液相色谱串联质谱法对水产品中喹诺酮类药物的测定

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shi dian lun tan
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液相色谱串联质谱法对水产品中
喹诺酮类药物的测定
◎李新
摘要：目的 使用液相色谱串联质谱法对水产品中环丙沙星、氧氟沙星、洛美沙星、诺氟沙星、培氟沙星、恩诺沙星6种喹诺酮类药物残留情况，以建立喹诺酮类药物水产品液相色谱串联质法测定方案。

方法 采用乙腈提取样品，后将提取液进行正己烷液液分配脱脂后，使用强阳离子固相萃取小柱净化的方式，对样品进行液相色谱串联质谱法测定。

在检测中对液相色谱串联质法测定全过程进行适当优化，并分析优化后6种喹诺酮类药物残留检测回收率等。

结果 0～40μg/L 范围内测定6种喹诺酮类药物的线性关系良好，且相关系数均在0.9924～0.9986之间，回收率高达80.36%～92.65%。

结论 对液相色谱串联质法测定全过程进行适当优化，使用强阳离子固相萃取小柱净化方式，可以满足水产品喹诺酮类药物检测的要求，值得深入研究与应用。

关键词：水产品；液相色谱串联质谱法；喹诺酮
水产品属于生活中较为常见的食材，尤其是鱼、虾等产品更是由于口感细腻鲜美，深受大众喜爱，但水产品在养殖过程中可能存在一些药物残留的情况，这些药物残留达到一定水平会对食用的大众健康构成严重威胁。

喹诺酮类属于水产品中易于超标的药物残留之一，此类药物属于广谱性的抗菌剂，由于其在革兰仕菌、球菌、杆菌等防治上效果好，所需成本低，使得这类药物成为水产品养殖中不可或缺的药物之一，但过量的药物残留会影响水产品的品质[1]。

而想要真正确保水产品安全，则需要强化对喹诺酮类药物残留的检测质量。

液相色谱串联质谱法属于近些年在药物残留等检测中应用较为广泛的技术，研究在此种检测法基础上进行优化的水产品喹诺酮类药物检测方案，对于提高水产品喹诺酮类药物检测质量，确保水产品安全具有重要意义[2]。

一、实验材料与方法
（1）实验材料。

实验器材：实验中所用的仪器为液相色谱仪（Thermo Fisher U3000）、串联质谱仪（TSQ Quantum Access Max）配ESI 离子源、离心机。

实验试剂：甲醇、乙腈、甲酸色谱纯（E．Merck，德国）、超纯水、Sulpco SCX SPE 柱（500mg ／3mL）、在Sulpco SCX SPE 柱使用前分别使用乙酸铵缓冲液（3mL 10mmol ／L）、甲醇（3mL）、水（3mL）对柱体进行冲液洗脱，使得柱体可以维持在湿润的状态下。

标准品：环丙沙星、氧氟沙星、洛美沙星、诺氟沙星、培氟沙星、恩诺沙星。

（2）实验方法。

实验中先对样品处理，后对质谱条件与色谱条件进行控制。

首先，样品处理。

①操作中先取匀浆样品5.00g，后加入Na2SO4（无水）5g、乙腈25 mL，后行离心分散提取，离心处理时设置参数为10000 r/min，上述步骤需要重复操作，后合并提取上清液，使用50.0mL 乙腈定容。

②待匀浆样品经过离心处理后摇匀取10.0mL，使用正己烷5mL 振摇脱脂2次，在氮气40℃吹至近干，后加入乙酸铵缓冲液3mL，涡动处理30s [3]。

③涡动处理后1 mL/min 流速经过SCX SPE 小柱，之后再用甲醇（1.5 mL）、氨水甲醇体积分数25%（3 mL）依次洗脱，使得洗脱液合并氮气40℃吹至近干。

④再以乙腈：0.1%甲酸水溶液=1：9定容至1.0 mL，使用0.22μm 滤膜过虑，后待测。

其次，质谱条件控制。

电喷雾源（ESI）、多反应监测（MRM）、490℃离子源温度、正离子模式、12.00L/min 雾化气（NEB）、14.00 L/min 气帘气（CUR）、3000 V 喷雾电压（IS）、8.00L/min 去溶剂气流、6.00 mL/min 碰撞气（CAD）、80ms 驻留时间。

再次，色谱条件控制。

30℃柱温、200μL/min 流速、20μL 进样量、色谱柱5μm 150mm×2.1mm YMC-Pack Pro C18柱。

二、实验结果与讨论
（1）实验优化方式。

①喹诺酮类药物残留检测的稳定性优化。

考虑到恩诺沙星在鱼皮中浓度比较高，因此在实验中采用鳗鱼皮先进行微波加热后将其搅碎，以避免对喹诺酮类药物稳定性造成影响。

结果表明加热在1min 以内不会对分析物产生影响，后将加热的鳗鱼皮搅碎与鱼肉匀浆制作成检测样品。

另外，考虑到喹诺酮类药物水相中工作中较容易被降解，故使用现配方式。

而诺氟对光较为敏感，故在储存时避光存放。

依次根据不
同喹诺酮类药物采用不同储存方式，确保检测准确性。

②优化提取液的选择与净化条件控制。

喹诺酮类药物属于酸碱另行物质，故在溶液萃取过程中，根据溶液酸碱特性不同针对性提取，分别在酸性条件、碱性条件下进行提取。

进一步优化净化条件，调整pH，后使用正相柱进行净化，并增加强阳离子交换小柱 SCX SPE 柱净化，确保溶液净化质量。

（2）实验检测相关系数、添加回收率。

实验检测相关系数、添加回收率如表1所示。

表1 喹诺酮类药物（6种）实验检测相关系数、添加回收率情况
药物名称
相关系数
添加量（μg/kg）
平均回收率 /%
氧氟沙星
0.9985
2.088.365.08
3.6410.087.8440.086.34洛美沙星
0.9984
2.082.845.081.4710.08
3.5640.08
4.76诺氟沙星
0.9946
2.088.365.088.9610.089.6540.090.36培氟沙星
0.9986
2.088.455.08
3.3510.090.2140.087.98环丙沙星
0.9924
2.086.775.08
3.6510.082.8440.08
4.56恩诺沙星
0.9971
2.092.655.080.3610.081.6940.0
80.69
综上所述，通过对液相色谱串联质法测定全过程进行适当优化，使用强阳离子固相萃取小柱净化方式，可以满足水产品喹诺酮类药物检测的要求，值得深入研究与应用。

（作者单位：国家轻工业食品质量监督检测南京站）
参考文献
[1]赵娜,梁嘉诚,时丽艳,等.QuEChERS-高效液相色谱-串联质谱法同时测定有机肥料中10种氟喹诺酮类药物残留[J].色谱,2019,v.37(03):77-82.
[2]闵宇航,魏宇涛,杜钢,余晓琴.超高效液相色谱串联质谱法测定豆芽中15种喹诺酮类药物[J].食品科技,2020,v.45;No.345(07):338-343.
[3]徐潇颖,赵超群,梁晶晶,等.全自动固相萃取-高效液相色谱-串联质谱法测定豆芽中15种喹诺酮类药物的残留量[J].理化检验(化学分册),2020,v.56(05):93-99.。