新冠病毒核酸检测SOP

新冠病毒核酸检测SOP
1.目的
根据《感染的肺炎实验室检测技术指南》，规范本中心感染的肺炎的检测方法。

2.适用范围
体外定性检测感染的肺炎疑似病例、疑似聚集性病例患者、其他需要进行感染诊断或鉴别诊断者的口咽拭子、鼻咽拭子和痰液样本检测。

3.职责
3.1检测人员：负责按照本检测细则对被检样品进行检测；
3.2复核人员：负责对检测操作是否规范以及检测结果是否准确进行复核；
3.3科室负责人：负责对科室综合管理和检测报告的签发。

4.检测依据
《感染的肺炎实验室检测技术指南》
5.操作程序
5.1实验前准备
5.1.1检测人员进入污染区前，必须穿好一次性防护服、一次性帽子、N95口罩、双层手套、一次性靴套、护目镜、防护面屏不得将与实验无关物品带入实验室。

5.1.2调节室温至20-25°C,湿度20-80%o
5.1.3检测试剂在室温平衡半小时;并检查试剂是否在有效期内。

5.1.4检查仪器是否正常，做好检测前准备工作。

5.1.5开启实验室污染区生物安全柜
5.2实验方法见试剂申明书
【检验方法】
5.2.1试剂准备（试剂准备区）
从试剂盒中取出核酸扩增反应液、酶混合液、ORFlab/N 反应液，室温融化，充分振荡混匀后瞬间离心。

计算试剂使用份数N（N=样本数+1管阳性对照+1管阴性对照），根据下表配置反应体系，力口入一适当体积离心管中，充分振荡混匀后瞬间离心，按20U1.分装至PCR反应管中，并转移至样本处理区。

加入体积（ML）/人份
ORFlab/N反应液
总体积20
5.2.2样本处理（样本处理区）
①核酸提取：待测样本、阳性对照及阴性对照按照核酸提取试剂盒说明书进行操作。

②加样：在上述准备好的PCR反
应管中分别加入待测样本核酸、阳性、阴性对照各5u1.,终体积为25u1./管，盖紧管盖，瞬时离心。

5.2.3PCR扩增检测（核酸扩增区）
①将PCR反应管置荧光定量PCR仪扩增检测。

插上仪器电源线，打开仪器背部的电源开关，仪器开机初始化。

等待至指示灯停止闪动，变成稳定绿色，进入下一步操作。

②打开电脑桌面qsoft4.1软件，进入qsoft4.1用户界面，表明仪器与电脑连接成功,进入下一步操作。

③新建程序：单击菜单栏中标页目一、创建新的程序。

或者调入已保存的PCR程序模板文件，运行程序。

④若创建新程序，点击创建项目。

设置PCR基本参数、文件名、反应体系、操作者等。

⑤设置实验程序，温度循环设置按试剂盒说明书中“循环参数设定、设置（如图）。

循环参数设定
申明：
A、步骤3中55C时设置荧光检测。

B、在勾选基因通道时需要填写检测号（管1,在此处可以填写检测基因号或者
1,2,3,4）
点击储存，储存我们所创建的新程序。

⑥在界面左下角点击Home,实验Home界面提供了多种进入实验导游的入口，用户点击实验导游。

⑦更改文件名、操作者，勾选模块，基因通道默认为我们所设置的，如需要可勾选全通道扫描。

⑧“孔板编辑、设置样品孔定义，根据我们样品数设置孔板，点击右下侧的样本项目，进行样本类型的更改，设置阴阳对照。

⑨反应条件全部设好后，打开仪器蓝色滑盖，放入样品，盖上盖子，点击“实验运行、，再点击开始，即可开始运行程序。

截止程序，暂停程序。

运行程序前，会要求设置好结果文件储存路径，运行结束后，结果文件主动储存在指定的文件夹中。

⑩结果分析参数设定
根据分析后扩增曲线图调节起止值，（建议起始设在3~15、终止设在5-20,同时调整阴性对照的扩增曲线平直或低于阈值线），点击分析，在报告界面查看结果。

【阳性判断值】
根据临床样本检测结果，利用R0C曲线法确定ORFlab、N
参考值均为Ct值等于38
O
【检验结果的解释】
质控标准
以下要求需在同一实验中同时满足，否则本次实验无效序：HEX/VIC通道
ROX通道内参—CW30
结果判读
检通
结果判读
样本阳性
样本阴性
复测*无Ct值或Ct值＞38
无Ct值或Ct值＞38
无Ct值或Ct值＞38
Ct届38
无Ct值或Ct值＞38Ct函38
Ct摩38
Ct值W38
Ct值W38
*痰液样本：建议复测，如复测结果两个通道均为Ct值《8则结果判读为阳性，否则为阴性；口咽拭子和鼻咽拭子：建议采集痰液样本进行复测，并按照痰液样本的标准进行结果判读，即两个通道均为Ct值至8则结果判读为阳性，否则为阴性。

⑪实验结束后，打开仪器蓝色滑盖，取出八联管丢弃，
并依次关闭PCR仪电源和电脑电源。

6仪器维护
6.1仪器的表面应每周用软抹布加少量清水擦洗1次，清洁后将仪器擦干；
6.2若有试剂泄漏在仪器表面，应用软抹布加75%酒精擦拭干净；
6.3清洁仪器前必须关闭电源，并拔掉电源线；
6.4不要将液体倾倒在模块中或者仪器内部；
6.5不能用强腐蚀性溶剂或者有机溶剂擦洗仪器；
6.6反应孔沾染灰尘或杂质后，会影响PCR扩增和荧光检查，因而要每3个月用吹气球悄悄吹拭；
6.7若有试剂泄漏在反应孔内，应用无尘纸或者无尘布加75%酒精擦拭。

6.8仪器不使用时，要盖上方机。

7操作注意事项
7.1实验室操作按照《医疗机构临床基因扩增检验实验室管理办法》进行。

实验操作必须严格分区，各区域使用的仪器、设备、耗材和工作服必须专用，不得交叉使用，避免污染。

试剂盒不同批号的组份不可以互换使用，各组份使用前应室温融化，充分振荡混匀，瞬间离心后使用。

7.2反应液分装时应避免产生气泡，上机前留意检查各反应管是否盖紧。

7.3实验结束后，应及时清算台面，并用10%次氯酸钠、75%酒精和紫外灯等措施举行消毒。

7.4试剂盒涉及的待测样本应视为具有传染性，实验室所有操作应符合《病原微生物实验室生物安全通用准则》；医疗废弃物处理应按照《医疗废弃物管理条例》进行管理。

7.5咽晟子检测结果为阳性其实不能作为破除依据，建议依据临床病症采集病毒载量较高的下呼吸道样本如痰液举行复测。

7.6试剂储存运输及使用过程中多种因素可能导致性能变化，如储存运输不当、样本采集、样本处置惩罚及检测过程操作不规范等，请严格按照申明书操作。

因拭子等样本采集过程
及病毒熏染过程本身的特点，可能存在采集到的样本量不足等缘故原由带来的假阳性结果，应结合临床其他诊疗息综合判断，必要时复测。

7.7待检标本和试剂盒及废弃物有潜在传染性，应严格遵守消毒隔离制度。

7.8实验操作后应立即去除手套，用清洁液洗手。

7.9避免标本溅出，污染情况。

7.10每次实验完毕，必须作一次性严格消毒。

7.11不能使用过期试剂。

7.12流感检测试剂必须保存在2°C~8°C环境中。

7.13移液器应经常校正。

8支持性文件
8.1《感染的肺炎实验室检测技术指南》
9质量记录
9.1检验原始记录。

9.2检验报告。

新冠病毒核酸检测服务方案
当前，境外新冠肺炎疫情持续蔓延，我国局部地区聚集性疫情和零星披病发例不断出现，特别是春节时代返乡人员增多、
人员流动增加，存在疫情传播风险，新冠病毒核酸检测（以下简称核酸检测）需求也将随之大幅度提升。

为进一步扩大核酸检测服务供应，满足检测需求，现就做好核酸检测服务提出以下要求：
一、加强核酸检测服务的组织管理
各地要按照《进一步推进新冠病毒核酸检测本领建设工作方案》要求，加强辖区内检测资源的统筹调剂，在提高日常核酸检测本领的同时，通过科学布局检测资源、调动机动检测气力等方式，为群众提供及时优质高效的核酸检测服务。

各省级卫生健康行政部门要通过官方网站等方式，向社会发布辖区内一切核酸检测机构名单、工作工夫、采样地点、联系德律风和预约方式等，要求各核酸检测机构在规定工夫内出具检测结果，并将检测结果与当地健康码相联系关系，便于群众查询使用。

二、不断优化核酸检测服务
核酸检测机构要全面推行预约服务，为群众提供德律风、手机APP、微小程序、现场等不同采样预约方式，实现分时
段、错峰采样，尽量减少群众现场期待工夫。

鼓励同时提供单样检测和混样检测服务，供群众自行选择，并在醒目位置公示核酸检测价格。

原则上，来自低风险地区的群众可举行10:1混样检测，中风险地区可举行5:1混样检测，高风险地区及重点人群须1」单样检测。

核酸检测机构要设置专门窗口或区域，为“愿检尽检”、返乡人员等单纯举行核酸检测的群众提供采样服务，群众无需挂号且免收门诊诊察费。

要充裕借助息化手段，提供网上支付、推送检测报告等服务,让息多跑路、群众少跑腿。