气相色谱法测宝石鱼鱼油中的脂肪酸组成
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中图分类号:TS2;文献标识码:A;文章篇号:1007-2764(2004)01-0030-081
气相色谱法测宝石鱼鱼油中的脂肪酸组成
王锡昌 陈俊卿
(上海水产大学食品学院,上海200090)
摘 要:本文以宝石鱼为原料,利用气相色谱法来鉴定宝石鱼鱼油中的的脂肪酸组成,通过与标准脂肪酸色谱图比较共确定25种脂肪酸,其中以16:0、18:0、18:1n-9、18:2n-6、22:6n-3、20:4n-3、22:5n-3(EPA)和22:6n-3(DHA)。
为主。
关键词:脂肪酸;EPA;DHA;气相色谱;宝石鱼
原产于澳大利亚的澳洲宝石鱼(scortums barcoo)英文名jade perch,其肌间无刺、肉细嫩、内脏占的比例少,尤其是宝石鱼有一块“油团”,出油率高,宝石鱼与其他名贵鱼相比,无腥味、异味、口感爽滑甘美;并且富含高度不饱和脂肪酸,尤其是被称之为脑黄金的DHA和防止动脉硬化的EPA。
因此营养价值高,是当今人们崇尚的保健美容食品,自上市以来倍受广大人们的亲睐。
1 实验部分
1.1 原料
宝石鱼六条购于…, 体长范围为24cm-26.5cm,体重范围为550g-740g。
1.2 主要仪器
电动绞肉机:MM8型绞肉机
均质机:PH91型,SMT
旋转蒸发仪:RE200,UAMATO
真空冷冻干燥器:2Xe_2型旋片式真空泵
Reacti-therm:heatingmodule,PIERCE
气相色谱仪:GC-14型,日本岛津公司
1.3 主要试剂
甲醇、氯仿、正己烷、5%盐酸-甲醇溶液、3%MgCl2溶液
1.4 色谱条件
GC-14型日本岛津气相色谱仪
检测器:FID
色谱柱:OMEGAWAX320 FUSED SILICA 毛细管柱(30m×0.32mm)
收稿日期:2003-10-5
作者简介:博士,研究方向是水产品、畜产品加工。
现正从事中日国际合作项目“中国淡水渔业资源利用与加工技术的开发”和教育部留学回国人员科研启动基金“白鲢鱼肉腥味成分的分离与特性”等研究
载气:高纯氦气
柱温:210℃
进样口温度:230℃
检测器温度:230℃
氦气压力为0.5Mpa,空气压力50KPa,氮气压力55-60KPa,氢气压力55-60KPa
1.5 样品前处理
1.5.1 脂质提取
称取碎鱼油5g,放入200ml小烧杯中,倒入约80ml氯仿:甲醇=2:1混合液。
均质5分钟(约2min停顿一次),并用混合液清洗均质头。
装好布氏漏斗进行抽滤,抽滤结束后,将滤液倒入分液漏斗中,并在分液漏斗中倒入3% MgCl2 40ml。
分液漏斗振摇1min,同时放气,静置过夜。
次日,将分液漏斗下层液过滤到圆底烧瓶中,在30℃水浴真空旋转蒸发仪中蒸发至无氯仿,用氮气将瓶中的脂质吹1min,称量。
1.5.2 脂质的甲酯化
取10-30mg脂质,置于具螺旋盖的试管中,加入3-5%的盐酸甲醇3ml,充氮盖上旋盖,在固体恒温加热器中80-100℃加热2小时进行甲酯化。
加热终了于室温中放置冷却,加水3ml,加正己烷3ml,充分振摇。
静置,分层后,将上层正己烷移入另一具螺旋盖的试管中并重复用正己烷(3ml)抽提甲酯化液提取二次,在得到的甲酯化抽提液中加入1ml水,充分振摇,静置。
分层后将下层液吸去,再重复水洗2次(应洗至中性)。
在上述甲酯化液中加入适量无水硫酸钠,脱水后,将甲酯化液过滤至长试管中,50℃真空旋转蒸发。
最后得到纯的脂肪酸甲酯。
用正己烷溶解。
取3μL进行气相色谱分析。
2 结果与讨论
2.1 宝石鱼鱼油脂肪酸组成色谱图(如图1)
81
82
图1 宝石鱼鱼油脂肪酸组成色谱图
1 14:0; 2 15:0; 3 16:0; 4 16:1n-7; 5 17:0; 6 18:0; 7 18:1n-9; 8 18:1 n-7; 9 18:2n-6; 10 18:3n-3; 11 18:4n-3; 12 20:0; 13 20:1n-9; 14 20:2n-6; 15 20:3n-6;16 20:4n-6; 17 20:3n-3; 18 20:4n-3; 19 20:5n-3; 20 20:1n-9; 21 22:4n-6; 22 22:5n-6; 23 22:5n-3; 24 22:6n-3; 25 24:1
2.2 方法的可行性实验
表1 宝石鱼鱼油脂肪酸组成
脂肪酸 样品1 样品2 样品3 平均值 标准偏差相对偏差
%
14:0 3.4944 3.6527 3.4859 3.5443 0.0939 2.7 15:0 0.3080 0.3168 0.3016 0.3088 0.0076 2.5 16:0 24.5869 24.2603 24.1680 24.3384 0.2201 0.9 17:0 0.3959 0.3936 0.3882 0.3926 0.0040 1.0 18:0 6.1319 6.0063 6.1313 6.0898 0.0723 1.2 20:0 0.1637 0.1560 0.1640 0.1612 0.0045 2.8 24:1 0.2392 0.2050 0.2321 0.2254 0.0180 8.0 Total SFA 35.3200 34.9907 34.8711 35.0606 0.2325 0.7 16:1n-7 4.7811 4.8823 4.7334 4.7989 0.0760 1.6 18:1n-9 25.9791 25.9162 26.1463 26.0139 0.1189 0.5 18:1 n-7 1.6729 1.6009 1.5882 1.6207 0.0457 2.8 20:1n-9 0.8577 0.7986 0.9458 0.8674 0.0741 8.5 22:1n-9 0.3556 0.3594 0.3677 0.3609 0.0062 1.7 Total MUFA 33.6464 33.5574 33.7814 33.6617 0.1128 0.3 18:2n-6 16.2437 16.6136 16.1825 16.3466 0.2332 1.4 18:3n-3 1.6937 1.7292 1.6795 1.7008 0.0256 1.5 18:4n-3 0.5766 0.6066 0.5712 0.5848 0.0191 3.3 20:2n-6 0.3074 0.3124 0.3036 0.3078 0.0044 1.4 20:3n-6 0.2078 0.2109 0.2101 0.2096 0.0016 0.8 20:4n-6 0.3720 0.3679 0.3872 0.3757 0.0102 2.7 20:3n-3 0.2118 0.2229 0.2100 0.2149 0.0070 3.3 20:4n-3 0.3414 0.3573 0.3462 0.3483 0.0082 2.3 20:5n-3 1.2926 1.3958 1.3085 1.3323 0.0556 4.2 22:4n-6 0.1158 0.1233 0.1238 0.1210 0.0045 3.7 22:5n-6 0.1200 0.1202 0.1290 0.1231 0.0051 4.2 22:5n-3 0.9962 1.0372 1.0213 1.0182 0.0207 2.0 22:6n-3 4.2632 4.4177 4.3634 4.3481 0.0784 1.8 Total PUFA 26.7422 27.5150 26.8363 27.0312 0.4216 1.6 others 4.2914 3.9369 4.5112 4.2465 0.2898 6.8 n-3/n-6 0.5399 0.5503 0.5480 0.5460 0.0055 1.0 n-3PUFA 9.3755 9.7667 9.5001 9.5474 0.1998 2.1 Cn-6PUFA
17.3667
17.7483
17.3362
17.4837 0.2296 1.3
为检测样品整个前处理和测定过程的可靠性,对
宝石鱼鱼油脂肪酸含量进行了平行实验,结果见表1。
由表可知,在25种确认的脂肪酸中,鱼油中脂肪含量
的相对偏差符合平行样变异系数小于10%的分析要
求,表明本实验重现性好。
2.3 讨论
本实验中确认的25种脂肪酸,其中7种饱和脂肪酸,5种单烯酸,13种多烯酸。
其中在鱼油中饱和脂肪酸的含量为35.06%,不饱和脂肪酸含量为60.69%。
由表中还可以看出鱼油中饱和脂肪酸的含量和单烯酸的含量差不多,但单烯酸的含量明显高与多烯酸含量。
在宝石鱼鱼油的饱和脂肪酸中,16:0含量最高,为24.34%,其次为18:0,为6.09%。
在宝石鱼鱼油的单烯酸中以18:1n-9含量最高,为26.01%,并且它在所测的脂肪酸中含量也是最高的。
在宝石鱼鱼油的多烯酸中,以18:2n-6含量最多,为16.35%,其次比较多的就是20:5n-3(EPA)和22:6n-3(DHA),在鱼油中EPA和DHA的含量分别占多饱和脂肪酸总量的4.93%、16.09%。
3 总结
从以上对宝石鱼油的脂肪酸组成结果来看,不饱和脂肪酸含量很大,其中多不饱和脂肪酸也占相当部分比例,说明具有较高的营养价值。
研究表明单不饱和脂肪酸同样具有降血脂和血小板凝聚的作用,此外还防止动脉硬化。
而多不饱和脂肪酸中具有重大生化活性意义的脂肪酸EPA和DHA也含有较大的比例,他们对大脑的发育并对改善大脑机能、提高记忆力都起着重要作用。
近年来许多研究还表明,多不饱和脂肪酸具有一定的抗癌活性。
此外在本实验中还测定了宝石鱼鱼肉的脂肪酸组成,发现鱼肉中各种脂肪酸所占的面积百分比例类似于鱼油中的各脂肪酸所占面积百分比例,因此对宝石鱼的研究在营养保健和医药开发方面都具有重要的理论和现实意义。
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5
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显功效[3]。
其次为油酸的含量,为23.4%。
油酸在降低血液胆固醇、甘油三酯和低密度脂蛋白胆固醇(LDL-C)的同时,还能升高对人体有益的高密度脂蛋白胆固醇(HDL-C) [4],因此,可预防血栓形成,降低血压,从而大大减少引发心脑血管疾病的危险。
实验鉴定出的火龙果种仁油脂肪酸除含有动植物油中常见的偶数碳脂肪酸外,还发现了奇数碳脂肪酸(C19)。
2.2 火龙果种仁氨基酸的组成和分析
蛋白质中的氨基酸含量,特别是必需氨基酸的含量是蛋白质质量的反映。
火龙果种仁的氨基酸组成以谷氨酸含量最高,为4379.86 mg/100g,精氨酸次之,为2423.73 mg/100g,精氨酸是半必需氨基酸,赖氨酸的含量最低,为359.09mg/100g;必须氨基酸的含量为24.38%(见表2)。
色氨酸在酸水解的时候被破坏,所以含量在表中没有显示。
对其氨基酸进行评分,推断赖氨酸为第一限制氨基酸,和谷类的第一限制氨基酸一样。
表2火龙果种仁蛋白质的氨基酸组成
Table2 amino acid composition of protein in white pitaya seed kernel 氨基酸含量mg/100g氨基酸含量mg/100g
天氨酸Asp 1610.53 酪氨酸Tyr 848.80
谷氨酸Glu 4379.86 缬氨酸Val 685.51
丝氨酸Ser 996.48 蛋氨酸Met 415.17
甘氨酸Gly 1069.45 半胱氨酸Cys 180.93
组氨酸His 940.12 异亮氨酸Ile 544.88
精氨酸Arg 2423.73 亮氨酸Leu 988.44
苏氨酸Thr 743.91 苯丙氨酸Phe 783.83
丙氨酸Ala 698.21 赖氨酸Lys 359.09
脯氨酸Pro 870.71
总量18539.64
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技,2003,11(2):31~33
Analysis of Fatty Acid and Amino Acid in the Seed Kernel of White Pitaya
Pan yan-li, Rui han-ming, Lin chao-peng
(College of Food and Biological Engineering, South China Univ. of Tech., Guangzhou 510640)
Abstract: The composition of fatty acid and amino acid in the seed kernel of white pitaya was analyzed by GC-MS technique and amino acid automatic analysis apparat us respectively。
The content of unsaturated fatty acid was 80.83% and the content of necessary amino acid was 24.38%。
Key words: White pitaya ; Seed kernel; Fatty acid; Amino acid
(上接第82页)
Determination Fatty Acid Jade Perch by Gas Chromatography
Wang Xichang, Chen Junqing
(Shanghai Fisheries University, Shanghai 200090)
Abstract: In this paper the sample was jade perch. The fatty acid composition of jade perch oil was analyzed by gas chromatography. Compared with standard fatty acid chromatography chart, the result shows that the main fatty acids of jade perch oil were 16:0、18:0、18:1n-9、18:2n-6、22:6n-3、20:4n-3、22:5n-3(EPA)和22:6n-3(DHA).
Key words: Fatty acid; EPA; DHA; Gas chromatography; Jade perch
84。