艾滋病(HIV)检测方法汇总

艾滋病（HIV）检测方法汇总

一、艾滋病简介

艾滋病日的概念来源于1988年，全球卫生部大臣关于艾滋病预防计划的高峰

会议上(W orld Summit of Ministers of Health on Programmes for AIDS Prevention)提

出的。从此，这个概念被全球各国政府、国际组织和慈善机构采纳。从此，这个概念被全球各国政府、国际组织和慈善机构采纳。自1981年世界第一例艾滋病病

毒感染者发现至今，短短20多年间，艾滋病在全球肆虐流行，已成为重大的公共

卫生问题和社会问题，引起世界卫生组织及各国政府的高度重视。为号召全世界人民行动起来，团结一致共同对抗艾滋病，1988年1月，世界卫生组织在伦敦召开

了一个有100多个国家参加的“全球预防艾滋病”部长级高级会议，会上宣布每年的12月1日为“世界艾滋病日” (World Aids Day) ;1996年1月，联合国艾滋病规划署(UNAIDS)在日内瓦成立;1997年联合国艾滋病规划署将“世界艾滋病日”更名为“世

界艾滋病防治宣传运动”，使艾滋病防治宣传贯穿全年。

二、艾滋病（HIV）检测方法

(一)抗体检测

主要有酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫荧光试验(IFA)。ELISA用去污剂裂解HIV或感染细胞液提取物作抗原，IFA用感染细胞涂片作抗原进行抗体检测，如果

发现阳性标本应重复一次。为防止假阳性，可做Westernblot(WB，蛋白印迹法)进

一步确证。

WB法是用聚丙烯酰胺凝胶电泳将HIV蛋白进行分离，再经传移电泳将不同

蛋白条带转移于硝酸纤维膜上，加入病人血清孵育后，用抗人球蛋白酶标抗体染色，就能测出针对不同结构蛋白抗体，如抗gp120、gp41、P24抗体，特异性较高。

快速检测法，也称为金标法，也是抗体检测的一种方法，根据免疫层析法的原理，用于HIV抗体检测的定性检测。

(二)抗原检测

用ELISA检测P24抗原,在HIV感染早期尚未出现抗体时,血中就有该抗原存在.由于P24量太少,阳性率通常较低。现有用解离免疫复合物法或浓缩P24抗原，

来提高敏感性。

(三)核酸检测

用PCR法检测HIV基因，具有快速、高效、敏感和特异等优点，目前该法已被应用于HIV感染早期诊断及艾滋病的研究中。

(四)病毒分离

常用方法为共培养法，即用正常人外周血液分离单个核细胞，加PHA刺激并培养后，加入病人单个核细胞诊断及艾滋病的研究中。

三、艾滋病（HIV）抗体、抗原检测

HIV抗体一般在人感染后几周逐渐出现,可延续至终生[15]，血清学试验分为初筛和确认试验。最常用的初筛试验和确认试验分别是酶联免疫吸附试验和免疫印迹试验(WB)。常规实验方法：酶联免疫吸附试验、免疫印迹试验(WestBlot)、间接免疫荧光法(IFA)。快速检测方法：明胶颗粒凝集试验、斑点免疫结合试验、P24抗

原的检测、分子生物学方法、RT?PCR检测法、荧光实时PCR检测技术、支链DNA(bDNA)、连接酶酶促链式反应(LCR)、核酸序列依赖性扩增(NASBA)、转录

介导的扩增(TMA)

1、酶联免疫吸附试验

ELISA法的基本原理是免疫反应物通过化学或免疫学的方法形成酶结合物，

酶结合物能与待检样品中相应的抗原或抗体结合成为免疫复合物,然后加入酶底物,经酶的催化或水解作用,无色底物产生颜色,用肉眼、分光光度计观察结果。初筛用的HIV ELISA试剂目前已经发展到第四代检测试剂。第一代试剂主要以病毒裂解物或部分纯化的病毒抗原包被反应板,以检测血清中的抗体。由于包被的抗原不很纯,假阳性率较高。第二代试剂使用基因工程方法得到的重组抗原和合成肽包被反应板，由于纯化抗原的使用,特异性有了很大提高。第三代试剂使用双抗原夹心法检测抗体,进一步提高了敏感性。第四代试剂则在第三代的基础上进一步增加了

P24抗原的检测,把HIV抗原和抗P24的抗体同时包被反应板,可同时检测血清中的HIV抗体和P24抗原。

2、免疫印迹试验

免疫印迹试验主要用于确认试验，基本原理是HIV全病毒抗原经过

SDS?PAGE电泳,将分子量大小不等的蛋白带分离开来,然后再把这些已经分离的不同蛋白带电转移到硝酸纤维素膜上。将此膜切割成条状,每一条硝酸纤维素膜上均含有经电泳分离过的HIV病毒抗原。将待检血清样品用稀释液稀释成1/100,再把

它直接加到硝酸纤维素膜上,恒温震荡,使其充分接触反应,血清中若含有抗HIV抗体,就会与膜条上的抗原带相结合。加入抗人IgG酶结合物和底物后,即可使有反应的

抗原?抗体结合带呈现紫褐色,根据出现条带情况判定结果。有报告说，免疫印迹试

验的特异性不是很好, 有大约2%的假阳性率，但免疫印迹试验依然是目前最常用

的HIV确认试验。

3、免疫荧光试验(IFA)

基本原理为应用H?9或HUT?78培养细胞作为载体,用HIV感染细胞,该细胞内

就会含有HIV抗原,将HIV感染的淋巴细胞涂于玻片上,固定，制备为抗原片,加入

待检血清，待检血清中的抗HIV抗体与抗原结合后,再与荧光素标记的抗人Ig结合,在荧光显微镜下可见到细胞内有黄绿色荧光。

4、明胶颗粒凝集试验(PA)

PA的基本过程是先将样品稀释,然后分别加入经抗原致敏的和未致敏的明胶颗粒,混匀后保温(一般为室温)。当血清中有HIV抗体存在时,经抗原致敏的明胶颗粒

与抗体发生抗原抗体反应,根据明胶颗粒在孔中的凝集情况判读结果。PA操作简便,无需特殊仪器设备,适合对少量标本的检测。

5、斑点印迹试验(或免疫层析/或渗滤)

斑点印迹试验一般采用硝酸纤维素膜作固相载体, 用HIV抗原包被于固相载体,加入待测标本(可为血清、血浆、尿液和其他体液),一定温度反应后洗去未结合于固

相载体上的标本,包被抗原和被检血清中抗体结合,用胶体金(或胶体硒)代替底物连

接在葡萄球菌蛋白A上,金标记蛋白A具有与人I g结合的能力,因而可与被捕获的HIV抗体结合。若样品中有HIV抗体,则薄膜上就会产生一桔红色斑点(或线条),一

般3～10 min出结果,特异性较好, 较为适宜于偏远地区临床用血检测,但不适于城市

地区的献血员筛查。

四、艾滋病（HIV）检测时间

艾滋病检测的最佳检测时间，对于艾滋病患者来说是一个非常重要的事项，因为患有艾滋病的人，在早期极少出现让人们感到异常的症状，所以常常被人们所忽略。一直到了发现症状的时候，艾滋病就已经到了晚期了，治疗已经极为不容易了。所以在感染早期，及时的进行艾滋病检测，是一项很重要的事项，他能帮助患者及早的发现艾滋病的症状高危后，一般需要2-4周时间就可以检测出艾滋病HIV抗体。高危行为后，一般需2周时间即可检测出艾滋病抗体。也就是说2周后就适合

作艾滋病检测。时间越往后，检测的准确性就越高(不同时间检测准确率、。绝大

多数被HIV感染的人，在4周后就能产生足够多的抗体，这个数量能够满足使用

目前的HIV抗体测试方法检测出HIV阳性。