胆红素钙盐。
5. 将胆红素钙盐从缸中捞出，再用细纱布过滤，然后将滤下的胆红素钙盐用热水冲洗干净。
6. 将洗净的胆红素钙盐倒入盆中，再倒入相当于胆红素钙盐1倍量的水，研成糊状。
7. 在胆红素钙盐糊中加入1%亚硫酸氢钠，并不断搅拌，随后缓慢滴加1∶1的稀盐酸，使pH值保持在1～2。
8. 静置15分钟后，用细纱布滤去酸液，让其慢慢聚结成深红色的团块。
9. 将少量浓度90%以上的酒精加入深红色的团块中，让团块溶解成糨糊状。
10.在糊状物中加入10倍量浓度90%以上的酒精和0.5%亚硫酸氢钠，调整pH值到3～4，静置16小时。
11.沉淀后，吸去上面的清亮液，将底部的沉淀物再用10倍量的酒精洗涤1次，即可得到粗制的胆红素。
粗制的胆红素可交售给生化制品厂，再进一步加工为精制胆红素。
二、孕马血清孕马血清（PMSG）在畜牧生产中应用广泛，它能促进母畜的卵巢功能恢复，诱发母畜发情和超数排卵，治疗公、母畜的性机能衰退，使猪、羊、兔等多胎多产，是提高养殖业经济效益的激素药物。
孕马血清的提取方法：选取妊娠60～100天的健康母马（查明胎儿是马而不是骡），颈静脉采血，每次1000～2000毫升，将采集的血液盛于已经消毒、干燥过的长筒状玻璃容器中，然后置于温室中使其迅速凝固。
为了更多地析出血清，可在血凝后压上一重物（如砝码）。
一般每100毫升血液可析出45～50毫升血清，将析出的血清吸出，分装备用。
如暂时不用，可以加入0.5%石炭酸防腐，放入冰箱，可保存一年不变质。
介绍一种改良的Von Kossa钙盐染色法
-234•临床与实验病理学杂志J Clin Exp Pathol2021Fe2；37(2)网络出版时间：2021-2-244：51网络出版地址：https：//4ss.csSU/eWdcms/detaiU34.1073.R.02210224.1627.025.Ctvi介绍一种改良的Vos Kossa钙盐染色法李丽，陈菲，包春娟，周琪琪，包骥、迈新二□歹技术交流关键词:Vos Koss a钙盐染色法;紫外光固化灯;HE染色中图分类号:R446.3文献标志码:B文章编号：401-7399(2021)02-0234-02doi：4/3315/6csSU cjcep.0221.02.027在牙齿及骨骼外出现的钙沉积均为病理性钙盐沉积。
草酸钙结晶性肾损伤的发病机制及其治疗靶点的基础研究中，实验大鼠肾组织内沉积的草酸钙结晶在HE染色中不易观察，借助Vos Kossa钙盐染色法对实验动物行钙盐特殊染色,以便半定量统计各肾脏组织内草酸钙结晶的量。
Vos Kossa钙盐染色法是一种金属置换法,硝酸银溶液作用于含有不溶性钙盐的切片时，钙被银置换，银盐在光的作用下被还原为黑色金属银，钙盐沉积处染色为黑色。
Vos Kossa钙盐染色法中最关键的硝酸银溶液染色步骤需要阳光照射，传统方法是将其置于阳光下或60W灯泡前，放置1h或更长 时间，整个染色步骤耗时长且不容易控制。
30W四灯管紫外光固化灯具有光照能量大、强度稳定、40。
照射、不留死角等优点，主要用于手机主板焊盘绿油快速固化。
本文现介绍 一种改良的36W紫外光固化灯加速Vos Kossa钙盐染色法,与传统方法相比,其操作简单、染色快且背景干净，现介绍如下。
1材料与方法H材料3)样本制片:草酸钙结晶实验大鼠52只，肾脏组织离体后立即置于4%中性福尔马林固定43h,常规石 蜡包埋后行4pm厚连续切片3张,65t烤片1h,常规脱蜡至流水冲洗后放入双蒸水中待染2张切片常规行HE染色，剩下2张切片分别用传统方法和改良方法行Vos Kossa钙盐染色法。
从猪胆中提取胆红素的研究
从猪胆中提取胆红素的研究陈士朋;姜健;光斌熊;周迎春【摘要】以猪胆为原料,利用钙盐法和直接法提取胆红素,通过水解、酸化、萃取、蒸馏、结晶得到胆红素,用熔点法进行检验.考察了提取方法,水解时间,水解温度,水解pH对胆红素收率的影响.研究结果表明,用直接法提取胆红素的最佳条件是:水解时间30min,水解温度85℃,水解pH11.胆红素收率达到83.35％.【期刊名称】《江西化工》【年(卷),期】2018(000)005【总页数】2页(P116-117)【关键词】胆红素;提取;直接法【作者】陈士朋;姜健;光斌熊;周迎春【作者单位】辽宁工业大学化学与环境工程学院,辽宁锦州121001;辽宁工业大学化学与环境工程学院,辽宁锦州121001;辽宁工业大学化学与环境工程学院,辽宁锦州121001;辽宁工业大学化学与环境工程学院,辽宁锦州121001【正文语种】中文胆红素是制造人工牛黄的主要原料，也是分析化学及生化研究的重要试剂。
同时胆红素在医学领域有着广泛和重要的用途，因此市场上对胆红素的需求量要求巨大。
但胆红素价格昂贵，而且工业上提取胆红素的收率并不理想，因此探求一种较高收率的胆红素提取方法成为了人们关注的焦点。
所以本文对从猪胆中提取胆红素的条件进行了研究。
1 实验部分1.1 药品与仪器原料和药品：新鲜猪胆汁、氢氧化钠、盐酸、亚硫酸氢钠、氯仿、冰乙酸、无水乙醇、乙醇、氧化钙盐钙、偏重亚硫酸钠。
仪器：数显恒温水浴锅、磁力加热搅拌器、电子天平、电子分析天平、电热鼓风干燥箱、酸度计等。
1.2 胆红素提取过程1.2.1 钙盐法提取胆红素过程：取猪胆汁100mL于烧杯中，加入新配石灰乳，加热至沸，将钙盐冲洗，滤干。
加蒸馏水调成糊状，加入1%的偏重亚硫酸钠，搅拌并快速加入冰乙酸，静置，过滤。
滤渣用氯仿溶解，水浴回流提取至氯仿液无色为止。
回收氯仿，加无水乙醇，抽干，产品用少量乙醇洗至流出液不显绿色。
于60℃真空干燥即得胆红素精品。
胆红素的提取与精制
胆红素的提取精制与应用摘要：胆红索是制药工业的贵重原料，可人工工合成牛黄，合成牛黄的胆红索要求质量较高，因此探索胆红素的提取方法，具有重要的科学价值和经济利益。
改进备胆红索钙盐、酸化、精制等阶段，使胆红索产率和纯度都有明显提高。
关键词：胆红素、精制、探索、临床应用正文：一、概述胆红素是人造牛黄的贵重原料，价格昂贵曾达25万元/kg，现在市场价 5 ～6 万元/ kg，天然牛黄中的胆红素的含量高达50%～60%。
天然牛黄中的胆红素钙盐是胆汁生石的重要原因。
据北大吴瑾光教授的研究发现人胆石中的胆红素是和糖蛋白、多糖结合存在的；有少量的胆红素用强酸、强碱处理也不被破坏，游离胆红素在血中浓度过高显示毒性结合胆红素是无毒的。
据药理实验证明，游离胆红素对乙型脑炎病毒的灭活率抑制指数是去氧胆酸和胆酸的 1.0 ～1.5 倍。
据日本岗奇公彦报告，胆红素被氧化成胆绿素，成为一种有效的肝脏治疗药，他在不破坏肝组织的情况。
有增殖新细胞的作用，可用于血清肝炎、肝硬变的治疗。
胆红素对W256瘤有较好的抑制作用。
另外，胆红索还有解热、降压、促进红血球新生等作用。
我国对胆红素的需求量很大，人造牛黄已超过100t因此，胆红素提纯方法的探索有重要经济价值。
胆红素的研制开始于1864年，staedeler首先从胆石中分离了胆红素。
1955年我国天津育发制药厂郭巩等人从牛胆汁中提取出胆红素；1960年武汉肉联厂开始用钙盐法从猪胆汁中提取胆红素。
20世纪60年代末北京同仁堂中药提炼厂郑谷栋教授对提炼方法进行了改进；1988年先后有人提出“快速提取胆红素新技术”，“自提胆红素技术”等等。
胆红素的提取归纳起来主要有两条途径：（1）先用乙醚、乙醇提取后的胆汁剩余物。
再用三氯甲烷提取胆红素；（2）先制备胆红素钙盐，盐酸酸化，三氯甲烷提取。
第（1）种途径直接用氯仿提取，收得率低，只能达到 0.0164 ～0.0168。
因为胆汁中的胆红素是种极易溶于水的胆红素结合物——结合胆红素，所以直接氯仿提取不尽合理第（2）种途径为胆红素钙盐法，其收得率可增加 1 ～2倍，但生产周期长，相应成本提高。