植物染色体安全毒理实验

植物染色体安全毒理实验
洗衣粉对蚕豆根尖细胞的微核诱变效应
摘要本实验研究一定浓度的洗衣粉对蚕豆根尖的诱变效应试验。

采用蚕豆根尖细胞的微核试验方法，以一定浓度的洗衣粉处理蚕豆根尖，观察蚕豆根尖细胞的微核率。

学会理论联系实际的去独立设计实验、准备实验、完成实验和分析实验，从本质上理解毒物对有丝分裂过程中的影响，即毒物能抑制有丝分裂过程，导致染色体畸变效应和微核效应，产生染色体膨大，滞后染色体和染色体桥。

关键词洗衣粉蚕豆根尖微核效应染色体
前言微核（micronucleus,MCN）是指位于生物细胞的细胞质中，完全与主核分开的椭圆形或圆形的微小核。

目前普遍认为微核是由外界损害因素(生物、物理、化学)作用细胞后，导致细胞染色体发生畸变，造成无着丝粒的染色体发生断裂,细胞进入下一次分裂时,染色体载玻片段不能随有丝分裂进入子细胞,而在细胞浆中形成直径小于主核的、嗜色与主核一致、完全与主核分开的圆形或椭圆形微小核，其染色同主核，但比主核淡，其直径小于主核1/3，在胞浆中形成1个或数个小核。

［1］
蚕豆根尖微核试验在１９８６年已被中国环保局列为一种水环境生物测试的规范方法。

它作为一种环境致突变性的检测手段，在我国不少地区的环保部门和医疗卫生系统中都有广泛的应用。

［2］蚕豆根尖微核技术是一种检测化学药品对生物毒害的毒理学方法，具有简便、快速、重复性好和灵敏度高的优势。

利用洗衣粉处理蚕豆根尖，测定蚕豆根尖细胞的微核数和微核率，得到实验结果表明：毒物（洗衣粉）能引起染色体畸变和微核效应，根尖细胞的有丝分裂受到抑制。

［3］
1材料和方法
1.1实验材料
立白洗衣粉、蚕豆、滤纸、纱布、培养皿、恒温箱、量筒、锥形瓶、标签、刀片、卡诺氏Ⅰ固定液（3甲醇：1冰醋酸）、1mol/L的盐酸、蒸馏水、石碳酸-品红溶液、乙醇（95%、70%）、显微镜
1.2实验方法
1.2.1浸泡
选用适量大小均匀、色泽一致的籽粒，将试验用蚕豆种子按需要量（20粒）放人盛有自来水的烧杯中，浸泡24 h，（22～23℃）
1.2.2发芽
种子吸胀后松散的铺在铺有2层浸湿纱布的培养皿中，用2层浸湿纱布盖在种子上，保持湿度，在22～23℃催芽2天，待大部分初生根长至1～2 cm左右时，再选取发芽良好的种子，作为实验材料，便可进行实验。

1.2.3 毒液处理
分别选取10粒生长良好、根生长差不多的种子，分别用蒸馏水、毒液培养种子一天。

1.2.4恢复培养
将种子用蒸馏水洗净之后，分别放入培养皿中，于22～23℃恢复培养24小时。

1.2.5固定
剪取约1cm根尖，放入卡诺氏固定液中固定5～6小时。

1.2.6 解离
取出根尖，用蒸馏水洗涤2次，吸干，加入1mol/L的HCL将幼根浸没，60℃条件下解离3～5分钟，使幼根软化。

1.2.7 染色
取出根尖，用蒸馏水洗3～4次，放在载玻片上，滴上石炭酸品红染色液，然后用解剖针将根尖细胞团块在染色液中捣碎，染色15～20分钟。

1.2.8 压片
在根尖上盖上盖玻片，垫上吸水纸。

用拇指垂直加压，将根尖压成薄片，使根尖细胞被展开。

［4］
1.2.9 镜检、计数
选取一定的视野，观察1000个细胞中发生微核效应的细胞个数，计算微核百分率与污染指数PI。

微核百分率=含有微核的细胞数/观察统计的细胞总数×1000‰
污染指数（PI）=样品实测微核率平均值/对照组微核率平均值
附：
污染指数PI值评价样品标准表
2结果与讨论
2.1结果
通过观察，得到以下结果：
表一：一定浓度洗衣粉对蚕豆根尖微核率的影响
由实验可知：毒物（洗衣粉）能引起微核效应，根尖细胞的有丝分裂受到抑制。

2.2结果讨论
微核是真核生物细胞中的一种异常结构，它主要由落后的染色体和无着丝粒的染色体载玻片段所形成。

微核的数量反应了染色体损伤的程度，可反映诱变剂对生物的危害程度，所以，微核已经成为检测环境诱变剂毒害效应的一个重要指标。

［5］
通过与其他组的比较，一定浓度的洗衣粉溶液对蚕豆根尖的影响也不同。

这可能与同学
培养的蚕豆根尖的长度有关。

而且不同浓度的洗衣粉对蚕豆根尖的影响也不同，而且毒物浓度越高影响越大。

参考文献
［1］.杨汉民细胞生物学实验高等教育出版社205-207
［2］.纪云晶实用毒理学手册中国环境科学出版社379-385
［3］.翟中和王喜忠丁明孝细胞生物学实验高等教育出版社271-277、290-291
［4］.祝庆蕃，常福聚，赵庆夏．蚕豆根尖细胞微核试验[J]．遗传
［5］.李龙陈家现代毒理学实验技术原理和方法化学工业出版社31-34。