不同产地麻疯树种仁的含油量及脱油种仁的佛波酯含量
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收稿日期: 2009-01-04 接受日期: 2009-03-10 *国家“十一五”科 技支撑计划课题(No. 2007BAD50B05)和教育部重点 课题(No. 307023) Supported by the Key Sci-tech Project of the 11th Five-year Plan of China (No. 2007BAD50B05) and the Important Projects of Ministry of Education of China (No. 307023) **通讯作者 Corresponding author (E-mail: cfang@)
人畜意外服食佛波酯而中毒的事件已有报道症状为眼花呕吐和腹泻adolf1984从麻疯树种子油中分离出12脱氧16羟基佛波醇hirota1988认为麻疯树种子油中至少存在4种该佛波醇的二部分其微弱差别仅存在于酸部分hass2002则认为麻疯树种子油中存在结构非常近似的佛波酯1998报道了墨西哥不同产疯树种仁中佛波酯的含量其中capeverdenicaraguaifenigeria产地麻疯树种仁中佛波酯的含量分别为270mg217mg1和230mg1而无毒墨西哥品种中的佛波酯含量很低仅有011mg收稿日期
(College of Life Sciences, Sichuan University, Chengdu 610064, China)
Abstract The content of oil in kernel and that of phorbol ester in defatted kernel of Jatropha curcas from different origins were studied in this paper. The oil content in kernel was determined according to GB/T 5512-85. Phorbol ester was extracted from the defatted seed kernels in dichloromethane by ultrasonic, and then its content was determined by high performance liquid chromatography (HPLC). The oil contents in kernel extracted from J. curcas growing in Xiaojinhe, Panzhihua, Renli and Pianjiao were 58.29%, 60.84%, 58.83% and 56.12%, and the phorbol ester contents in defatted kernel in Xiaojinhe, Panzhihua, Renli and Pianjiao were 2.43 mg g-1, 2.25 mg g-1, 2.03 mg g-1 and 1.21 mg g-1, respectively. The oil contents in kernel of J. curcas varied from different origins, and seed selection and breeding could be, therefore, conducted based on the oil content in kernel. The phorbol ester contents of defatted kernel from different origins were all higher than those of the nontoxic varieties of J. curcas. Therefore, it is extremely necessary to take further detoxification treatment if the defatted kernel of J. curcas is used as potential feed resources. Fig 3, Tab 3, Ref 10 Keywords Jatropha curcas L.; kernel; oil content; phorbol ester; high performance liquid chromatography CLC Q949.753.506 : Q949.9
麻疯树(Jatropha curcas L.)又名小桐子、假油桐、假花生 等，为 大戟 科 (Euphorbiaceae)麻 疯 树属 (Jat ropha)落 叶 灌 木 或 小乔木，主要分布于热带、亚热带地区，是 一种抗旱耐瘠的 油料植物[1]. 国内外研究表明，麻疯树种仁含油量很高，除榨 取能源用油外，其 榨油后种渣的粗蛋白含量很高，可用作饲 料. 然而，大戟科植物对人畜都显示出或多或少的毒性，其毒 性 主 要来源于植物中的二 萜 类 化合 物 或 其 衍生物，麻 疯 树 种 子也不例外. 对照已报道的麻疯树化学成分发现，麻疯树种 子中存 在 多 种二 萜 酯，即 佛 波 酯，许 多 报 道认 为 该 成 分 是 种 子中主 要 的 毒 性 成 分之一 [2]，能 导 致 脊 椎动 物 如 狗、羊 、鱼及 无脊椎动物如软体动物的钉螺等产生急性毒性. 人畜意外服食佛
波酯而中毒的事件已有报道，症状为眼花、呕吐和腹泻[3]. Adolf (1984)从麻疯树种子油中分离出12-脱氧-16-羟基佛波醇[4]. Hirota (1988)认为麻疯树种子油中至少存在4种该佛波醇的二萜酯， 它们可能 具 有相同的二萜 醇 部 分，其 微弱差 别 仅存 在于酸 部分[5]. Hass (2002)则认为麻疯树种子油中存在6种结构非常 近似的佛波酯[6]. Makkar等 (1998)报 道了墨西哥不同产地麻 疯树种仁中佛波酯的含量，其中Cape Verde、Nicaragua和IfeNigeria产地麻疯树种仁中佛波酯的含量分别为2.70 mg g-1、 2.17 mg g-1和2.30 mg g-1，而无毒墨西哥品种中的佛波酯含量 很低，仅有0.11 mg g-1 [7].
应用与环境生物学报 2009，15 (4): 546~548 Chin J Appl Environ Biol=ISSN 1006-687X
2009-08-25 DOI: 10.3724/SP.J.1145.2009.00546
不同产地麻疯树种仁的含油量及脱油种仁的 佛波酯含量*
梁 慧 彭 彤 颜 钫 唐 琳 陈 放**
度计(北京普析通用仪器厂). 电子分析天平AE-240 (0.000 1 g).
1.2 方 法
1.2.1 麻疯树种仁含油量测定
麻 疯 树 种 子 去 壳，用 粉 碎 机
粉碎后，按照GB/T 5512-85粮食、油料检验 粗 脂肪 测定法进
行种子油含量的测定.
1.2.2 麻疯树脱油后种仁中佛波酯检测 紫外光谱扫描检测
标准曲线绘制：取1 mL乙醇加入1 mg佛波酯标准品中， 即配成1.0 mg/mL的标准品溶液. 分别精密吸取4、8、12、16、 20 μL进样，平行3次，测定佛波酯峰面积. 用峰面积的平均值 与进样量(μg)进行线性拟合，得到佛波酯线性回归方程. 标准 品的HPLC谱图见图2，保留时间约为34 min.
图1 麻疯树脱油后种仁二氯甲烷提取物的紫外扫描图谱 Fig. 1 UV scanning of dichlormethane extract from defatted kernel
of J. curcas
参考H.P.S. Makkar (1998)报 道的麻疯 树 种仁佛波酯检 测 方 法 [7]，确 定 液 相 色 谱 条 件：色 谱 柱 为 十八 烷 基 硅 烷 键 合硅胶填充柱(Spherisorb C18)，柱长25 cm，内径46 mm；以 0.175%磷酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，A : B梯度洗 脱：0~20 min (40%~25% : 60%~75%)、20~30 min (25%~0% : 75%~100%)、30~40 min (0%~0% : 100%~100%)；检测波长280 nm；流速1.3 mL/min；柱温22 ℃；进样量20 μL.
(四川大学生命科学学院 成都 610064)
摘 要 选用国内4种不同产地的麻疯树种仁，对其含油量以及脱油后的佛波酯含量进行了研究. 采用GB/T 5512-85 粮食、油料检验 粗 脂肪 测定法进行麻疯 树 种仁含 油量的 测定；脱油后种仁 经二氯甲烷超声提取佛波酯，采用高效 液相色谱(HPLC)对其含量进行检测. 结果表明，小金河、攀枝花、仁里、片角乡麻疯树种仁的含油量分别为58.29%、 60.84%、58.83%和56.12%，脱油后种仁中佛波酯含量分别为2.43 mg g-1、2.25 mg g-1、2.03 mg g-1和1.21 mg g-1. 不同产地 的麻疯树种仁含油量均有差异，在深入开发麻疯树资源时，种仁含油量的高低可作为其选种依据之一. 4种不同产地的 麻 疯 树 种 仁 脱 油 后的 佛 波 酯 含 量 均 高于 无 毒 麻 疯 树品种，要利 用 麻 疯 树 的脱 油 种 仁 这一潜 在饲 料资源，对其 进 行 进 一步脱毒处理是必要的. 图3 表3 参10 关键词 麻疯树；种仁；含油量；佛波酯；高效液相色谱
1.1.2 试剂与仪器 佛波酯标准品(Phorbol-12-myristate
13-acetate)来自Sigma公司，纯度≥99%. 乙腈为液相色谱纯，
水为去离子水，其余 试剂石油醚(沸程：30~60 ℃)、磷酸、二
氯甲烷、乙醇 均为分析 纯 .
岛津高效液相色谱仪CBM20A. TU-1900紫外–可见分光光
确 定 H PLC检 测 波长：将 麻 疯 树 脱 油 后 种 仁 的 二 氯甲烷 提 取
物用乙醇 溶解后，经稀 释至 适 当的 浓 度(浓 度 控制在 吸 光 度 A
在0.5~1.0之间)，在紫外–可见分 光光度计上，于190~700 nm
的波长范围内进行扫描，检测其最大吸收的波长. 结果见图
1，在207.0 nm和280.5 nm处有两个最大吸收峰，结合参考文
梁 慧等：不同产地麻疯树种仁的含油量及脱油种仁的佛波酯含量
547
1 材料与方法
1.1 材 料
1.1.1 植物材料 从我国主要麻疯树产地选用了4种不同产地
的麻疯 种子，分别采自四川省凉山州盐源县小金河乡、四
川省 攀 枝 花 地 区、云南省永 胜 县 仁 里 乡和 云南省永 胜 县片角
乡. 取当年成熟、自然干燥的种子用于实验.
献[7]和紫外扫描结果确定选择280 nm作为检测波长.
图2 佛波酯标准品HPLC谱图 Fig. 2 HPLC chromatogram of the standard phorbol ester
，分别在0、2、4、8、12、24 h进样，记录各色谱图，测定其峰 面积. 计算各次 进样佛波酯峰面积值的RSD%，检测样品的 稳定性.
样品制备：分别取5 g各地脱油后的种仁，加入40 mL的 二氯甲烷，在150 W下超声5 min，自然沉淀，过滤脂层. 重复 此提取程序5次. 收集6次滤液，减压浓缩，除去溶剂，然后真 空干燥，温度不超过40 ℃.
佛波酯检测：用乙醇溶解干燥物，配成浓度10 mg/mL的样 品溶液，将提取液用孔径0.45 μm的滤膜过滤，进样量为20 μL. 在与标准品相同的液相色谱条件下记录各提取物的色谱图. 并 记录色谱峰的峰面积，以外标法计算供试样品中麻疯树佛波酯 的含量. 样品的HPLC谱图见图3，保留时间约为26~29 min.
CLC Q949.753.506 : Q949.9
Oil Content in Kernel and Phorbol Ester Content in Defatted Kernel of
Jatropha curcas from Different Origins*
LIANG Hui, PENG Tong, YAN Fang, TANG Lin & CHEN Fang**
目前关于国内的麻疯树种仁中佛波酯的含量尚未见报道. 我国麻疯树的主要产区为云南、四川等地，我们收集了四川、 云南等 代 表 性 产 地 的麻 疯 树当 年成 熟的 种 子，测定了其 种 仁 的含油量，并首次测定了其脱油后种仁中佛波酯的含量，以期 为后续研究开发麻疯树种仁脱油后作为动物饲料打下基础.
4期
人畜意外服食佛波酯而中毒的事件已有报道症状为眼花呕吐和腹泻adolf1984从麻疯树种子油中分离出12脱氧16羟基佛波醇hirota1988认为麻疯树种子油中至少存在4种该佛波醇的二部分其微弱差别仅存在于酸部分hass2002则认为麻疯树种子油中存在结构非常近似的佛波酯1998报道了墨西哥不同产疯树种仁中佛波酯的含量其中capeverdenicaraguaifenigeria产地麻疯树种仁中佛波酯的含量分别为270mg217mg1和230mg1而无毒墨西哥品种中的佛波酯含量很低仅有011mg收稿日期
(College of Life Sciences, Sichuan University, Chengdu 610064, China)
Abstract The content of oil in kernel and that of phorbol ester in defatted kernel of Jatropha curcas from different origins were studied in this paper. The oil content in kernel was determined according to GB/T 5512-85. Phorbol ester was extracted from the defatted seed kernels in dichloromethane by ultrasonic, and then its content was determined by high performance liquid chromatography (HPLC). The oil contents in kernel extracted from J. curcas growing in Xiaojinhe, Panzhihua, Renli and Pianjiao were 58.29%, 60.84%, 58.83% and 56.12%, and the phorbol ester contents in defatted kernel in Xiaojinhe, Panzhihua, Renli and Pianjiao were 2.43 mg g-1, 2.25 mg g-1, 2.03 mg g-1 and 1.21 mg g-1, respectively. The oil contents in kernel of J. curcas varied from different origins, and seed selection and breeding could be, therefore, conducted based on the oil content in kernel. The phorbol ester contents of defatted kernel from different origins were all higher than those of the nontoxic varieties of J. curcas. Therefore, it is extremely necessary to take further detoxification treatment if the defatted kernel of J. curcas is used as potential feed resources. Fig 3, Tab 3, Ref 10 Keywords Jatropha curcas L.; kernel; oil content; phorbol ester; high performance liquid chromatography CLC Q949.753.506 : Q949.9
麻疯树(Jatropha curcas L.)又名小桐子、假油桐、假花生 等，为 大戟 科 (Euphorbiaceae)麻 疯 树属 (Jat ropha)落 叶 灌 木 或 小乔木，主要分布于热带、亚热带地区，是 一种抗旱耐瘠的 油料植物[1]. 国内外研究表明，麻疯树种仁含油量很高，除榨 取能源用油外，其 榨油后种渣的粗蛋白含量很高，可用作饲 料. 然而，大戟科植物对人畜都显示出或多或少的毒性，其毒 性 主 要来源于植物中的二 萜 类 化合 物 或 其 衍生物，麻 疯 树 种 子也不例外. 对照已报道的麻疯树化学成分发现，麻疯树种 子中存 在 多 种二 萜 酯，即 佛 波 酯，许 多 报 道认 为 该 成 分 是 种 子中主 要 的 毒 性 成 分之一 [2]，能 导 致 脊 椎动 物 如 狗、羊 、鱼及 无脊椎动物如软体动物的钉螺等产生急性毒性. 人畜意外服食佛
波酯而中毒的事件已有报道，症状为眼花、呕吐和腹泻[3]. Adolf (1984)从麻疯树种子油中分离出12-脱氧-16-羟基佛波醇[4]. Hirota (1988)认为麻疯树种子油中至少存在4种该佛波醇的二萜酯， 它们可能 具 有相同的二萜 醇 部 分，其 微弱差 别 仅存 在于酸 部分[5]. Hass (2002)则认为麻疯树种子油中存在6种结构非常 近似的佛波酯[6]. Makkar等 (1998)报 道了墨西哥不同产地麻 疯树种仁中佛波酯的含量，其中Cape Verde、Nicaragua和IfeNigeria产地麻疯树种仁中佛波酯的含量分别为2.70 mg g-1、 2.17 mg g-1和2.30 mg g-1，而无毒墨西哥品种中的佛波酯含量 很低，仅有0.11 mg g-1 [7].
应用与环境生物学报 2009，15 (4): 546~548 Chin J Appl Environ Biol=ISSN 1006-687X
2009-08-25 DOI: 10.3724/SP.J.1145.2009.00546
不同产地麻疯树种仁的含油量及脱油种仁的 佛波酯含量*
梁 慧 彭 彤 颜 钫 唐 琳 陈 放**
度计(北京普析通用仪器厂). 电子分析天平AE-240 (0.000 1 g).
1.2 方 法
1.2.1 麻疯树种仁含油量测定
麻 疯 树 种 子 去 壳，用 粉 碎 机
粉碎后，按照GB/T 5512-85粮食、油料检验 粗 脂肪 测定法进
行种子油含量的测定.
1.2.2 麻疯树脱油后种仁中佛波酯检测 紫外光谱扫描检测
标准曲线绘制：取1 mL乙醇加入1 mg佛波酯标准品中， 即配成1.0 mg/mL的标准品溶液. 分别精密吸取4、8、12、16、 20 μL进样，平行3次，测定佛波酯峰面积. 用峰面积的平均值 与进样量(μg)进行线性拟合，得到佛波酯线性回归方程. 标准 品的HPLC谱图见图2，保留时间约为34 min.
图1 麻疯树脱油后种仁二氯甲烷提取物的紫外扫描图谱 Fig. 1 UV scanning of dichlormethane extract from defatted kernel
of J. curcas
参考H.P.S. Makkar (1998)报 道的麻疯 树 种仁佛波酯检 测 方 法 [7]，确 定 液 相 色 谱 条 件：色 谱 柱 为 十八 烷 基 硅 烷 键 合硅胶填充柱(Spherisorb C18)，柱长25 cm，内径46 mm；以 0.175%磷酸溶液为流动相A，以乙腈为流动相B，A : B梯度洗 脱：0~20 min (40%~25% : 60%~75%)、20~30 min (25%~0% : 75%~100%)、30~40 min (0%~0% : 100%~100%)；检测波长280 nm；流速1.3 mL/min；柱温22 ℃；进样量20 μL.
(四川大学生命科学学院 成都 610064)
摘 要 选用国内4种不同产地的麻疯树种仁，对其含油量以及脱油后的佛波酯含量进行了研究. 采用GB/T 5512-85 粮食、油料检验 粗 脂肪 测定法进行麻疯 树 种仁含 油量的 测定；脱油后种仁 经二氯甲烷超声提取佛波酯，采用高效 液相色谱(HPLC)对其含量进行检测. 结果表明，小金河、攀枝花、仁里、片角乡麻疯树种仁的含油量分别为58.29%、 60.84%、58.83%和56.12%，脱油后种仁中佛波酯含量分别为2.43 mg g-1、2.25 mg g-1、2.03 mg g-1和1.21 mg g-1. 不同产地 的麻疯树种仁含油量均有差异，在深入开发麻疯树资源时，种仁含油量的高低可作为其选种依据之一. 4种不同产地的 麻 疯 树 种 仁 脱 油 后的 佛 波 酯 含 量 均 高于 无 毒 麻 疯 树品种，要利 用 麻 疯 树 的脱 油 种 仁 这一潜 在饲 料资源，对其 进 行 进 一步脱毒处理是必要的. 图3 表3 参10 关键词 麻疯树；种仁；含油量；佛波酯；高效液相色谱
1.1.2 试剂与仪器 佛波酯标准品(Phorbol-12-myristate
13-acetate)来自Sigma公司，纯度≥99%. 乙腈为液相色谱纯，
水为去离子水，其余 试剂石油醚(沸程：30~60 ℃)、磷酸、二
氯甲烷、乙醇 均为分析 纯 .
岛津高效液相色谱仪CBM20A. TU-1900紫外–可见分光光
确 定 H PLC检 测 波长：将 麻 疯 树 脱 油 后 种 仁 的 二 氯甲烷 提 取
物用乙醇 溶解后，经稀 释至 适 当的 浓 度(浓 度 控制在 吸 光 度 A
在0.5~1.0之间)，在紫外–可见分 光光度计上，于190~700 nm
的波长范围内进行扫描，检测其最大吸收的波长. 结果见图
1，在207.0 nm和280.5 nm处有两个最大吸收峰，结合参考文
梁 慧等：不同产地麻疯树种仁的含油量及脱油种仁的佛波酯含量
547
1 材料与方法
1.1 材 料
1.1.1 植物材料 从我国主要麻疯树产地选用了4种不同产地
的麻疯 种子，分别采自四川省凉山州盐源县小金河乡、四
川省 攀 枝 花 地 区、云南省永 胜 县 仁 里 乡和 云南省永 胜 县片角
乡. 取当年成熟、自然干燥的种子用于实验.
献[7]和紫外扫描结果确定选择280 nm作为检测波长.
图2 佛波酯标准品HPLC谱图 Fig. 2 HPLC chromatogram of the standard phorbol ester
，分别在0、2、4、8、12、24 h进样，记录各色谱图，测定其峰 面积. 计算各次 进样佛波酯峰面积值的RSD%，检测样品的 稳定性.
样品制备：分别取5 g各地脱油后的种仁，加入40 mL的 二氯甲烷，在150 W下超声5 min，自然沉淀，过滤脂层. 重复 此提取程序5次. 收集6次滤液，减压浓缩，除去溶剂，然后真 空干燥，温度不超过40 ℃.
佛波酯检测：用乙醇溶解干燥物，配成浓度10 mg/mL的样 品溶液，将提取液用孔径0.45 μm的滤膜过滤，进样量为20 μL. 在与标准品相同的液相色谱条件下记录各提取物的色谱图. 并 记录色谱峰的峰面积，以外标法计算供试样品中麻疯树佛波酯 的含量. 样品的HPLC谱图见图3，保留时间约为26~29 min.
CLC Q949.753.506 : Q949.9
Oil Content in Kernel and Phorbol Ester Content in Defatted Kernel of
Jatropha curcas from Different Origins*
LIANG Hui, PENG Tong, YAN Fang, TANG Lin & CHEN Fang**
目前关于国内的麻疯树种仁中佛波酯的含量尚未见报道. 我国麻疯树的主要产区为云南、四川等地，我们收集了四川、 云南等 代 表 性 产 地 的麻 疯 树当 年成 熟的 种 子，测定了其 种 仁 的含油量，并首次测定了其脱油后种仁中佛波酯的含量，以期 为后续研究开发麻疯树种仁脱油后作为动物饲料打下基础.
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