绿色荧光标记C-反应蛋白的原核表达和毛细管电泳检测
实验设计——绿色荧光蛋白的表达
分子生物学实验设计报告绿色荧光蛋白的克隆表达——闵霞（2013141241165）李彩云（2013141241095）一、引言基因标记技术是近年来发展起来的分子生物学技术。
荧光蛋白基因在标记基因方面由于具有独特的优点而广受科学家们的关注。
荧光蛋白是海洋生物体内的一类发光蛋白，分为绿色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白和红色荧光蛋白。
绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。
当受到紫外或蓝光激发时，GFP发射绿色荧光。
它产生荧光无需底物或辅因子，发色团是其蛋白质一级序列固有的。
基因克隆技术包括把来自不同物的基因同有自主复制能力的载体DNA在体外人工连接，构建成新的重组DNA，然后送入受体生物中去表达，从而产生遗传物质和状态的转移和重新组合。
采用重组DNA技术，将不同来源的DNA分子在体外进行特异性切割，重新连接，组装成一个新的杂合DNA 分子。
在此基础上，这个杂合分子能够在一定的宿主细胞中进行扩增，形成大量的子代分子。
本次实验中，分子克隆质粒载体所携带的外源基因是EGFP绿色荧光蛋白，实验的最终目的是将EGFP基因插入表达载体pET-28a中，组成重组子，并导入到大肠杆菌细胞中并诱导其表达，培养出绿色的大肠杆菌菌落。
为此，我们要利用碱变性法将大肠杆菌中的质粒DNA提取出来，并通过Bam HI和NotⅠ两种酶的双酶切作用，从而获得目的外源基因片段EGFP和表达载体pET-28a质粒的DNA，然后通过连接酶连接后形成重组子，并通过氯化钙法导入大肠杆菌感受态细胞中，让其在含有Amp和IPTG的LB琼脂平板上生长繁殖，最后通过观察大肠杆菌能否在含有Amp和IPTG的LB平板上长出绿色的菌落，来判断EGFP基因工程菌的构建效果二、主要路线：1、质粒DNA的提取2、琼脂糖凝胶电泳检测质粒DNA3、酶切连接重组质粒4、重组质粒的扩增5、菌落PCR法鉴定阳性克隆6、目的荧光蛋白基因的表达1、质粒DNA的提取实验原理：1）质粒是一种染色体外的遗传因子，大小在1kb~200kb之间，是具有双链闭合环状结构的DNA分子，主要发现于细菌、放线菌和真菌细胞中。
绿色荧光蛋白GFP的研究进展及应用
（４）构建载体方便。由于编码ＧＦＰ的基因序列 很短，所以很方便地同其它序列一起构建多种质粒， 而不至于使质粒过大影响转化频率。
（５）可直接用于活细胞测定。ＧＦＰ是能在异源 细胞内表达后，能自发产生荧光的蛋白，并且ＧＦＰ 的分子量较小，Ｎ一端和Ｃ一端都能忍受蛋白的融
合，是理想的标记物，可进行活细胞实时定位观察， 更能接近自然真实的状态。如在活细胞中直接观察 蛋白向细胞核、内质网运动的状态，还可实时观察到 外界信号刺激下，目的蛋白的变化过程，借助荧光显 微镜观察，使研究更为方便。使用激光共聚焦显微 镜，其图像效果更佳，结合现代的计算机软件，可进 行三维显示。
３ ＧＦＰ的应用
ＧＦＰ的应用主要集中在利用其荧光性质的基础 上作为一种标记物。 ３．１ ＧＦＰ在分子生物学上的应用 ３．１．１ ＧＦＰ作为报告基因 报告基因是一种编码
可被检测的蛋白质或酶的ＤＮＡ，如传统的荧光素酶 （ＵⅨ）基因和ｐ一葡萄糖苷酶（ｃｕｓ）基因。ＧＦＰ作 为基因报告可用来检测转基因效率，把ＧＦＰ基因连 接到目的基因的启动子之后，通过测定ＧＦＰ的荧光 强度就可以对该基因的表达水平进行检测。目前， 此方法无论在农杆菌介导或基因枪介导的植物遗传 转化中还是在活细胞、转基因胚胎和动物中都已得 到非常广泛的应用，特别是在活细胞基因表达的时 空成像方面［１５Ｉ。 ３．１．２ ＧＦＰ作为融合标签
２ ＧＦＰ的理化性质。荧光特性及其改进
绿色荧光蛋白基因克隆及表达 结题报告
H2O 10XPCR Buffer EGFP-F EGFP-R dNTP rTap 菌 总体积
15μl 2.5μl 2μl 2μl 2μl 0.5μl 1μl 25μl
11.阳性菌株培养
等转板的菌长出以后,挑取2~3个阳性克隆 摇菌,37℃过夜。
12.重组质粒提取
(1)取已经培养好的含有pEGFP和pET-28a重组质粒1.5mL置于Eppendorf管中 ，以10000r/min离心1min，去掉上清；重复一次。然后将小管倒扣在吸水纸上 ，并用移液枪吸出多余的菌液，尽量除尽。加入150μL的GET缓冲液，充分混 匀，室温下放置10min。使用EDTA是为了除去细胞壁上的Ca2+，使溶菌酶更易 与细胞壁接触。
重复步骤上述步骤。将吸附柱Ca2放回收集管中，12000r/min离心 2min，室温放置数分钟，彻底除去漂洗液PW。将吸附柱Ca2，置于 室温10分钟，向吸附膜的中间位置悬空滴加适量洗脱缓冲液EB，室温 放置2min，12000r/min离心2min，收集DNA溶液。
6.连接反应
（1）将酶切后的片段用T4-DNA连接酶相 连 （2）16℃连接过夜。
试剂
溶液1－G.E.T缓冲液（pH8.0），溶液2－ 0.2mol/L NaOH, 1%SDS，溶液3－乙酸钾溶液 (3M, pH=4.8)，灭菌蒸馏水，pH7.5~8.0醋酸铵 （NH4Ac）7.5mol/L，异丙醇，70％乙醇，无水 乙醇，0.5 × TBE缓冲液，平衡液BL，溶胶液 PN，漂洗液PW，洗脱缓冲液EB，0.1 mol/L CaCl2溶液，卡那霉素100mg/ml，IPTG，2KB DNA Maker，6XLoading Buffer，酶反应终止 液(10 x Loading Buffer)，0.25%溴酚蓝， 10xPCR缓冲液，琼脂糖，NaAc，TE缓冲液， 酚氯仿，T4DNAligase及其缓冲液(10 x ligase Buffer)
绿色荧光蛋白和PCR技术
绿色萤光蛋白(green fluorescent protein)，简称GFP，这种蛋白质最早是由下村修等人在1962年在一种学名Aequorea victoria的水母中发现。
其基因所产生的蛋白质，在蓝色波长范围的光线激发下，会发出绿色萤光。
这个发光的过程中还需要冷光蛋白质Aequorin的帮助，且这个冷光蛋白质与钙离子(Ca2+)可产生交互作用。
由水母Aequorea victoria中发现的野生型绿色萤光蛋白，395nm和475nm 分别是最大和次大的激发波长，它的发射波长的峰点是在509nm，在可见光绿光的范围下是较弱的位置。
由海肾(sea pansy)所得的绿色萤光蛋白，仅有在498nm有一个较高的激发峰点。
在细胞生物学与分子生物学领域中，绿色萤光蛋白基因常被用作为一个报导基因(reporter gene)。
一些经修饰过的型式可作为生物探针，绿色萤光蛋白基因也可以克隆到脊椎动物(例如:兔子上进行表现，并拿来映证某种假设的实验方法。
2008年10月8日，日本科学家下村修（伍兹霍尔海洋生物学研究所）、美国科学家马丁·查尔菲（哥伦比亚大学）和钱永健（加利福尼亚大学圣迭戈分校）因为发现和改造绿色荧光蛋白而获得了当年（2008）的诺贝尔化学奖。
GFP的性质GFP荧光极其稳定,在激发光照射下，GFP抗光漂白(Photobleaching)能力比荧光素(fluorescein)强，特别在450～490nm蓝光波长下更稳定。
GFP需要在氧化状态下产生荧光，强还原剂能使GFP转变为非荧光形式，但一旦重新暴露在空气或氧气中，GFP荧光便立即得到恢复。
而一些弱还原剂并不影响GFP荧光。
中度氧化剂对GFP荧光影响也不大,如生物材料的固定、脱水剂戊二酸或甲醛等。
GFP融合蛋白的荧光灵敏度远比荧光素标记的荧光抗体高，抗光漂白能力强,因此更适用于定量测定与分析。
但因为GFP不是酶，荧光信号没有酶学放大效果，因此GFP灵敏度可能低于某些酶类报告蛋白。
绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆、表达和粗提取
绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆、表达和粗提取南方医科大学2011预防医学（卫生检验检疫）摘要目的：研究绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）基因在大肠杆菌中的基因克隆与重组表达，以及对其进行粗提取。
方法：从E.coli DH5ɑ中用碱提取质粒的方法提取质粒pEGFP-N3和质粒pET-28a。
然后用质粒DNA 的琼脂糖凝胶电泳对已经提取的产物进行电泳，确定从大肠杆菌中成功提取了质粒。
再用限制性内切酶BamHI和NotI对成功提取的质粒进行酶切，并对酶切后的质粒进行琼脂糖凝胶电泳，用以确定已经提取了GFP基因。
将含有GFP基因的质粒转化到感受态细胞E.coli BL-21中，用LB培养基对转化后的E.coli进行扩大培养。
用IPTG诱导GFP基因表达可以看到浅绿色菌落。
最后对绿色荧光蛋白进行粗提取。
结论：本实验有助于学生掌握最基本的分子生物学实验技术，为进一步的实验奠定基础。
关键词：绿色荧光蛋白基因克隆重组表达转化粗提取目录1 前言 (3)2 实验目的 (4)3 实验设备 (4)4 材料及试剂 (5)5 实验操作步骤 (5)5.1操作流程 (5)5.2质粒DNA的分离与纯化 (6)5.2.1 质粒的培养 (6)5.2.2 质粒的DNA的碱提取法 (6)5.2.3 质粒DNA的鉴定与纯化 (7)5.3酶切及连接 (8)5.3.1 双酶切 (8)5.3.2 回收酶切产物（采用DNA回收试剂盒进行回收） (8)5.3.3 连接 (9)5.4大肠杆菌感受态细胞的制备及转化 (9)5.4.1 LB（Luria-Bertain）液体和固体培养基的配制（参考附录）.. 95.4.2．感受态细胞的制备 (CaCl2法) (9)5.4.3 转化涂板 (10)5.5GFP蛋白的诱导表达 (10)5.6绿色荧光蛋白的粗提取 (11)参考文献 (11)附录 (12)1LB培养基的配制： (12)2.溶液Ⅰ (12)3.溶液Ⅱ (12)4.溶液Ⅲ（100ML） (12)5.DN ASE-FREE RN ASE A (13)6.TE缓冲液（P H8.0） (13)7.20×TBE (13)8.G ENE F INDER-溴酚蓝上样缓冲液 (13)9．PEGFP-N3质粒全图谱 (13)10．P ET-28A质粒全图谱 (14)1 前言绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。
基于绿色荧光蛋白标记技术的植物细胞分化研究
基于绿色荧光蛋白标记技术的植物细胞分化研究植物细胞分化是植物生长发育过程中非常重要的一环，它决定了植物的形态、结构和功能，是保证植物正常生长和发育的关键因素。
绿色荧光蛋白标记技术是一种在生物体中检测或观察特定基因表达的有力工具，在植物细胞分化研究中得到了广泛的应用。
本文将从绿色荧光蛋白标记技术的基础知识、应用原理、研究进展等方面综述其在植物细胞分化研究中的应用。
一、绿色荧光蛋白标记技术的基础知识1.1 绿色荧光蛋白的发现和分离1988年，Osamu Shimomura从蓝色发光水母中发现了绿色荧光蛋白(Green fluorescent protein，GFP)。
随后，Martin Chalfie发现了GFP的基因序列，并且成功地将其引入小鼠、斑马鱼等模式生物细胞中，使得这些细胞发出了明亮的绿色荧光，开创了GFP应用于生物学领域的新时代。
1.2 GFP的生化特性GFP是一种含有238个氨基酸的蛋白质，其大约490-510纳米的荧光光谱在黄绿光区域。
GFP内部内嵌着一个主要负责荧光产生的色团环结构，称为荧光色团环(fluorescent chromophore)，这个环结构的形成需要一个称为四肽环化酶的酶的作用，它能够将三个氨基酸(Cys-Tyr-Gly)连接成为一个四肽。
GFP的很多特性可通过改变它的核苷酸序列或蛋白质翻译后的修饰来进行调节。
二、绿色荧光蛋白标记技术在植物细胞分化研究中的应用原理2.1 基于突变筛选的植物细胞分化标记技术透过人工诱变或通过遗传突变等方法，可诱发部分植物基因的表达。
将这些基因与GFP合并编码后在自身植物基因组进行定位分析，可以标记该细胞在植物细胞分化过程中所处的位置或时期。
这种标记方法要求依赖性较高，因为研究者需要对某一个特定的基因进行变异和筛选才能得到标记，且标记区域为固定染色体某一地点。
2.2 基于转基因技术的植物细胞分化标记技术另外一种标记细胞分化的技术，是基于转基因技术，将被研究的目标基因与GFP融合编码构建植物转基因体系，作为一个构建植物转基因体系，标记细胞分化的技术来使用。
致病性大肠杆菌绿色荧光蛋白标记
致病性大肠杆菌绿色荧光蛋白标记郭永明;陈晓丽;余晶;杨晓红;杨健【期刊名称】《川北医学院学报》【年(卷),期】2015(30)5【摘要】目的:用增强型绿色荧光蛋白(enhanced green fluorescent protein,EGFP)标记致病性大肠杆菌(enteropathogenic escherichia coli,EPEC),以方便研究细菌的黏附.方法:以真核表达载体pEGFP-Cl为模板设计引物,采用PCR 方法扩增EGFP基因并测序后,克隆入原核表达质粒载体pTrc99a,转染EPEC,用荧光显微镜观察IPTG诱导后EPEC对Hep-2细胞的黏附及荧光表达情况.结果:成功构建原核表达质粒pTrc99a-EGFP和菌株EPEC/EGFP,黏附到Hep-2细胞表面的细菌克隆能够表达绿色荧光蛋白.结论:对EPEC进行了EGFP标记,为计数细菌的黏附提供方便.【总页数】4页(P583-585,589)【作者】郭永明;陈晓丽;余晶;杨晓红;杨健【作者单位】川北医学院病原生物学与免疫学实验教学中心;川北医学院临床医学系,四川南充637000;川北医学院临床医学系,四川南充637000;川北医学院病原生物学与免疫学实验教学中心;川北医学院病原生物学与免疫学实验教学中心【正文语种】中文【中图分类】R392【相关文献】1.干细胞脑内移植有效标记研究:绿色荧光蛋白质粒标记的应用价值 [J], 关云谦;陈彪;刘平;邹春林;张愚2.α2B-肾上腺素能受体与增强型绿色荧光蛋白标记的活化T细胞核因子2共表达稳转细胞株的构建 [J], 王震;李玉蕾;周培岚;苏瑞斌;傅风华3.稳定表达敲入增强绿色荧光蛋白标记的干扰素γ受体2基因Ifngr2的黑素瘤细胞系的构建与鉴定 [J], 樊浩;周涛;李卫华4.苦瓜枯萎病原菌的绿色荧光蛋白基因标记 [J], 陈燕萍;刘欣;肖荣凤;朱育菁;林永胜;刘波5.基于CRISPR/Cas9系统对乳酸乳球菌进行绿色荧光蛋白标记 [J], 宋馨;王慧;袁世豪;黄佳伟;易文涛;艾连中因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
绿色荧光蛋白的原核表达和纯化及鉴定的实验设计与实践
绿色荧光蛋白的原核表达和纯化及鉴定的实验设计与实践王青松;胡晓倩【摘要】该文以绿色荧光蛋白FRP为实验对象,通过设计原核蛋白表达、镍柱亲和纯化、荧光光谱分析、SDSPAGE电泳分离、Western blotting免疫印迹及蛋白质质谱鉴定等内容的生物化学综合实验,提高学生的生物化学实验技能.荧光光谱分析表明,纯化的GFP蛋白的最大激发波长为480 nm,最大发射波长为500 nm,与已知的GFP荧光光谱基本相同.SDSPAGE电泳分离发现,GFP的亲和纯化效果好,且纯化得到的GFP分子量约为27 kDa,与理论值相符.该实验适用于生物科学专业本科生系统完整地学习蛋白质表达、纯化和鉴定的实验方法,具有很好的综合性,取得非常好的教学效果.【期刊名称】《实验技术与管理》【年(卷),期】2014(031)005【总页数】4页(P38-41)【关键词】绿色荧光蛋白;亲和纯化;SDS-PAGE电泳;Western blotting;LC-MS/MS质谱【作者】王青松;胡晓倩【作者单位】北京大学生命科学学院生物基础教学实验中心,北京100871;北京大学生命科学学院生物基础教学实验中心,北京100871【正文语种】中文【中图分类】Q-331绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一种在美国西北海岸生长的名为Aequorea victoria的维多利亚水母中发现的蛋白质。
GFP全长共238个氨基酸，分子量约为27kDa，它的发光核心是由第65至67个氨基酸（丝氨酸－酪氨酸－甘氨酸）残基组成的结构域，可自发地形成一种荧光发色团，在波长395 nm的紫外光激发下可产生绿色荧光［1－4］。
自1962年日裔科学家下村修在维多利亚水母中发现绿色荧光蛋白至今，GFP已经广泛应用于蛋白质表达纯化、蛋白质相互作用、蛋白质细胞内定位示踪和模式生物转基因等生物学研究中［5－8］。
SDS－聚丙烯酰胺凝胶电泳（SDS－PAGE）对蛋白质进行电泳分离，是生物学研究中广泛使用的实验技术。
绿色荧光蛋白(GFP)原核表达分析
石河子大学分子生物学实验结课论文绿色荧光蛋白(GFP)原核表达分析学生姓名学号专业年级、班级指导教师所在学院中国·新疆·石河子2016年1月绿色荧光蛋白(GFP)原核表达分析摘要：本实验主要探讨目的蛋白（GFP）在大肠杆菌中的表达的情况以及鉴定目的蛋白形成的是包涵体还是可溶性蛋白。
本实验先对菌液进行培养、活化、然后采用IPTG分别对其不同时间点的诱导，用SDS-PAGE来确定目的蛋白的可溶性及其分子量，掌握GFP 诱导不同时间的表达情况的检测方法。
关键词：绿色荧光蛋白；SDS-PAGE；原核表达1 前言1.1实验目的掌握聚合酶链式反应(PCR)的原理和操作方法；了解重组载体的构建方法；锻炼学生查阅文献资料、设计与优化实验的能力；加强学生对化学生物学中常用研究方法的认知。
1.2实验背景绿色荧光蛋白（green fluorescent protein GFP) 是源于多管水母属等海洋无脊椎动物的发光蛋白，其在蓝光或紫外光下可发出明亮的绿色荧光，可以作为报告基因检测蛋白的特异性表达或进行细胞定位研究。
与以往lacZ、CAT 等报告基因相比，有很多无可比拟的优越性: GFP 不具有种属依赖性，在多种原核和真核生物细胞中都表达；荧光强度高，稳定性高；不需要反应底物与其他辅助因子，受蓝光激发产生绿色荧光,尤其适用于体内的即时检测；另外GFP 分子量小，易于融合，适用于多种转化方式，对受体无毒害,安全可靠；并且通过替换一些特殊氨基酸，可以使之产生不同颜色的光，从而适应不同的研究需要。
正是由于GFP 检测具有高灵敏度，操作简单，无需使用同位素等优点，近年来广泛用于基因的表达与调控、蛋白质的定位、转移以及相互作用、信号传递、转染与转化，以及细胞的分离与纯化等研究领域。
绿色荧光蛋白还在监测目的基因表达、研究细胞内物质代谢及追踪细胞系的分化等方面有着广泛应用。
采用GFP作为标记基因，可直接收集转化细胞供实验，缩短了筛选时间、减少对细胞活性的影响并可作为活体标记，为研究发育的基因调控和分子机制提供了一种简洁有效的手段。
绿色荧光蛋白基因克隆及表达结果分析
3 结果与分析3.1质粒提取用醋酸铵法提取pET-28a 和pEGFP-N3质粒后，进行琼脂糖电泳检测质粒是否提取成功。
得到电泳结果，如图一所示，3、4号泳道有明显清晰的条带说明pEGFP-N3提取成功。
1、2泳道同样有明显清晰的条带，说明pET-28a 提取成功。
3.2双酶切用BamH1和Not1分别对pEGFP-N3和pET-28a 双酶切。
1、2号泳道为pEGFP-N3的酶切结果，如图二所示，电泳会得到两条带，说明pEGFP-N3酶切成功。
4号泳道为pET-28a 的酶切产物的电泳有明显条带，证明酶切成功。
3.3 抗性筛选通过氯化钙法制备DH5α感受态细胞，用热激发将pET-28a-GFP 转入DH5α感图 1 pET-28a 和pEGFP-N3质粒提取电泳图1、2泳道为pET-28a 电泳结果 3、4号泳道为pEGFP-N3电泳结果图 2 BamH1、Not1双酶切 pEGFP-N3和pET-28a1、2号泳道为pEGFP-N3酶切产物 3号泳道为pEGFP-N3原始质粒 4号泳道为pET-28a 酶切产物 5号用泳道为pET-28a 原使质粒受态细胞。
转化重组质粒后涂平板，进行重组质粒的抗性筛选。
因为28a中含有抗卡那基因，所以筛选后可以得到含28a的重组质粒。
从图中可以看出1号平板长出较多菌落，说明DH5α感受态细胞存活。
2号平板无菌落生长，说明DH5α中不含抗卡那基因。
3号板生长出较少菌落，证明卡那有活性。
4号板无菌落生长。
失败原因其一可能是在倒了第一个平板加入卡那后，由于倒平板速度太慢，导致培养基凝固，影响了卡那的浓度和活性。
其二可能是在转化过程中，离心后，弃上清的过程中，将沉淀和上清混在了一起，影响了溶液的浓度。
图3重组质粒转化DH5α感受态细胞1号图为不含卡那的阴性对照2号图为含卡那的阴性对照3号图为含卡那的自提pET-28a的阳性对照4号图为含卡那的连接产物结果3.4PCR鉴定经PCR扩增后，进行琼脂糖凝胶电泳检测是否扩增成功，得到电泳结果如图四所示，结果表明，1、2泳道的条带约为700bp，说明成功扩增出含有GFP的基因。
c反应蛋白荧光免疫层析国标
c反应蛋白荧光免疫层析国标c反应蛋白（C-reactive protein，CRP）是一种由肝脏合成的血浆蛋白，是一种急性相应蛋白。
它最早是在1930年由美国科学家波尔尼斯基（Tillet and Francis）发现并命名。
CRP的合成与释放主要受到肝脏细胞的刺激，特别是在感染、炎症和组织损伤等病理状态下，其合成速度和含量都会显著增加。
CRP是一种典型的急性相应蛋白，其浓度可在感染、炎症和组织损伤等病理状态下迅速升高。
因此，CRP被广泛应用于临床诊断和疾病监测中。
特别是在感染性疾病的早期诊断、炎症反应的监测以及心血管疾病的风险评估等方面具有重要价值。
荧光免疫层析（Fluorescent Immunoassay）是一种常用的检测方法，可以用于检测CRP的浓度。
该方法利用荧光标记的抗体与待测样品中的CRP结合，并通过荧光信号的强弱来判断CRP的浓度。
荧光免疫层析具有灵敏度高、特异性强、操作简便等优点，因此在临床实验室中得到了广泛应用。
根据国际标准，正常人的CRP浓度通常很低，一般在0-10mg/L之间。
而在感染、炎症和组织损伤等病理状态下，CRP浓度会显著升高。
根据CRP的浓度水平，可以将其分为以下几个等级：1. 低风险：CRP浓度小于1 mg/L，表示患者处于低风险状态，一般不需要进一步检查和治疗。
2. 中风险：CRP浓度在1-3 mg/L之间，表示患者处于中等风险状态，可能存在轻微的感染或炎症反应，需要进一步观察和检查。
3. 高风险：CRP浓度大于3 mg/L，表示患者处于高风险状态，可能存在严重的感染、炎症或组织损伤等情况，需要进一步检查和治疗。
荧光免疫层析国标是针对CRP检测方法的标准化要求。
该标准主要包括以下几个方面：1. 样品处理：要求对待测样品进行适当的处理，以保证样品中CRP的稳定性和活性。
2. 试剂准备：要求对荧光标记抗体和其他试剂进行准确配制，并保证其质量稳定。
3. 检测方法：要求使用合适的荧光免疫层析方法进行CRP的检测，并保证其准确性和可靠性。
c反应蛋白 免疫荧光法 146
一、反应蛋白简介反应蛋白（C反应蛋白，C-reactive protein，CRP）是一种由肝脏合成的血浆蛋白，在免疫系统的炎症反应中起着重要的作用。
CRP的水平通常在正常情况下很低，但在发生炎症或感染时会显著升高。
CRP 被广泛用于评估炎症状态和预测心血管疾病风险。
二、免疫荧光法原理免疫荧光法是一种以抗原抗体反应为基础的生物化学分析技术。
在CRP检测中，免疫荧光法使用CRP特异性抗体标记荧光染料，通过与待测标本中的CRP结合产生荧光信号来检测CRP的存在和水平。
三、免疫荧光法步骤1. 样本处理：需要从患者血液中提取血清样本，通常采用离心或其他方法分离血清。
2. 样本固定：将提取的血清样本涂布在载玻片或其他固定基质上，使其固定并保持其形态完整。
3. 抗体标记：将荧光标记的抗CRP抗体滴加到固定的血清样本上，允许其与待测的CRP结合形成抗原抗体复合物。
4. 洗涤：对固定的样本进行洗涤步骤，以去除未结合的抗体和其他非特异性信号物质。
5. 荧光检测：使用荧光显微镜或荧光分析系统观察样本，检测荧光信号的强度和分布，从而确定CRP的水平。
四、免疫荧光法的优点1. 灵敏度高：免疫荧光法能够检测到很低浓度的CRP，具有很高的检测灵敏度。
2. 特异性好：通过选择特异性抗体，免疫荧光法能够准确地识别CRP，避免误判。
3. 可视化：免疫荧光法使用荧光标记，可以直观地通过观察荧光信号来判断检测结果，便于结果解读。
五、免疫荧光法的应用1. 临床诊断：免疫荧光法可以用于炎症性疾病的诊断和疾病活动的监测，如风湿性关节炎、系统性红斑狼疮等。
2. 疾病预防：通过检测CRP的水平，可以评估个体心血管疾病的风险，帮助制定预防和治疗策略。
3. 药物疗效监测：在药物治疗过程中，免疫荧光法可用于监测炎症状态和药物疗效，指导治疗方案的调整。
六、免疫荧光法的发展与展望随着生物技术和荧光成像技术的不断发展，免疫荧光法在CRP检测中的应用也在不断完善和拓展。
两种不同的原核表达载体蛋白表达及纯化的比较
基因组学与应用生物学，2020年，第39卷，第9期，第4136-4144页研究报告Research Report两种不同的原核表达载体蛋白表达及纯化的比较邱淑彬1,2荆韧威3郭正隆3谢晓东1,2*1天津农学院农学与资源环境学院,天津,300384;2天津市作物抗逆的机理及遗传改良国际联合研究中心,天津,300384;3天津医科大学基础医学研究中心,天津-牛津基因治疗联合实验室,天津,300070*通信作者,*************.cn摘要为了比较两种不同的原核表达载体体外表达纯化CP05-GFP蛋白的能力，本研究通过构建pET28b-CP05-GFP(双His-Tag)、pET28b-CP05-GFP(单His-Tag)、pGEX-6p-1-CP05-GFP(GST-Tag)三个原核表达质粒，诱导表达并纯化带有不同标签的CP05-GFP蛋白。
通过考马斯亮蓝染色技术比较两种不同的原核表达载体表达以及体外纯化CP05-GFP蛋白的能力，发现3个原核表达载体均能诱导表达出CP05-GFP蛋白，且能纯化出CP05-GFP蛋白，但是不同标签纯化CP05-GFP蛋白的纯化效率是不同的：pET28b-CP05-GFP (双His-Tag)原核表达系统能够表达并纯化出CP05-GFP蛋白，但其表达量低易纯化；pET28b-CP05-GFP(单His-Tag)原核表达系统能够表达并纯化出CP05-GFP蛋白，其表达量高但不易纯化；pGEX-6p-1-CP05-GFP (GST-Tag)原核表达系统可表达出足量的CP05-GFP(GST-Tag)蛋白，并且易纯化。
本研究有助于选择合适的载体进行融合蛋白的表达和纯化。
关键词原核表达,载体构建,蛋白纯化Comparison of Two Different Prokaryotic Expression Vectors in Protein Expression and PurificationQiu Shubin1,2Jing Renwei3Guo Zhenglong3Xie Xiaodong1,2*1College of Agronomy and Resource Environment,Tianjin Agricultural University,Tianjin,300384;2Tianjin Joint Research Center for Crop Stress Resistant and Genetic Improvement,Tianjin Agricultural University,Tianjin,300384;3Tianjin-Oxford Joint Laboratory Gene Therapy,Research Cen-ter of Basic Medical Science,Tianjin Medical University,Tianjin,300070*Corresponding author,*************.cnDOI:10.13417/j.gab.039.004136Abstract To compare the ability of two different prokaryotic expression vectors in the expression and purification of CP05-GFP in vitro,the pET28b-CP05-GFP(Double His-Tag),pET28b-CP05-GFP(Single His-Tag) and pGEX-6p-1-CP05-GFP(GST-Tag)expression vectors were constructed.Afterwards,the CP05-GFP proteins with different tags were expressed and purified.The expression efficiency of these two vectors and the ability of different tags to purify the CP05-GFP proteins were compared by coomassie blue staining.The CP05-GFP proteins with different Tags could be obtained from the pET28b-CP05-GFP(Double His-Tag),pET28b-CP05-GFP(single His-Tag)and pGEX-6p-1-CP05-GFP(GST-Tag)expression vectors.While the abilities of different tags to purify to purify CP05-GFP in vitro were compared by Coomassie blue staining technique.The results showed that the CP05-GFP protein with double His-Tag was expressed in a low level,but easy to be purified.In contrast,the CP05-GFP protein with a single His-Tag could be expressed with high abundance but difficult to be purified. Significantly,the CP05-GFP with a GST-Tag could be expressed with high abundance and easy to be purified.基金项目：本研究由国家自然科学基金(31771858)资助引用格式：Qiu S.B.,Jing R.W.,Guo Z.L.,and Xie X.D.,2020,Comparison of two different prokaryotic expression vectors in protein expression and purification,Jiyinzuxue Yu Yingyong Shengwuxue(Genomics and Applied Biology),39(9):4136-4144(邱淑彬,荆韧威,郭正隆,谢晓东,2020,两种不同的原核表达载体蛋白表达及纯化的比较,基因组学与应用生物学,39(9):4136-4144)体外重组蛋白表达技术已经渗透到生物学的各个领域。
绿色荧光蛋白原核表达载体的构建
绿色荧光蛋白原核表达载体的构建赵轶君;董浩;潘红艳;徐芳;赵佳;步怀宇;李红民【期刊名称】《华北农学报》【年(卷),期】2013(000)003【摘要】为开发以绿色荧光蛋白（GFP）为基因的原核表达载体，根据 NCBI 基因序列设计引物，通过 PCR 扩增获得GFP 编码基因，经限制性核酸内切酶消化后将 GFP 定向克隆至原核表达载体 pMAL－c2X 中 malE 基因下游的EcoRⅠ与Hind Ⅲ位点之间，与 malE 基因融合为一个表达框。
重组产物转化 E．coli TB1感受态细胞，在添加有50 mg/mL AMP、10μmol/L IPTG 的 LB 平板上于37℃培养12～16 h 后放置于25～30℃的培养箱中继续培养4～6 h，365 nm UV 照射下挑取转化克隆，经扩大培养后用 IPTG 诱导 GFP 的表达并用 SDS－PAGE 检测表达效率。
结果表明，融合在麦芽糖结合蛋白下游的 GFP 编码基因可以在宿主细胞中有效表达，在365 nm UV 照射下，可以直接从加有50 mg/mL AMP、10μmol/L IPTG 的 LB 平板上挑取发绿色荧光的重组克隆，SDS－PAGE 分析结果显示其扩大培养物经 IPTG 诱导后可高效表达 GFP。
该结果为进一步构建以 GFP 为标记基因取代抗生素筛选标记的原核表达载体提供了切实的试验依据。
【总页数】4页(P73-76)【作者】赵轶君;董浩;潘红艳;徐芳;赵佳;步怀宇;李红民【作者单位】西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069;西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069;西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069;西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069;西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069;西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069;西部资源生物与现代生物技术教育部重点实验室，陕西省生物技术重点实验室，西北大学生命科学学院分子生物学课程组，陕西西安 710069【正文语种】中文【中图分类】Q78【相关文献】1.增强型绿色荧光蛋白原核表达载体的构建及其表达 [J], 刘华伟;张宏;孙超;王庆贺;宋艳瑞2.增强型绿色荧光蛋白原核表达载体的构建及表达 [J], 段斯亮;于声;苏晓庆3.乳酸乳球菌NZ9000中增强型绿色荧光蛋白报告系统的构建 [J], 刘璐; 艾连中; 夏永军; 熊智强; 管彤; 宋馨4.基于绿色荧光蛋白的冷鲜猪肉中大肠杆菌预测模型的构建 [J], 刘变芳;胡辉帆;张义奎;蔡锦;杜双奎;李俊丽;曹梦茜;吕欣5.表达绿色荧光蛋白重组猪塞内卡病毒的构建及初步应用 [J], 张晓战;边传周;王增;杨磊;邓同炜;赵攀登;彭志锋;陈露露;郭懿文;夏艳勋;乔宏兴因版权原因，仅展示原文概要，查看原文内容请购买。
生化绿色荧光蛋白的基因克隆及表达开题报告
学号：班级：姓名：《生物化学与生物分子学实验》——分子生物学设计性实验开题报告实验课题：绿色荧光蛋白的基因克隆及表达指导老师：作者姓名：所在院系：小组编号：小组成员：完成时间：成都医学院Cheng Du Medical College题目：绿色荧光蛋白（GFP）基因的基因克隆及在大肠杆菌中的表达立题依据：随着分子生物学和基因工程技术的迅速发展和广泛应用, 人们根据自己的意愿有目的、有计划、有根据、有预见地将外源基因导入动物细胞内, 使外源基因进行表达、阐明基因表达的调控机理或者通过与染色体基因组进行稳定整合，将生物性状传递给子代动物的研究方兴未艾[1]。
1.选材：大肠杆菌大肠杆菌是第一个用于重组蛋白生产的宿主菌，它不仅具有遗传背景清楚、培养操作简单、转化和转导效率高、生长繁殖快、成本低廉、可以快速大规模地生产目的蛋白等优点。
而且其表达外源基因产物的水平远高于其它基因表达系统，表达的目的蛋白量甚至能超过细菌中蛋白量的30 %，因此大肠杆菌是目前应用最广泛的蛋白质表达系统。
2.基因标记技术基因标记技术是近年来发展起来的分子生物学技术。
荧光蛋白基因在标记基因方面由于具有独特的优点而引起了科学家的广泛关注，现已被普遍应用到分子生物学研究的各个方面。
荧光蛋白是海洋生物体内的一类发光蛋白，分为绿色荧光蛋白、蓝色荧光蛋白、黄色荧光蛋白和红色荧光蛋白[2]。
3.绿色荧光蛋白从水母(Aequorea victoria)体内发现的发光蛋白。
分子质量为26kDa，由238个氨基酸构成，第65～67位氨基酸(Ser-Tyr-Gly)形成发光团，是主要发光的位置。
其发光团的形成不具物种专一性，发出荧光稳定，且不需依赖任何辅因子或其他基质而发光。
绿色荧光蛋白基因转化入宿主细胞后很稳定，对多数宿主的生理无影响，是常用的报道基因。
【实验目的】研究绿色荧光蛋白（Greed Fluorescent Protein，GFP）基因的基因克隆及在大肠杆菌中的表达。
绿色荧光蛋白（GFP）原核表达分析
绿色荧光蛋白（GFP）原核表达分析石河子大学分子生物学实验结课论文绿色荧光蛋白(GFP)原核表达分析学生姓名学号专业年级、班级指导教师所在学院中国·新疆·石河子2016年1月绿色荧光蛋白(GFP)原核表达分析摘要：本实验主要探讨目的蛋白（GFP）在大肠杆菌中的表达的情况以及鉴定目的蛋白形成的是包涵体还是可溶性蛋白。
本实验先对菌液进行培养、活化、然后采用IPTG 分别对其不同时间点的诱导，用SDS-PAGE来确定目的蛋白的可溶性及其分子量，掌握GFP 诱导不同时间的表达情况的检测方法。
关键词：绿色荧光蛋白；SDS-PAGE；原核表达1 前言1.1实验目的掌握聚合酶链式反应(PCR)的原理和操作方法；了解重组载体的构建方法；锻炼学生查阅文献资料、设计与优化实验的能力；加强学生对化学生物学中常用研究方法的认知。
1.2实验背景绿色荧光蛋白（green fluorescent protein GFP) 是源于多管水母属等海洋无脊椎动物的发光蛋白，其在蓝光或紫外光下可发出明亮的绿色荧光，可以作为报告基因检测蛋白的特异性表达或进行细胞定位研究。
与以往lacZ、CAT 等报告基因相比，有很多无可比拟的优越性: GFP 不具有种属依赖性，在多种原核和真核生物细胞中都表达；荧光强度高，稳定性高；不需要反应底物与其他辅助因子，受蓝光激发产生绿色荧光,尤其适用于体内的即时检测；另外GFP 分子量小，易于融合，适用于多种转化方式，对受体无毒害,安全可靠；并且通过替换一些特殊氨基酸，可以使之产生不同颜色的光，从而适应不同的研究需要。
正是由于GFP 检测具有高灵敏度，操作简单，无需使用同位素等优点，近年来广泛用于基因的表达与调控、蛋白质的定位、转移以及相互作用、信号传递、转染与转化，以及细胞的分离与纯化等研究领域。
绿色荧光蛋白还在监测目的基因表达、研究细胞内物质代谢及追踪细胞系的分化等方面有着广泛应用。
采用GFP作为标记基因，可直接收集转化细胞供实验，缩短了筛选时间、减少对细胞活性的影响并可作为活体标记，为研究发育的基因调控和分子机制提供了一种简洁有效的手段。
绿色荧光蛋白GFP基因的克隆和表达新手详细注释版资料
绿色荧光蛋白(GFP)基因的克隆和表达背景知识绿色荧光蛋白（green fluorescent protein，GFP）是一类存在于包括水母、水螅和珊瑚等腔肠动物体内的生物发光蛋白。
当受到紫外或蓝光激发时，GFP 发射绿色荧光。
它产生荧光无需底物或辅因子。
发色团是其蛋白质一级序列固有的。
GFP 由3 个外显子组成，长2.6kb；GFP 是由238 个氨基酸所组成的单体蛋白,相对分子质量为27. 0kMr，其蛋白性质十分稳定，能耐受60℃处理。
1996 年GFP 的晶体结构被解出，蛋白质中央是一个圆柱形水桶样结构，长420 nm，宽240 nm，由11 个围绕中心α螺旋的反平行β折叠组成，荧光基团的形成就是从这个螺旋开始的，桶的顶部由3 个短的垂直片段覆盖，底部由一个短的垂直片段覆盖，对荧光活性很重要位的发色团是由其蛋白质内部第65-67的生色团则位于大空腔内。
自身环化和氧化形成.Ser-Tyr-Gly的分离与纯化质粒DNA实验一一、实验目的提取方法：碱裂解法。
该法用于DNA掌握一种最常用的质粒DNA省时，提取的质粒DNA从小量培养物中抽提质粒，比较方便、甚至测序。
的酶切、质量较高，可用于DNAPCR 二、基本原理质粒是一类在细菌细胞内发现的独立于染色体外，能够自主复制的稳定的遗传单位。
迄今。
质粒到200kbDNA为止，从细菌中分离得到的质粒都是环型双链分子，分子量范围从1kb可持续稳定地处于染色体外的游离状态，但在一定条件下又会可逆地整合到寄主染色体DNA复制上，随着染色体的复制而复制，并通过细胞分裂传递到后代。
在大多数情况下质粒DNA中的酶体系和细菌染色体复制时所用的酶是相同的。
有些质粒复制受宿主细胞复制作用的严格限制，因此每个细胞中只含一个或几个拷贝，称为严谨型质粒，有的质粒的复制受宿主细胞的个拷贝。
当宿主细胞的蛋白10-200控制不严，称为松弛型质粒，它们在每个细胞中的数目可达质合成受到抑制时（例如经氯霉素处理），细菌染色体虽不再增加，但松弛型质粒DNA可继续被复制，以至每个细胞内的拷贝数可以增至一千到几千。
绿色荧光标记C反映蛋白的原核表达和毛细管电泳检测
绿色荧光标记C-反映蛋白的原核表达和毛细管电泳检测陈腾祥，夏高晓，陈丽，刘亚伟，刘靖华，姜勇【摘要】目的：表达纯化重组的His-EGFP-CRP蛋白，通过毛细管电泳技术对该重组蛋白的生物活性进行评判。
方式: 用pET14b/EGFP-hCRP原核表达质粒转化到大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达，表达的重组蛋白通过亲和色谱纯化、梯度透析，取得复性的His-EGFP-CRP蛋白；并用高效毛细管电泳（HPCE）技术对复性的蛋白进行检测，了解蛋白质的等电点及活性。
结果: 转化实验发觉，该质粒pET14b/EGFP-hCRP在BL21（DE3）中能够被诱导表达；通过包涵体变性溶解、亲和色谱纯化可取得纯度较高的His-EGFP-CRP蛋白；HPCE 分离发觉复性后的His-EGFP-CRP蛋白峰为多个，其在电泳液pH值低于6时易检出，His-EGFP-CRP与THP-1细胞裂解物孵育后的检测峰增多。
结论: 成功地在大肠杆菌BL21（DE3）中诱导表达重组蛋白His-EGFP-CRP，通过包涵体变性溶解及亲和色谱纯化取得该重组蛋白，复性后的His-EGFP-CRP等电点接近于6，以单体或多聚体等结构形式存在，具有结合活性，能与细胞内相关分子结合成复合物，可应用于CRP功能和内化机制的研究。
【关键词】 C反映蛋白；基因表达；蛋白质复性；电泳，毛细管［Abstract］Objective: To express the purified recombinant protein, His-EGFP-CRP, and to evaluate the feasibility of its application in the research of function and internalization mechanism of human C-reactive protein （CRP）. Methods: The re-constructed vector pET14b/EGFP-hCRP was transformed into Escherichia.coli BL21（DE3）, induced by isopropyl-β-D-thiogalactopyranoside （IPTG）. The expressed protein, His-EGFP-CRP, was purified with affinity chromatography method and refolded with gradient filtration. The renatured His-EGFP-CRP was analyzed with high performance capillary electrophoresis （HPCE） to evaluate its isoelectric point （pI）and bio-activity. Results: Fusion protein His-EGFP-CRP successfully expressed in transformed E. coli cells after the induction, and then was purified with inclusion lysis and affinity chromatography. His-EGFP-CRP was detected at several peaks of the fraction profile of HPCE when the pH of electrophoresis buffer was under 6. The number of His-EGFP-CRP detection peaks increased after the protein was incubated with lysate of THP-1 cells. Conclusions: The pI of His-EGFP-CRP is about 6, and its structures may be monomer or polymer, which have the ability to bind relative molecles in lysate of THP-1 to formcomplex. These results suggest the recombinant protein could be used in exploiting the function and internalization mechanism of human CRP.［Key words］ C-reactive protein; gene expression; protein renaturation; electrophoresis,capillaryC-反映蛋白（C-reactive protein, CRP）是一种发觉较早的蛋白质，在急性心肌梗塞、创伤、感染、炎症、外科手术和肿瘤侵润时，其血浆浓度急剧升高，达到正常水平的数百倍，乃至数千倍，能够作为上述疾病的临床监测指标，是急性期蛋白的要紧成员之一［1］。
绿色荧光蛋白──一种新的基因表达标记物
绿色荧光蛋白──一种新的基因表达标记物
黄涛
【期刊名称】《生命的化学》
【年(卷),期】1995(15)2
【摘要】绿色荧光蛋白──一种新的基因表达标记物黄涛（中国医学科学院基础医学研究所医学分子生物学国家重点实验室，北京１００００５）关键词绿色荧光蛋白，基因表达标记物发育生物学家一直想找到一种可以直接在活组织或细胞生长和分化的任何时刻随时被检测到的细胞标记物（ｃ...
【总页数】2页(P38-39)
【关键词】绿色荧光蛋白;基因表达;标记物
【作者】黄涛
【作者单位】中国医学科学院基础医学研究所
【正文语种】中文
【中图分类】Q753
【相关文献】
1.韧皮部特异性启动子的克隆及含绿色荧光蛋白报告基因新植物表达载体的构建[J], 胡桂兵;张上隆;徐昌杰;林顺权
2.增强型绿色荧光蛋白基因与轮状病毒VP6基因融合表达载体的构建及表达 [J], 潘小霞;张顺;袁静;文喻玲;陈元鼎
3.绿色荧光蛋白作为骨髓间充质干细胞示踪标记物在脑出血脑内的表达 [J], 杜杰;
高小青;涂江义;杨朝鲜;邓莉
4.截短的丙型肝炎病毒核心蛋白基因和绿色荧光蛋白基因在Sf 9细胞中的融合表达 [J], 沈剑平;朱诗应
5.hTERT基因启动子调控表达绿色荧光蛋白基因的逆转录病毒载体的构建及在人宫颈癌Hela细胞中的表达 [J], 邓俊晖;余新;邵江华
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被诱导表达； 通过包涵体变性溶解 、 亲和 色谱 纯化 可获得纯度较高 的 ＨｓＥ Ｆ — Ｒ ｉ Ｇ ＰＣ Ｐ蛋 白； Ｐ Ｅ分离发现复性 — ＨＣ
［ 关键词 ］Ｃ反应蛋白； 基因表达； 蛋白质复性 ； 电泳， 毛细管
［ 中图分类 号］Ｑ１ Ｔ９６２ ５； Ｑ３．２
［ 文献标 识码 ］Ａ ［ 文章编 号］１０－ ０（０８０－ ４－ ００ ７７２０）５ ４１５ ２ ０ ０
Ｔｈ ｏ ａ ｙ ｔｃ Ｅｘ ｒ ｓ ｉ ｎ ｏ ｕ ａ ｒ ａ ｔｖ ｏ ｅｎ Ｌａ ｅ ｌｄ ｗｉｈ ｅ Ｐｒ ｋ ｒ ｏ ｉ ｐ ｅ ｓｏ ｆＨ ｍ ｎ Ｃ－ ｅ ｃ ｉ ｅ Ｐｒ ｔ ｉ ｂ ｌ ｔ ｅ
５０ １ ） １ ５５
［ 摘 要 ］目的： 表达纯化重组的 Ｈｓ Ｇ ＰＣ Ｐ ｉＥ Ｆ —Ｒ 蛋白， — 通过毛细管电泳技术对该重组蛋白的生物活性进行评
价 。方法 ： ｐ Ｔ ４／ Ｇ Ｐｈ Ｒ 用 Ｅ １ｂ Ｅ Ｆ —Ｃ Ｐ原核表达质粒转化到大肠杆菌 Ｂ２ （ Ｅ ） Ｉ １ Ｄ ３ 中诱导表达 ， 表达的重组蛋白通过 亲和色谱纯化 、 度透析 ， 梯 获得复性 的 Ｈ ｓ Ｇ ＰＣ Ｐ蛋 白； ｉ Ｅ Ｆ —Ｒ — 并用 高效毛细管 电泳 （ Ｐ Ｅ 技术对复性 的蛋 白进 ＨＣ ）
［ ｂ ｔ ｃ ］Ｏｂｅｔ ｅ Ｔ ｘｒｓ ｔｅｐ ｒ ｅ ｃｍｂ ａ ｔ ｒｔ ｎ ｉ Ｅ Ｆ — Ｒ ， ｎ ｖｌａ Ａ ｓ ａｔ ｒ ｊｃ ｖ ： ｏｅｐｅｓ ｈ ｕｉ ｄｒ ｏ ｉ ｎ ｏｅ ，Ｈｓ Ｇ ＰＣ Ｐ ａｄｔ ｅａ ｔ ｉ ｉ ｆ ｅ ｎ ｐ ｉ — ｏ ｕｅ
ｔ ｅ ｓｂ ｌ ｙ ｏ ｔ ｐ ｌｃ ｔ ｎ ｊ ｈｅ ｒ ｓ ａ ｃ ｆｆ ｎ ｔ ｎ ａ ｄ ｉ ｔｍａ ｉａｉｎ ｍｅ ｈ ｎｉｍ ｆｈ ｍａ ｈｅｆ ａ ｉ ｉｉ ｆｉ ａ ｐ ｉａｉ ｎ ｔ ｅ ｅ ｒ ｈ ｏ ｕ ｃ ｉ ｎ ｎ ｅ ｌ ｔ ｃ ａ ｓ ｏ ｕ ｎ Ｃ． ｔ ｓ ｏ ｏ ｚ ｏ
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学 院 学 报
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性溶解及亲 和色谱纯化获得该重组蛋 白， 复性后的 Ｈ ｓ Ｇ ＰＣ Ｐ等电点接近于 ６， 体或 多聚体等结构形式 ｉ Ｅ Ｆ ．Ｒ ． 以单
存 在 ， 有 结 合活 性 ， 与 细胞 内相 关 分 子 结合 成 复合 物 ， 具 能 可应 用 于 Ｃ Ｐ功 能 和 内 化机 制 的研 究 。 Ｒ
后 的 ＨｓＥ Ｆ —Ｒ ｉ Ｇ ＰＣ Ｐ蛋 白峰 为多 个 ， 在 电泳 液 ｐ — 其 Ｈ值 低 于 ６时 易 检 出 ， ｉ Ｅ Ｆ ．Ｒ Ｈｓ Ｇ ＰＣ Ｐ与 Ｔ Ｐ１细 胞 裂 解 物 孵 ． Ｈ一
育后的检测峰增多。结论 ： 成功地在大肠杆菌 Ｂ ２ （ Ｅ ） Ｌ １ Ｄ ３ 中诱导表 达重组蛋 白 Ｈｓ Ｇ ＰＣ Ｐ， ｉ Ｅ Ｆ —Ｒ 通过包涵体变 －
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论著 ・
绿 色 荧光标 记 Ｃ 反 应 蛋 白的原 核 表 达 和 毛 细 管 电泳 一 检 测
陈腾 祥 ，夏高晓 ，陈 丽 ，刘亚伟 ，刘靖华 姜 勇 ” ，
（． １ 贵阳医学院 生理学教研室 ，贵州 贵阳 ５ ００ ２ 南方医科大学 病理生理学教研室和广 东省蛋 白质组学重点实验室 ，广东 广州 ５０ ４； ．