苯酚硫酸法测总糖
资料-多糖含量测定的各种方法优缺点
苯酚-硫酸法测多糖含量一、原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。
再以比色法测定。
二、试剂1、浓硫酸：分析纯，95.5%2、80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
3、6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。
（每次测定均需现配）4、标准葡聚糖（Dextran,Pharmacia）或分析纯葡萄糖。
5、15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
6、5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
7、6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml 水。
8、6mol/L 盐酸三、操作1、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml，各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml 及浓硫酸5.0ml，摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2、样品含量测定1）取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。
最后一次将残渣一起到入离心管。
注意：总的溶液不要超出10毫升。
（既不要超出离心管的容量）。
2）离心，转速3000转/分钟，共三次。
第一次15分钟，取上清液。
后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。
最后滤液保持18毫升左右。
3）水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
4）定容取样。
水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。
定容至25毫升的容量瓶中。
苯酚_硫酸法测定围乐颗粒中总多糖的含量
Tab 1
样品含量 / mg 4 98 4 98 4 98 4 98 4 98 4 98
表 1 加样回收率试验结果( n = 6) Results of sample recovery test( n= 6)
加入量 /m g 5 10 5 13 5 12 5 16 5 08 5 09 测得量 / mg 10 09 10 01 10 02 10 15 10 01 10 00 回收率 /% 100 20 98 05 98 44 100 19 99 02 98 62 x /% RS D /%
( 收稿日期: 2007 - 08 - 22 修回日期: 2008 - 01 - 02)
Ch ina Pharmac y 2008 V ol. 19 No. 9
685
丁醇= 4 ! 1 ) 脱蛋白, 样品液与氯仿- 正丁醇的体积比为 4 ! 1, 分取上清 液, 精密量取 1 0 mL , 加无水乙醇 至含醇量 达 70% , 冷藏, 5 000 r min - 1 离心 30 m in, 取沉淀, 依次加乙醚、 无水乙醇洗涤 3 次, 挥干, 沉淀加水溶解, 定容至 100 m L , 即 得。 2 2 检测波长的确定 分别吸取一定量 的葡萄糖对照品 溶液和已处 理好的供 试 品溶液, 显色后在 280~ 600 nm 波长范围内扫描。结果表明, 葡萄糖对照品和供试品的最大吸收峰位一致, 均位 于 487 nm 波长处, 故本试验选用 487 nm 作为检测波长。 紫外吸收光谱见 图 1。
ABSTRACT O BJECT I V E: T o esta blish phenol- sulfuric acid m ethod fo r t he deter minatio n of the co ntent o f t otal polysac cha rides in W eile g r anules M ET HO DS: T he samples w er e depro teinized by Sev ag metho d, co lo red by phenol- sulfur ic acid m etho d ( w ater bat h at 60 fo r 30 m in) , and the co nt ent of to tal poly saccha rides in W eile g r anules w as de term ined w ith -1 G luco se as co nt ro l RESU L T S: T he linear r ange o f G lucose w as 20 47~ 102 36 g mL ( r = 0 999 4 ) , w ith an av er age re co ve ry of 99 09 % ( RS D = 0 92% , n = 6) T he content of to tal poly sacchar ides in W eile g ranules w as 41 63% CO N CL U S IO N : T his met hod w as sim ple, accur ate and r ep ro ducible, and suit able fo r q ualit y contr ol of W eile g r anules KEY WORDS W eile g ranules; T ot al p o ly sa ccharides; Pheno l- sulfur ic acid m etho d; Content det erm inat io n 围乐颗粒是根据治疗更年期综合征的经验方 ( 主含赤芍、 当归、 牡丹皮等药材) , 结合现代药理研究, 提取精制其中的芍 药总苷、 当归多糖等有效部位( 成分) 制备而成的新制剂。当归 多糖可促进造血细胞的形成, 加快血细胞的分化与成熟, 促进血 [1] 虚动物外周血细胞数量恢复正常 。其机制可能是通过诱导造 血微环境的成纤维细胞分泌某些造血生长因子, 从而促进造血 祖细胞的增殖分化[ 2 ] ; 另外, 当归多糖还有免疫调节作用 [3 ~ 5 ] 。 由 于当归多糖是与疗效有关的主要有效部位之一, 且在方中的比 例最大, 故为了控制该制剂的质量与疗效, 笔者把多糖含量作 为质控指标, 采用苯酚- 硫酸法进行了含量测定。 试药 D - 无水葡萄糖对照品 ( 中国药品生物制品检定所, 批号: 110833- 200503) ; 围乐颗粒 ( 南方医科大学中医药学院新药开 发实验室) ; 水为重蒸馏水, 其它试剂均为分析纯。 1 2
[课程]资料-多糖含量测定的各种方法优缺点
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苯酚-硫酸法测多糖含量一、原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。
再以比色法测定。
二、试剂1、浓硫酸：分析纯，95.5%2、80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
3、6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。
（每次测定均需现配）4、标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）或分析纯葡萄糖。
5、15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
6、5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
7、6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
8、6mol/L 盐酸三、操作1、制作标准曲线准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml，各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml，摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2、样品含量测定1）取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。
最后一次将残渣一起到入离心管。
注意：总的溶液不要超出10毫升。
（既不要超出离心管的容量）。
2）离心，转速3000转/分钟，共三次。
第一次15分钟，取上清液。
后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。
最后滤液保持18毫升左右。
3）水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
4）定容取样。
水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。
定容至25毫升的容量瓶中。
苯酚硫酸法测多糖含量计算公式
苯酚硫酸法测多糖含量计算公式多糖是一类高分子化合物，由多个单糖分子通过糖苷键连接而成。
多糖广泛存在于天然产物中，如植物、动物、微生物等。
多糖具有多种生物活性，如抗氧化、抗肿瘤、免疫调节等，因此在医药、食品、化妆品等领域有着广泛的应用。
测定多糖含量是多糖研究的基础，其中苯酚硫酸法是一种常用的测定方法。
苯酚硫酸法是一种比色法，其原理是将多糖与苯酚在硫酸存在下加热，生成一种紫色化合物，其吸光度与多糖含量成正比。
该方法具有操作简便、灵敏度高、重现性好等优点，因此被广泛应用于多糖含量的测定。
苯酚硫酸法测定多糖含量的计算公式如下：多糖含量（%）=（A-B）×V×D/（C×m）其中，A为待测样品的吸光度值，B为空白对照的吸光度值，V为总体积，D为稀释倍数，C为苯酚硫酸试剂的浓度，m为样品的质量。
在进行苯酚硫酸法测定多糖含量时，需要注意以下几点：1.样品的制备：多糖样品需要经过适当的处理，如粉碎、溶解、过滤等，以获得均匀的样品。
2.空白对照的制备：空白对照是指不含多糖的样品，其制备方法与待测样品相同。
3.苯酚硫酸试剂的制备：苯酚硫酸试剂需要在使用前制备，其制备方法为将苯酚和浓硫酸按一定比例混合，制成苯酚硫酸试剂。
4.吸光度的测定：吸光度的测定需要使用紫外可见分光光度计，选择合适的波长进行测定。
5.计算公式的应用：在进行计算时，需要注意各参数的单位，如体积的单位为毫升，质量的单位为克。
苯酚硫酸法是一种简便、灵敏、重现性好的多糖含量测定方法，其计算公式简单易懂，适用于多种多糖的测定。
在进行测定时，需要注意样品的制备、空白对照的制备、苯酚硫酸试剂的制备、吸光度的测定以及计算公式的应用等方面，以保证测定结果的准确性和可靠性。
苯酚-硫酸比色法测定多糖含量
苯酚-硫酸比色法测定多糖含量
苯酚-硫酸法是常用的多糖含量测定方法之一。
该方法基于多糖在硫酸的作用下，与苯酚产生颜色反应的原理，利用光度计测定反应产物的吸收值，从而计算出多糖的含量。
步骤如下：
1. 取样品0.1g，在50ml锥形瓶中加入5ml去离子水，振荡
20min溶解。
2. 加入2ml 5%苯酚水溶液，振荡均匀。
3. 加入5ml浓硫酸，使用磁力搅拌器搅拌1-2min。
4. 将混合物放置在冷水中冷却10min。
5. 用紫外分光光度计在490nm处测定吸光度A，同时以含有相同试验液体积的去离子水为对照。
6. 计算样品中多糖含量。
该方法测定简便，精度高，适用于多糖含量较高的样品。
但此法不能区分多糖的种类及其组成，不能应用于含非多糖的样品中。
多糖含量测定方法
多糖含量的测定3,5-二硝基水杨粗多糖中的总糖含量使用苯酚-硫酸法进行测定，还原糖用酸（DNS）法测定，多糖含量=总糖-还原糖。
1、总糖含量测定实验原理：多糖在硫酸作用下，先水解成单糖，并脱水生成糖醛衍生物，与苯酚生成橙黄色溶液，在490nm处有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。
试剂：浓硫酸（分析纯）、5%苯酚溶液（分析纯）、标准葡萄糖。
操作步骤：①制作标准曲线：准确称取105 C烘干至恒重的葡萄糖50mg于500ml容量瓶中配成0.1 mg/ml的标准溶液，用蒸馏水分别配成0、0.02、0.04、0.06、0.08、0.1 mg/ml。
1 ml标准液分别加入5%苯酚溶液1 ml，并迅速加入浓硫酸5 ml，静置10 min。
摇匀，30 °C放置30 min后于490nm测定OD值，以葡萄糖含量为横坐标，OD值为纵坐标，制作得到标准曲线。
②样品含量测定：吸取1.0ml样品液，按照上述步骤操作测定OD490，并代入标准曲线计算样品的总糖含量。
2、还原糖含量实验原理碱性条件下，DNS可与还原糖反应生成3-氨基-5-硝基水杨酸。
此物质在煮沸条件下成棕红色，且颜色深浅在一定范围内与还原糖含量成线性关系。
据此可通过测定OD值确定还原糖含量。
试剂及配制：浓度为1mg/ml的葡萄糖标准溶液。
DNS显色液：称取3.25g DNS溶于少量蒸馏水中并转移至500ml容量瓶中，加入2mol/L的NaOH溶液162.5ml，再加入7.5ml的丙三醇，摇匀，加蒸馏水定容至500ml，摇匀。
操作步骤① 标准曲线制作：在6支试管中分别加入1mg/ml葡萄糖标准溶液0.00ml，0.10ml，0.20ml，0.30ml，0.40ml，0.50ml，补蒸馏水至0.5ml，然后加入DNS 试剂1.5ml，充分混匀。
置于沸水浴中煮沸5mi n,然后迅速流水冷却，并分别向试管中加入4ml蒸馏水，混匀。
在540nm处读0D值。
总糖含量的测定苯酚硫酸法
总糖含量的测定苯酚硫酸法
总糖含量的测定苯酚-硫酸法的实验原理为：苯酚-硫酸试剂可与游离的或寡糖、多糖中的己糖、糖醛酸（或甲苯衍生物）起显色反应，己糖在490nm处（戊糖及糖醛酸在480nm）有最大吸收，吸收值与糖含量呈线性关系。
实验材料包括葡萄糖试剂、试剂盒、浓硫酸、苯酚等，实验步骤如下：
1. 材料处理：将0.5～1g所测的材料捣碎，用适量蒸馏水、玻璃碾磨器碾磨并分次抽提，混合液离心得抽提液即样品液。
2. 标准曲线制作：取50μg/ml的己糖标准溶液0ml，0.1ml，0.2ml，0.3ml，0.4ml，0.5ml于试管中，用水补足到0.5ml，加0.3ml 5%酚溶液，混匀后快速加入1.8ml浓硫酸，振荡混匀，室温放置20min即可出现橙黄色，以第一管调零点，可于490nm处比色测定读OD值。
以糖含量为横坐标，相应的OD值为纵坐标，绘制标准曲线。
3. 样品含量测定：取0.5ml内含2～25μg糖量，同样加入0.3ml 5%酚溶液，混匀后立刻沿管壁加入浓硫酸1.8ml，振荡混匀，达室温后，可测490nm处的OD值，从标准曲线上查相应糖含量。
该方法不需要沸水浴加热，且蛋白质的存在对显色反应影响不大，故也可用于糖蛋白中的己糖测定，还可用于己糖甲基化衍生物和6-脱氧核糖、戊糖的测定。
除此之外，该方法的热量来自浓硫酸与水的混合，因此加浓硫酸时反应快，且应立即混匀，试管应大一些，以免烫手。
苯酚_硫酸法测定食品总糖方法的应用和改进
半乳糖
90. 4 90. 7 92. 2 88. 1 99. 2 97. 2 77. 1
乳糖
73. 2 70. 3 70. 5 66. 0 73. 6 71. 8 90. 6
麦芽粮
63. 9 58. 2 60. 2 56. 6 73. 1 83. 0 99. 0
庶糖
102. 3 100. 9 102. 4 99. 8 103. 8 99. 8 100. 1
淀粉
103. 0 103. 4 101. 0 100. 7 102. 1 102. 5 99. 4
总糖
89. 8 86. 7 88. 8
81. 1 84. 0 99. 3
总糖 + 纤维 -
103. 9
上面的 6 种方法在资料上转载 ,以葡萄糖计 ;苯酚法以庶 糖计 。本法总糖回收范围 91. 0 %～107. 3 % x = 99. 3 % ;总糖 + 纤维素 92. 0 %～110. 2 % x = 103. 9 %
本法结果明显优于以上 6 种方法 。单糖的回收以半乳糖
结果较差 ,纤维素不影响总糖的测定 ,且其他各种纯品糖 、总 糖回收符合检验要求 。
2. 2 测定样品 、观察精密度 选择 2 个含糖量低 、含纤维素高 的样品 ,柿茶叶 、辣椒面 ;2 个含糖量高 ,含纤维素少的样品 ,面 粉 、大米 。测定含糖量并观察精密度 。
素 。5 %苯酚溶液 、分析纯浓硫酸 、15 %盐酸 。
0. 5ml 加入总糖中按总糖测定 。
表 1 不同测定方法对纯品糖 、总糖 、总糖 + 纤维素 、回收 ( %)
方法
斐林 1 号 斐林 2 号 甘油铜法 氧化法 DNS 法 蒽酮法 苯酚法
苯酚硫酸法测总糖
苯酚-硫酸法1. 原理苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。
再以比色法测定。
2. 试剂浓硫酸6%苯酚：先配置80%苯酚：80g苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20g水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
再配置6%苯酚：取75ul的80%苯酚于烧杯中，加入960ul水（每次测定均需现配）。
3. 操作步骤(1) 制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
(2) 样品含量测定：吸取1.0ml样品，补水至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml，摇匀冷却室温放置30分钟以后于490nm测光密度。
每次测定取双样对照。
以标准曲线计算多糖含量。
注意事项:1、苯酚是否重蒸、其溶液浓度、是否现配现用2、加入硫酸后是否加热、显色时间的确定3、所选波长：这个最为重要，因为已糖及其甲基化衍生物在490nm下有最大吸收峰，而戊糖、糠醛酸及其甲基化衍生物在480nm下有最大吸收峰。
如果阁下的多糖样品不是单一品而是数种混合（纯化也难一达到100%纯），则波长一定要扫描过再做4、加浓硫酸前要摇匀，加之后也要摇匀。
（1）此法简单、快速、灵敏、重复性好，对每种糖仅制作一条标准曲线，颜色持久。
（2）制作标准线宜用相应的标准多糖，如用葡萄糖，应以校正系数0.9校正μg数。
（3）对杂多糖，分析结果可根据各单糖的组成比及主要组分单糖的标准曲线的校正系数加以校正计算（4）测定时根据光密度值确定取样的量。
光密度值最好在0.1——0.3之间。
比如：小于0.1之下可以考虑取样品时取2克，仍取0.2ml样品液，如大于0.3可以减半取0.1ml的样品液测定。
苯酚硫酸法测定草莓中总糖含量
摘要：目的：建立草莓中总多糖含量测定方法。
方法：以葡萄糖为对照品，采用苯酚-硫酸法，在490nm 处测定吸光度。
结果：葡萄糖浓度在10～100mg/L 范围内与吸光度呈良好的线性关系（r=0.9995）；回收率在90.0%~101.5%范围内，测得不同品种的草莓总多糖含量在3.43%~5.43%。
结论：该方法简便准确、稳定可靠，可作为草莓中总多糖含量的测定方法。
关键词：苯酚-硫酸法；草莓；总糖含量中图分类号：TS262.6文献标识码：ADOI 编号：10.14025/ki.jlny.2019.04.011蔡红梅1，田子玉2*（1.吉林省农业科学院农业质量标准与检测技术研究所；2.吉林省农业科学院农业经济与信息研究所，吉林长春130033）苯酚-硫酸法测定草莓中总糖含量shi yan yanjiu草莓是蔷薇科草莓属植物，由于其营养丰富、含有多种营养物质、且有保健功效等特点广受人们的喜爱。
已报道的总糖含量测定方法有苯酚-硫酸[1-3]、蒽酮-硫酸[4-5]等，其中，苯酚-硫酸法的应用最多。
本实验建立苯酚-硫酸法测定草莓中总糖含量的方法，旨在为草莓品质分析提供理论基础。
1材料与方法1.1原料不同品种的草莓，购自长春市的某超市和农贸市场。
1.2试剂苯酚、葡萄糖、浓硫酸、乙腈等试剂均为国产分析纯。
1.3仪器电子天平（德国Sartorius ）；GSY-11型恒温水浴箱（北京市医疗设备厂）；分光光度计（北京普析通用仪器有限责任公司）；数控超声清洗器（昆山市超声仪器有限公司）；TDL －40B 离心机（上海安亭科学仪器厂）。
1.4供试溶液的制备草莓匀浆后，准确称取1g （精确到0.001g ）于25mL 具塞试管内，加入10mL 的乙腈-水（v ∶v=1∶9）溶液，涡旋10s ，超声提取30min ，离心，取上清液，制得供试溶液。
1.5标准溶液的配制取适量葡萄糖于105℃烘箱内烘至恒重，精确称取0.1000g 于100mL 容量瓶，用蒸馏水溶解定容刻度，即得浓度为1.0000mg/mL 的葡萄糖标准溶液。
总糖含量的测定方法
总糖含量的测定方法
总糖含量的测定方法有以下几种：
1. 酚硫酸法：将样品与酚硫酸溶液反应生成花色素，然后用紫外分光光度计测定吸光度值，并通过标准曲线计算出总糖含量。
2. 比色法：将样品与苯酚溶液和硫酸溶液混合反应，生成芝麻酚，再用紫外分光光度计测定吸光度值，并通过标准曲线计算出总糖含量。
3. 酵母法：将样品加入含糖培养基，然后将培养基放入恒温摇床中培养，通过测定培养液中呼吸产生的二氧化碳量来计算总糖含量。
4. 红外光谱法：将样品与KBr混合制成透明的样品片，然后使用红外光谱仪进行测定，通过分析样品片的红外吸收光谱来计算总糖含量。
5. 高压液相色谱法：将样品通过高压液相色谱仪进行分析，通过分离出的糖类成分来计算总糖含量。
总多糖含量测定方法
总多糖含量测定方法
总多糖的含量测定方法有多种，其中包括苯酚-硫酸法、3,5-二硝基水杨酸比色法、蒽酮-硫酸法等。
1. 苯酚-硫酸法：苯酚-硫酸试剂可与游离的或多糖中的己糖、糖醛酸起显色反应，己糖在490nm波长处、戊糖及糖醛酸在480nm 波长处有最大吸收，吸收度与糖含量呈线性关系。
2. 3,5-二硝基水杨酸比色法（DNS法）：3，5-二硝基水杨酸与多糖水解后的还原糖生成有色物质进行测定。
这种方法是在碱性条件下显色，较准确测定还原糖与总糖的含量从而求出多糖的含量，可消除还原性杂质的干扰。
3. 蒽酮-硫酸法：多糖与硫酸发生脱水反应，生成糠醛或其衍生物，与蒽酮试剂缩合生成有色物质进行测定。
此外，间羟基联苯法也是一种常用的多糖中糖醛酸含量测定方法，该法较硫酸咔唑法受中性糖残基的干扰更小。
另外还有超氧阴离子清除率和羟自由基清除率的检测方法、水分的检测方法等。
苯酚硫酸法测多糖原理
苯酚硫酸法测多糖原理
苯酚硫酸法是一种常用的测定多糖含量的方法，其原理是利用苯酚与
硫酸的混合物将多糖分解成糖酸，然后使用精确浓度的碘液进行滴定，通过测算滴定液的消耗量来计算出样品中多糖的含量。
具体实现过程如下：首先将待测样品溶于开水中，加入预先混合的苯
酚-浓硫酸混合物中，然后在混合液中加入恒定浓度的碘液，开始实时记录消耗的滴定液的数量。
当滴定液中的碘消耗完时，混合液将变成
蓝色，这时就可以计算出样品中多糖的含量了。
这种方法的优点是快速方便，可适用于大量样品的测定，且有较高的
灵敏度和准确度，常常用于食品糖的测定以及多糖的生产和质量控制。
虽然苯酚硫酸法测定多糖的原理相对简单，但仍需要在操作时严格控
制实验条件、仔细检查每一步的操作是否正确，以确保测定结果的准
确可靠。
同时还需要注意避免硫酸对人体的危害，做到防护措施上的
全面。
苯酚-硫酸法测定菊苣根中总糖的含量
苯酚－硫酸法测定菊苣根中总糖的含量目的：研究菊苣根总糖的测定方法。
方法：采用苯酚-硫酸法，在488nm处测菊苣根中总糖的含量。
结果：回归方程为Y=10.908X-0.13264，r=0.9999，线性范围为30-80μg/ml。
平均回收率为103.27%，RSD=2.20%。
菊苣根中平均总糖含量为平均含量为34.613mg/g。
结论：方法简便，结果准确，为菊苣根总糖的进一步研究奠定良好的基础。
标签：菊苣根总糖苯酚-硫酸法菊苣根为菊科植物毛菊苣(CichoriumglandulosumBoiss.etIIout )及菊苣(CichoriumintybusL.)干燥的根。
菊苣系维吾尔族习用药材，维吾尔语名为卡申纳，有清肝利胆、健胃消食、利尿消肿之功效[1]。
《中国药典》2000年版一部只收载其地上部分。
菊苣根主要含有三萜、倍半萜、有机酸等类成分[2-4]。
现代药理研究表明，菊苣根具有改善消化器官活动机能、改善心脏功能、保肝降脂、降血糖和抗菌等作用[5]。
为了确定菊苣根总糖的含量，本文利用苯酚-硫酸法制得醛糖衍生物，采用分光光度法对菊苣根总糖含量进行测定。
1 仪器与试药SpectrumLab 54分光光度计(上海棱光技术有限公司)，RE52CS-2旋转薄膜蒸发仪(上海亚荣仪器厂)，KQ-400DBC超声清洗仪(昆山市超生仪器有限公司)，BS110S分析天平(北京，赛多利斯)，DZF-6021型真空干燥箱(上海精宏实验设备厂);其它所用试剂均为分析纯。
菊苣根采自新疆乌鲁木齐市南山，经新疆自治区中医医院李永和主任药师鉴定为菊科植物菊苣(CichoriumintybusL.)的干燥根。
2 方法与结果2.菊苣根总糖的提取：菊苣根干燥，粉碎过20目筛，精密称取药材粉末10g，用石油醚索氏回流提取4h，药渣在50℃减压干燥至干。
然后精密称取脱脂后的药渣3g，加蒸馏水100mL，回流提取3次。
每次20min，过滤，合并滤液并定容至200 ml，得0.015g/ml的总糖提取液，备用。
苯酚_硫酸法测定葡萄酒中总糖含量的样品处理_刘志明
糖含量的相对标准偏差（RSD）为1.6%~2.3%，加标回收率为94.7%~97.8%。解决了测定时酒样碳化和色扰问题，方法简便易行，测定
数据的稳定性、重现性、精密度和准确度均较高。
关 键 词：苯酚-硫酸法；葡萄酒；总糖含量；样品处理
中图分类号：O656.3
文献标识码：A
文章编号：0254-5071（2011）02-0158-04
Sample treatment for determination of total sugar content in wine by phenol-sulfuric acid method
LIU Zhiming, TANG Yanjun, WU Haizhou, ZHANG Qingrong
(College of Food Science, Heilongjiang Bayi Agricultural University, Daqing 163319, China)
s=100×c（/ c0+c）i
式中：s是加标回收率，%；c0是原始酒样中总糖含量，mg/mL； ci是加入的标准葡萄糖溶液浓度，mg/mL；c是加标后测 得的总糖含量，mg/mL。
2 结果与讨论 2.1 单因素试验
（1）沉淀剂加量：沉淀剂加量对红葡萄酒脱色率的影 响见图1。结果表明，试验条件下红葡萄酒脱色率在沉淀剂加 量10%时，绝大部分有色物质、杂质均被除去，综合考虑该 加量最适宜。故选择0.5%、1.0%和1.5%作为沉淀剂加量的 3个水平进行葡萄酒总糖含量测定的样品处理正交试验。
②测定结果稳定性：按①方法，每隔10min测定一次 样液，测1h内数据的稳定性[9]。
③测定结果重现性：按①方法制得4种葡萄酒样处理 液各6份，测定吸光度值。
硫酸苯酚法测可溶性总糖含量
硫酸苯酚法测可溶性总糖含量一、测定原理可溶性糖主要有能溶于水及乙醇的可溶性单糖和寡聚糖。
糖在浓硫酸作用下脱水生成糠醛或羟甲基糠醛能与苯酚所合成一种橙红色化合物，在10~100mg 范围内其颜色深浅与糖的含量成正比，且在485nm波长下有最大吸收峰，因此可用比色法在此波长下测定。
硫酸苯酚法可以用于甲基化的糖、戊糖和多聚糖的测定，方法简单，灵敏度高且不受蛋白质存在的影响，产生的颜色稳定时间160min以上。
二、实验试剂1．90%苯酚溶液：称取90g苯酚，加蒸馏水定容至100ml。
2．9%苯酚溶液：取3ml 90%苯酚溶液，加蒸馏水至30ml，现配先用。
3．浓硫酸（比重1.84）4．1%蔗糖标准液：将分析纯蔗糖在80 ℃下烘至恒重，精确称取1.000 g ，加少量水溶解，移入100ml容量瓶中，加入0.5ml浓硫酸，用蒸馏水定容至刻度。
5．100μg/L 蔗糖标准液：精确吸取1％蔗糖标准液lml加入100ml容量瓶中，加蒸馏水定容。
三、仪器设备分光光度计，50ml比色管7支，移液管四、实验步骤1．标准曲线的制作取20 ml刻度试管6支，从0～5分别编号，按表1加入溶液和水，然后按顺序向试管内加入1ml 9％苯酚溶液，摇匀，再从管液正面以5～20 s 时间加入5ml浓硫酸，摇匀。
比色液总体积为8ml，在室温下放置30 min ，显色。
然后以空白为参比，在485 nm波长下比色测定，以糖含量为横坐标，光密度为纵坐标，绘制标准曲线，求出标准直线方程。
ml蒸馏水，塑料薄膜封口，于沸水中提取30min（提取2次），提取液过滤入25 ml容量瓶中，反复冲洗试管及残渣，定容至刻度。
3．测定吸取0.5ml样品液于试管中（重复2次），加蒸馏水1.5 ml，同制作标准曲线的步骤，按顺序分别加入苯酚、浓硫酸溶液，显色并测定光密度。
由标准线性方程求出糖的量，计算测试样品中糖含量。
四、结果计算可溶性糖含量（％）X = ﹙C×D／M﹚×100X———每百克样品总糖含量C———在标准曲线上查得的糖含量（g）D———稀释倍数M———样品重量(g)。
多糖测定原理 怎样检测比色皿是否洗干净
苯酚-硫酸法原理：即是检测总糖含量，多糖在浓硫酸作用下，水解生成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，然后与苯酚缩合成橙色的化合物，且颜色稳定（时间长达160min），在波长490nm 处有最大吸收，其吸光度与总糖含量成线性关系，因此，可以利用分光光度法测定其吸光度，并利用外标法定量。
苯酚- 硫酸法是测定多糖最常用的一种方法。
多糖在浓硫酸作用下，水解成单糖，并迅速脱水生成糠醛衍生物，与苯酚缩合成有色化合物，并通过比色法确定含量，该方法具有操作简单、快速、重复性好，显色后稳定性较好等优点，但对有色样品结果易偏高蒽酮- 硫酸法是多糖类在浓硫酸作用下水解、脱水，再与蒽酮结合成有色化合物，于最大吸收波长处测吸光度。
蒽酮- 硫酸法稳定性较差，宜新鲜配制并注意避光。
苯酚溶液的配制。
称取100 g 苯酚( 纯苯酚为针状无色结晶) ，加铝片0.20 g( 先用1∶6 的盐酸除去铝片表面的氧化铝后再称量使用) ，碳酸氢钠0.10 g，蒸馏收集182 ℃的馏分。
准确称取80 g 苯酚( 分析纯，重蒸馏试剂) ，加20 ml蒸馏水使之溶解，即得浓度80% 苯酚( 4 ℃冰箱中可避光长期保存) 。
其他浓度于临用前以浓度80%苯酚配制。
蒽酮硫酸试剂的配制。
精密称取 2.000 g 蒽酮，溶解到浓度为80% 的硫酸中，以浓度为80% 的浓硫酸定容至1 000 ml，现用现配。
怎样检测比色皿是否洗干净可以做一下UV，测试一下透光率于标准对比用乙醇清洗后倒立，待干后看是否有划痕一简单方法：注入水测吸光度，先调零后将两比色皿对调位置，看差值。
最简单的办法，是装了洗涤液之后，用垂直的两个角度测量，看是否一样的谱图怎样将比色皿洗干净放在浓硫酸或酒精浸泡比色皿的两个透光面是不可以用刷子刷的，可以倒入洗洁精，用手轻轻刷，两个透光面一定要小心，不要将其划伤。
然后用水将洗洁精冲洗干净后，以表面补挂水珠为干净标准~用蒸馏水冲洗3遍，自然风干即可~用甲醇或无水乙醇淌洗一下，然后自然风干即可可以泡在SDS（十二烷基硫酸钠）溶液里面，用的时候用蒸馏水冲洗干净注意事项菜籽多糖的脱色大孔树脂预处理：先用蒸馏水浸泡过夜，使其充分溶胀，然后过滤，接着用95%乙醇浸泡4～6h，然后用95%乙醇洗至流出液加水无白色浑浊。
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苯酚-硫酸法
苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。
再以比色法测定。
[试剂]
6%苯酚：
先配置80%苯酚：80g苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20g水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
再配置6%苯酚：取75ul的80%苯酚于烧杯中，加入960ul水（每次测定均需现配），测定的时候就用6%的苯酚来测！
浓硫酸
[操作]
1．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2．样品含量测定：
吸取2.0ml样品，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却室温放置30分钟以后于490nm测光密度。
每次测定取双样对照。
以标准曲线计算多糖含量。
可能有以下问题需要注意:
1。
苯酚是否重蒸、其溶液浓度、是否现配现用
2。
加入硫酸后是否加热、显色时间的确定
3。
阁下所选波长：这个最为重要，因为已糖及其甲基化衍生物在490nm下有最大吸收峰，而戊糖、糠醛酸及其甲基化衍生物在480nm下有最大吸收峰。
如果阁下的多糖样品不是单一品而是数种混合（纯化也难一达到100%纯），则波长一定要扫描过再做
4。
加浓硫酸前要摇匀，加之后也要摇匀。
苯酚-硫酸法是利用多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。
再以比色法测定。
原理多糖在硫酸的作用下先水解成单糖，并迅速脱水生成糖醛衍生物，然后与苯酚生成橙黄色化合物。
再以比色法测定。
试剂
1．浓硫酸：分析纯，95.5%
2．80%苯酚：80克苯酚（分析纯重蒸馏试剂）加20克水使之溶解，可置冰箱中避光长期储存。
3．6%苯酚：临用前以80%苯酚配制。
（每次测定均需现配）
4．标准葡聚糖（Dextran,瑞典Pharmacia）,或分析纯葡萄糖。
5．15%三氯乙酸（15%TCA）：15克TCA加85克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
6．5%三氯乙酸（5%TCA）：25克TCA加475克水使之溶解，可置冰箱中长期储存。
7．6mol/L 氢氧化钠：120克分析纯氢氧化钠溶于500ml水。
8．6mol/L 盐酸
操作
1．制作标准曲线：准确称取标准葡聚糖（或葡萄糖）20mg于500ml 容量瓶中，加水至刻度，分别吸取0.4、0.6、0.8、1.0、1.2、1.4、1.6及1.8ml,各以蒸馏水补至2.0ml，然后加入6%苯酚1.0ml及浓硫酸5.0ml,摇匀冷却，室温放置20分钟以后于490nm测光密度，以2.0ml水按同样显色操作为空白，横坐标为多糖微克数，纵坐标为光密度值，得标准曲线。
2．样品含量测定：
①取样品1克（湿样）加1ml 15%TCA溶液研磨，再加少许5％TCA 溶液研磨，倒上清液于10毫升离心管中，再加少许5％TCA溶液研磨，倒上清液，重复3次。
最后一次将残渣一起到入离心管。
注意：总的溶液不要超出10毫升。
（既不要超出离心管的容量）。
②离心，转速3000转/分钟，共三次。
第一次15分钟，取上清液。
后两次各5分钟取上清液到25毫升锥形比色管中。
最后滤液保持18毫升左右。
（测肝胰腺样品时，每次取上清液时应过滤。
因为其脂肪含量大容易夹带残渣。
）
③水浴，在向比色管中加入2毫升6mol/L 盐酸之后摇匀，在96℃水浴锅中水浴2小时。
④定容取样。
水浴后，用流水冷却后加入2毫升6mol/L 氢氧化钠摇匀。
定容至25毫升的容量瓶中。
吸取0.2 ml的样品液，以蒸馏补至2.0ml，。