实验二静脉注射氨茶碱血药浓度及药动学参数的检测
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标， △A为纵坐标描点绘图，用Excel软件求直线回归方程和相关系数。
2.静脉注射氨茶碱和血药浓度的测定
①取体重2.5~3.0kg健康雄性家兔1只，于耳缘静脉（外侧）注射氨茶碱10mg/kg（2min内注完）， 另一耳用锐利刀片切割耳缘静脉取血。分别在给氨茶碱后5、10、20、30、60、120、180 min取 血约1.5ml，室温下静置60 min。
2.为什么要测定两个波长下氨茶碱的吸光度并取其 差值？
六、参考结果：
一、氨茶碱血药浓度与△A的标准曲线
C = 1.84*△A- 0.00002 C单位：mg/ml
二、氨茶碱血药浓度-时间表
序号
时间（min）
1
5
2
10
3
20
4
30
5
60
6
120
7
180
8
240
不同波长下吸光度
274 nm
298 nm
二、氨茶碱血药浓度-时间表
T
5
(min)
10
20
30
60
△A
120 180
C (μg/ml)
三、药物动力学参数的计算结果
作时间t-浓度C-lgC表，画lgC – t图，求算Vc、K21、K10、K12（按课本P229例1 处理）。
五、讨论与思考
1.氨茶碱家兔体内的药时曲线呈几室模型，如何解 释？有几种判断是二室模型的方法，判断的依据是 什么？
实验二 静脉注射氨茶碱血药浓度测 定及药动学参数的计算
一、实验目的:
1.掌握紫外双波长法测定氨茶碱血药浓度的方法；
2.熟悉家兔耳缘静脉注射给药后药动学处理原理和 方法；
3.熟悉血清中药物提取方法及双波长测定法在血药 浓度测定中的应用。
二、基本原理
1.氨茶碱
• 氨茶碱又名茶碱乙烯双胺，由茶碱与乙二胺缩合而成，氨茶碱能抑制 体内磷酸二酪酶，减慢环磷酸腺苷（cAMP）的分解速度，从而增加 其在细胞内的含量，促使支气管平滑肌舒张，有扩张胆管、冠状动脉 作用；减少肾小管对电解质的再吸收而呈现强心利尿作用，一般应用 于支气管哮喘、胆绞痛、心绞痛等。
0.1841
0.07
0.1289
二、氨茶碱静脉注射后时间 t – C - lgC表
T
5
(min)
10
20
30
60
120 180 240
C
1.84 1.29
(mg/ml)
1.178 1.141 1.031 1.031 1.841 1.289
lgC
0.265 0.110 0.071 0.057 0.0133 0.013 0.265 0.110
④吸取上层碱液，以0.1mol/NaOH溶液做参比，测定其在λ274和λ298的吸收度（ A274和A298 ），计 算△A。
⑤将测得血清样品的△A代入标准曲线的方程，求得相应的C，C×10即为茶碱的血药浓度。以时 间（T）为横坐标，浓度对数（logC）为纵坐标，进行相应的药动学数据处理。
3.药动学参数的计算
所用材料
日本大耳白或新西兰兔 氨茶碱注射液
兔子固定器 1.5 ml EP管
婴儿称
其它:1 ml注射器,1.5 ml EP管离心机,漩涡振荡器, 离心机,紫外检测仪,10 ml离心管,三氯醋酸,氢 氧化钠,等.
三、实验操作
1.氨茶碱标准曲线的绘制：
取5支0.5 ml空白家兔血清，分别加入氨茶碱注射液（2.5 mg/2 ml）使其浓度分别达到 0.5、1.0、 1.5、2.0、2.5 ml，加0.1mol/L盐酸0.2ml、5%异丙醇氯仿液（抽提液）5ml，蜗旋混合 后，3000r/min离心10min。吸取下层氯仿液4 ml至另一试管中，加入0.1mol/L NaOH溶 液4ml，蜗旋混合后、3000r/min，离心10min。吸取上层碱液，以0.1mol/NaOH溶液做 参比，测定其在λ274和λ298的吸收度（ A274和A298 ），计算△A，以茶碱浓度为横坐
2. 静脉注射药物动力学
• 氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到平衡后转入 消除相。血药浓度-时间曲线呈二室药物动力学模型。
3. 氨茶碱血药浓度的测定
• 双波长法测定原理：在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提取出茶 碱，并同时沉淀血清蛋白，再用碱液将茶碱从有机溶剂中提出，然后 采 碱 λ29用 和8 ，双 本可波底根长，据法即标进溶准行剂曲紫、线外 血进测 清行定 的浓， 吸度即 收换测 ，算定λ2。λ982为74和本λ底298的处吸的收吸）光，度△（Aλ=27λ4为274茶-
七、注意事项：
六、取血时不要用凉水润湿取血部位。 七、若离心用10000 r/min离心血清，当转速显示到达10000r/min后，15s即可。 八、若血清与氯仿乳化，可用超声仪超声破乳。 九、血清样品测定时，可用空白对紫外仪调零，波长分别用274nm、298nm调零， 之后可用同一比色杯样品分别在两个波长处测定读数，无需重新调零取△A。十、 实验结束后，兔笼应清洗干净，刀片和注射器（1ml）要回收。
0.274 0.168
Hale Waihona Puke 0.174 0.0980.139
0.075
0.155 0.263 0.148
0.093 0.207 0.092
0.274
0.174
0.168
0.098
△A
0.1 0.07 0.064 0.062 0.056 0.056
0.1
浓度 （mg/ml）
0.1841 0.1289 0.1178 0.1141 0.1031 0.1031
作时间t-浓度C-lgC表，画lgC – t图，求算Vc、K21、K10、K12（按课本P229例1处 理）。
4. 本实验3人一组
每组进行家兔耳缘静脉给药及家兔氨茶碱血药浓度药物动力学数据的计算。
四、实验结果：
一、氨茶碱血药浓度与△A的标准曲线
C = 1.84*△A- 0.00002 C单位：mg/ml, r 2= 1
②分离血清：等EP管中血液凝固后，10000 r/min离心15 s分离血清，各管均取血清0.5ml于10ml 试管中，加0.1mol/L盐酸0.2ml、5%异丙醇氯仿液（抽提液）5ml，蜗旋混合后，3000r/min离心 10min。
③吸取下层氯仿液4 ml至另一试管中，加入0.1mol/L NaOH溶液4ml，蜗旋混合后、3000r/min，离 心10min。
生物药剂学与药物动力学实验课件
八、参考文献：
[1] 崔福德.药剂学.人民卫生出版社.第7版，北京.2013年11月. [2] 刘建平.生物药剂学与药物动力学.人民卫生出版社.第4版， 北京.2012年5月. [3] 杨伟，等.生物药剂学与药物动力学实验.自编教材. 2013年.
七、注意事项：
一、注射时不宜快速注射，也不宜过多，否则会引起兔子心悸死亡。药液注射入血管 时，原来红色的血管充满无色的药液则说明注射成功，若药液未进入血管，表现在推 注时阻力较大，且在注射部位药液会流出。 二、血液最好自然滴入EP管中，一般不宜刮取，否则血细胞将破裂，血清颜色变红， 也不要用注射器抽取、用吸管吸取。 三、计算浓度时，计算出△A后，所求得的C需×10，才是真正血清中的药物浓度，因 为我们在处理样品时稀释10倍。 四、血清样品要放置1h以上再处理才较好，最好120 min后其充分凝结，少于1h则离心 得到的是血浆，其中纤维蛋白较多，对样品的后处理不佳。 五、用注射器吸取血清0.5ml，最后一个时间点最好超过1h，否则血清中蛋白质会凝固， 导致血清移取困难。
2.静脉注射氨茶碱和血药浓度的测定
①取体重2.5~3.0kg健康雄性家兔1只，于耳缘静脉（外侧）注射氨茶碱10mg/kg（2min内注完）， 另一耳用锐利刀片切割耳缘静脉取血。分别在给氨茶碱后5、10、20、30、60、120、180 min取 血约1.5ml，室温下静置60 min。
2.为什么要测定两个波长下氨茶碱的吸光度并取其 差值？
六、参考结果：
一、氨茶碱血药浓度与△A的标准曲线
C = 1.84*△A- 0.00002 C单位：mg/ml
二、氨茶碱血药浓度-时间表
序号
时间（min）
1
5
2
10
3
20
4
30
5
60
6
120
7
180
8
240
不同波长下吸光度
274 nm
298 nm
二、氨茶碱血药浓度-时间表
T
5
(min)
10
20
30
60
△A
120 180
C (μg/ml)
三、药物动力学参数的计算结果
作时间t-浓度C-lgC表，画lgC – t图，求算Vc、K21、K10、K12（按课本P229例1 处理）。
五、讨论与思考
1.氨茶碱家兔体内的药时曲线呈几室模型，如何解 释？有几种判断是二室模型的方法，判断的依据是 什么？
实验二 静脉注射氨茶碱血药浓度测 定及药动学参数的计算
一、实验目的:
1.掌握紫外双波长法测定氨茶碱血药浓度的方法；
2.熟悉家兔耳缘静脉注射给药后药动学处理原理和 方法；
3.熟悉血清中药物提取方法及双波长测定法在血药 浓度测定中的应用。
二、基本原理
1.氨茶碱
• 氨茶碱又名茶碱乙烯双胺，由茶碱与乙二胺缩合而成，氨茶碱能抑制 体内磷酸二酪酶，减慢环磷酸腺苷（cAMP）的分解速度，从而增加 其在细胞内的含量，促使支气管平滑肌舒张，有扩张胆管、冠状动脉 作用；减少肾小管对电解质的再吸收而呈现强心利尿作用，一般应用 于支气管哮喘、胆绞痛、心绞痛等。
0.1841
0.07
0.1289
二、氨茶碱静脉注射后时间 t – C - lgC表
T
5
(min)
10
20
30
60
120 180 240
C
1.84 1.29
(mg/ml)
1.178 1.141 1.031 1.031 1.841 1.289
lgC
0.265 0.110 0.071 0.057 0.0133 0.013 0.265 0.110
④吸取上层碱液，以0.1mol/NaOH溶液做参比，测定其在λ274和λ298的吸收度（ A274和A298 ），计 算△A。
⑤将测得血清样品的△A代入标准曲线的方程，求得相应的C，C×10即为茶碱的血药浓度。以时 间（T）为横坐标，浓度对数（logC）为纵坐标，进行相应的药动学数据处理。
3.药动学参数的计算
所用材料
日本大耳白或新西兰兔 氨茶碱注射液
兔子固定器 1.5 ml EP管
婴儿称
其它:1 ml注射器,1.5 ml EP管离心机,漩涡振荡器, 离心机,紫外检测仪,10 ml离心管,三氯醋酸,氢 氧化钠,等.
三、实验操作
1.氨茶碱标准曲线的绘制：
取5支0.5 ml空白家兔血清，分别加入氨茶碱注射液（2.5 mg/2 ml）使其浓度分别达到 0.5、1.0、 1.5、2.0、2.5 ml，加0.1mol/L盐酸0.2ml、5%异丙醇氯仿液（抽提液）5ml，蜗旋混合 后，3000r/min离心10min。吸取下层氯仿液4 ml至另一试管中，加入0.1mol/L NaOH溶 液4ml，蜗旋混合后、3000r/min，离心10min。吸取上层碱液，以0.1mol/NaOH溶液做 参比，测定其在λ274和λ298的吸收度（ A274和A298 ），计算△A，以茶碱浓度为横坐
2. 静脉注射药物动力学
• 氨茶碱经静脉进入血液，随血液循环进行组织分布，达到平衡后转入 消除相。血药浓度-时间曲线呈二室药物动力学模型。
3. 氨茶碱血药浓度的测定
• 双波长法测定原理：在酸性条件下，可用有机溶剂从血清中提取出茶 碱，并同时沉淀血清蛋白，再用碱液将茶碱从有机溶剂中提出，然后 采 碱 λ29用 和8 ，双 本可波底根长，据法即标进溶准行剂曲紫、线外 血进测 清行定 的浓， 吸度即 收换测 ，算定λ2。λ982为74和本λ底298的处吸的收吸）光，度△（Aλ=27λ4为274茶-
七、注意事项：
六、取血时不要用凉水润湿取血部位。 七、若离心用10000 r/min离心血清，当转速显示到达10000r/min后，15s即可。 八、若血清与氯仿乳化，可用超声仪超声破乳。 九、血清样品测定时，可用空白对紫外仪调零，波长分别用274nm、298nm调零， 之后可用同一比色杯样品分别在两个波长处测定读数，无需重新调零取△A。十、 实验结束后，兔笼应清洗干净，刀片和注射器（1ml）要回收。
0.274 0.168
Hale Waihona Puke 0.174 0.0980.139
0.075
0.155 0.263 0.148
0.093 0.207 0.092
0.274
0.174
0.168
0.098
△A
0.1 0.07 0.064 0.062 0.056 0.056
0.1
浓度 （mg/ml）
0.1841 0.1289 0.1178 0.1141 0.1031 0.1031
作时间t-浓度C-lgC表，画lgC – t图，求算Vc、K21、K10、K12（按课本P229例1处 理）。
4. 本实验3人一组
每组进行家兔耳缘静脉给药及家兔氨茶碱血药浓度药物动力学数据的计算。
四、实验结果：
一、氨茶碱血药浓度与△A的标准曲线
C = 1.84*△A- 0.00002 C单位：mg/ml, r 2= 1
②分离血清：等EP管中血液凝固后，10000 r/min离心15 s分离血清，各管均取血清0.5ml于10ml 试管中，加0.1mol/L盐酸0.2ml、5%异丙醇氯仿液（抽提液）5ml，蜗旋混合后，3000r/min离心 10min。
③吸取下层氯仿液4 ml至另一试管中，加入0.1mol/L NaOH溶液4ml，蜗旋混合后、3000r/min，离 心10min。
生物药剂学与药物动力学实验课件
八、参考文献：
[1] 崔福德.药剂学.人民卫生出版社.第7版，北京.2013年11月. [2] 刘建平.生物药剂学与药物动力学.人民卫生出版社.第4版， 北京.2012年5月. [3] 杨伟，等.生物药剂学与药物动力学实验.自编教材. 2013年.
七、注意事项：
一、注射时不宜快速注射，也不宜过多，否则会引起兔子心悸死亡。药液注射入血管 时，原来红色的血管充满无色的药液则说明注射成功，若药液未进入血管，表现在推 注时阻力较大，且在注射部位药液会流出。 二、血液最好自然滴入EP管中，一般不宜刮取，否则血细胞将破裂，血清颜色变红， 也不要用注射器抽取、用吸管吸取。 三、计算浓度时，计算出△A后，所求得的C需×10，才是真正血清中的药物浓度，因 为我们在处理样品时稀释10倍。 四、血清样品要放置1h以上再处理才较好，最好120 min后其充分凝结，少于1h则离心 得到的是血浆，其中纤维蛋白较多，对样品的后处理不佳。 五、用注射器吸取血清0.5ml，最后一个时间点最好超过1h，否则血清中蛋白质会凝固， 导致血清移取困难。