粗糙链孢霉的杂交实验—遗传学实验

5、压片与镜检
取一载玻片，用解剖针将子囊果挑出放到载玻片上， 加1-2滴水，再盖上另一载玻片，用力压片，使子囊充 分压散而末破裂，最后在显微镜下观察、记录各种类型 子囊的数目。
粗糙链雹霉lys+与lys-杂交子囊孢子的排列方式 图中（1）（2）为非交换型；（3）（5）（6）缺少（4）为交换型子囊
作业
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实验八 粗糙链孢霉的杂交
一、实验目的
1、了解顺序四分体的遗传分析方法 2、掌握重组值的计算及着丝粒作图的方法 3、观察由于基因转换引起的异常分离现象
二、实验原理
粗糙链孢霉，又称红色面包霉，在分类学上属于真菌中 的子囊菌纲、球壳目、脉孢菌属。
利用粗糙链孢霉进行遗传学分析有如下优点： ① 个体小，生长快，容易培养； ② 有性繁殖可产生大量后代； ③ 无性世代是单倍体，基因型可直接反映在表型上； ④ 一次杂交可达到高等二倍体一次杂交和一次测交的目的

粗 糙 链 孢 霉 的 生 活 史
从交换型子囊数占总子囊数的百分比， 可以计算出该基因与着丝点间的交换值：
第二次分裂分离自囊数 子囊总数
1 100％ 2
三、实验材料、用具及药品
• 粗糙链孢霉：野生型（lys+）菌株，赖氨酸缺陷型（lys-） 菌株。
• 用具：酒精灯、试管、培养皿、载玻片、镊子、接种针、 解剖针、滤纸、显微镜等 。
• 药品： 75%酒精
四、实验步骤
1、菌种活化
把野生型和缺陷型菌种分别斜面接种到试管培养基上， 置于28℃恒温培养箱中培养5-7天，直至菌丝上部有分生孢 子产生，长好的菌株在菌丝上部可见红粉状孢子。
2、杂交培养基的配制：
将浸软的玉米粒剪碎，每试管2-3粒，加入3毫升2% 的琼脂，再放入经多次折叠的滤纸。加上棉塞，消毒 即可。
观察一定数目的子囊果，记录每个完整子囊的 类型，按不同的子囊类型计数填入表中，计算Lys 基因与着丝粒间的距离。
子囊类型
非交换类型
1
（第一次分离裂） 2
交换类型
3
（第二次分离裂） 4
5
6
孢子排列方式
＋＋＋＋――――
－－－－＋＋＋＋ ＋＋――＋＋―― ――＋＋――＋＋ ＋＋――――＋＋ ――＋＋＋＋――
3、接种杂交
在无菌条件下，用接种环分别挑取Lys+和Lys-菌株的菌丝 或分生孢子，接种于杂交培养基上，然后放在25℃恒温培养 箱中培养，约经14天左右，可看到棕黑色的成熟子囊，此时 即可在显微镜下观察分析。
4、灭活与收集子囊果
在长有棕黑色子囊果的试管中，加75%酒精，静置20 分，摇动片刻，将子囊果冲洗下来，倒入平皿中。
观察数 合计
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