血糖含量的测定――邻甲苯胺法(O-toluidine boric,TB法)

血糖含量的测定――邻甲苯胺法（O-toluidine boric，TB法）

实验原理

血液中所含的葡萄糖，称为血糖。它是糖在体内的运输形式。目前国

内医院多采用葡萄糖氧化酶法和邻甲苯胺法测定血糖。前者特异性强、价廉、方法简单,其正常值：空腹全血为3.6～5.3毫摩尔/升（65～95

毫克/分升），血浆为 3.9～6.1毫摩尔/升。后者由于血中绝大部分非

糖物质及抗凝剂中的氧化物同时被沉淀下来，因而不易出现假性过高

或过低, 结果较可靠, 其正常值：空腹全血为3.3～5.6毫摩尔/升（6

0～100毫克/分升），血浆为3.9～6.4毫摩尔/升（70～115毫克/分升）。本实验采用邻甲苯胺法测定血糖。其原理是葡萄糖在酸性介质

中加热脱水反应生成5－羟甲基－2－呋喃甲醛，分子中的醛基与邻甲

苯胺缩合成青色的薛夫氏碱，通过比色可以定量。

试剂和器材

一、试剂

邻甲苯胺试剂：:称取硫脲1.5ｇ溶于750ｍL冰醋酸中, 加邻甲苯胺150

ｍL及饱和硼酸40ｍL, 混匀后加冰醋酸至1000ｍL, 置棕色瓶中，冰箱

保存。

葡萄糖标准溶液：5.0mg/mL，临用时稀释成1.0 mg/mL。

二、材料

人血清。

三、器材

具塞试管1.5×15cm（×8）；分光光度计。

操作方法

一、制作标准曲线

取6支试管编号后，按下表顺序加入试剂：

管号0 1 2 3 4 5

标准葡萄糖液(mL) 0.00 0.02 0.04 0.06 0.08 0.10

蒸馏水(mL) 0.10 0.08 0.06 0.04 0.02 0.00

邻甲苯胺试剂(mL) 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0 5.0

A630

加毕，温和混匀，于沸水浴中煮沸4min取下，冷却，放置30min，用1c m比色杯，试剂空白为参比，测定 630nm 处吸光值，绘制标准曲线。

二、样品测定

取3支试管编号后，分别加入试剂，与标准曲线同时作比色测定：

管号对照样品①样品②

稀释的未知血清样品(mL) 0 0.10 0.10

蒸馏水(mL) 0.10 0.00 0.00

邻甲苯胺试剂(mL) 5.0 5.0 5.0

A630

加毕，温和混匀，于沸水浴中煮沸4min取下，冷却，放置30min，用 1 cm比色杯，试剂空白为参比，测定630nm 处吸光值，从标准曲线中可查出样品中血糖含量。

注意事项

邻苯甲胺法测定血糖具有操作简单,特异性较高的优点, 试剂成本也较低, 目前在教学实验或规模较小的基层医院用于测定血糖。但该法一般在浓酸高温条件下发生反应, 因此在做血糖测定时须多加注意。