实验五影响酶活力的因素

实验10 影响酶活力的因素——正交实验法
（碘量法测定酶活力）
四个班，每班分16组两个同学一组
目的要求：初步掌握正交实验设计法（简称正交法）的使用，运用正交法测定底物浓度、温度和pH这三种因素对酶活力的影响。

实验原理：
酶反应受到多种因素的影响，如底物浓度、酶浓度、温度、pH值、激活剂和抑制剂等都能影响酶的反应速度。

这种多因素的实验可通过正交法即用—特制的表格——正交表来安排试验，计算和分析实验结果。

这样就能通过少量实验取得较好的效果。

实践证明正交法是一个多、好、快、省的方法，目前已广泛用于农业生产和科学实验中。

本实验运用正交法测定酶浓度、温度、PH值这三个因素对酶活性的影响，并求得在什么样的底物浓度、温度和pH值时酶的活性最大。

酶活力用硫代硫酸钠滴定法测定。

过氧化氢酶能把过氧化氢分解成水和氧，其活力大小以一定时间内一定量的酶所分解的过氧化氢量来表示。

被分解的过氧化氢量可用碘量法间接测定。

当酶促反应进行一定时间后，终止反应，然后以钼酸铵做催化剂，使未被分解的过氧化氢与碘化钾反应放出游离碘，再用硫代硫酸钠滴定碘。

其反应为：
H2O2+2KI+H2SO4→I2+K2SO4+2H2O
I2+Na2S2O4→2NaI+Na2S4O6
反应完后，以样品溶液和空白溶液的滴定值之差求出被酶分解的过氧化氢量，即可计算出酶的活力。

实验器材：
试管15毫升试管9*16=144支
吸管1毫升2*16=32支
吸管5毫升2*16=32支
吸耳球16个
漏斗1个
研钵（或者搅碎机）1个（1台）
恒温水浴锅3台
铁架台16个
蝴蝶夹16个
酸碱两用滴定管16个
100毫升的三角烧瓶3*16=48个
烧杯500毫升18个（装好水放到恒温水浴锅里）
实验所需药品：
1. 0.01 mol/L 的过氧化氢溶液每组消耗50毫升，每班需16ⅹ50=800毫升
1.1毫升过氧化氢溶液，用蒸馏水定容至1000毫升。

（用带盖白色试剂瓶分装10
瓶。

分装1000毫升即可，其余3000用白色大试剂瓶装好备用）
2. 1.8 mol/L 的硫酸溶液（每组消耗50毫升，每班需16ⅹ50=800毫升）共配4000
毫升
95毫升浓硫酸，用蒸馏水定容至1000毫升。

（用带塞白色试剂瓶分装10瓶。

分装1000毫升即可，其余备用）
3. 10%钼酸铵溶液(每组需30滴，每班需16ⅹ30=480滴)共配500毫升
20克钼酸铵，少量蒸馏水溶解，用蒸馏水定容至200毫升（用带胶头滴管的白色试剂瓶分装10瓶。

）
4. 0.02 mol/L 硫代硫酸钠溶液（每组消耗50毫升，每班需16ⅹ50=800毫升，配置6000
毫升）
4.97克硫代硫酸钠溶解于少量蒸馏水，蒸馏水定容至1000毫升。

（用带胶头滴管的
白色150毫升试剂瓶分装10瓶，分装1000毫升即可，其余备用）
5. 1%的淀粉溶液（每组需50滴，每班共需16ⅹ50=800滴，每班需200毫升，实验
临用前配置）
2克淀粉，加入50毫升开水完全溶解，后用蒸馏水定容至200毫升。

（用带胶头滴管的白色试剂瓶分装6瓶）
6. 20%的碘化钾溶液（每组需12毫升，每班共需16ⅹ12=192毫升）共配1000毫升
200克碘化钾溶解于少量蒸馏水中，蒸馏水定容至1000毫升。

（用棕色容量瓶配，用带塞棕色50毫升试剂瓶分装，分装10瓶）
7. 巴比妥钠---盐酸缓冲液
A液：0.04 mol/L 巴比妥钠盐8.25克蒸馏水溶解，再用蒸馏水定容至1000毫升B液：0.2 mol/L 16.5毫升浓盐酸加蒸馏水定容至1000毫升
pH 5 巴比妥钠--盐酸缓冲液：用洁净烧杯配制
A液1000毫升+B液200毫升（用pH计测，用盐酸和氢氧化钠调pH）pH 7 巴比妥钠---盐酸缓冲液：用洁净烧杯配制
A液1000毫升+B液178毫升（用pH计测，用盐酸和氢氧化钠调pH）pH 9 巴比妥钠---盐酸缓冲液：用洁净烧杯配制
A液1000毫升+B液165毫升（用pH计测，用盐酸和氢氧化钠调pH）实验步骤：
1. 酶液提取：称取新鲜小麦叶片1.25克，剪碎置研钵中，加入约0.5克碳酸钙和10毫
升水研磨成匀浆，用漏斗移入250毫升容量瓶中，研钵少量蒸馏水冲洗，洗液也移入瓶中，用蒸馏水定容至刻度。

（由加班同学在每次课前准备，用带塞白色50毫升试剂瓶分装10瓶，每瓶大约分25毫升。

标签名称：酶液）
2. 实验设计
本实验取三个因素，酶浓度[E]、温度、pH值。

每个因素选三个水平（水平即允许因素允许变化范围内，要进行试验的“点”，见下表：
表1 正交试验设计表
按一般方法,如对三个因素三个水平的各种搭配都要考虑,共需做33=27 此实验，而用正交表只需做9次试验.选用L9表(L是正交表的代号),L右下角的数字表示试验次数)。

表2 L9表
L9表有两个特性：
（1）.每一列中“1”“2”“3”这三个数字都出现三次，即出现次数相同。

（2）每两列的横行组成的“数对”共有九个，九种不同的数对（1，1）、（1，2）、（1，3）、（2，1）、（2，2）、（2，3）、（3，1）、（3，2）、（3、3）各出现一次。

在每一列中各个不同的数字出现的次数相同；每两列的横行组成的各种不同的“数对”出现的次数也都相同，这两点就是正交表的特点，它保证了用正交表安排的试验计划的均衡搭配的。

因此，分析数据比较方便，结果比较可靠。

2. 实验安排
将本实验的四个因素依次放在L9的第1、2、3列，再将各列的水平数用该列因素相应水平写出来，就得到下面的实验安排表。

正交法测定集中因素对酶活力的影响——实验安排表
表中试验号共9个，表示要做9次试验，每次试验的条件如每一纵行所示。

如做第一
试验时0.01mol/LH2O2 5ml，[E]是0.5 ml，温度37o C，pH为5，其余类推。

另取第10支试管，作非酶对照，即加0.01mol/L H2O25ml，缓冲液7.5毫升，1.8 mol/L 的硫酸5 ml，摇匀放置10分钟后加入酶液2.5 ml。

各反应管及对照管倒入三角烧瓶，各瓶分别加入20%的碘化钾溶液1 ml和3滴钼酸铵溶液，然后依次用0.02mol/L的硫代硫酸钠滴定，滴定至溶液呈淡黄色后加入5滴淀粉溶液，再继续滴定至蓝色消失即到终点，记下各瓶消耗的硫代硫酸钠的体积。

计算酶活力
（1）按国际酶活力单位计算
被分解的过氧化氢量（微摩尔）=1/2ⅹV(硫代硫酸钠空白滴定值-样品滴定值)（ml）ⅹ0.02ⅹ103
过氧化氢酶活力（IU）=（被分解的过氧化氢量（微摩尔）ⅹ50）/(时间ⅹ样品重量（g）)
(2) 按习惯酶活力单位计算
被分解的过氧化氢量（mg）= V(硫代硫酸钠空白滴定值-样品滴定值)（ml）ⅹ0.02ⅹ1/2ⅹ34.02
过氧化氢酶活力（IU）=（被分解的过氧化氢量（mg）ⅹ50）/(时间ⅹ样品重量（g）)
3.实验记录及分析
实验做好后，把9个数据填入下表试验结果栏内，按表中数据计算出各因素的一水平试验结果总和、二水平试验结果总和、三水平试验结果总和，再取平均值（各自被3除）。

最后计算极差。

极差是指这一列中最好和最坏的之差，从极差的大小可以看出哪个因素对酶活力影响最大，哪个最小。

找出在何种条件下酶活力最高，最后做一直观分析结论。

正交法测定几种因素对酶活力的影响——数据记录及分析
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相信自己总有一天会成功的！只有自己不敢做的，没有做不成的，做销售10分靠天，九分靠人做，市场是人做出来的。

工作经历
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超越电脑专卖店 | 市场主管
行业类别：计算机硬件| 企业性质：民营| 规模：20人以下| 职位月薪：4001-6000元/月
工作描述：
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2011/06 -- 2012/11
衡阳市教育培训学校 | 销售主管
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工作描述：
为学校制定招生计划，带领招生专员在各社区以及学校周围做广告（包括粘贴墙体广告，入户拜访宣传）开展招生工作，定期到中小学校门口驻点宣传，联系各学校任课老师开展招生工作。

教育经历
2007/09 --2011/06
在校学习情况
曾获
院校级三等奖
在校实践经验
2008/03 -- 2010/10
大学生英语周刊衡阳市推销员到衡阳市区域经理
*2008年推销员，在学校新生开学期间向学生和家长推销《学生英语报》
*2009-2010年《学生英语报》衡阳地区区域经理，负责在衡阳各高校组建团队销售《学生英语报》，团队培训，团队维护，最后指导团队销售。

*2009-2010年。

衡阳行动者文化传播有限公司招生代理
负责公司在衡阳地区的自考、成人高考、家教培训的招生工作，制订季度招生计划，实行电话营销，接待客户的来访、洽谈工作。

到各医院和各事业单位接触式发放传单并且交谈留下有意向人的电话以后回访。

并且做出了良好的业绩。

语言能力
英语：读写能力良好| 听说能力良好
企业合同管理制度
一、合同管理总账
1、目的和依据
为加强公司的合同管理工作，预防、减少和及时解决合同纠纷，维护企业合法权益，提高经济效益、根据《中华人民共和国合同法》和有关政府部门规定，结合公司的实际情况，制定本制度。

2、适用范围
本制度适用于公司及其所属各单位与外签订的各类合同、协议等，包括但不限于买卖合同，借款合同、租赁合同、加工承揽合同、运输合同、资产转让合同、仓储合同、保险合同等。

3、合同管理原则
合同管理必须遵循依法办事，预防为主，层层把关，跟踪监督，及时调整，维护企业合法权益的原则。

4、保守商业秘密
管理、参与合同工作的一切有关人员，应当为公司保守商业秘密。

二、合同管理职责
1、企业合同管理部门的主要管理职责
（1）认真学习、贯彻执行《中华人民共和国合同法》和有关条例，依法保护本企业的合法权益。

（2）制定、修订本公司合同管理制度、办法，组织实施合同管理工作。

（3）审查合同，防止不完善或不合法的合同出现。

（4）协助合同承办人员依法签订合同，参与重大合同的谈判与签订。

（5）做好合同统计、归档、保管工作。

（6）监督、检查本公司合同签订、履行情况。

（7）代表本公司处理与外单位的合同纠纷。

（8）按期统计，汇总本公司的合同签订、履行、合同纠纷处理情况等，并及时向公司领导汇报。

2、采购、销售部门的主要职责
（1）依法签订、变更、解除本部门的合同。

（2）严格审查本部门所签订的合同、重大合同提交相关部门会审。

（3）对所签合同认真执行，并定期自查合同履行情况。

（4）在合同履行过程中，加强与其它各有关部门联系，发生问题及时向领导汇报。

（5）合同原件交与合同管理部门，本部门也要做好合同的登记、统计、归档工作。

3、财务部门的主要职责
（1）加强与采购、销售等有关部门的，及时通报合同履行中的应收应付情况。

（2）财务部见合同付款，做好与合同有关的应收应付款项的统计、
分析，提出处理建议，妥善保管收、付凭证。

（3）配合销售部做好合同管理工作。

三、合同审签管理
（1）公司对外签订合同，应由法定代表人或法定代表人授权的代理人进行，未经授权任何人不得以公司名义对外签订合同。

（2）除及时清结者外，合同应当采用书面形式，合同文本应当采用统一的合同示范文本，合同相对方提供的合同文本必须送交有关部门审核。

（3）合同按种类统一编号。

（4）合同及其有关的书面材料，应当语言规范，字迹清晰，条款完整，内容具体，用语准确，无歧义。

（5）订立合同必须完备合同条款，合同条款一般包括当事人的名称或者姓名和住所、标的、数量和质量，价款和付款方式，履行的期限、地点、方式、违约责任及解决争议的方法等。

（6）对外签订合同，要明确选择纠纷管辖地。

（7）法定代表人或合同承办人应当亲自在合同文本上签名盖章。

（8）签订合同，应当加盖单位的合同专用章或公章。

严禁在空白合同文本上加盖合同专用章或公章，单份合同文本达二页以上的须加盖骑缝章。

四、合同审签程序
（1）签订合同前必须严格审查对方当事人的主体资格。

对方需提供上一年度年检过的公司法人营业执照副本复印件，并
加盖该公司公章。

（2）签订合同前需要审查代理人的代理身份和代理资格。

（3）签订合同必须认真审查对方当事人的履约能力。

（4）签订合同应当仔细审查对方当事人提供的有关证明资料。

（5）合同承办人应将合同的副本或复印件一份及时送交本单位财务部门备案，作为财务部门收付款物的依据。

五、合同履行、变更和解除
1、合同履约管理
（1）法定代表人、公司总经理全面负责合同的履行。

合同承办单位、部门和人员具体负责其订合同的履行。

（2）在履行合同过程中，根据情况的变化，应当对对方当事人的履行能力进行跟踪调查。

如发现问题，合同承办人及时处理，必要时经单位负责人同意，可实地调查合同标的情况和对方当事人的履约能力。

（3）接收标的必须经过严格的验收程序，对不符合制度和合适合同标的应在法定期限内及时提出书面异议。

（4）合同结算必须通过本单位财务部门进行，对合法有效的合同，财务部门必须在合同约定的期限内结算，对未经合法授权或超权限签订的合同，财务部门有权拒绝结算。

（5）凡与合同有关的来往文书、电信、信函、电话记录都应作为履约证据留存。

对我方当事人的履约情况，除妥善保存有关收付凭证外，还要做好履约记录。

2、合同的变更和解除
（1）对方当事人作为款物接收人而要求变更接收人时，必须有书面变更协议。

严禁未取得对方当事人的书面材料而凭口头约定向已变更的接收人发货或付款。

（2）我方当事人遇有不可抗力或者其他原因无法履行合同时，应当及时收集有关证据，并立即以书面形式通知对方当事人，同时积极采取补救措施，减少损失。

（3）发现对方当事人不履行或不完全履行合同时，合同承办人应当催促对方当事人采取有效补救措施，收集、保存对方当事人不履行合同的有关证据，及时向公司报告。

（4）我方当事人因故变更或解除合同，应当及时以书面形式通知对方当事人，说明变更解除合同的原因和请求对方书面答复的期限，尽快与对方当事人达成变更或解除合同的协议。

六、合同纠纷处理
1、合同纠纷管理
（1）为解决合同纠纷所采取的各项措施，必须在法定的诉讼时效和期间内进行。

（2）发现对方当事人利用合同进行诈骗等犯罪活动时，应当立即向单位负责人报告并向公安机关报案。

（3）合同承办部门人员应配合好公司行政部参加仲裁或诉讼。

（4）合同纠纷发生后，可以通过协商、调解、仲裁、诉讼等方式解决。

（5）合同发生纠纷后，需要委托代理人参加诉讼活动的，应当及时委托有资质的代理人参与处理纠纷。

（6）解决合同申请书、起诉书、证据、答辩书、协议书、调解书仲裁书、裁定书、判决书等，在结案后十日内，由承办人送交行政部备案。

2、合同纠纷处理程序
（1）发生合同纠纷，合同承办部门、人员应立即报告公司领导和行政部，销售部、采购部、财务部等相关部门应当及时提供解决纠纷所需的相关材料。

（2）在处理合同纠纷过程中，对于可能因对方当事人的行为或者其他原因，使判决不能执行或者难以执行的案件，应当及时向法院申请财产保全。

（3）合同纠纷发生后，应当依法采取一切措施，积极收集、整理有关证据，在证据可能灭失或者难以取得的情况下，应当向法院申请促使证据。

（4）向法院提供原始证据时，必须先行复制，并请求法院的承办人员出具证据收执。

七、合同资料管理
1、档案资料内容
下列资料可以作为合同档案：
（1）谈判记录、可行性研究报告及批准文件；
（2）对方当事人的法人营业执照、营业执照、事业法人执照的副
本复印件；
（3）对方当事人履约能力证明资料复印件；
（4）对方当事人的法定代表人或合同承办人的职务资格证明，个人身份证明、介绍信、授权委托书的原件或复印件；
（5）我方当事人的法定代表人的授权委托书的原件和复印件；
（6）双方签订或履行合同的往来最电传、电子邮件、信函、电话记录等书面材料厂
（7）登记、见证、鉴证、公证等文书资料库
（8）合同正本、副本及变更、解除合同的书面协议；
（9）标的验收记录的；
（10）交接、收付标的、款项的原始凭证复印件。

2、合同资料的归档、统计与管理
（1）公司所有合同都必须统一编号，由行政部妥善保管。

（2）合同承办人办理完毕签订、变更、履行及解除合同的各项手续后十日内，应将合同档案资料移交行政部。

（3）借阅合同须办理登记手续，有关企业秘密的合同还须主管领导的签批。

八、附则
（1）凡因本按规定处理合同事宜，未及时汇报情况和跌合同有关资料而给公司造成损失的，追究相关负责人和责任人的相应责任。

（2）行政部应定期将履行完毕或不再履行的全身表关资料按合同编号整理，由行政部主管确认后交档案管理人员存档，不得随意
处置、销毁、遗失。