水样中左旋18-甲基炔诺酮的胶体金免疫层析试剂条的研制

ｃ ｕｄ ｂ ｉｕ ｌ ｖ ｌ ａｅ ｉ ｉ ０ ｍｉ ． ｈ ｅ ｓｔ ｉ ｆｔｅ ａ ｓ ｙ ｓｉｋ ｆｒＬ ａ ０ ｎ ｏ ｌ ｅ ｖｓ ａ ｙ ｅ ａ ｕ ｔｄ ｗ ｔ ｎ １ ｎ Ｔ ｅ ｓ ｎ ｉ ｖ ｔ ｏ ａ ｔ ＮＧ ｗ ｓ １ ｇ・ｍＬ～． ｒｓ ｅ ｃ ｉｉ ａ ｕ ｄ ｌ ｈ ｉ ｙ ｈ ｓ ｃ ｏ Ｎｏｃ ｏ ｓｒａ ｔ ｔ ｗ ｓｆ ｎ ｖｙ ｏ
基金项 目： 国家 自然科 学基金 资助项 目（０ ７ ０４ ２６５５） 联 系 人 简 介 ： 安平 （ ９２ ） 男 ， 授 ， 要 研 究 方 向 免 疫 分 析 。 Ｅ ｉ ｄｎａ ｐｎ６ １＠ ｙｈｏ Ｃｒ ｃ 邓 １６・， 教 主 ｍａ ：ｅｇｎ ｉ １９ ａｏ．ｏ ． ｎ ｌ ｇ ｎ
第２ ３卷 第 ５期 ２ １ 年 ５月 ０１
化 学 研 究 与 应 用
Ｃ ｅ ｃ ｌ ｓ ａ ｃ ｎ ｐ ｉａｉ ｎ ｈ ｍｉａ ｅ ｒ ｈ ａ ｄ Ａｐ ｌ ｔ Ｒｅ ｃ ｏ
Ｖ０． ３． ． １ ２ Ｎｏ ５
Ｍａ ２ １ ｙ，０１
文 章编 号 ：０ ４ １５ （ ０ １ ０ －６ ２０ １０ —６ ６ ２ １ ） ５０ ２ －４
ｗｔ ｄ ｔ ｌｉ ｅｔ ｌｅｔｏ，７ －ｓ ａｉ ，７ 一ｓ ａｉ ，ｓ ｏｅ ｍ ｔｙ ｒ ｎ ｏ ｎ ， ｒ ｎｓｌ ｅａｄ ｅ ｎｕｅｏ Ｔ ｅｒｓｌ ｆ ｉ ｉ ｈ ｓ ｌ ｓｏ，ｓ ｉ １ （ｅｔ ｄ ｌ１＃ ｅｔ ｄ ｌｅｔ ｎ ， ｅｈｌ ｅ ｉ ｌ ｅ ｐｅ ｉ ｏ ｎ ｌ ｂ ｔ １ ｈ ｅｕｔ ｏ ｈ ｅ ｙ ｔｂ ｒ ｒｌ ｒ ｏ ｒ ｏ ｒ ｐ ｄ ｓｏ ｄ ｏｎ ｅ ｒ． ｓ
吸附法 操作 简便 ， 仍 不 适 合 快 速 、 场检 测 。胶 但 现
形成 的沉淀 。取 红 色 上 清 溶 液 于 ４Ｃ以 １ ０ ０ｐ ｃ ４ ０ ｒｍ
离心 ４ ｍ ｎ ０ ｉ。将 可 流 动 的 暗红 色 沉 淀转 移 到 另 外
一
个 离 心管 中 ， 后 用含 １ Ｓ 的 ５ 蔗糖 的 溶 最 ％Ｂ Ａ ％
变 。所制备 的试剂条具有灵敏 、 速、 快 特异 、 稳定 性好 的特点 ， 适合现场快速检测。
关键词 ： 旋 １一 左 ８ 甲基 炔 诺 酮 ； 体 金 免 疫 层 析 试 剂 条 ； 胶 水样
中 图分 类 号 ：６ ７ ０ ５ 文 献 标 识 码 ： Ａ
Ａ ｏ ｌ ｉ ｌｇ ｌ ｍ ｍ ｕｎ ｃ ｏ ａ ｏ ｒ ｐｈ ｃ ａ ｓ ｙ ｓ ｉ ｋ ｆ ｒ ｆ ｓ ｃ ｌｏ ｄａ ｏ ｄ ｉ ｏ ｈｒ ｍ ｔ ｇ ａ ｉ ｓ ａ ｔｃ ｏ ａ ｔ ｄｅ ｅ ｔｏ ｏ ｅ ０ Ｏ ｇ ｓ ｒ ｌｉ ｔ ｒ ｓ ｍ ｐｌ ｓ ｔ ｃ ｉ ｎ ｆｌ Ｖ ｎ ｒ ｅ ｔ ｅ ｎ ｗａ ｅ ａ ｅ
１ 实 验 部 分
１ １ 实验 试剂 及材 料 ．
ｐ ． ） 在 ３ ｏ 干 燥后 放 于 室温保 存 备用 。 Ｈ ７ ４ ， ７【 ＝ 制 备好 的 胶 体 金一 Ｎ Ｌ Ｇ抗 体 复 合 物 均 匀 喷 涂 于 玻 璃 纤 维 素 膜 作 为胶 体 金 结 合 垫 ，７Ｃ干 燥 后 ３ｃ 室 温保 存备 用 。 在 Ｐ Ｃ塑 料底 板 上将 以 上各 部 分依 次 黏 贴 。 Ｖ 将Ｎ Ｃ膜 黏贴 在 底板 的中 间部位 ， 体金 结合 垫 贴 胶 于Ｎ Ｃ膜 下 方 重 叠 １～２ ｍ。吸 水 垫 和 样 品 垫 分 ｍ
别贴 于底 板 的 上 、 部 位 ， 层 之 间 的衔 接 要 紧 下 各
左 旋 １ ． 基 炔 诺 酮 （ ９ ， 海 第 十 制 药 ８甲 ９％ 上 厂 ） 氯 金 酸 （ Ａ Ｃ ・ Ｈ ０） 柠 檬 酸 三 钠 、 乙 ； Ｈ ｕＩ ３ 、 聚
Ｋｅ ｙ ｗｏｒ ｓ：ｅ ｏ ｏ ｇ ｓｒｌ ｃ ｌｏｄａ ｏｄ ｉ ｍｕ ｃ ｏ ｔｇ ａ ｈ ｃ ａ ｓ ｙ ｓｉ ｋ； ｔｒｓ ｍ ｐ ｅ ｄ ｌｖ ｎ ｒ ｅ ｔｅ ； ｏ ｌｉ ｌｇ ｌ ｍ ｎｏ ｈｒ ｍａｏ ｒ ｐ ｉ ａ ｔｃ ｗａｅ ａ ｌ ｓ
环境 激 素 （ｎｉｎ ｅｔ ｏｍｏｅ ， 称 为 内 ｅｖｒ ｍ ｎ ｌ ｒ ｎ ） 又 ｏ ａｈ
液将 沉 淀 混 悬 为 原 体 积 的 １１ 加 入 １～２滴 ／ ０， ０ １ Ｎ Ｎ ，℃保 存备 用 。 ． ％ ａ ４
１３ 胶 体 金 免疫试 剂 条 的组 装 ．
胶 体金 免 疫层 析 试剂 条 各 部 分 的制 备及 组 装
步骤 如 下 。 硝 酸纤 维 素膜 是 试 剂条 最 重 要 的部 分 。将 包 被抗 原 Ｌ Ｇ Ｏ Ｎ — ＶＡ溶 液稀 释 到适 当浓 度 ， Ｎ 在 Ｃ膜 靠近 下端 的部 分 均 匀划 线 ， 为 检 测 线 （ 作 Ｔ线 ） 羊 ；
分 泌干扰 物 （ ｎ ｏｒ ｅｄｓ ｐｅｓ ｅ ｄｃ ｎ ｉ ｕ ｔ ） ｉ ｒ ｒ 是 存 在 于 生
引起 了越 来 越 多 的 关 注 。 左 旋 １一 基 炔 诺 酮 ８甲 （ｅｏｏｇｓｅ，Ｎ 是一 种 人 工 合 成 的 甾体 化 合 １ ｎｒｅｔｌＬ Ｇ） ｖ ｒ
物， 为孕 激素 的一 种 ， 因其 具 有 安 全可 靠 的避 孕 效 果 而成 为常 规 应 用 的避 孕 药 之 一 ， 长 期 在体 内 但 存 留可 能会 导 致 月 经 紊 乱 ， 加 了患 乳 腺 癌 的 危 增
第 ５期
王俊 卿等 ： 样 中左 旋 １ ． 水 ８ 甲基 炔诺 酮的胶 体金 免 疫层 析试 剂 条 的研 制
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险 。此 外 ， 左旋 １ 一 ８甲基 炔诺 酮 可 通 过尿 液 进 入 水体 ， 可视 为一 种 环 境 激 素 。 它 在 水 生 物 体 内蓄 积 ， 干扰 水 生 物 的 激 素 分 泌 及 生 长 代 谢 Ｊ 因 会 。 此 Ｌ Ｇ对 生态 环 境及人 类 健康 存在 潜 在危 害 。 Ｎ 检 测 Ｌ Ｇ 的 方 法 有 高 效 液 相 色 谱 法 Ｎ （ Ｐ Ｃ 、 相色谱 一 ＨＬ） 气 质谱 联 用 法 （ Ｃ ＭＳ 、 Ｇ ． ） 毛 细管 电泳 分 析 ［ ］ 酶 联 免 疫 吸 附 法 。等 。色 及 。 谱 法 和毛 细 管 电 泳 法 具 有 较 高 的 灵 敏 度 ， 需 要 但 昂贵 的仪 器 和 繁琐 的 样 品前 处 理 过 程 ； 联 免 疫 酶
ｔｅａｓｙｓ ｃ ｒ ｐｋｎ ａｅ ｓｍ ｌｓ ｅ ｏｒｌ ｅ ｅｌ ｉ ｏｅｏｔ ｎｄｂ ｎｙ ｅｌ ｋｄｉ ｕ ｏｏ ｅｔ ｓａ （ ＬＳ ） ｈ ｓ ｔ ｋｆ ｉｉ ｗ ｔｒ ａ ｐｅ ｒ ｃｒ ａ ｄｗ ｌｗｔ ｔ ｓ ｂａ ｅ ｙｅｚｍ —ｎｅ ａ ｉ ｏ ｓ ｇ ｗ ｅ ｅｔ ｈｈ ｉ ｉ ｍｍ ｎｓｒ ｎ ａｓｙ Ｅ ＩＡ ｂ
膜置 于 ３ ｑ 干燥 备 用 。 ７Ｃ
酮抗 体 ， 实验条 件 的优 化 ， 制 出能 快 速 检 测 水 经 研 样 中 Ｌ Ｇ 的胶 体金 免疫 层 析试 剂 条 。 Ｎ
用 玻 璃纤 维 素 膜作 样 品垫 。 在玻 璃 纤 维 素膜
上 均匀 喷涂 磷 酸盐 缓 冲液 （ Ｂ ， ０ １ 吐 温一０ Ｐ Ｓ含 ．％ ２，
Ａ ｓ ａ ｔ Ａ ｃ ｌ ｉａ ｇ ｌ ｉ ｕ ｏ ｈｏ ａｏｒｐ ｉ ａｓｙｓ ｃ ａ ｒｐ ｒｄｆｒａ ｔ ｅ ｃ ｏ ｆ ｅ ｏ ｏｇ ｓ ｅ（ Ｎ ｉ ａ ｒ ａ ・ ｂｔ ｃ： ｏ ｏ ｌ ｏ ｒ ｌ ｄ ｄ ｍｍ ｎ ｃ ｒｍ ｔ ａ ｈ ｓａ ｔ ｋｗ ｓ ｅ ａ ｓ ｄ ｔ ｔ ｎ ｏ ｌ ｎ ｒｅｔ ｌ Ｌ Ｇ）ｎｗ ｔ ｍ ｇ ｅ ｉ ｐ ｅ ｏｆ ｅ ｉ ｖ ｒ ｅｓ
．
Ｗ ｉ ｉ ｅ ｋ ，ｈ ｓｙ ｓｉｋ Ｗａ ｔ ｂ ｅ ｗ ｔ ｏ ｔｓｇ ｉ ｃ ｎ ｏ ｓｏ ｃｉ ｉ ． ｈ ｒ ｐ ｒ ｄ ａ ｓ ｙ ｓｉ ｋ ｗ ｔ ｈ ｒ ｐ ｒ ｅ ｆｈ ｇ ｔ ｎ ８ ｗ ｅ ｓ ｔｅ ａ ａ ｔ ｓ ｓａ ｌ ｈ ｕ ｉｎｆ ａ ｔ ｓ ｆａ ｔ ｔ Ｔ ｅ ｐ ｅ ａ ｅ ａ ｔ ｈ ｔ ｅ ｐ ｏ ｅ ｔ ｓｏ ｉｈ ｈ ｓ ｃ ｉ ｉ ｌ ｖｙ ｓ ｃ ｉ ｉ
ｐｅｓ ｉ ．Ｂａ ｅ ｎ ｔ ｅ ｃ ｍｐ ｔｔｖ ｒ ａ ｔｏ ｆｃ ａｉ ｇ ａ ｔｇ ｎ ａ ｄ ｔ ｒ ｅ ａ ａ￣ｅ ｆ ｒ ｉ ｉ ｄ ｎ ｉｏ ｅ ｔ ｒｓ ｌｓ ｏ ｈ ｓ ｙ ｓｉｋ ｓ ｄ ｏ ｈ ｏ ｅ ｉｉｅ ｅ ｃ ｉｎ ｏ ｏ ｔｎ ｎ ｉｅ ｎ ａ ｇ ｔ ｎ ｌ ｏ ｌ ｔ ａ ｔｂ ｄｉｓ，ｈｅ ｅ ｕ ｔ ｆｔ ｅ ａ ａ ｔ ｍ ｅ ｓ ｃ
水 样 中 左 旋 １一 甲基 炔 诺 酮 的 胶 体 金 免 疫 层 析 ８ 试 剂 条 的 研 制
王俊 卿 ， 王玉珍 ， 邓安平
（ 四川 大学化 学学 院 ， 四川 成都 ６ ０ ６ ） １ ０ ４
摘 要 ： 制 了 一 种 检 测 水 样 中 左旋 １ ． 基 炔 诺 酮 （ Ｎ ） 量 的 胶 体 金 免 疫 层 析 试 剂 条 。基 于 包 被 抗 原 和 检 研 ８甲 ＬＧ含 测 物 对 金 标 抗 体 的竞 争 反 应 ， 通过 可 目测 的 胶 体 金标 记 物 而得 到 直 观 的检 测 结 果 。试 剂 条 对 Ｌ Ｇ 的检 测 ， Ｎ 灵 敏 度 为 ｌ ｇ・ ｌ ， １ ｍｎ内显 示 结 果 ； 己 烯 雌 酚 、 三 醇 、７ 一 二 醇 、７ 一 二 醇 、 酮 、 Ｏｎ ｍ一 在 ０ ｉ 与 雌 ｌ （雌 １ １雌 ３ 雌 甲泼 尼 龙 、 泼 尼 松 龙 和 克 伦 特 罗 无 交 叉 反 应 ； 标 水 样 分 别 用 试 剂 条 和 Ｅ ＩＡ检 测 ， 果 一 致 ； ８周 内 检测 效果 无 明显 改 加 ＬＳ 结 在
体 金免 疫层 析 技 术 具 有 简 便 、 速 、 本 低 廉 ， 快 成 适
合 于现 场检 测 等 优 点 ， 已广 泛 用 于 生 物 和 环 境 样 品的检 测 ¨ 。本 文 用 自制 的左 旋 ｌ ． 基 炔 诺 ８甲