高效液相色谱法测定甜叶菊中甜菊糖总苷的含量

高效液相色谱法测定甜叶菊中甜菊糖总苷的含量
关键词：利用高效液相色谱法对甜叶菊干叶中甜菊糖总苷含量开发出一种新的检测方法，通过单因素试验，确立了检测方法，即样品经30%乙腈超声提取、孔径为0.45μm的有机滤膜过滤后，选择C18（250mm×4.6mm，5μm）色谱柱；以78%的0.1%磷酸水溶液+22%乙腈（体积比）为流动相，1.0mL/min的流速进行洗脱。

在210nm 波长及40℃柱温下利用DAD检测器检测，用外标法定量。

得出的图谱峰形尖锐，结果回收率高、检测结果准确、精密度高、重复性良好。

说明此方法开发具有较强的可行性。

关键词：高效液相色谱法；甜叶菊；甜菊糖总苷
Determination of stevioside in stevia rebaudiana by
high performance liquid chromatography
Author:Siqiao Xie
Instructor:Bingbing Chen
Absrtact:a new detection method for stevioside content in stevia rebaudiana dry leaves was developed by high performance liquid chromatography. through single factor test, the detection method was established, in other words,C18(250mm×4.6mm, 5μm) chromatographic column was selected after the sample was ultrasonically extracted with 30% acetonitrile and filtered by 0.45μm organic filter membrane. Elution was carried out at a flow rate of 1.0mL/min with 78% 0.1% phosphoric acid aqueous solution +22% acetonitrile (volume ratio) as mobile phase. At 210nm wavelength and 40℃ column temperature, DAD detector was used for detection and external standard method was used for quantification. The obtained chromatogram has sharp peak shape, high recovery rate, accurate test results, pinpoint accuracy and beautiful repeatability. This shows that the development of this method is feasible.
Key words:high performance liquid chromatography; Stevia rebaudiana; Stevioside total glycoside
1 前言
食物是人类得以生存的必备保障，食物的主要成分与构成人体的基本物质相同，人类可从食物中获取人体生长的营养物质及能量。

随着历史的发展，生活质量的提高，人类得以发现不同的口味。

食品味道有着明显的多样性，而人类对甜味有着天然的喜爱。

随着食品科学、食品工业的不断发展，为了丰富食品的味道，满足人们味蕾对食品不同口味的需求，食品相关研究人员对甜味剂的研究也在持续努力。

现在市场上的甜味剂种类繁多，比如天然和人工合成甜味剂因其来源不同而被划分；营养性甜味剂和非营养性甜味剂因其营养价值不同而被归类；而糖类甜味剂和非糖类甜味剂因其化学结构和性质的不同而被划分。

食品工业中常用的甜味剂有糖精钠、麦芽糖醇、安赛蜜、木糖醇、甜蜜素、阿斯巴甜、甜菊糖等。

正是因为食品工业中用到的甜味剂繁多，消费者也就更加地重视这些甜味剂的安全问题，安全无毒、健康绿色的天然甜味剂更受消费者的欢迎。

而大多数人工合成的甜味剂不会被小肠吸收，但到达大肠后会对肠道菌群产生较大的影响，从而让血糖升高，长此以往出现“胰岛素抵抗”的问题[1]。

而甜菊糖苷作为新兴的天然甜味剂，是一种低热量、高甜度（甜度约是蔗糖300倍）的天然甜味剂[2]。

同时，其具有降低血压、控制血糖、抗腹泻、一定程度上提高免疫力、促进新陈代谢等效果。

另外，甜菊糖苷可消除蔗糖的副作用，所以对控制肥胖症和小儿龋齿有非常显著的功效，同时对调节胃酸、恢复神经疲劳也有很好的功效，可降低心脏病的发病率[3]。

甜菊糖苷又可作为矫味剂，其甜味强烈，回味时间长，后味可口，有较长清凉爽口的感觉，同时可以增强或改善其它的很多甜味剂。

因此，甜菊糖苷普遍被加入某些药物，如片剂、丸剂、胶囊以矫正异味、苦味等。

甜菊糖苷不易被酸碱反应，酸碱度在4到10之间，用水加热，其化学结构还能保持原有性质，不会产生葡萄糖而容易被微生物作用，属于非发酵性的物质。

在国内外，甜菊糖苷在食品工业和药品方面应用广泛，目前及未来市场均巨大。

甜菊糖苷从甜叶菊中提取。

甜叶菊（Stevia rebaudiana）又称之为甜菊、糖草、甜草、甜泽兰等，属于菊科甜叶菊属的多年生草本植物，浅根系植物，甜叶菊有以下习性：喜欢温和的生长环境、不耐高温，温度为25-30℃最适合茎叶的生长；喜欢湿度较高的土壤且怕旱，生长期更喜湿，但又怕渍。

甜叶菊原产于南美洲巴拉圭、巴西的原始森林，最早引进的是日本，我国于1977年由南京中山植物园从日本引进甜叶菊，1978年试种成功[4]。

目前云南、北京、陕西、新疆维吾尔自治区、江苏、广西、安徽、福建、河北、湖南等地都有栽培种植。

联合国粮农组织、世界卫生组织食品添加剂联合专家委员会在2008年6月第69届会议报告中明确表明：正常人甜菊糖苷每日摄入量在4毫克/千克体重以下时对人体没有副作用[5]。

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甜叶菊的甜味活性物质是甜菊糖总苷（包括甜菊糖苷、瑞鲍迪苷A、瑞鲍迪苷B、瑞鲍迪苷C、瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷F、瑞鲍迪苷M、甜茶苷、甜菊双糖苷、杜尔可苷A等），瑞鲍迪苷A(Rebaudioside A)是甜菊糖总苷中的主要成分，其分子式为C44H70O23，分子量为967.01，CAS号为58543-16-1，结构式见图1。

图1 瑞鲍迪苷A的结构式
瑞鲍迪苷A为白色结晶性粉末，能溶于水、甲醇、乙醇、乙腈等溶剂。

目前甜菊糖苷检测方法众多，如液相色谱法、近红外光谱法、反相高效液相色谱法、液质联用质谱法等。

反相高效液相色谱法、液质联用质谱法适合鉴定分离甜叶菊的各个成分[6-8]，但前处理比较复杂、时间成本大；近红外光谱法直接扫描甜叶菊干片非常高效[9]，但操作难度较大，定标样品的选择、制备、精确的化学分析对于人员的专业要求较高，该法适合于有一定研究能力的检测公司或研究所。

高效液相色谱法（HPLC）因其操作简单，精确度高，效率高等优势，而被当做常用检测方法。

例如，刘超采用高效液相色谱法测定甜叶菊糖中的甜叶菊糖和莱鲍迪苷 A 的含量[10]。

李红采用氨基柱，乙腈－水为流动相测定14 个地区甜叶菊糖苷含量[11]。

中华人民共和国出入境检验检疫行业标准：出口甜叶菊总糖甙含量的测定中方法一等都涉及HPLC[12]。

HPLC的原理：单一或不同比例流动相经混合以后经高压系统输送[13], 输送过程中待测样品在利用各成分的分配系数和相互作用力的不同而在固液两相之间引起排阻作用,使得各物质的运动速度不同,经过洗脱在检测器产生电信号作用，通过记录仪记录出待测样品的图谱。

本论文的目的是研究出一种检测未经加工的甜叶菊原料中甜菊糖总苷含量的检测方法，确定各个试验参数，最终根据甜叶菊原料中各个甜度活性成分的图谱计算总苷含量，从而确定甜叶菊原料的好坏,分析不同品种、不同地域种植出的甜叶菊原料中甜菊糖总苷各成分含量和总含量的差异，为培育优良品种提供数据支撑。

甜菊糖总苷高的说明可从中提取的糖苷含量更多，表明其原料好。

2 材料与方法
2.1 仪器、材料及试剂
2.1.1 仪器
样品的前处理及上机检测时用到较多仪器设备，故常用的仪器不列出。

仪器及设备见表1。

表1 仪器及设备
仪器设备名称型号/规格厂家
分析天平X205BMU/感量0.00001g梅特勒-托利多集团
超声波清洗器SK7200H上海科导超声仪器有限公司温度计0℃-100℃常州坤鼎热工仪表有限公司连盖圆底离心管5ml海门市三和镇弘澄实验器材厂
高速台式离心机
TG16-WS
（高转速16000r/min）
长沙湘仪离心机仪器公司
有机系/水系针头过滤器直径：13mm,
孔径：0.45μm
天津市津腾实验设备有限公司
高效液相色谱仪（配二
极管阵列检测器）
Agilent 1260安捷伦科技有限公司真空泵GM-0.5A天津市津腾实验设备有限公司
超纯水机（一级用水）SUP-20-C山东汀兰环保科技有限公司C18柱250mm×4.6mm,5.0 μm广州菲罗门科学仪器有限公司
C18柱250mm×4.6mm,5.0 μm浙江月旭材料科技有限公司
C18柱250mm×4.6mm,5.0 μm北京绿百草科技发展有限公司
2.1.2 材料
样品：桂林市中药材批发市场采购的甜叶菊干叶，经粉碎机粉碎成粉末状。

瑞鲍迪苷A标准品：购于Chromadex，纯度93.0%，批号：00018226-P36。

2.1.3 试剂
超纯水由桶装纯净水经过超纯水机纯化后经孔径为0.45 μm的水相滤膜过滤可得。

试剂见表2。

表2 试剂
试剂名称级别厂家
甲醇分析纯西陇科学股份有限公司
磷酸分析纯西陇科学股份有限公司
超纯水一级（自制）密理博（中国）有限公司
乙腈色谱级美国天地
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2.2 试验方法
2.2.1 试剂配制
0.1%磷酸水溶液：用1mL移液管精密量取1.00mL磷酸于1L流动相瓶子中再加入1000mL超纯水，置于超声波清洗器中超声混匀，用0.45μm水相滤膜过滤得。

30%甲醇：用量筒分别量取300mL甲醇和700mL超纯水，于2L锥形瓶中混匀即得。

30%乙腈：用量筒分别量取300mL乙腈和700mL超纯水，于2L锥形瓶中混匀即得。

2.2.2 标准溶液的配制
精密称取瑞鲍迪苷A标准物质25mg（精确至0.01mg）于25ml容量瓶中，加入适量的30%乙腈于超声波清洗器中超声溶解，充分溶解后取出冷却至室温后用30%乙腈定容至刻度，摇匀，即得浓度约为1.0 mg/mL的标准溶液，置于冰箱保存备用，保存温度为4℃。

标准曲线溶液的配制：分别精密吸取标准溶液(1.0 mg/mL)8.00mL、4.00mL、2.00mL、1.00mL于10mL量瓶中，用30%乙腈定容至刻度，得到浓度分别为0.8mg/mL、0.4mg/mL、0.2mg/mL、0.1mg/mL的系列标准溶液，再将0.1mg/mL的溶液逐级稀释成浓度为0.02mg/mL、0.01mg/mL、0.002mg/mL、0.001mg/mL的溶液，供高效液相色谱仪测定[14]。

2.2.3 样品的处理
称取约0.5g（精确至0.00001g）粉碎均匀的甜叶菊干叶置于50mL容量瓶中，加入适量的提取溶剂于超声波清洗器中超声提取后，冷却至室温，定容至刻度，摇匀，转移至5ml离心管于高速离心机以10000r/min的转速离心，取上清液用孔径为0.45μm 滤膜（滤膜视溶剂的性质选择水系或有机系）过滤后待测。

2.3 色谱条件
流动相为0.1%磷酸水：乙腈（起始洗脱体积比例为78% ：22%），色谱柱：C18（250mm×4.6mm，5μm），进样量：10ul，流速：1.0mL/min，柱温：40℃，检测波长：210nm。

梯度洗脱程序见表3。

表3 梯度洗脱
时间（min）0.1%磷酸水（%）乙腈（%）流速（mL/min）078 22 1.0
2071 29 1.0
5055 45 1.0
3 检测原理
由于甜菊糖总苷能溶于水、甲醇、乙腈等溶剂，所以样品经30%乙腈超声提取、孔径为0.45μm的有机滤膜过滤后，DAD检测器检测，用外标法定量，以保留时间进行定性，测定得到相应的峰面积之后，根据色谱图得到甜菊糖总苷的含量，从而对样品进行分析。

4 结果分析
4.1 检测波长的选择
瑞鲍迪苷A的标准溶液在高效液相色谱仪中用DAD检测器进样分析，调取其光谱图，经分析得出结论：瑞鲍迪苷A中在210nm左右有最大吸收波长。

由于甜菊糖总苷中其余成分的光谱图也与瑞鲍迪苷A的光谱图基本一致，故本检测方法利用210nm作为检测器的检测波长，光谱图见图2、图3、图4。

图2 瑞鲍迪苷A的光谱图图3 甜菊糖苷的光谱图图4 甜茶苷的光谱图
4.2 流动相的选择
4.2.1流动相条件的选择
方法开发过程中分别使用甲醇-水、乙腈-水、甲醇-0.1%磷酸水和乙腈-0.1%磷酸水这四种组合溶剂作为流动相对甜叶菊干叶进行分析，结果发现在流动相是乙腈-0.1%磷酸水的时候，峰形尖锐且对称性高，目标峰分离度较好，基质干扰小，对称性也较好。

故本方法的流动相选择乙腈-0.1%磷酸水。

4.2.2流动相比例和流速的选择
由于甜叶菊干叶中瑞鲍迪苷D、瑞鲍迪苷M的含量较低，且受基质干扰较大，
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故在方法开发时使其出峰时间较长才能将其与基质完全分离；甜菊糖总苷中各成分的极性差异比较明显，且样品的杂质在方法运行的前半段已经被全部洗脱下来，故在此条件下，方法的后半段检测时间加快了梯度变换速率，使目标峰更快出峰，节约检测时间。

因此，最终选择乙腈-0.1%磷酸水的起始比例为22:78对样品进行梯度洗脱。

因为流速太小，检测方法的运行时间过长，浪费时间和流动相。

流速太大，色谱柱的柱压升高比较明显，容易导致柱床塌陷。

综上所述，本方法检测时以1.0mL/min 为流速，分析时间合适，峰对称性好，各目标峰能够与杂质有效分离。

4.3 色谱柱的选择
本方法试验了广州菲罗门科学仪器有限公司、浙江月旭材料科技有限公司和北京绿百草科技发展有限公司的C18柱(250mm×4.6mm,5.0μm)的分离效果，试验结果表明，北京绿百草科技发展有限公司生产的C18柱分离效果最好，能将甜叶菊干叶中的目标成分和杂质完全分离，满足检测的要求。

所以本方法选了择北京绿百草科技发展有限公司生产的C18柱作为检测用的色谱柱。

4.4 柱温的选择
通过对比柱温在30℃、40℃、50℃时的分离效果，发现在30℃时由于柱温太低导致目标峰与杂质峰不能完全分离，在50℃时由于柱温太高，出峰时间过快导致目标峰与杂质峰不能完全分离，在40℃时相对保留时间的重现性好，温度适宜，目标峰与杂质峰能够有效分离。

综上，本方法选择40℃作为检测时的柱温。

4.5 提取溶剂的选择
分别精密称取0.5g（精确至0.00001g）粉碎均匀的甜叶菊干叶粉末于9个做有标志的50ml容量瓶中，平分为三组，分别用适量的超纯水、30%甲醇、30%乙腈溶解，于同一超声波清洗器中超声提取30min（每隔6min振摇一次），取出冷却至室温后用对应的提取溶剂定容至刻度，摇匀，转移至5ml离心管置于高速台式离心机离心5min （10000r/min），取上清液用孔径为0.45μm的滤膜（滤膜视溶剂的性质选择水系或有机系）过滤待测，检测结果见表4。

表4 不同提取溶剂的检测结果
超纯水30%甲醇30%乙腈
瑞鲍迪苷A含量1 8.54 8.83 8.98
瑞鲍迪苷A含量2 8.50 8.70 9.03
瑞鲍迪苷A含量3 8.58 8.72 8.98 平均值8.54 8.75 9.00
由检测结果可知，甜叶菊干叶的提取溶剂是30%乙腈时，有效成分提取比较完全，提取效果最好。

因此，本方法选取30%乙腈作为甜叶菊干叶的提取溶剂。

4.6 提取时间的选择
分别精密称取0.5g（精确至0.00001g）粉碎均匀的甜叶菊粉末于9个做有标志的50ml容量瓶中，用适量30%乙腈溶解，再平分为三组，三组至于同一超声波清洗器中分别超声提取15min、30min、45min，取出冷却至室温后用30%乙腈定容至刻度，摇匀，转移至5ml离心管置于高速台式离心机离心5min（10000r/min），取上清液用孔径为0.45μm的有机系滤膜过滤待测，检测结果见表5。

表5 不同提取时间的检测结果
提取15min 提取30min 提取45min
瑞鲍迪苷A含量1 8.48 9.03 9.02
瑞鲍迪苷A含量2 8.45 8.99 9.00
瑞鲍迪苷A含量3 8.45 9.02 9.02 平均值8.46 9.01 9.01
由检测结果可知，甜叶菊干叶超声提取30min和45min，有效成分的含量基本一致，说明样品超声提取30min已能将甜叶菊干叶中的甜菊糖总苷完全提取出来，再增加提取时间只是浪费资源，降低工作效率。

因此，本方法最终以30min定为超声提取时间。

4.7 提取温度的选择
分别精密称取0.5g（精确至0.00001g）粉碎均匀的甜叶菊粉末于9个做有标志的50ml容量瓶中，用30%乙腈溶解，再平分为三组，三组分三次至于同一超声波清洗器中分别使用30℃、45℃、60℃水浴超声提取30min，取出冷却至室温后用30%乙腈定容至刻度，摇匀，转移至5ml离心管置于高速台式离心机离心5min（10000r/min），取上清液用孔径为0.45μm的有机系滤膜过滤待测，检测结果见表6。

表6 不同提取时间的检测结果
30℃提取45℃提取60℃提取
瑞鲍迪苷A含量1 8.75 8.98 9.01
瑞鲍迪苷A含量2 8.80 8.99 8.98
瑞鲍迪苷A含量3 8.79 8.99 8.99 平均值8.78 8.99 8.99
由检测结果可知，甜叶菊干叶使用45℃和60℃水浴超声提取时有效成分的含量基本一致，说明样品使用45℃水浴超声提取已能将甜叶菊干叶中的甜菊糖总苷完全提取出来，再升高提取温度只是浪费电能，降低超声波清洗器使用寿命。

因此，本方法最终以45℃定为超声提取温度。

4.8 标准曲线
分别精密吸取浓度为1.0mg/mL、0.8mg/mL、0.4mg/mL、0.2mg/mL、0.1mg/mL、
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0.02mg/mL、0.01mg/mL、0.002mg/mL、0.001mg/mL的瑞鲍迪苷A系列标准溶液（2.2.1项的标准溶液），在2.3项的条件下，分别注入高效液相色谱仪中进样分析，测得相应的不同浓度标准的峰面积，仪器自动调取数据记录，在软件的“数据处理”模块点击“校正曲线图”即可调取标准曲线及线性回归方程。

横坐标是标准溶液的浓度，纵坐标是该浓度相应的峰面积。

标准曲线的回归方程及相关系数见图5。

图5 线性回归方程和相关系数
经试验结果表明，瑞鲍迪苷A的线性相关系数为0.9998，说明该方法测量的瑞鲍迪苷A标准溶液在0.0009176-0.917654mg/mL的浓度范围内与峰面积呈现良好的线性关系。

4.9 重复性的测定
分别精密称取0.5g（精确至0.00001g）粉碎均匀的甜叶菊干叶粉末于6个不同的50mL容量瓶中，用30%乙腈溶解，置于同一超声波清洗器中45℃水浴超声提取30min，取出冷却至室温后用30%乙腈定容至刻度，摇匀，转移至5mL离心管置于高速台式离心机离心5min（10000r/min），取上清液用孔径为0.45μm的有机系滤膜过滤待测，检测结果见表7、表8、图6。

表7 重复性测试结果
结果（%） 1 2 3 4 5 6 平均值
（%）
相对标准
偏差（%）
瑞鲍迪苷A含量8.96 9.14 9.10 9.18 8.94 9.01 9.06 1.10 甜菊糖总苷含量21.57 22.04 21.91 22.01 21.50 21.25 21.71 1.50
表8 各成分使用瑞鲍迪苷A标准品计算结果的校正因子
成分名称瑞鲍迪
苷D
瑞鲍迪
苷M
瑞鲍迪
苷A
甜菊糖
苷
瑞鲍迪
苷F
瑞鲍迪
苷C
杜尔可
苷A
甜茶苷
瑞鲍迪
苷B
名称缩
写
RD RA STV RF RC DA Rub RB SB 分子量1129.18 967.03 804.88 936.99 951.04 788.89 642.74 804.88 642.74 校正因
子
1.205 1.000 0.832 0.969 1.020 0.816 0.665 0.935 0.665
图6 供试品检测的色谱图
由重复性的测试结果可知相对标准偏差RSD值≤2.0%，说明本方法重复性良好，方法具有可行性。

4.10 仪器精密度的测定
精密称取0.5g（精确至0.00001g）粉碎均匀的甜叶菊干叶粉末于50mL容量瓶中，用30%乙腈溶解，置于同一超声波清洗器中45℃水浴超声提取30min，取出冷却至室温后用30%乙腈定容至刻度，摇匀，转移至5mL离心管置于高速台式离心机离心5min（10000r/min），取上清液用孔径为0.45μm的有机系滤膜过滤待测，样品溶液连续进样6针，检测结果见表9。

由测试结果可知相对标准偏差RSD值≤2.0%，说明仪器精密度高，色谱条件的选择具有安全性，表明检测方法具有可行性。

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表9 仪器精密度的测试结果
成分名称 峰面积1 峰面积2 峰面积3 峰面积4 峰面积5 峰面积6 平均峰面积 相对标准偏差 (%) 瑞鲍迪苷D 299.54 308.04 311.12 309.50 306.74 303.11 306.34 1.40 瑞鲍迪苷M 189.27 194.31 190.71 188.30 186.03 186.33 189.16 1.63 瑞鲍迪苷A 1307.5 1307.3 1307.5 1311.8 1315.2 1315.0 1310.7 0.29 甜菊糖苷 117.08 119.18 120.63 122.07 117.56 120.44 119.49 1.61 瑞鲍迪苷F 149.31 148.83 149.92 148.14 147.04 148.57 148.64 0.67 瑞鲍迪苷C 646.11 648.36 647.06 646.30 649.18 647.60 647.44 0.18 杜尔可苷A 121.70 118.33 121.71 117.72 119.70 120.85 120.00 1.42 甜茶苷 80.960 81.620 81.500 84.220 81.460 80.790 81.760 1.53 瑞鲍迪苷B 136.94 140.54 139.28 140.24 141.67 140.45 139.85 1.16 甜菊双糖苷
40.780
41.400
42.370
42.380
42.850
42.600
42.060
1.90
4.11 瑞鲍迪苷A 的加标回收率测定
分别精密称取0.25g （精确至0.00001g ）粉碎均匀的甜叶菊粉末于9个不同的50mL 容量瓶中，每3份样品为一组，每组分别加入瑞鲍迪苷A 标准溶液0.8mL 、1.0mL 、1.2mL ，用30%乙腈溶解，至于同一超声波清洗器中45℃水浴超声提取30min ，取出冷却至室温后用30%乙腈定容至刻度，摇匀，过0.45μm 滤膜，取续滤液待测。

检测结果见表10。

表10 瑞鲍迪苷A 的加标回收率测定
样品编号
样品总检出量（mg ） 本底检出
量（mg ） 标准加入量（mg ） 回收率（%）
平均回收
率（%） 相对标准偏
差（%）
1 35.63 31.17 4.588 97.21 97.93
1.68 2 45.83 38.51 7.341 99.71 3 49.19 38.96 10.090 101.39 4 35.69 31.26 4.588 96.56 5 45.06 37.96 7.341 96.76 6 49.22 39.41 10.090 97.22 7 36.21 31.71 4.588 98.08 8 45.68 38.60 7.341 96.44 9 49.03
39.14
10.090
98.02
经试验结果表明，本方法的平均回收率为97.93%，相对标准偏差为1.68%，表
明本方法与理论值差别小，可信度高，具有可行性。

5 结论
试验中通过单因素实验确定了甜叶菊菊叶粉末最优的前处理条件。

即在提取试剂为30%乙腈、提取温度45℃、提取时间为30min条件下能对各个成分提取完全，前处理操作简捷、安全。

选择乙腈-0.1%磷酸水作为流动相并以流速为1.0mL/min及起始比例为22:78对样品进行梯度洗脱能够有效洗脱掉样品中的杂质，对样品成分进行分离，得到的图谱峰形尖锐，目标峰分离度较好，对称性也较好，基线平稳。

结果回收率高、检测结果准确、精密度高。

说明此方法开发具有较强的可行性。

相对于出入境的行业标准中的比色法，操作更简捷，降低了时间成本。

同时，此方法分离出的有效成分的种类更多，适合检测不同的甜叶菊总苷。