CpG ODN诱导人PBMC增殖的体外实验研究
CpG ODN诱导人PBMC对结肠癌细胞体外杀伤作用的研究
中 图分 类 号 :7 53 5 R 3 .
An i ro feto u n P M C n c ln c r iol el id cd b G tun re c fh ma B t o oo a cn ia cl n u e y Cp ODN l s
C G O N I- 与肿瘤抗原共 同刺激能有效提高人 P MC的杀伤活性 。 p D 、 2 L B
文 献标 识 码 : A
删 G 嘴 , i-og, l n -u. H Jnln Ja Mig k
对肿瘤 细胞的杀伤活性 。结果 以 C GO N刺激人 P MC 的细胞 , p D B 组 其对 肿瘤 细胞的杀伤活性 明显高于对照组 ( P<
(h eodH st inU irt , hncu 30 1 C i ) t Scn o ilfJ i n e i C aghn 10 4 , h a e pa o l v sy n
A s atObet e A ta B s i p D hc c da m najvn adosr e ii cvyt t bt c: jcv cvt P MC t C G O Nw i at si uoduat n bev t i k n ati e r i i e wh h e m eh r U g i t o h
c n e el . eh d S mu aeP MC f e l d l n ainss f r dfo c c r i u r n g n I - TC G O d a c rc l M t o s s i t lt B so h at a ut a d p t t u ee rm a e t mo t e .L 2 o p DN a h s e n w ht ai n d tr n h er i ig a t i t he c c rc l . s l T ec l poi rt n a t t au f C G O t lt ru s ih e miet i kl n ci t ot a e e s Re u t e l vy n l s h e rl eai ci y v leo o f o i v DN s mu ai g o pi h g — i g n
CpG ODN诱导人PBMC分泌细胞因子的体外实验研究
* : 同浓 度 的 N C G O N组 比较 , 显 著 性 差 异 ( 与 op D 有 P<00 ) .5
3 讨 论
强的纤 维 肉瘤 的动 物模 型 , 肿 瘤 的发展 较 对 照 组 其 迅速 , 示 IN 7对 肿 瘤 的抑 制 作 用 l 。在 肿 瘤 的 显 F. 4 ] 发展过 程 中 , 肿瘤 细 胞 可 通 过 多种 机 制 逃避 宿 主 的 免疫 监视 。C G O N可 以诱导 人 P MC释放多 种抗 p D B
中 国实 验 诊 断 学21 00年 源自月第1 4卷第 2期
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2 7 -— 5 - - —
文 章 编 号 :07 27 2 1)2 27— 2 10 —48 (00 0 —05 0
C G O N诱 导 人 P MC分 泌 细 胞 因子 p D B 的体 外 实 验 研 究
韩 刚 , 志刚 , 王 贾明库
表 3 C G 0 6诱 导 人 P MC释 放 T F  ̄的 浓 度 ( ̄/ ,t ) p 20 B N- t ml/=9 i
*: 与同浓度 的 N C G O N组 比较 , op D 有显 著性差 异( P<00 ) .5 表 4 O 20 C G 0 6诱导人 P MC释 放 I-2的浓度 (G/ , B L1 P mln=9 )
*: 同浓度的 N C G O N组 比较 , 与 op D 有显 著性差 异( P<0 0 ) .5
基金项 目: 吉林省科技厅资助项 目( 目编号 200 1 项 0540—5 )
*通 讯 作 者
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25 —— 8 —
一
C i JIbDan b 21 , 0 1 , o2 hn i , ,0O V l 4 N . m g
CpG-ODN对肺腺癌细胞增殖的抑制作用及其与Runx3关系的初步研究的开题报告
CpG-ODN对肺腺癌细胞增殖的抑制作用及其与Runx3关系的初步研究的开题报告
题目: CpG-ODN对肺腺癌细胞增殖的抑制作用及其与Runx3关系
的初步研究
背景:肺腺癌是肺癌中最常见的类型,具有高度恶性和易转移的特点,虽然现有的治疗手段能够一定程度上控制肺腺癌的进展,但药物耐
受性和复发率仍然较高。
因此,探索新的治疗手段和机制对于肺腺癌的
治疗具有重要意义。
CpG寡核苷酸(CpG-ODN)是一种能够模拟细菌DNA并激活免疫应答的分子,已被证明具有抗癌作用。
Runx3基因编码
一种转录因子,参与调控细胞周期和细胞增殖,被认为在肺癌中的表达
下调,其与CpG-ODN对肺腺癌增殖的关系需要进一步研究。
目的:本研究旨在探究CpG-ODN对肺腺癌细胞增殖的抑制作用,以及其与Runx3表达的相关性,为肺腺癌的治疗提供新的思路和理论支持。
方法:选取人肺腺癌细胞株作为实验材料,分为实验组和对照组。
实验组分别加入不同浓度的CpG-ODN处理,观察细胞增殖情况。
对照组不加任何处理。
采用Western blot方法检测不同浓度CpG-ODN处理后Runx3的表达情况,并进行相关性分析。
预期结果:预计CpG-ODN能够抑制肺腺癌细胞的增殖,浓度与效应的关系符合一定的规律;CpG-ODN处理后Runx3的表达会显著上调,并且与细胞增殖水平呈现负相关的趋势。
这些发现将为进一步探究CpG-ODN对肺腺癌治疗的潜在作用提供可靠的理论基础。
pbmc增殖实验原理
pbmc增殖实验原理
PBMC增殖实验是一种常用的细胞生物学实验,用于研究外周血
单个核细胞(PBMC)的增殖能力。
PBMC是一种混合细胞群,包括淋
巴细胞、单核细胞和自然杀伤细胞等。
进行PBMC增殖实验的原理主
要包括以下几个方面:
1. PBMC分离和培养,首先,从外周血中分离PBMC,通常采用
密度梯度离心法。
然后将PBMC进行培养,提供适当的营养物质和生
长因子,以促进其生长和增殖。
2. 刺激因子的作用,在培养PBMC的过程中,可以加入不同的
刺激因子,如激活剂、抗原或药物等,以模拟体内的免疫应答过程。
这些刺激因子可以激活PBMC,促进其增殖和分化。
3. 测定增殖活性,通过不同的方法来测定PBMC的增殖活性,
常用的方法包括MTT法、放射性核素标记法、流式细胞术等。
这些
方法可以定量或定性地评估PBMC的增殖能力。
4. 数据分析和解释,最后,对实验结果进行数据分析和解释,
比较不同条件下PBMC的增殖活性,探讨刺激因子对PBMC增殖的影
响,从而揭示PBMC在免疫应答中的作用和调控机制。
总的来说,PBMC增殖实验的原理是通过培养PBMC并加入刺激因子,测定其增殖活性,从而研究PBMC在免疫应答中的生物学特性和调控机制。
这种实验方法在免疫学和临床医学研究中具有重要的应用价值。
CpG ODN 免疫佐剂效应研究进展
Pr o g r e s s o n No v e l Ge no me Ed i t i ng Te c hn o l o g i e s
HAN Yo n g ,YANG J i e ,LI Zi — b i n ,DONG S o n g — p e n g ,GAO Fe n g — s h a n
2 O 1 4, 1 4: 3 2 7 .
s i n g C RI S P R / C a s 9 s y s t e m[ J ] . PL o S On e , 2 0 1 4 , 9( 9 )
e 1 O 6 71 8 .
[ 2 9 ] X i n g H L。 Do n g L, Wa n g z P, e t a 1 . A C RI S P R/ C a s 9 t o o l k i t
常 为十 几至 二 十几 个 碱 基 不 等 。C p G O DN 能 够 模
收 稿 日期 : 2 0 1 5 — 0 4 — 1 9 基 金项 目 : 吉林 省 科 技 发 展 计 划 项 目( 2 0 1 3 0 5 2 2 0 8 8 J H, 2 0 1 4 0 3 0 7 0 0 8 NY)
单核 细胞及 巨噬细胞 等免 疫 细胞 内质 网膜上 的 T o l l 样 受体 9 ( TL R 一 9 ) 结合 , 通 过 产 生 Th l型 免疫 反应 和 分 泌促 炎 因子 来增 强免 疫应答 的 强度 , 在 机体 抵抗 病 原入侵 和 抗肿 瘤等 方 面起 到 免疫 增强 剂 的作 用 。近年 来 , C p G OD N 作 为 一种新 型免 疫 佐 剂受 到 了人 们 越 来越 多的 关注 。论 文主要 介 绍 了 C p G OD N 的种 类及 其 结 构和 功 能特征 、 作 用机 制 、 对 畜禽 的免 疫增 强作 用 、 安 全性 等 方 面的研 究进展 , 为C p G O DN 作为 疫 苗佐 剂 的
CpG ODN纳米佐剂的免疫效应及应用进展
CpG ODN纳米佐剂的免疫效应及应用进展作者:王征帆万曾培高小鹏来源:《湖北农业科学》2020年第13期摘要:CpG ODN是人工合成的具有非特异性免疫刺激的DNA序列,模拟细菌DNA在体内的应答过程,诱发细胞和体液免疫。
CpG ODN作为新型免疫增强剂在兽医临床上的应用展现出了巨大的潜力,并在免疫学、药物学和药效学等领域备受关注。
然而CpG ODN并不稳定且易被核酸酶酶解,其自身带负电荷,不易结合到细胞表面。
因此,CpG ODN如何高效传递并能有效摄取成了新的挑战。
纳米传递系统的研究使CpG ODN单独或协同疫苗免疫取得显著疗效,为改善CpG ODN在疫苗研究中的应用拓宽了思路。
从CpG ODN纳米佐剂的作用机制、免疫活性、安全性及临床应用等方面进行综述,并对该领域未来的研究方向进行展望,为后续工作提供有益参考。
关键词:CpG ODN;纳米佐剂;作用机制;免疫活性;安全性Abstract: CpG ODN is a synthetic DNA sequence with non-specific immunostimulation which simulates the response process of bacterial DNA in vivo, inducing cellular and humoral immunity. CpG ODN has shown great potential as a novel immunopotentiator in veterinary clinical applications, and has attracted much attention in the fields of immunology, pharmacology and pharmacodynamics. However, CpG ODN is unstable and easily digested by nucleases, which are negatively charged and do not easily bind to the cell surface. Therefore, how to efficiently transfer CpG ODN and effectively ingest it becomes a new challenge. The study of nano-transmission system has achieved significant efficacy for CpG ODN alone or in combination with vaccine immunization,and broadened the thinking for improving the application of CpG ODN in vaccine research. The mechanism of action, immunological activity, safety and clinical application of CpG ODN nanoadjuvant were summarized, and future research directions in this field was prospected, to provide useful reference for follow-up work.Key words: CpG ODN; nano adjuvant; mechanism of action; immunological activity; safetyCpG ODN是人工合成的具有免疫刺激活性的非甲基化胞嘧啶-鸟嘌呤二核苷酸的DNA重复序列,能诱导强烈的细胞免疫和体液免疫,增强机体免疫应答。
CD80联合CD28/CpG ODN活化的PBMC对胃癌细胞杀伤作用的实验研究
O0 ) C 2 / p D 共 刺 激 活 化 P M 在 体 外 对 胃癌 细 胞 株 MK 杀 伤 作 用 明 显 ( < .1 , D 0与 C 2 / . ,D 8 G O N 5 C B C N P 00 ) C 8 D 8
CG D p O N共 刺激 活化 P MC合 用 ,对 胃癌 细胞 株 MK 的杀 伤 作 用显 著 大 于 C 8 B N D 0本 身 对 胃癌 细 胞 株 MK 杀 伤 N
K ilng f c y l i e i ac of PBM C c tm ul t l a i a e b CD2 / osi a ey ctv t d y 8 CpGO DN c m bi d wih CD 8 o o ne t 0 n t he
g s i c n e o s c l E p r na t d F N u ,G O S u jn IY n - a .D p.o G n rlS re , a t c a c r u e : x e i t ls y A G J n U H -n ,L o g y n e t f e ea ug r r l me u y
CpG-ODN的免疫刺激作用
CpG提高淋巴细胞CD69表达
CD69
35
30
25
表 达
20
率 15
(
10
)
5
0
* *
%
对照 CpG2006 CpG2216
对照 CpG2006 CpG2216
T淋巴细胞
B淋巴细胞 *:与对照组比较,P<0.05
B细胞CD80、CD86表达
对照组
加CPG-ODN组
CpG提高B细胞表面MHC-Ⅰ、 MHC-Ⅱ的表达
MHC
2500
2000
1500
表
达 1000
量
( 500
)0
* *
**
MFI
对照 CpG2006 CpG2216
对照 CpG2006 CpG2216
MHC-Ⅰ
MHC-Ⅱ *:与对照组比较,P<0.05
活化B细胞诱导CTL
1. 负载了抗原的活化B细胞与淋巴细胞混合培 养(含IL-2的RPMI1640培养液).
CPG诱导PBMC杀伤靶细胞
1. 收集CPG活化的PBMC 2. 细胞毒性实验:效应细胞为CPG活化的
PBMC;靶细胞为CFSE预染的K562细胞。 对照组效应细胞为未经CPG活化的PBMC。 3. 效:靶=20:1,混合培养2h。流式细胞术 检测靶细胞死亡率。
CPG诱导PBMC杀伤靶细胞
CFSE染色靶细胞
TOLL受体
TOLL受体在血细胞中的表达
活化B细胞负载核心抗原
1. 磁珠分选B淋巴细胞 2. CPG活化B淋巴细胞 3. 核心抗原肽:FLPSDFFPSV-FITC 4. 流式细胞仪、荧光显微镜检测抗原负载
分子佐剂CpG DNA的研究进展及应用概况
分子佐剂CpG DNA的研究进展及应用概况摘要免疫佐剂的主要作用是提高抗原(免疫原)的免疫原性和免疫反应的可持续性,它能诱导机体的免疫系统对抗原产生体液免疫或细胞免疫反应。
近年来,免疫佐剂的研究越来越受到人们的关注,该文着重介绍分子佐剂CpG DNA 的研究进展及应用概况,以为开发研制高效、低毒、结构新颖的免疫佐剂提供参考。
关键词分子佐剂;CpG DNA;研究进展;应用作为一种非特异性免疫增强剂,当佐剂与抗原一起注射或预先注入机体时,可增强机体对抗原的免疫应答或改变免疫应答类型。
同时,既减少了抗原的使用量,增加了机体抗体的产生量,又可以减轻免疫耐受。
近年来,佐剂发展较快,多种新型佐剂不断涌现,黏膜佐剂、纳米佐剂、天然佐剂及分子佐剂等是目前研究的热点。
用分子佐剂来提高基因疫苗的免疫效率是基因疫苗研究的关键,很多分子佐剂如CpG DNA、细胞因子、共刺激分子、趋化因子、C3d、免疫刺激调节分子等成为当前研究的热点。
1 CpG DNA的研究进展CpG DNA是一种DNA序列,其核心是一些未甲基化的CpG基序,具有免疫激活功能,它包括ODN(oligodeoxynucl-eotides,含CpG基序)和细菌、病毒、无脊椎动物等低等生物的基因组DNA,其碱基普遍遵循5-嘌呤-嘌呤-嘧啶-嘧啶-3的排列规律[1]。
研究表明,这种排列可激活多种免疫效应细胞,又称为免疫刺激DNA序列,其在细菌和病毒基因组中出现的频率至少是脊椎动物基因组的20倍,使入侵的外来细菌和病毒能够轻易地被脊椎动物的免疫系统所识别,从而激活相应的免疫应答机制。
CpG DNA的免疫激活机制可通过模式识别理论来解释,该理论是2000年由美国免疫学家Janeway et al提出的,病原相关分子模式(PAMP)是指天然免疫针对主要靶分子信号,模式识别受体(PRR)是指相对应的识别受体。
天然免疫中TLR家族成员识别PAMP后,从而在抗感染天然免疫中发挥重要作用。
CpG-ODN对LPS诱导的大鼠乳腺上皮细胞损伤的保护作用
氏阴性菌 的主 要致 病 因子 』 。研究 显示 , 体外 经 L S刺 在 P 激, 细胞 能分泌与炎症相关 的介质介导 细胞 的损 伤 。其诱
发的炎症反应 和革 兰氏阴性菌感染引起的炎症变化有相似 的 地方 , 因此 , 在临床上有 着广泛 的应用 。而 C G—O N是 以 p D C G二核苷酸为核心 的未 甲基化的特殊的 D A序列 , p N 它可 以
试剂盒购于解放军总 医院科技开发中心方免所 。
激活免疫活性 细胞产生 多种细胞 因子 , 增强 机体 的特 异性和 非特异性免疫效应 , 对微生物感染具有潜在的防治效果 。
朱于敏等 的研究 已证实 C G—O N对大肠杆 菌感染 诱发 的 p D
六孔培养板 ( 丹麦 C s r , m ot ) 5 L细胞培养瓶( a 丹麦 C R — O N IG) 细胞培养箱 ( hr N , Te m公司 ) X Z— 2倒 置显微镜 ( ,S D 重庆
试剂盒购 于南 京建 成 生物 工 程 研究 所 ; 肿瘤 坏 死 因 子 一
(u o ers co — T F一仅 、白细胞 介素 一1 (ne tm r coi f tr ,N n sa ) B itr -
l kn一1 I e i p, u L一1 ) 白细胞介素 一 (n r ui 6 I 6 p及 2 it l kn一 , ee L一 )
关键词 : 鼠; p 大 C G—O N; D 乳腺 上皮 细胞 ; P ;免疫 调节 LS 中图分 类号 : 8 5 1 4 1 ¥6 . 2 . 文献标 志码 :A 文章编号 :0 2—10 (0 1 0 04 0 10 3 2 2 1 )3— 2 7— 3 1 12 主要 试剂 和 仪器 .. D—H n s ; ME F2( 国 ak 液 D M/ 1 美
CpG_ODN的免疫调节作用及其在支气管哮喘中的应用
Immuno愧 ulatione爪 ctsodapplioti姗 orCpGoligl欣。xynucleot ides inbr。傲hialasthma LIN ya ,,WU 凡n召.烧Pa八。。ntofResPirato卿 Mod泣c王ne.爪eh,HosP£tala了了飞2‘ated to F叼ianA公d王calU,:*r,it夕, E理2人。砚 350001,以 1”a
IK 灯 叨 。油 I CpG oligod的xynucleotides;Bronchialasth姗 ;Immunor铭ulatlon
目前 认 为 ,支气管 哮喘 (哮喘)是一种 由多种 免 疫细胞及细胞组分参 与的慢性气道 炎症 性疾病 ,其 主要的免疫学改变为 Thl/ThZ 亚群比例失衡 ,表现 为 Thl型免疫反应相对减 弱,ThZ相关 细胞数 目增 多 和 功能 相 对 亢 进 。近 来 大 量 研 究 表 明,CpG oligodeoxynucleotides(CpGODN)具有免疫调节作 用 ,能够诱导产生 Thl 型免疫反应,下调 ThZ 反应 , 并使 ThZ 反应向 Thl 反应转化 ,调节 Thl/ThZ亚 群 比例平 衡 从 而有 效 地预 防 和 治疗 哮 喘。 目前 cpGoDN已成为国内外研究的热点之一。故本文 就 cpGODN的免疫调节作用及其在哮喘中的应用 作 一综 述 。 i cpconN的基本概念
1700 .
国际呼吸杂志 2007年 第27卷 第22期 IntJRe艺pir,Nov.Zoo7vol.27.No,22
CpGODN的免疫调节作用及其在支气管哮喘中的应用
林 岩吴 净
【摘 要 】 CpGODN是 含有 cpG基序的脱氧寡核昔酸,它具有强大的免疫 调节作 用,能够激活 自然杀 伤细胞(NK)、单核/巨噬细胞 、树突状细胞(民 )、B细胞和 T细胞等多种 免疫细胞 ,诱导并增强非特异性 及 特异性免疫应答 ;同时还可以诱 导产生 Thl 型免疫反 应,下调 ThZ 型反应 ,调控免 疫应答类型。在支 气管 哮喘(哮喘 )动物模型研究 中发现 ,CpG ODN能够有 效地抑制气道 炎症 、气 道高反应性及气道 重构的发 生 和发展.在预防和治疗哮喘方面 具有广阔的应用前景,
CpG-ODN对猪外周血淋巴细胞和脾脏免疫细胞免疫刺激作用的初步研究
CpG-ODN对猪外周血淋巴细胞和脾脏免疫细胞免疫刺激作用的初步研究温建新;李俊;周顺;任慧英;牛钟相;王金宝【期刊名称】《西南农业学报》【年(卷),期】2007(020)006【摘要】为了筛选出对猪体有免疫刺激活性的CpG寡聚脱氧核苷酸(CpG-ODN),设计了9种未甲基化CpG-ODN不同序列,通过人工合成,分别作用于猪外周血淋巴细胞和脾细胞,进行健康猪外周血淋巴细胞和脾脏免疫细胞体外转化试验.用四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检测外周血淋巴细胞转化效果和脾细胞的增殖能力和代谢能力,通过测得的OD490值,计算出淋巴细胞增殖指数(SI),筛选CpG-ODN的免疫刺激作用.结果显示:9种不同序列的CpG-ODN对猪外周血淋巴细胞和脾脏免疫细胞均具有不同程度的刺激效果,其中CpG-ODN6、CpG-ODN7刺激强度极显著.为研制DNA疫苗有效的CpG-ODN免疫佐剂奠定基础.【总页数】4页(P1329-1332)【作者】温建新;李俊;周顺;任慧英;牛钟相;王金宝【作者单位】青岛农业大学动物科技学院,山东,青岛,266109;山东农业大学动物科技学院,山东,泰安,271018;山东省农业科学院,山东,济南,250000;青岛农业大学动物科技学院,山东,青岛,266109;青岛农业大学动物科技学院,山东,青岛,266109;山东农业大学动物科技学院,山东,泰安,271018;山东省农业科学院,山东,济南,250000【正文语种】中文【中图分类】S828【相关文献】1.不同序列的CpG-ODN对猪外周血淋巴细胞和脾脏免疫细胞免疫刺激作用的研究 [J], 温建新;邱洪;李俊;任慧英;周顺;王金宝2.CpG寡核苷酸对人外周血B淋巴细胞免疫刺激作用 [J], 陈军浩;吴超;欧阳建;刘勇;耿东进3.兔抗人外周血单核细胞、兔抗猴脾脏淋巴细胞免疫血清的制备及其在分离人和猕猴胚胎内细胞团中的应用 [J], 张秀珍;采克俊;王淑芬;胡智兴;裴轶劲;季维智4.兔抗人外周血单核细胞、兔抗猴脾脏淋巴细胞免疫血清的制备及其在分离人和猕猴胚胎内细胞团中的应用 [J], 张秀珍;采克俊;王淑芬;胡智兴;裴轶劲;季维智5.CpG ODN重组质粒对猪外周血淋巴细胞免疫刺激作用的研究 [J], 张进进; 冷雪; 周宇; 伭婷; 夏辉; 盛陈艳; 麻宝艺; 马青霞; 刘雅馨; 高沙沙; 杜锐因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
CpG ODN诱导人PBMC增殖的体外实验研究
CpG ODN诱导人PBMC增殖的体外实验研究李金龙;耿力;韩刚;贾明库【摘要】目的研究CpG ODN在体外刺激人PBMC的增殖情况.方法分别以肿瘤抗原(Ag)、白细胞介素-2(IL-2)和CpG ODN单独或联合刺激正常人和肿瘤患者PBMC,并对其增殖活性进行测定.结果以CpG ODN刺激人PBMC组的细胞增殖活性明显高于对照组(P<0.05).结论 CpG ODN、IL-2与肿瘤抗原共同刺激能有效提高人PBMC的增殖活性.【期刊名称】《中国实验诊断学》【年(卷),期】2010(014)001【总页数】2页(P37-38)【关键词】CpG ODN;人外周血单核细胞【作者】李金龙;耿力;韩刚;贾明库【作者单位】吉林大学第二医院,普通外科,吉林,长春130041;吉林大学第二医院,普通外科,吉林,长春130041;吉林大学第二医院,普通外科,吉林,长春130041;吉林大学第二医院,普通外科,吉林,长春130041【正文语种】中文【中图分类】R730.54近年来肿瘤的生物治疗研究较多,并取得了一定的疗效与进步。
CpG ODN具有激活宿主免疫系统的能力,可刺激机体活化对肿瘤的先天免疫并增强抗原递呈细胞介导的获得性免疫,在疫苗佐剂的设计以及抗肿瘤免疫治疗中显示出良好的应用前景[1]。
本文通过观察CpG ODN与IL-2、肿瘤冻融抗原共同刺激人PBMC在体外的增殖情况,为进一步进行相关肿瘤免疫治疗奠定基础。
1.1.1 病例选择分别选取本院健康志愿者和结肠癌患者各5人进行采血20 ml,并在2 h内分离。
1.1.2 肿瘤细胞株、CpG2006和IL-2 人结肠癌细胞株SW1116购自吉林省肿瘤研究所;CpG 2006由上海生工生物技术服务公司合成;IL-2购自长生基因药业股份有限公司。
1.2.1 人PBMC的分离每份血样中加入等量生理盐水混匀稀释,离心。
分离出离心分层后单个核细胞层,另加RPMI1640后离心,洗涤2次。
CpG ODN佐剂序列的筛选及其免疫刺激活性研究
CpG ODN佐剂序列的筛选及其免疫刺激活性研究赵玉娇;蔡路奎;王晓丹;席珏敏;陈俊英;潘玥;邱丽娟;姜黎明;孙强明【摘要】目的设计和筛选对入PBMC细胞和小鼠脾细胞具有免疫刺激活性的CpG ODN序列,研发能用于人用疫苗的有效核酸佐剂. 方法根据具有免疫刺激活性的CpG ODN序列结构特点,设计并合成出15条候选序列,分别合成并进行非硫代和硫代修饰.分选健康人PBMC细胞及Balb/c小鼠脾细胞,以不同CpG ODN进行体外刺激,MTT法检测CpG ODN诱导细胞增殖水平.随后将筛选出的有效CpG ODN序列与人类基因组序列进行同源性比较,以评估其安全性. 结果在刺激人PBMC和小鼠脾细胞72h后,硫代和非硫代修饰的15条序列A值均高于阴性对照组,其中IMB-AC5序列刺激人PBMC后A值分别达到0.377和0.334,与阳性对照ISS1018序列A值(0.387和0.338)接近;刺激小鼠脾细胞72h后,A值同样高于其他序列,达到0.571和0.486,与阳性对照ISS1018序列A值(0.588和0.464)接近.综合上述结果,选择5号非硫代序列作为候选佐剂.同源性比较结果显示,该序列与人类基因组序列没有同源性,与部分蛋白编码基因的同源性只有50%~65%,此外其部分序列与入18号染色体上的一些重复序列有同源性,最高同源性达62%.证明筛选出的新型CpG ODN佐剂IMB-AC5安全性较高.结论设计筛选出对人PBMC细胞和小鼠脾细胞具有免疫刺激活性的CpG ODN序列IMB-AC5,与人类基因组序列具有较低同源性,为进一步研发人用疫苗佐剂奠定基础.【期刊名称】《医学研究杂志》【年(卷),期】2016(045)005【总页数】6页(P37-42)【关键词】CpG;ODN;佐剂;免疫刺激活性;同源性【作者】赵玉娇;蔡路奎;王晓丹;席珏敏;陈俊英;潘玥;邱丽娟;姜黎明;孙强明【作者单位】650118昆明,中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;650118昆明,中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;650118昆明,中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;650118昆明,中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;650118昆明,中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;650118昆明,中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;650118昆明,中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;650118昆明,中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室;650118昆明,中国医学科学院/北京协和医学院医学生物学研究所云南省重大传染病疫苗研发重点实验室【正文语种】中文【中图分类】R3目前市场上预防用疫苗大部分使用氢氧化铝[Al(OH)3]作为佐剂。
CD_3McAb、CD_28McAb、CpG ODN刺激PBMC活化的研究
CD_3McAb、CD_28McAb、CpG ODN刺激PBMC活化的研究罗志刚;谢江波【期刊名称】《南华大学学报:医学版》【年(卷),期】2003(31)4【摘要】目的为肿瘤生物治疗寻找高效、安全的效应细胞。
方法采用CD3 单克隆抗体与CD2 8单克隆抗体及CpGODN共刺激外周血单核细胞活化增殖。
对增殖细胞的增殖量、剂量依赖性与细胞表型进行测定。
结果单用CD3 单克隆抗体和小剂量的IL - 2就可以引起PBMC有效扩增 ,CD2 8单抗可提供协同刺激信号 ,使PBMC扩增达到最高。
而CpGODN亦可提供第二信号 ,但较CD2 8单抗为弱。
CD2 8协同扩增呈剂量非线性相关型 ,而CpGODN则为剂量正相关。
表型测定表明共刺激细胞中NK细胞比率明显增高 ,分别达到33.1 0 %± 1 3.82 % (CD3 +CD2 8) ,2 9.5 0 %± 1 3.2 0 % (CD3 +CPGODN) ,与对照组比较差异有显著性(P <0 .0 5 )。
同时 ,CD4+ CD8+ T细胞比值发生倒置。
结论CD2 8、CpGODN均能协同CD3 单抗诱导PBMC活化增殖 ,CD2 8单抗激活无剂量线性相关 ,而CpGODN激活有剂量正相关。
激活的细胞是以NK细胞、CD4+ CD8-、CD4- CD8+ T细胞为主体的异质细胞群。
【总页数】5页(P379-382)【关键词】CD3;CD28;CpG;ODN;NK细胞【作者】罗志刚;谢江波【作者单位】南华大学第二附属医院;湖南省肿瘤医院【正文语种】中文【中图分类】R73-34【相关文献】1.CpG ODN刺激PBMC后作用于卵巢癌细胞HO8910杀伤活性的研究 [J], 吴富菊;马晓艳;魏敏;薛惠荣2.CpG ODN刺激PBMC后作用于肝癌细胞BEL-7402杀伤活性的检测 [J], 罗利琼;林月霞;王辉;黄树林3.CD3McAb、CD28McAb、CpG ODN刺激PBMC活化的研究 [J], 罗志刚;谢江波4.CD80联合CD28/CpG ODN活化的PBMC对胃癌细胞杀伤作用的实验研究 [J], 方军;郭树军;李永研5.CpG-ODN对慢性乙型肝炎患者PBMC免疫刺激作用的观察 [J], 李宁;范学工;朱才;应若素;黄燕因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
CpG寡核苷酸对人外周血单个核细胞的免疫刺激作用
CpG寡核苷酸对人外周血单个核细胞的免疫刺激作用郭勇;曹星梅;刘捷;田玮;张王刚;姚煜【期刊名称】《西安交通大学学报(医学版)》【年(卷),期】2002(023)005【摘要】目的观察CpG ODN、GM-CSF、CD40-L对正常人外周血单个核细胞(PBMC)的免疫刺激作用,以期筛选出一种高效的疫苗佐剂.方法用CpG ODN 2006、GM-CSF、CD40-L刺激正常人PBMC,48h后采用ELISA法检测培养上清液中IFN-γ、IL-12及IL-10水平;应用免疫荧光法检测PBMC上CD40、CD86、HLA-DR的表达.结果 CpG ODN 2006能诱导正常人PBMC分泌较高水平的IL-12、IFN-γ,抑制IL-10的分泌;上调PBMC CD40、CD86、HLA-DR表达的作用最强.结论 CpG ODN 2006是一种免疫刺激作用强大的新型佐剂,可用于多种疫苗的制备.【总页数】3页(P441-443)【作者】郭勇;曹星梅;刘捷;田玮;张王刚;姚煜【作者单位】西安交通大学,第二医院血液科,西安,710004;西安交通大学,第二医院血液科,西安,710004;西安交通大学,第二医院血液科,西安,710004;西安交通大学,第二医院血液科,西安,710004;西安交通大学,第二医院血液科,西安,710004;西安交通大学,第一医院肿瘤内科,西安,710061【正文语种】中文【中图分类】R392.33【相关文献】1.CpG寡核苷酸对人外周血B淋巴细胞免疫刺激作用 [J], 陈军浩;吴超;欧阳建;刘勇;耿东进2.CpG寡核苷酸的免疫刺激作用及其在疫苗中的应用 [J], 殷翔;周红3.CpG寡核苷酸对人外周血淋巴样树突状细胞的增殖作用 [J], 蔡玲;王法春4.抗人TLR9抗体对CpG寡核苷酸介导的人外周血单核细胞肿瘤坏死因子-α释放的影响 [J], 吴翀;丁国富;周红5.用富含CpG的质粒初免并以蛋白及CpG寡核苷酸和Quil A加强免疫可诱导强的抗HCV NS3细胞及体液免疫应答 [J], YuH;BabinkLA;vanDrunenLittel-vandenHurkS;施海晶;胡云章因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
CpG ODN诱导浆细胞样树突状细胞免疫调节的作用机制
CpG ODN诱导浆细胞样树突状细胞免疫调节的作用机制胡向农;魏强
【期刊名称】《现代免疫学》
【年(卷),期】2005(25)4
【摘要】CpGODN是包含未甲基化的CpG基序的寡核苷酸,可以通过识别Toll 样受体9(TLR9)诱导浆细胞样树突状细胞(PDC),促进其在归巢的同时由未成熟状态向成熟状态转化,并有效地提呈抗原,增加共刺激分子的表达,提供T细胞活化需要的第二信号;另外,CpGODN诱导PDC释放细胞因子IFN-α、同时在CD40L的协助下释放IL-12,由此引发T细胞向Th1方向分化和活化NK细胞,释放IFN-γ,启动先天性免疫和获得性免疫。
对CpGODN的深入研究,将对抗感染、肿瘤免疫提供新的途径。
【总页数】4页(P337-340)
【关键词】CpG;ODN;TOU样受体9;浆细胞样树突状细胞
【作者】胡向农;魏强
【作者单位】四川大学华西医院泌尿外科
【正文语种】中文
【中图分类】R392.1
【相关文献】
1.CpG ODN2216刺激慢性乙型肝炎患者浆样树突状细胞表型和功能的变化 [J], 刘庆峰;张政;姚金霞;施明;张晖;毛远丽;王福生
2.CpG ODN诱导树突状细胞的免疫调节机制 [J], 孙梯业;颜伟
3.CpG ODN诱导树突状细胞抗肿瘤作用的研究进展 [J], 孙梯业;颜伟;周宁新
4.CpG ODN对食管癌细胞RNA转染的脐血树突状细胞诱导CTL抗肿瘤功能的影响 [J], 王健;史玉;张永泽;潘丽兰;王欢;张红艳;李凤铭;郑海萍
5.CpG ODN对人胃癌BGC 823细胞RNA转染的脐血树突状细胞诱导CTL活性影响的研究 [J], 杜英;黄玉敏;孙蕾;董子明
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CpG ODN抑制EB病毒复制的体外研究的开题报告
CpG ODN抑制EB病毒复制的体外研究的开题报告
题目:CpG ODN抑制EB病毒复制的体外研究
背景与意义:
微生物ODN(oligodeoxynucleotides)是指由5'-3'连接的寡聚核苷酸,在免疫应答与炎症中具有重要的调节作用,并且被广泛应用于体内免疫治疗。
研究表明,特定的阿德诺酸脱氨酶(ADARs)和RNA后转录修饰(RNA editing)介导EB病毒免疫逃逸。
因此,我们预计CpG ODN(含有CpG二核苷酸序列的ODN)能够抑制EB病毒复制,从而减少免疫逃逸的现象。
研究目的:
本研究旨在探究CpG ODN对EB病毒复制的影响,以期为EB病毒的免疫治疗提供理论依据。
研究内容:
1. 确定EB病毒复制的细胞模型(如LCL等)。
2. 提取EB病毒RNA,并筛选出ADARs和RNA后转录修饰的关键区域。
3. 合成含有CpG二核苷酸序列的ODN,以四氯化碳和技术级钠盐为媒介将ODN 导入细胞。
4. 观察CpG ODN对EB病毒复制的作用,并评估其效果。
5. 利用荧光定量PCR技术检测EB病毒RNA的表达。
6. 对研究结果进行统计学分析并探究其机制。
期望结果:
CpG ODN可以抑制EB病毒复制,从而减少免疫逃逸的现象,为EB病毒的免疫治疗提供理论依据。
CpG ODN佐剂促进HBsAg疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的探讨
CpG ODN佐剂促进HBsAg疫苗诱导小鼠细胞免疫应答的探讨马瑞;黄俊;吴长有【期刊名称】《免疫学杂志》【年(卷),期】2006(22)3【摘要】目的探讨cpG ODN对重组乙型肝炎表面抗原(HBsAg)诱导小鼠细胞免疫应答的影响。
方法HBsAg和HBsAg+CpG ODN分别肌肉注射免疫Balb/c 小鼠后,从淋巴组织(脾和淋巴结)和非淋巴组织(肺)分离淋巴细胞,体外经HBsAg抗原刺激后,利用ELISA检测细胞培养液中IFN-γ的水平,再利用流式细胞仪在单个细胞水平上检测IFN-γ^+细胞的频率,分析IFN-7^+细胞亚群。
结果对照组和HBsAg免疫组IFN-γ产生的水平很低,当HBsAg加强免疫1~2次后,IFN-γ表达仍然没有明显升高;而CpG ODN+HBsAg免疫1次或加强免疫后,CpG显著促进HBsAg诱导的IFN-γ产生。
进一研究结果表明CpG促进HBsAg诱导淋巴器官和非淋巴器官内CD4^+和CD8^+T细胞IFN-γ的表达。
结论CpG免疫佐剂不仅能诱导细胞免疫应答同时也诱导体液免疫应答,提示CpG ODN可以用于HBsAg预防和治疗性佐剂。
【总页数】4页(P235-238)【关键词】CpG;0DN;HBsAg;疫苗;佐剂【作者】马瑞;黄俊;吴长有【作者单位】中山大学基础医学院免疫学教研室【正文语种】中文【中图分类】R392.11【相关文献】1.分析CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导的细胞免疫应答的作用 [J], 杜晓敏;周益民;2.佐剂CpG-ODN与重组HBsAg疫苗联合免疫乙型肝炎病毒转基因小鼠的免疫应答研究 [J], 张卓然;杨淑凤;李炎;郑丛龙3.CpG ODN佐剂对呼吸道合胞病毒重组疫苗诱导的细胞免疫应答的作用 [J], 李娜;刘建勋;曾瑞红4.CD137L在HBsAg DNA疫苗诱导小鼠细胞免疫应答中的佐剂效应 [J], 江虹;黄茵;史丽云;吴炜;蔡玲斐;贾红宇;钟石根5.CpG-ODN调节小鼠免疫细胞对HBsAg体液免疫应答性的初步研究 [J], 刘兴田;冯永堂;孟洁;苗乃法;鞠吉雨;吴国庆;魏兵因版权原因,仅展示原文概要,查看原文内容请购买。
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( 稿 日期 :08 2 4 收 20 —1 —2 )
文章 编 号 :07 272 1) 1 0 3 — 2 1 —48 (00 0 — 0 7 0 0
C G O N诱 导人 P MC增殖 的体外 实 验研 究 p D B
李金龙 , 耿 力, 韩 刚 , 贾明库
( 林大学第二医院 普通外科 , 吉 吉林 长 春 104 ) 30 1
中国 实 验诊 断 学
21 00年 1 月
第 l卷 4
第1 期
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1 3. 7
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病毒和猪呼吸道冠状病毒的研究 [] 中国预 防兽医学报 ,O2 J. 20 ,
2 3 1. 4: 0
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p a o i n e i Caghn104 , h a ilfJi U irt hncu 30 1 C i ) t l nG O N在体外刺激人 P MC的增殖情况。方法 o D B
分别以肿瘤抗原 ( g 、 A ) 白细胞介 素-(L2 2 I-)
和 c D G o O N单独 或联合刺激正常人和肿瘤患者 P MC 并对 其增殖活性 进行测定 。结 果 以 c D B , G o O N刺激人 P M BC 组的细胞增殖活性明显高于对照组( P<00 ) .5 。结论
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